不同年龄正常人外周血淋巴细胞端粒酶催化亚单位的表达

目的:探讨不同年龄正常人外周血淋巴细胞端粒酶催化亚单位(hTERT)的表达规律。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及凝胶成像技术,检测105例20岁以上不同年龄正常人外周血淋巴细胞的hTERT表达的相对水平。结果:hTERT表达的相对水平在各年龄组分别为:20～29岁,0.557±0.190;30～39岁,0.600±0.360;40～49岁,0.723±0.206;50～59岁,0.498±0.213;60～69岁,0.626±0.203;70～79岁,0.524±0.340;≥80岁,0.702±0.214;各组间差异无显著性(P>0.05)。结论:正常人外周血淋巴细胞中端粒酶催化亚单位水平与年龄无明显相关性,提示端粒酶调控可能既有转录水平也存在转录后因素。     

端粒酶催化亚单位在细胞学诊断肺癌中的表达

目的:检测支气管镜涂片中端粒酶催化亚单位(hTERT)的表达,探讨其与肺癌发生的关系,探索细胞学诊断肺癌的新途径。方法:应用免疫组化和原位杂交的方法检测137例支气管镜涂片中hTERT和hTERTmRNA的表达,并与临床病理资料及细胞学诊断进行相关性分析研究。结果:137例病例中,hTERT和hTERTmRNA表达阳性率在细胞学诊断为癌细胞组分别为67.86%(57/84)和79.76%(67/84);疑癌或异型细胞组分别为46.67%(7/15)和60.00%(9/15);未见癌细胞组分别为5.26%(2/38)和39.47%(15/38)。二者的表达在癌细胞组明显高于其他2组(P<0.05)。其中有组织学对照的105例,hTERT和hTERTmRNA阳性表达率与细胞学诊断阳性率相一致。hTERT和hTERTmRNA的阳性表达率呈正相关性(r=0.994,P<0.05),但这二者的表达率与组织病理类型及其他临床特征差异均无显著性(P>0.05)。结论:端粒酶在支气管涂片中的阳性表达与肺癌的发生密切相关。hTERT和hTERTmRNA在癌组织中均存在高表达,且比传统形态学诊断更敏感。而hTERT蛋白的表达在细胞学涂片中更可靠(假阳性率低)。因此检测这二者的表达有助于提高肺癌的细胞学检出率,对早期发现、诊断肺癌有重要意义。     

人胰腺癌端粒酶亚单位的表达及其意义

目的：探讨端粒酶亚单位表达水平与人胰腺癌发生的关系，以及表达与端粒酶活性高低的相关性。方法：应用RT－PCR，DNA测序等技术研究端粒酶亚单位在胰腺癌中的表达情况，用ELISA法检测端粒酶活性。结果：24例胰腺癌标本中hTERT mRNA表达阳性率为83．3％，而癌旁组织为8．3％，两者有显著性差异。hTERT mRNA的表达是人端粒酶活性表达的关键性因素。hTR入TP1 mRNA在癌组织及癌旁组织中的表达无统计学差异，与端粒酶活性的表达无相关性。结论：端粒酶参与了胰腺癌的发生；hTERT mRNA表达水平的上调可能在胰腺癌形成过程中起重要作用。     

原代白血病细胞人端粒酶催化亚单位的表达

目的 :研究原代白血病细胞人端粒酶催化亚单位 (hEST)的表达及其临床意义。方法 :应用RT -PCR方法检测 30例初发急性白血病 (AL)患者、1 2例AL获完全缓解 (CR)患者和 6例正常志愿者骨髓单个核细胞 (MNCs)hESTmRNA的表达。结果 :初发AL患者骨髓MNCshESTmRNA表达量 (0 .71± 0 .34)明显高于CR患者 (0 .4 3± 0 .2 5 ,P <0 .0 5 )及正常志愿者 (0 .2 2± 0 .2 1 ,P <0 .0 1 )。初发AL患者骨髓常规涂片中原始细胞百分率与骨髓MNCs的hESTmRNA表达量呈正相关 (r =0 .4 5 7,P <0 .0 5 )。结论 :初发AL患者骨髓MNCs的hESTmRNA表达增高。hESTmRNA表达可能代表白血病细胞的一种高增殖状态     

胃癌前病变组织中人端粒酶催化亚单位的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

目的:探讨胃癌前病变组织中人端粒酶催化亚单位(hTERT)的表达状况及其与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系.方法:采用实时定量荧光RT-PCR方法检测胃黏膜中hTERT表达水平,将hTERT与GAPDH拷贝数之比的100倍作为标准化hTERT(NhTERT),用快速尿素酶法和Warthin-Starry银染色法检测Hp.结果:伴肠上皮化生的萎缩性胃炎组织中hTERT表达明显增高(80.9±6.36),而肠上皮化生的Hp感染率明显高于无肠上皮化生者(69%vs31%),Hp阳性患者hTERT表达水平为(101.5±13.50),Hp阴性患者hTERT表达水平为(49.6±8.58),二者相比有统计学意义(P＜0.01).结论:在胃癌前病变阶段,Hp感染与端粒酶表达水平之间有直接关系,呈正相关,提示端粒酶、Hp感染在胃癌的发生、发展中起重要作用.     

植物凝集素刺激下人外周血淋巴细胞端粒酶催化亚单位(hTERT)表达上调

目的通过测定正常人外周血淋巴细胞中hTERT在植物凝聚素(PHA)刺激前后的表达水平的变化,评估正常人淋巴细胞对PHA刺激的反应能力。方法采集40例正常人外周血,分离淋巴细胞后,一部分在含0.5%PHA的培养液中培养,分别于24h、48h收集细胞,提取总RNA后,用RT-PCR法测定其hTERT合成水平的相对含量。结果淋巴细胞受到PHA刺激前hTERT的表达相对水平为0.575±0.231。刺激后24h、48hhTERT的表达相对水平分别为0.723±0.294,0.931±0.342,刺激后较刺激前明显升高(P<0.01)。结论正常人外周淋巴细胞活化时,hTERT的表达水平随时间延长明显升高。     

胃癌组织中端粒酶催化亚单位检测的临床意义

端粒酶是一种核糖核蛋白酶 ,广泛存在于永生化细胞和肿瘤细胞中。在肿瘤的发生、发展过程中起着重要的作用。ｈＴＥＲＴ是端粒酶的催化亚单位 ,可以催化端粒酶复制并延长端粒的作用 ,对于维持端粒酶的活性具有决定性作用。因此 ,ｈＴＥＲＴ与肿瘤的关系比端粒酶更为密切 ,有望代替端粒酶活性检测成为肿瘤诊断的指标之一。目前国内对于ｈＴＥＲＴ的研究很少。我们应用ＲＴ -ＰＣＲ方法检测胃癌组织中ｈＴＥＲＴｍＲＮＡ的表达 ,结合其组织病理学资料进行初步分析 ,以了解ｈＴＥＲＴ检测在肿瘤诊断中的临床意义。1　材料与方法1.1组织标本　取…     

端粒酶及蛋白亚单位在骨巨细胞瘤中的表达

[目的]检测人端粒酶活性和端粒酶蛋白亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)基因在不同分级骨巨细胞瘤组织中的表达情况.[方法]收集骨巨细胞瘤样本并进行病理学分级,采用TRAP方法检测端粒酶活性,RT-PCR方法检测各样本中hTERT基因的表达,经薄层分析扫描进行定量分析.[结果]约80%的骨巨细胞瘤组织中有端粒酶活性表达,与表达组织学分级差异无统计学意义(P＞0.05).4例骨巨细胞瘤Ⅰ级样本不表达hTERT基因或表达极弱,13例骨巨细胞瘤Ⅱ级与3例骨巨细胞瘤Ⅲ级的样本有较高的hTERT基因表达水平,与骨巨细胞瘤Ⅰ级的表达差异有统计学意义(P＜0.05),骨巨细胞瘤Ⅱ级与Ⅲ级的hTERT表达差异无统计学意义(P＞0.05).术后复发样本hTERT基因表达亦较其他样本明显增高.[结论]骨巨细胞瘤组织中可检测到端粒酶活性和hTERT基因,hTERT基因表达量可为骨巨细胞瘤分级及生物学行为的预测提供参考.     

人端粒酶催化亚单位基因正反义腺病毒表达载体的构建及鉴定

目的: 构建hTERT正义和反义腺病毒表达载体. 方法: 用EcoRⅠ从pGRN145质粒上切下约3.5 kb的人端粒酶全长cDNA片段,然后连入pDC315质粒的EcoRⅠ酶切位点上,经BamHⅠ酶切鉴定出正义和反义表达载体,并对正反义重组质粒进一步测序鉴定其方向. 结果: 经BamHⅠ酶切后,正义质粒形成1.0 6.4 kb两条带. 反义重组质粒为1.0 2.5 3.9 kb三条带,与理论计算值完全一致,测序结果进一步确认了方向的正确性. 结论: 成功构建了hTERT的正、反义腺病毒表达载体.     

人端粒酶催化亚单位基因单核苷酸多态性与胃癌的关系

目的 探讨人端粒酶催化亚单位基因(human telomerase catalytic subunit,hTERT)Ex2-659A/G位点单核苷酸多态性与胃癌患者发病风险的关系.方法 对甘肃西部三家医院外科手术切除168例胃癌患者(病例组)和同期在上述医院查体的健康人群156例(对照组)进行病例对照研究;采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)对2组进行基因型分析,比较各基因型分布频率和发病风险的关系.结果 病例组hTERT Ex2-659A/G位点从、AG、GG基因型的频率与对照组相比无显著差异.病例组A、G等位基因频率分别为44.74%和55.26%,对照组为43.42%和56.58%,2组A、G等位基因型频率比较有显著性差异(x2=5.373 4,P=0.020 4).与G/G基因型相比,A/G和A/A 2种基因型的个体患胃癌的危险度(OR)分别为0.519 (95% CI:0.310～0.870,P=0.013)、0.550(95% CI:0.255～1.188,P=0.128).结论 hTERT Ex2-659A/G单核苷酸多态性可能为胃癌的保护因素.     

端粒,端粒酶与胰腺癌的早期诊断

综述端粒酶与肿瘤的研究进展及其在胰腺癌研究领域的应用，提示通过内镜逆行胰管冲洗法（ＥＲＰＤＢ）收集胰管脱落细胞检测端粒酶活性及其相关指标，将为胰腺癌的早期诊断提供新的途径。     

端粒酶催化亚单位与肿瘤

人类端粒酶催化亚单位又称端粒酶逆转录酶 ,为端粒酶激活的限速酶 ,与端粒酶活性表达一致 ,对癌病变特异。一些化疗药物、中药、核酶及反义寡核苷酸均能不同程度地抑制hTERT -mRNA的表达 ,同时抑制了端粒酶活性 ,减慢了肿瘤细胞的生长速度。     

人端粒酶蛋白催化亚单位反义基因转染对胃癌细胞恶性表型的逆转作用

目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位（hTRT）反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 采用基因重组技术,构建hTRT正比、反义真核表达载体,采用脂质体法导入SGC－790细胞、反义真核表达载体,并导入SGC－790胃癌细胞株中,获得稳定表达正、反义基因的细胞系7901－S、7901－AS1和7901－AS2。7901－AS1和7901－AS2出现显著生长抑制现象,端粒酶活性明显下降,细胞凋亡增加,异型性减小,G0／G1期细胞增加,S和G2M期细胞减少,增殖指数减小,软琼脂中克隆形成,裸鼠体内成瘤消失。结论 hTRT反义基因治疗可以明显抑制SGC－7901细胞的增殖,部分逆转肿瘤细胞的恶性表型,其机制可能主要是通过诱导细胞分化而非诱导细胞凋亡途径实现的,提示hTRT基因可以作为肿瘤治疗的靶基因。     

端粒酶在肿瘤诊断中的应用

端粒酶(TR)是合成端粒重复序列的反转录DNA聚合酶,在许多肿瘤组织细胞中处于高度表达活性,而在正常组织细胞中却没有酶活性表达(除生殖和造血干细胞外).它存在于肿瘤发生、发展过程中,维持肿瘤细胞的高度增殖,对肿瘤细胞端粒的缩短起着非常重要的作用,TR表达水平的高低与肿瘤细胞侵袭、肿瘤进展和转移相关.因此可作为早期诊断肿瘤的广谱肿瘤标志物.     

端粒酶及其在肿瘤中的应用研究

端粒是线性染色体末端的一段特殊的DNA -蛋白质复合物 ;端粒酶是一种粒蛋白逆转录酶 ,能以自身的RNA为模板 ,反向合成 -TTAGGG - ,不断加在DNA末端。目前研究认为 ,端粒一端粒酶参与细胞的增殖过程 ,大多妇科恶性肿瘤有端粒酶的表达。抑制端粒酶的活性 ,将导致癌细胞端粒序列重新变短并激活细胞衰老途径。因此 ,端粒酶可以作为恶性肿瘤治疗的理想靶目标     

人端粒酶催化亚单位启动子驱动的EGFP真核表达载体的构建及在肺癌细胞的表达

目的：构建人端粒酶催化亚单位（hTERT）启动子驱动的增强绿色荧光蛋白（EGFP）真核表达载体，研究其调控EGFP在肿瘤细胞中的靶向表达。方法：从含hTERT启动子序列的重组质粒pGL3-hTERTp上，酶切获取约1100bv的启动子片段，克隆至无启动子的EGFP质粒载体pEGFP-1的多克隆位点中，构建pEGFP-hTERTp真核表达载体。用含有巨细胞病毒（CMV）启动子的质粒pEGFP—N1作为阳性对照，pEGFP-1作为阴性对照，脂质体转染法分别转染人肺癌细胞95D，NCI—H446，A2，A549，LTEP—a-2，YTMLC和人正常细胞MRC-5，荧光显微镜下观察各细胞中EGFP转录表达情况。结果；双酶切和单酶切均显示载体pEGFP—hTERTp构建成功。细胞转染结果显示：在转染了pEGFP-hTERTp质粒的肺癌细胞中EGFP都有不同程度的表达，而在MRC-5中无EGFP表达；转染pEGFP-N1的肺癌细胞和正常细胞中均可清晰地观察到EGFP强荧光表达。结论：hTERT启动子能调控EGFP在肺癌细胞中靶向性转录表达。CMV启动子调控的EGFP在肺癌细胞和正常细胞中的表达不具有特异性。hTERT启动子有可能作为肿瘤靶向性基因治疗的调控元件。     

端粒、端粒酶与胰腺癌的早期诊断

综述端粒酶与肿瘤的研究进展及其在胰腺癌研究领域的应用 ,提示通过内镜逆行胰管冲洗法 (ERPDB)收集胰管脱落细胞检测端粒酶活性及其相关指标 ,将为胰腺癌的早期诊断提供新的途径。     

人端粒酶催化亚单位启动子调控自杀基因HSV-TK靶向性表达治疗肺癌的体内外实验研究

目的 研究人类单纯疱疹病毒的胸苷激酶(HSV-TK)/更昔洛韦(GCV)治疗系统在人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的调控下对肺癌细胞A549的体外靶向性增殖抑制作用和对裸鼠体内A549移植瘤的治疗效果.方法 ①用已构建的hTERT启动子和SV40启动子调控的TK基因表达质粒pGL3-hTp-TK和pGL3-SV40-TK转染端粒酶阳性的人肺腺癌细胞A549及端粒酶阴性的人胚肺细胞MRC-5,RT-PCR方法检测转染细胞中TK基因的表达情况;②MTT法检测GCV对上述转染细胞体外增殖的抑制作用;并应用流式细胞仪检测GCV对上述转染细胞凋亡的影响;③将A549细胞接种于裸鼠皮下,研究pGL3-hTp-TK/GCV和pGL3-SV40-TK/GCV对移植瘤的体内生长抑制作用.结果 ①转染pGL3-SV40-TK的A549和MRC-5细胞均有TK mRNA表达,转染pGL3-hTp-TK的A549细胞也有TK mRNA表达,但MRC-5细胞无TK mRNA表达;②GCV对转染pGL3-SV40-TK的A549、MRC-5细胞和转染pGL3-hTp-TK的A549细胞的体外增殖均有明显抑制作用,对转染pGL3-hTp-TK的MRC-5细胞无明显抑制作用;转染pGL3-SV40-TK 和pGL3-hTp-TK的A549细胞经GCV处理后细胞凋亡指数(分别为21.58%和23.19%)均显著高于转染pGL3-hTp的A549细胞及空白对照, 转染pGL3-SV40-TK的MRC-5细胞凋亡指数(9.35%)显著高于对照组,而转染pGL3-hTp-TK的MRC-5细胞凋亡指数(0.88%)无明显升高;③pGL3-SV40-TK/GCV和pGL3-hTp-TK/GCV治疗系统对裸鼠A549移植瘤的生长具有明显抑制作用,抑瘤率分别为46.7%和40.5%,均显著高于各阴性对照组(分别为9.7%,14.3%,7.0%和8.0%).结论 hTERT启动子可以调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向性表达,HSV-TK/GCV治疗系统在hTERT启动子调控下对肺癌细胞A549的体外增殖和裸鼠体内的移植瘤生长均有明显的抑制作用.     

单个shRNA质粒同时抑制LNCaP细胞人端粒酶催化亚单位和雄激素受体的表达

目的 探讨单个shRNA质粒联合抑制LNCaP细胞人端粒酶催化亚单位(hTERT)和雄激素受体(AR)基因表达的可行性.方法 使用RNAi-DNA载体技术,将hTERT和AR siRNA的DNA模板同时插入到载体Pgenesil,构建成重组质粒Pgenesil-hTERT-AR-shRNA,转染至LNCaP细胞,与空白对照、Pgenesil-HK-shRNA(通用阴性质粒)、Pgenesil-hTERT-shRNA和Pgenesil-AR-shRNA比较,利用实时荧光定量PCR技术观察其对LNCaP细胞hTERT和AR基因mRNA表达的影响.采用Annexin V方法检测细胞凋亡,MTF比色分析法测定细胞增殖活性.结果 空白对照组、Pgenesil-HK-shRNA组、Pgenesil-hTERT-shRNA组、Pgenesil-AR-shRNA组和Pgenesil-hTERT-AR-shRNA组细胞的hTERT基因mRNA分别为(1.51±0.08)×108、(7.32±0.43)×107、(2.94±0.15)×106、(4.45±0.25)×107、(3.17±0.18)×106 (copies/ml),各组AR基因mRNA分别为(1.92±0.11)×105、(6.47±0.32)×105、(3.70±0.24)×104、(1.22±0.06)×104、(7.21±0.41)×103 (copies/ml),提示Pgenesil-hTERT-shRNA对hTERT基因mRNA有抑制作用,Pgenesil-AR-shRNA对AR基因mRNA有抑制作用,Pgenesil-hTERT-AR-shRNA对hTERT和AR基因mRNA都有抑制作用(P＜0.05).Pgenesil-hTERT-AR.shRNA与Pgenesil-hTERT-shRNA、Pgenesil-AR-shRNA比较,引起的细胞凋亡、细胞生长抑制更加明显(P＜0.05).结论 含有hTERT-shRNA和AR-shRNA DNA模板的重组表达质粒Pgenesil-hTERT-AR-shRNA能够明显抑制hTERT和AR基因的表达和前列腺癌细胞的生长.     

人胃癌组织端粒酶活性与其催化亚单位(hTRT)基因表达的相关性

[目的]探讨胃癌组织中端粒酶活性与其催化亚单位(hTRT)基因表达的关系.[方法]采用改良端粒重复扩增法(TPAP)和RT-PCR扩增法检测胃癌组织、胃溃疡组织、正常胃黏膜中端粒酶活性和hTRT基因表达.[结果]58例胃癌组织中51例(88%)有hTRT基因表达,50例(86%)检测到端粒酶活性,58例非胃癌组织中,3例有hTRT基因表达,无l例检测到端粒酶活性.[结论]hTRT基因表达与端粒酶活性的表达具有高度一致性.