抗同型磺基丙氨酸单克隆抗体的制备和定性

用戊二醛将L-同型磺基丙氨酸(L-HCA)连接到牛血清白蛋白(BSA),形成L-HCA-BSA连接物.用L-HCA-BSA免疫小鼠后,收集脾淋巴细胞,并与骨髓瘤细胞融合.用含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核甙(HAT)培养基保留杂交细胞.用ELISA法筛选能够分泌与L-HCA-BSA产生免疫反应的杂交细胞.通过ELISA抗体系列稀释试验和抗体吸收试验,确定抗体特异性.结果表明,抗L-HCA单克隆抗体(McAb)2D4能特异地与L-HCA-BSA产生免疫反应.用L-HCA-BSA吸收L-HCA McAb,可明显降低或取消L-HCA抗体与L-HCA-BSA的免疫反应.结果提示L-HCAMcAb对L-HCA-BSA具有特异性,可用于免疫组织和细胞化学研究L-HCA在神经系统中的分布和定位.     

抗猪鼻支原体单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗猪鼻支原体(M．hyorhinis,M.hy)的单抗隆抗体(monoclonal antibody,McAb)，为相关研究提供工具。方法：用灭活的猪鼻支原体免疫BALB／c小鼠，运用传统的细胞融合技术制备抗猪鼻支原体单克隆抗体。单抗鉴定采用酶联免疫吸附实验(ELISA)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法。结果：经ELISA筛选获得了一株抗猪鼻支原体的单克隆抗体，该抗体亚类为IgG2b。ELISA结果表明该单抗仅与猪鼻支原体反应而与肺炎支原体和发酵支原体不反应。用经PCR检测支原体阳性的胃癌切片做免疫组化，结果显示，该抗体能与PCR阳性的胃癌组织切片产生特异性反应。结论：获得一株抗猪鼻支原体特异性单克隆抗体，可为相关研究提供工具。     

高亲和力抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体制备及检测变异HBsAg方法的建立

目的制备抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)单克隆抗体,建立检测变异HBsAg的方法。方法用血源HB-sAg免疫BALB/c小鼠,制备可以识别变异HBsAg的抗-HBs单抗。筛选出可以较好识别变异HBsAg的单抗mAb1,优化该抗体ELISA检测HBsAg的方法,与2种HBsAg检测试剂比较检测变异HBsAg的能力。对6份临床样品进行检测及序列分析,以证实方法的可靠性。结果经过筛选,得到1种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HB-sAg的单抗。检测变异HBsAg的能力优于市售HBsAg诊断试剂。结论制备的单抗可以用于ELISA检测变异HB-sAg,减少HBsAg变异株的漏检率。     

抗马尔尼菲青霉单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备和鉴定抗马尔尼菲青霉单克隆抗体(mAb)。方法用基因重组马尔尼菲青霉甘露糖蛋白1(MP1)抗原免疫BALB/c小鼠,制备mAb,并采用ELISA间接法和免疫印迹进行筛选和鉴定。结果筛选出4株稳定分泌抗马尔尼菲青霉mAb杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定均为IgG1,抗体亲和常数分别为8.2×10-9、4.7×10-9、6.5×10-9和2.7×10-9,免疫印迹证实马尔尼菲青霉mAb特异性识别MP1。结论4个杂交瘤细胞株特异性好、亲和力高,为马尔尼菲青霉病的快速诊断奠定了基础。     

抗狂犬病疫苗单克隆抗体的制备和初步鉴定

用狂犬病疫苗为抗原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/O融合,经过培养、克隆、ELISA鉴定,筛出3株分泌抗狂犬病疫苗单克隆抗体细胞株。双扩散结果证明:3株细胞均分泌IgG1。     

酶标记抗人IgM单克隆抗体的制备及其初步鉴定与应用

用HRP以改良过碘酸钠法标记了6种国产抗人IgM单克隆抗体并进行了初步鉴定。选用高效价的HRP标记抗人IgM McAb,用ELISA间接夹心法检测病人血清中特异性IgM抗体,其特异性阳敏感性与采用HRP标记羊抗人μ链检测基本相同。     

抗脲激酶单克隆抗体的研制和初步鉴定

用上海生物化学制药厂赠送的脲激酶（Ｈ－ＵＫ），免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合，用高纯度Ｈ－ＵＫ包被筛选阳性克隆，获得抗Ｈ－ＵＫ单克隆抗体ＮＵＫ－１和ＮＵＫ－２两细胞株。酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测效价为１０４～１０５，经亚类测定分属ＩｇＧ１和ＩｇＧ２。为研究脲激酶的结构和导向治疗血栓提供了可能。     

高尔基体蛋白73单克隆抗体的制备和鉴定

目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)鼠源单克隆抗体的制备方法并进行鉴定。方法用GP73重组抗原蛋白免疫5只小鼠获得血清抗体,免疫小鼠脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合,经过筛选后选择GP73抗体阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养,通过腹水制备获得高特异性和高效价的GP73单克隆抗体(单抗)。结果成功筛选出11株能稳定分泌特异性GP73单抗的杂交瘤细胞株,经多次复苏传代仍能稳定分泌特异性强、效价高的抗体。11株单抗均能结合天然状态下的GP73蛋白,与无关蛋白均无交叉反应,提示有较强的特异性。应用筛选出的配对GP73单抗可检测出浓度为1ng/ml的GP73基因工程表达抗原。结论制备的GP73杂交瘤细胞株分泌的抗体对GP73蛋白具有特异亲和性,并且有较高效价,为GP73蛋白诊断试剂的研制提供了关键技术基础。     

单克隆抗体酶联免疫吸附测定甲胎蛋白方法的建立

应用二种抗甲胎蛋白(AFP)不同抗原决定簇的单克隆抗体分别与纤维素及酶结合,建立酶联免疫吸附测定(ELISA)法。应用这种方法测定18例人血清标本,结果与放射酶免疫测定比较,二者趋于一致。此外,本文对单克隆抗体的ELISA与抗血清的RIA进行了比较与讨论。     

人胎盘层粘连蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得能特异性识别人层粘连蛋白(hLN)的单克隆抗体(McAb)。方法用纯化的人层粘连蛋白(hLN)作抗原免疫Balb/C小鼠,以细胞融合、酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选和克隆化技术获得抗hLN的杂交瘤细胞株;用生物学方法鉴定杂交瘤细胞,用免疫学方法鉴定McAb的特异性。结果获得4株稳定分泌抗人LN的杂交瘤细胞株(2A1、3B5、2C4、4D1),培养上清的ELISA效价分别为:1∶512、1∶1024、1∶512、1∶256;腹水效价分别为:1×106、1×107、1×106、1×105;采用ELISA相加法表明2A1、4D1与3B5、2C4识别的hLN上的抗原决定簇和识别的不同,4株单抗均属实IgG。结论成功建立了4株稳定分泌抗人LNMcAb的杂交瘤细胞株,它们分别识别hLN上2个不同的抗原位点,有望作为hLN定量检测的特异性抗体。     

抗重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备与鉴定

目的 :获得能特异性识别人红细胞生成素 (hEPO)的单克隆抗体 (McAb)。方法 :用重组人红细胞生成素 (rHuEPO)作抗原免疫Balb/c小鼠 ,以细胞融合、酶联免疫吸附实验 (ELISA)筛选和克隆化技术获得抗hEPO的杂交瘤细胞株。用生物学方法鉴定杂交瘤细胞 ,用免疫学方法鉴定McAb的特异性。结果 :获得 3株稳定分泌抗hEPO McAb的杂交瘤细胞株 (1H7、4G11、1B4 )。培养上清的ELISA效价分别为 :1∶10 2 4、1∶5 12、1∶5 12 ;腹水效价为 :1× 10 7、1× 10 6、2× 10 4。阻断法表明 1H7识别的hEPO上的抗原决定簇和 4G11、1B4识别的不同。结论 :成功建立了 3株稳定分泌抗hEPO McAb的杂交瘤细胞株 ,它们分别识别hEPO上 2个不同的抗原位点 ,有望作为EPO定量检测的特异性抗体。     

人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的 通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Western blot等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得1株能稳定分泌抗ALT1单克隆抗体的细胞株8A9,亚类鉴定这种单抗为IgG2.间接ELISA法测定细胞株腹水抗体的效价为10×10~5.Dot-ELISA、Western blot显示ALT1单克隆抗体能特异性地识别免疫原.结论 成功制备ALT1单克隆抗体.     

抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性.方法 分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗).纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶.分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA.结果 获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株.用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50 μg/L的gp36.结论 为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗.     

抗胆固醇酯转运蛋白单克隆抗体的制备及其应用

目的：自行制备胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ），建立人血清ＣＥＴＰ的酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ），调查中国人群ＣＥＴＰ参考值及临床意义。方法：应用杂交瘤技术制备ＣＥＴＰＭｃＡｂ。用棋盘试验确定ＥＬＩＳＡ法的反应条件；进行灵敏度、精密度、回收率、特异性试验。结果：制备出一株特异性好、反应性强的ＣＥＴＰＭｃＡｂ。筛选出ＥＬＩＳＡ法最佳反应条件，样本稀释２０００倍，可检测０．２８～４．５２ｍｇ／Ｌ的血清ＣＥＴＰ水平；平均批内ＣＶ为４．９％，平均批间ＣＶ为１０．２％；平均回收率为９２．５％～９７．２％；特异性高。检测结果同国外实验室ＥＬＩＳＡ法高度相关。１１２８例参考人群血清ＣＥＴＰ浓度为１．８４±１．５５ｍｇ／Ｌ，女性高于男性；随着年龄增高，ＣＥＴＰ浓度降低。冠心病患者ＣＥＴＰ浓度为２．６６±２．０８ｍｇ／Ｌ，较相应对照组显著升高（Ｐ＜０．０１）。结论：该法具有方便、快速、准确、特异等优点，对了解ＣＥＴＰ在动脉粥样硬化发生中的作用有着十分重要的意义。     

抗人成骨肉瘤单克隆抗体的制备及其特性

目的：制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体并探讨其特性。方法：用人骨肉瘤细胞系OS-732免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞系NS-1融合,经酶联免疫吸附试验及补体依赖细胞毒实验筛选,获3株分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞。将手术切取经病理证实的骨肉瘤、软骨肉瘤、骨巨细胞瘤、滑膜肉瘤、平滑肌肉瘤、非骨化性纤维瘤、骨软骨瘤和正常肌、骨组织冰冻切片后,应用间接免疫荧光抗体实验检测。 结果：3株McAb均与骨肉瘤组织呈阳性反应,其中二株亦与软骨肉瘤呈阳性反应,与正常组织及其他肿瘤组织呈阴性反应。3株McAb分别与骨肉瘤相关抗原不同的抗原决定簇结合。 结论：抗人成骨肉瘤单克隆抗体具有较高的特异性。     

风疹病毒单克隆抗体的研究

用风疹病毒（RV）Gos-10株免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与Sp2/0细胞融合，用ELISA法筛选分泌RV McAb的杂交瘤细胞6株，经克隆培养后发现其中的1A9株能稳定分泌高效价特异性McAb，经鉴定为IgG2a，经ELISA检测、抗原吸收试验、中和试验及HI试验证明该McAb是种特异性的，能与各株RV发生交叉反应，而与其它种病毒不发生反应，证明此McAb对RV抗原有高度特异性与敏感性，可用以制备诊断试剂，实现风疹的早期、快速诊断和基础理论研究。     

抗人IgG单克隆抗体制备和鉴定

以人ＩｇＧ为抗原，采用杂交瘤技术获得６株不同性质的抗人ＩｇＧ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）（ＡＩ２，ＡＩ３，ＡＩ４，ＡＩ５，ＡＩ６和ＡＩ７）。ＡＩ２ＭｃＡｂ具有抗ＩｇＧ１亚类的特异性，可识别ＩｇＧγ链和Ｆ（ａｂ）２片段，作用位点可能在人ＩｇＧ１铰链区。ＡＩ３，ＡＴ７，ＭｃＡｂ分别为ＩｇＧ３，ＩｇＧ４亚类限制性ＭｃＡｂ，可能作用于ＩｇＧＣＨ１区。ＡＩ４ＭｃＡｂ铰链区。ＡＩ３，ＡＩ７，ＭｃＡｂ可识别ｘ和λ链。     

非竞争ELISA法测定抗DR5单克隆抗体功能性亲和常数

目的:测定抗DR5单克隆抗体功能性亲和常数。方法:采用非竞争性ELISA固相法,经确定最佳抗原包板浓度、最佳抗原包板时间及最佳抗原与抗体结合反应时间后,得到DR5与抗DR5的两株单克隆抗体的抗原抗体结合反应曲线,计算抗DR5两株单抗的亲和常数。结果:抗DR5(366EC)的功能性亲和常数在2.63×109M-1水平,抗DR5(mDRA-6)的功能性亲和常数在1.004×109。结论:抗DR5与DR5结合能力较强,为今后进行免疫学检测和开发进行肿瘤靶向治疗提供了理论基础。     

抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备、性质鉴定及初步应用

为研制出能与土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHc）结合的特异单克隆抗体，使之能特异性地对土拨鼠肝炎病毒（WHV）进行检测。并应用于相关肝炎病毒的筛查。以原核表达的土拨鼠肝炎病毒重组核心蛋白（WHc1～149氨基酸）免疫BALB／c小鼠，常规杂交瘤技术进行细胞融合，有限稀释法克隆化，间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组织化学（IHC）筛选、鉴定。     

抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步应用

本文用华支睾吸虫成虫可溶性抗原免疫的BALB/c小鼠与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆化后获得4株抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞。该4株荜克隆抗体与华支睾吸虫成虫抗原作ELISA,结果均为阳性。经交叉试验(ELISA法)证明与日本血吸虫成虫抗原,虫卵抗原和卫氏并殖吸虫成虫抗原均呈阴性反应。4株单克隆抗体免疫球蛋白亚类鉴定除3F_7株为IgG_1外,其余3株均属IgM。初步试用3F_7株单克隆抗体作ELISA双抗体法检测人体华支睾吸虫循环抗原。