癌痛消颗粒对移植性肝癌大鼠VEGF-C的影响

目的:观察癌痛消颗粒对大鼠移植性肝癌血管内皮因子C(VEGF-C)表达的影响。方法:将40只大鼠移植性肝癌模型随机分为4组,即癌痛消颗粒高剂量组(A组)、癌痛消颗粒低剂量组(B组)、5-Fu组(C组)、模型组(D组)。于造模后第8天对癌痛消颗粒治疗组灌胃给药,5-Fu组腹腔注射给药,连续用药14天后停药24h,处死大鼠,取出瘤块,用免疫组化法检测瘤块中VEGF-C的表达情况。另设正常对照组(E组)大鼠10只,不进行造模及给药,供实验结束时作空白对照用。结果:造模各组(A、B、C、D组)VEGF-C均高于正常对照组(E组),差异均有统计学意义(均P0.05),其中以D组VEGF-C表达最高。A、B、C组VEGF-C均低于D组,差异均有统计学意义(均P0.05)。A组VEGF-C低于B组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:癌痛消颗粒对大鼠移植性肝癌VEGF-C的表达有干预作用,且以高剂量组作用更为明显。     

癌痛消颗粒影响大鼠移植性肝癌细胞凋亡的研究

目的:探讨癌痛消颗粒对实验大鼠肝癌细胞的影响。方法:采用Walker-256瘤株进行SD大鼠的移植型肝癌的造模,造模结束后药物治疗,最后处死动物取标本,检测细胞周期及细胞凋亡。结果:癌痛消颗粒组的肝细胞主要停留在细胞周期的G0/G1期,在S期的细胞明显减少,与模型组相比,差异均有非常显著性意义(P<0.01);癌痛消组细胞凋亡率明显提高,与模型组、正常组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论:癌痛消颗粒能使肝癌细胞周期停留在G0/G1期,阻止其进入S期;显著提高癌细胞凋亡率,促使癌细胞凋亡。     

癌痛消诱导大鼠移植性肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究癌痛消颗粒对大鼠移植性肝癌的抑瘤作用以及对肿瘤细胞凋亡的影响,探讨该药抗肝癌作用的机理。方法:采用walker-256瘤株建立SD大鼠的移植性肝癌的模型,分为癌痛消高、中、低剂量组,5-Fu组,蒸馏水组,连续用药14天。停药24h,处死大鼠,取出瘤块,称重,计算抑瘤率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:癌痛消低、中、高治疗组均有抑瘤作用,抑瘤率分别为12.4%、32.4%、45.7%;癌痛消低、中、高剂量组均可诱导肝癌细胞凋亡,与蒸馏水组比较,癌痛消高、中剂量组差异均具有显著性意义;癌痛消高、中剂量组能改善模型大鼠体重变化。癌痛消各剂量组较蒸馏水组和5-FU组,一般情况较好,症状较轻。结论:癌痛消能改善移植性肝癌大鼠的生存质量,抑制大鼠移植性肝癌细胞生长,其作用机制可能与诱导肝癌细胞凋亡有关,其作用强度可能与剂量呈正相关。     

癌痛消方调控大鼠移植性肝癌细胞Survivin及Bcl-2的实验研究

目的从分子层面了解癌痛消方抗肿瘤的主要作用机制,明确不同功效药物组在抗肿瘤中所扮演的角色,从而深入阐释“癌毒”论的客观实质性。方法采用Walker-256瘤株进行Wistar大鼠的移植性肝癌的造模,造模成功后随机分为5组,即全方组、理气活血（拆方I）组、清热解毒（拆方Ⅱ）组、扶正培元（拆方Ⅲ）组、模型组,每组10只,分别给予相应药物治疗14天,最后处死大鼠,并取出瘤块,分别应用流式细胞仪AnnexinV／PI法检测肿瘤细胞凋亡率和细胞周期、免疫组化法和实时荧光定量RT．PCR法检测瘤块中Bcl-2、Survivin蛋白和mRNA的表达情况。结果（1）全方组能明显促进肝癌细胞凋亡;并能影响肝癌细胞周期,使大部分细胞停滞于G0／G1期,有效阻止肝癌细胞增殖。拆方Ⅱ组与全方组疗效一致,差异无统计学意义（P〉0．05）;拆方Ⅲ组有效,但其效果不如前两者,差异有统计学意义（P〈0．01）;（2）癌痛消方能明显下调肝癌细胞中Survivin和Bcl-2蛋白和mRNA的表达;清热解毒药物在下调肝癌细胞中Survivin和Bcl-2蛋白和mRNA的表达效果显著,与癌痛消方功效相近（P〉0．05）,扶正培元药物疗效不及前两者,差异有统计学意义（P〈0．01）,活血化瘀药物一定程度上上调Survivin和Bcl-2蛋白和mRNA的表达。结论（1）癌痛消方能明显通过下调肝癌细胞中Survivin和Bcl-2蛋白和mRNA的表达,致使肝癌细胞凋亡比值升高,肝癌细胞增殖受到抑制;（2）清热解毒药物在癌痛消方中起到了最为重要的作用,湿热毒邪是肿瘤发病中最根本的致病因素,正气亏虚也是肝癌起病的条件之一,痰、瘀等病理产物作用机制不明,有待进一步研究。     

癌痛消方中活血化淤药对大鼠移植性肝癌细胞中Fas、FasL及Caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨癌痛消方中使用的大剂量活血化淤药物对肝癌细胞凋亡因子的影响,进一步明确其在抗肿瘤方面的作用机制.方法 将40只Walker-256移植性肝癌大鼠模型随机分为4组,即癌痛消全方组、活血化淤药组、非活血化淤药组及模型组,于造模后第8天给药,连续用药14 d后停药24 h,处死大鼠,并取出适量肿瘤组织行流式细胞JC-1染色法检测,并取出适量瘤块行免疫组化法检测其中Fas、FasL、Caspase-3蛋白的表达情况.结果 肝癌细胞线粒体膜电位下降的细胞比值(JC-1+％)在活血化淤药组中为(22.34±1.94)％,与癌痛消全方组、非活血化淤组两两比较,差异均显著(P=0.000),与模型组比较,差异无统计学意义(P =0.093).Fas、FasL和Caspase-3蛋白在活血化淤药组的表达情况与模型组比较,差异无统计学意义(P =0.835、P=0.584和P=0.820)；与癌痛消全方组和非活血化淤药组两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).三者蛋白表达情况与细胞凋亡检测结果相一致.结论 单独使用癌痛消方中大剂量活血化淤药不能明显影响Fas、FasL和Caspase-3蛋白在肝癌细胞中的表达,不能明显干扰细胞凋亡网络信号从而促进肝癌细胞的凋亡,有必要与其他具有抗肿瘤作用药物联合使用.     

癌痛消胶囊调节小鼠荷H22移植性肝癌细胞VEGF表达的实验研究

目的 :通过观察癌痛消胶囊对小鼠荷H22 移植性肝癌细胞血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的调节作用 ,探讨该药抑制肿瘤的作用是否与抑制肿瘤血管生成有关。方法 :于昆明种雄性小鼠前肢右腋皮下接种0 2mlH22 肿瘤细胞悬液(浓度为1×107/ml)进行造模。利用造模动物观察瘤块重量 ,计算肿瘤生长抑制率 ,用免疫组化法检测瘤细胞中VEGF的表达程度。结果 :与阴性对照组相比 ,癌痛消胶囊组有明显的抑瘤作用(P<0 05) ,抑瘤率为36 34 % ;病理检测显示 ,造模各组VEGF阳性表达率为100% ,但程度不同 ,癌痛消胶囊组可使肿瘤组织VEGF的表达明显下调 ,与阴性对照组比较 ,差异有显著性意义(P<0 01)。结论 :癌痛消胶囊对小鼠荷H22 移植性肝癌细胞的生长有抑制作用 ,能减少血管生成调控基因VEGF的表达。     

癌痛消颗粒治疗原发性肝癌血瘀毒结兼正虚证疗效分析

目的:探讨癌痛消颗粒对原发性肝癌(以下简称肝癌)的临床疗效。方法:严格遵循诊断标准、病例纳入标准、排除标准等,观察27例肝癌患者,口服癌痛消颗粒,进行治疗前后AFP、中医症状体征、Karnofsky评分指标的检查与分析。结果:临床观察27例原发性肝癌患者中用癌痛消颗粒治疗,肿瘤体积疗效有效率88.89%;中医证候总有效率为21/27(77.78%);用药前后中医证候积分差值为(10.31±4.71),差异有显著性意义(P<0.01);AFP用药前后的差值为(316.31±62.74),差异有显著性意义(P<0.01);用药前后生活质量(卡氏评分)有明显变化,评分前后差值为(11.15±5.65),差异有显著性意义(P<0.01)。结论:癌痛消颗粒治疗原发性肝癌血瘀毒结正虚证患者的肿瘤体积疗效有效率88.89%;中医证候总有效率为21/27(77.78%),能明显降低原发性肝癌患者的AFP水平,改善患者的生活质量。     

癌痛消颗粒对移植性肝癌模型大鼠肝癌及癌旁组织miRNAs的影响

目的观察癌痛消颗粒对移植性肝癌模型大鼠肝癌及癌旁组织微小核糖核酸（miRNAs）表达的调节作用,探讨癌痛消颗粒抗肝癌作用的机制。方法将60只移植性肝癌模型大鼠随机分为5组,即癌痛消颗粒高、中、低剂量组及5-氟尿嘧啶（5-Fu）对照组、蒸馏水对照组,另设10只大鼠为空白对照组,不进行造模及给药。于造模后第8 d对癌痛消颗粒高、中、低剂量及蒸馏水对照组灌胃给药治疗,连续用药14 d后停药;5-Fu对照组腹腔注射给药治疗,共连续注射5次,各组均停药24 h后处死各组大鼠,取出瘤块,用实时定量PCR（PT-PCR）技术观察肝癌及癌旁组织特定miRNAs中miR-199a-3p、miR-199a-5p、miR-18表达水平。结果癌痛消颗粒高、中、低剂量组及5-Fu对照组、蒸馏水对照组肝癌及癌旁组织miR-199a-3p、miR-199a-5p、miR-18表达水平与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;癌痛消颗粒高、中、低剂量组及5-Fu对照组miR-199a-3p、miR-199a-5p、miR-18表达水平与蒸馏水组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,且癌痛消颗粒高、中剂量组与5-Fu对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,癌痛消颗粒低剂量组与5-Fu对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,癌痛消颗粒中剂量组与高剂量组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论癌痛消颗粒对移植性肝癌模型大鼠的肝癌及癌旁组织miRNAs的表达具有调节作用,其抗癌机制可能与降低miR-18的表达,升高miR-199a-3p、miR-199a-5p的表达有关,且癌痛消颗粒的中剂量组的临床效果最好。     

癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响

目的观察癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法癌痛消饱和溶液按86.4、43.2、21.6 g/kg剂量给予SD大鼠灌胃1周,取血制备含药血清,加入SMMC-7721及Bel-7404肝癌细胞培养液。不同浓度癌痛消药物血清处理人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果体外研究显示,癌痛消方药物血清低、中、高剂量组对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404均具有不同程度的抑制作用,且这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性,癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404有促凋亡作用。结论癌痛消方药物血清在体外对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞有抑制增殖作用和促凋亡作用。     

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织SREBP-1c mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织SREBP-1c mRNA及蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法:选雄性SPF级SD大鼠55只,随机分为模型组、正常对照组和3个中药干预组,分别为疏肝组、健脾组及合方组。除正常对照组外,各组采用脂肪乳剂灌胃8 w复制大鼠NAFLD模型,同时各药物干预组给予不同药物干预(10 mL/kg),正常对照组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃。8 w后处死动物取肝组织,HE染色观察肝脏病理变化;RT-PCR方法检测肝组织SREBP-1c mRNA的表达;免疫组织化学方法检测肝组织SREBP-1c的蛋白表达水平和分布。结果:模型组大鼠肝组织SREBP-1c mRNA表达水平及SREBP-1c蛋白阳性表达率较正常对照组显著升高(P<0.01);各中药干预组大鼠肝组织SREBP-1c mRNA表达水平及SREBP-1c蛋白阳性表达率较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01);疏肝组、健脾组大鼠肝组织SREBP-1c mRNA表达率较合方组显著降低(P<0.01)。病理观察显示疏肝、健脾组大鼠肝组织脂肪变最轻。结论:疏肝健脾方药可能是通过下调SREBP-1c mRN...     

香兰素与乙基香兰素对大鼠肝脏中转运蛋白mRNA表达的影响

目的 研究香兰素、乙基香兰素对大鼠肝脏中多药耐药基因Mdr1、多药耐药相关蛋白Mrp2、阴离子转运蛋白Oatp1A1和阳离子转运蛋白Oct1 mRNA表达水平的影响.方法 大鼠ig香兰素或乙基香兰素3、15、75 mg/(kg·d),连续给药7d,提取肝脏总RNA,逆转录后荧光定量PCR检测细胞膜Mdr1、Mrp2、Oatp1A1和Oct1 mRNA的表达.结果 香兰素、乙基香兰素均能显著上调Mdr1 mRNA的表达,下调Oatp1A1、Oct1 mRNA的表达,对Mrp2 mRNA的表达无显著影响.结论 香兰素、乙基香兰素给药后能提高肝细胞Mdr1对药物的外排作用,减弱Oatp1A1、Oct1对药物的摄取能力,当香兰素和乙基香兰素与上述转运体底物药物共用时,可能会发生药物相互作用.     

枸杞多糖对小鼠移植性肝癌抑制作用的实验研究

目的探讨枸杞多糖对小鼠移植性肝癌的抑制作用。方法采用皮下接种法制备小鼠移植性肝癌(H22肝癌细胞株)模型,随机将96只小鼠分成对照组、模型组、枸杞多糖高、中、低剂量(20、10、5 mg/kg)组、环磷酰胺(20 mg/kg)组。观察枸杞多糖对荷瘤小鼠死亡率、肿瘤体积、肿瘤质量及肿瘤细胞密度、核分裂像、肿瘤坏死程度及间质淋巴细胞浸润、纤维组织增生情况的影响。结果 20、10、5 mg/kg的枸杞多糖能明显降低移植性肝癌小鼠的死亡率(P<0.05),减小肿瘤细胞的体积和质量(P<0.05),抑瘤率分别为42.23%、25.10%和9.16%;同时20、10 mg/kg的枸杞多糖能不同程度地降低肿瘤细胞密度(P<0.05),减少肿瘤细胞的核分裂像计数(P<0.05),增加肿瘤细胞坏死程度、间质淋巴细胞浸润和纤维组织增生(P<0.05)。结论枸杞多糖对小鼠移植性肝癌有一定的抑制作用。     

疏肝法对围绝经期综合征肝郁证模型大鼠雌激素受体mRNA表达的影响

目的：观察疏肝法对围绝经期综合征(perimenopausal syndrome, PMS)肝郁证模型大鼠行为学及其卵巢雌激素受体(Estrogen receptor, ER)mRNA表达的影响,探讨其作用机制。方法将围绝经期大鼠按随机数字表法分为模型组、柴胡疏肝散组、丹栀逍遥散组,每组8只。采用孤养法联合慢性束缚法制备PMS肝郁证大鼠模型。另将8只3月龄SD健康大鼠作为正常对照组。柴胡疏肝散组大鼠灌胃柴胡疏肝散水煎剂4.0 g/kg,丹栀逍遥散组灌胃丹栀逍遥散水煎剂4.9 g/kg,模型组及正常对照组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续给药21 d。采用旷场实验观察各组大鼠行为学变化;采用放射性免疫技术检测大鼠血清雌二醇、卵泡刺激素及促黄体生成素水平;采用实时荧光定量PCR法检测大鼠卵巢组织ERα、ERβ mRNA表达变化。结果给药后21 d,与模型组比较,柴胡疏肝散组、丹栀逍遥散组大鼠水平运动得分[(49.6±6.0)分、(51.6±5.8)分比(40.0±4.6)分]、垂直运动得分[(14.1±0.7)分、(14.6±2.3)分比(10.9±1.8)分]提高(P＜0.05及P＜0.01);柴胡疏肝散组大鼠卵巢ERα mRNA[(7.42±2.54)比(3.80±1.36)]表达水平升高(P＜0.01),血清卵泡刺激素[(3.96±0.48)mIU/ml比(5.31±0.41)mIU/ml]水平降低(P＜0.01);丹栀逍遥散组大鼠血清促黄体生成素[(6.65±0.46)mIU/ml 比(8.10±0.62)mIU/ml]水平降低(P＜0.01)。结论疏肝法可改善 PMS 肝郁证大鼠的行为学,其治疗机制可能与调节内分泌及提高卵巢雌激素受体基因表达相关。     

针刺保肝护脑对脑缺血再灌注肝损伤大鼠SODmRNA表达的影响

目的:探讨针刺保肝护脑对脑缺血再灌注肝损伤大鼠SODmRNA表达的影响.方法:将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺对照组、针刺保肝护脑组.线栓法制作缺血再灌注大鼠模型,测试大鼠行为学、血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、SOD活性、肝组织SODmRNA含量.结果:模型组、针刺对照组和针刺保肝护脑组缺血2h(电针治疗前)时神经功能缺损评分无显著差异;经10次电针治疗结束后:与模型组比较,针刺对照组和针刺保肝护脑组神经功能缺损评分有极显著差异(P＜0.01);与针刺对照组比较,针刺保肝护脑组神经功能缺损评分变化更为显著(P＜0.05).电针治疗前,与假手术组、针刺对照组和针刺保肝护脑组比较,模型组血清ALT、AST水平显著增高(P＜0.01),而血清SOD、肝组织SODmRNA明显降低(P＜0.01);经10次电针治疗结束后:与模型组比较,针刺对照组和针刺保肝护脑组血清ALT、AST水平明显降低(P＜0.01),同时血清SOD、肝组织SODmRNA显著升高(P＜0.01);与针刺对照组比较,针刺保肝护脑组血清ALT、AST、SOD和肝组织SODmRNA各项变化更为显著(P＜0.05).结论:针刺保肝护脑对脑缺血再灌注大鼠的治疗效果较单纯头穴针刺更为显著,其治疗机制与促进肝脏SODmRNA表达相关.     

电针对急性脑梗死大鼠VEGF/Flt-1基因及其蛋白表达的影响

[目的]以大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠为研究对象,通过观察血管内皮生长因子及其受体(VEGF/Flt-1)基因及其蛋白表达的变化以探讨电针对急性脑梗死大鼠血管新生的干预机制。[方法]将120只Wistar大鼠随机分为3组,即空白组、模型组、电针组,模型组和电针组按术后3 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、12 d各分为7个时相组,每时相各8只。各组造模后,电针组依时相进行电针人中穴的治疗。各组大鼠依时间段处死后,进行实时荧光定量聚合酶连反应(PCR)及免疫组化的检测。[结果]电针组VEGF/Flt-1的mRNA及蛋白表达均较模型组有显著上调。[结论]电针对急性脑缺血大鼠VEGF/Flt-1的表达有良性调整作用,可促进缺血半暗带的血管新生。     

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织脂肪酸合成酶mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝组织脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)mRNA及蛋白表达的影响,探讨疏肝健脾方药抗大鼠NAFLD的作用机制。方法:雄性SD大鼠,分为正常组、模型组、健脾组、疏肝组、综合组。使用高脂肪乳剂灌胃造模,治疗组给予相应药物灌胃,8周后处死大鼠,检测血清转氨酶、血脂和肝脂水平;HE染色观察肝组织病理变化;RT-PCR和免疫组织化学方法检测肝组织FAS基因和蛋白的表达。结果:与模型组相比,各药物干预组大鼠血清AST、TC、TG含量和肝组织TC含量均显著下降(P<0.05,P<0.01),健脾组和疏肝组肝组织TG含量显著下降(P<0.05);光镜观察各药物均能改善大鼠肝细胞脂肪变性,以疏肝组更为显著;各用药组FAS mRNA表达水平和蛋白的表达均有下降(P<0.05),其中疏肝组表达的水平最低。结论:疏肝健脾方药能显著改善NAFLD大鼠脂质代谢紊乱,减轻肝损伤,具有良好的抗NAFLD的作用。其机制可能与下调FAS mRNA及蛋白表达有关。     

二鳖散对大鼠Walker-256肝癌肿瘤生长及血清VEGF，endostatin表达的影响

目的:探讨二鳖散对大鼠Walker-256肝癌肿瘤生长及血清血管内皮生长因子(VEGF)、内皮抑素(Endostatin)表达的影响,从抗血管生成角度探讨二鳖散的抗癌作用.方法:采用Walker-256癌肉瘤腹水接种Wistar大鼠制作肝癌模型,随机分为二鳖散低、中、高剂量(1.25,2.5,5 g·kg~(-1)·d~(-1))组、5-氟脲嘧啶75 mg·kg~(-1)组及模型组.于造模的第9天开始灌胃,每日1次,共21 d.检测各组大鼠瘤重、肿瘤抑制率,ELISA法检测各组大鼠血清VEGF,endostatin的表达,计算比较各组vEGF/endostatin的比值.结果:二鳖散中、高剂量组和5-氟脲嘧啶组大鼠瘤重减轻,其血清VEGF表达量降低,Endostatin 表达量升高,VEGF/endostatin比值降低,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05 P<0.01).结论:二鳖散能抑制大鼠Walker-256 肝癌的生长,其机制可能与调控VEGF/endostatin的失衡而抑制肿瘤血管生成有关.