大鼠全脑缺血再灌流对脑内钙调蛋白的影响及Nimodipine的作用

测定了大鼠全脑性缺血及再灌流脑区的钙调蛋白(CaM)活性,发现脑缺血30分钟时大脑皮质与海马的 CaM 活性明显下降,纹状体也有下降趋势。再灌流12小时使海马和纹状体的 CaM 活性更进一步下降。用钙通道阻滞剂 Nimodipne 可明显减轻缺血再灌流引起的 CaM 下降,並促进脑电恢复。结果提示脑缺血再灌性损伤与钙大量内流有关,而 Nimodipine 可通过抑制钙内流而对脑损伤起保护作用。     

捕食应激致大鼠海马钙/钙调素依赖性蛋白激酶途径调控紊乱

目的　探讨创伤后应激障碍 (PTSD)样行为异常的神经生物学机制。方法　将 16 0只Wistar大鼠随机分为捕食应激组和对照组 (每组各 80只 )。采用流式细胞仪、荧光标记术和免疫印迹法 ,检测捕食应激后 4 8h内大鼠海马细胞内游离Ca2 + 浓度与钙调素 (CaM )相对活性平均通道荧光 ,以及海马组织总CaM、Ca2 + /CaM依赖性蛋白激酶IIα (CaMKⅡα)与IV(CaMKⅣ )的表达变化。结果实验后即刻捕食应激大鼠海马细胞内游离Ca2 + 浓度明显增高 [应激组 (2 81± 70 )nmol/L ,对照组(2 0 7± 5 1)nmol/L ,P <0 0 1],12h增至顶峰 [应激组 (332± 84 )nmol/L ,对照组 (2 2 0± 5 4 )nmol/L ,P <0 0 1],2 4h仍明显增高 [应激组 (2 73± 6 7)nmol/L ,对照组 (2 0 0± 4 8)nmol/L ,P <0 0 1];实验后即刻游离CaM平均通道荧光则同步降低 (应激组 2 2± 0 5 ,对照组 3 4± 0 8,P <0 0 1;2 4h应激组2 7± 0 7,对照组 3 3± 0 8,P <0 0 5 ) ;而海马总CaM于实验后第 2 4h、CaMKⅡα和CaMKⅣ于实验后第 12h内表达明显增高 (P <0 0 1)。结论　捕食应激后早期海马细胞Ca2 + CaM及其依赖性蛋白激酶途径调控紊乱 ,在严重心理应激所致实验大鼠PTSD样行为异常中可能有意义。     

急性脑缺血再灌流后脑组织钙依赖中性蛋白酶的变化

本文采用大鼠全脑缺血模型,观测脑缺血再灌流脑组织Ca~(2 )依赖性中性蛋白酶(calci-um-activated neutral proteinase,calpain)活性的变化及海马C_(A1)区神经元损害改变。结果显示脑缺血再灌流脑组织calpain Ⅰ和calpain Ⅱ活性都明显升高(P<0.01),C_(A1)区神经元密度相应下降,提示calpains在脑缺血损害过程中可能起一定作用。     

DA耗竭对缺血性纹状体CaM KⅡ活性及磷酸化的影响

为了探讨DA耗竭对纹状体神经元缺血性损伤的保护作用是否与CaM KⅡ的参与有关,建立了损毁大鼠黑质十四动脉阻断前脑缺血的复合模型,采用同位素32P掺入法、放射自显影和CaM KⅡ及磷酸化CaM KⅡ(p-CaM KⅡ)免疫组织化学方法,研究了DA耗竭对纹状体缺血CaM KⅡ活性、自身磷酸化、含量和细胞内分布的影响.发现损毁黑质、耗竭DA可逆转由缺血引起的纹状体CaM KⅡ酶活性及免疫活性下降,减少该酶自身磷酸化状态.这些作用可能是损毁黑质保护纹状体缺血性损伤的机制之一.     

大鼠脑损伤后脑组织和血中钙,钙调素与脑水肿的关系

利用落体撞击大鼠脑损伤模型,在致伤后不同时间测定脑组织水含量,脑皮质和血中总钙与钙调素(CaM)含量。脑损伤后6小时,脑白质水含量已有明显增加(P<0.01),脑皮质和血中总钙、CaM 含量亦有相应的不同程度升高,至伤后48小时达峰值,伤后1周恢复接近于对照值。实验结果提示,脑损伤后脑内钙积聚和CaM含量升高是脑水肿的发生与发展重要因素之一。     

线粒体钙、钙调素、兴奋性氨基酸、丙二醛在脑缺血再灌注中变化的实验观察

目的：观察脑缺血再灌注中线粒体钙（MitochondriaCaloium,MCa）、钙调素（Calmodulin,CaM）、兴奋性氨基酸（ExcitatoryAminoAcid,EAA）、丙二醛（Malondiadehyde,MDA）的动态变化,研究探索其变化时相,为阻抑其自稳平衡紊乱的发生提供科学的时间效应点。方法：采用大鼠全脑缺血再灌注模型（4VO）,测定假手术组、缺血30min再灌注1h、6h、12h组大脑皮层、海马组织MCa、CaM、EAA、MDA的含量。结果：缺血30min再灌注1h鼠大脑皮层、海马组织MCa、CaM、MDA含量显著升高,EAA含量显著降低,再灌注6h后,MCa、CaM继续升高,EAA、MDA回复到假手术组水平,当再灌注到12h时．MCa、CaM也相继回复到假手术组水平。结论：脑缺血再灌注早期（1h）,Ca++、EAA、氧自由基自稳平衡紊乱发生,Ca++自稳平衡紊乱回复较EAA、氧自由基晚。     

单唾液酸四已糖神经节苷脂在脑缺血再灌注损伤中作用的实验研究

目的：观察单唾液酸四已糖神经节苷胸（GM1）对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：采用四血管闭塞（4VO）全脑缺血再灌注动物模型，测定假手术组，缺血30min再灌注60minGM1；处理组（10mg／kg，缺血5min腹腔注射），缺血30min再灌注60min生理盐水（NS）处理组鼠脑海马组织兴奋性氨基酸（ExcitatoryAminoAcid，EAA），钙调素（Calmodulin，CaM），丙二醛（Malondiadehyde，MDA）的含量。结果：脑缺血再灌注组海马组织EAA含量显著性降低（P〈0．01），而CaM、MDA则显著性升高（P＜0．01），GM1处理组海马EAA、CaM、MDA含量同假术术组比较没有显著性差异（P＞0．05）。结论：GM1能阻抑脑缺血再灌注损伤中EAA的过度释放和／或重摄取障碍，细胞内外钙平衡紊乱，氧自由基产生过多等病理生理过程，发挥脑保护作用。     

KN-93对缺血再灌注后PC12细胞NF-κB表达及细胞活性的影响

目的观察Ca2 /钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Ca2 /CaM PKⅡ)竞争性抑制剂KN-93对缺血再灌注损伤后大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)核因子κB(NF-κB)的表达及细胞活性的影响情况.方法将传代培养的PC12细胞在特制的装置中进行缺血再灌注处理,建立研究所需要的细胞模型并施以KN-93进行干预,运用免疫细胞化学和流式细胞仪技术检测不同处理条件下NF-κB的表达情况,并应用甲基噻唑蓝(MMT)比色法对细胞的损伤程度进行检测.结果经过KN-93预处理的试验组相对于单纯缺血再灌注处理对照组,NF-κB的表达和细胞损伤程度均明显降低(P<0.01).结论 KN-93能够减少缺血再灌注引起的胞浆PC12细胞NF-κB的上调,并能减轻细胞的损伤程度;缺血再灌注损伤中NF-κB的激活可能存在着Ca2 /CaM PKⅡ调控通路.     

GM1对大鼠全脑缺血再灌注中钙平衡紊乱,氧自由基代谢异常 …

目的 研究单唾液酸四己糖神经节苷脂（ＧＭ１）对大鼠全脑缺血再灌注中钙平衡紊乱、氧自由基代谢异常以及病理损伤的影响。方法 运用大鼠全脑缺血再灌注模型（４ＶＯ）,观察假手术组、脑缺血３０分钟再灌注６０分钟生理盐水（ＮＳ）处理组（ＮＳ组）和缺血３０分钟再灌注６０分钟ＧＭ１处理组（ＧＭ１组）的脑海马组织线粒体钙（ＭＣａ）、钙调素（ＣａＭ）、丙二醛（ＭＤＡ）及海马ＣＡ１区病理改变。结果 ＮＳ组海马组织ＭＣａ     

急性脑缺血再灌流后脑组织钙依赖性中性蛋白酶的变化

采用大鼠全脑缺血模型，观测脑缺血再灌流脑组织钙依赖性中性蛋白酶（ｃａｌｃｉｕｍ－ａｃｔｉｚａｔｅｄｍｅｕｔｕａｌｐｒｏｔｅｉｍａｓｅ，ｃａｌｐａｉｎ）活性的变化及海马ＣＡ１区神经元损害改变。结果显示脑缺血再灌流脑组织ｃａｌｐａｉｎⅠ和ｃａｌｐａｉｎⅡ活性都明显升高（Ｐ＜０．０１），ＣＡ１区神经元密度相应下降，提示ｃａｌｐａｉｎｓ在脑缺血损害过程中可能起一定作用。     

氢化麦角碱对血管性痴呆小鼠海马组织CaM、CaMPKⅡ mRNA动态表达的影响

目的 观察氢化麦角碱对血管性痴呆（VD）小鼠海马组织钙凋蛋白（CaM）、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMPKⅡ）mRNA表达的影响。方法采用双侧颈总动脉线结法制作小鼠VD模型。将小鼠分为假手术对照组、氢化麦角碱治疗组和VD模型组，分别于术后7、14、30d测试小鼠学习成绩，24h后测试记忆成绩，并应用RT—PCR技术检测海马CaM、CaMPKⅡ mRNA的动态表达。结果术后7、14、30dVD模型组海马组织CaM、CaMPKⅡ mRNA的表达均低于假手术组（P〈0．05）；术后7d氢化麦角碱组CaM、CaMPKⅡ mRNA的表达与VD模型组比较差异无统计学意义（P〉0．05），但随着用药时间延长，其表达呈逐渐上升的趋势，术后14、30d氢化麦角碱组CaM、CaMPKⅡ mRNA的表达显著高于VD模型组（P〈0．05）。结论VD小鼠海马组织CaM、CaMPKⅡ mRNA在较长时期内表达减少可能与VD发病相关，而氢化麦角碱可以提高CaM、CaMPKⅡ mRNA的表达水平，并改善VD的临床症状。     

脑缺血时NMDA受体通过Src激酶和Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ调控ERKs激活

目的ERKs是钙依赖性激活蛋白,本研究旨在探讨钙依赖性蛋白激酶是否参与了脑缺血后ERK级联的调控。方法采用四动脉结扎诱导大鼠前脑缺血,用免疫印迹的方法观察几个钙依赖性蛋白激酶含量及活性的变化。结果致死性脑缺血以NMDA受体依赖的方式激活ERKs,并差异性上调Src和Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）的活性。Src激酶和CaMKⅡ的抑制剂PP2和KN62能显著的阻止缺血诱导的ERKs激活。然而,缺血诱导的Src过度激活也伴随着ERKs的活性抑制。结论致死性脑缺血刺激NMDA受体通过Src激酶和CaMKⅡ介导ERKs活性上调,但是脑缺血诱导的Src过度激活可能也参与了ERKs信号通路的负性调控。     

钙调素拮抗剂对癫痫动物模型抗痫作用的研究

目的 了解钙调素拮抗剂有无抗痫作用,为临床上开发新型的抗痫药以进一步控制癫痫提供理论依据。方法 采用记录小鼠脑电图同时观察其行为的方法,观察钙调素桔抗剂W—7对L型钙离子通道激动剂±Bayk—8644致痫小鼠行为和脑电图的影响。结果 钙调素拮抗剂明显延长了痫性发作和痫波发放的潜伏期,减轻了痫性发作程度,减少了痫波发放频率;同时还发现钙调素拮抗剂有一定的镇静作用。结论 钙调素拮抗剂对±Bayk-8644致痫小鼠有抗痫作用。     

母源性BDE-209对仔鼠海马组织形态学及CaMK Ⅱ含量的影响

目的 观察母源性BDE-209暴露后仔鼠海马组织结构形态及海马Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)含量的变化.方法 3月龄Wistar大鼠白妊娠0 d起按照随机数字表法分为实验组和对照组(E组),实验组母鼠在妊娠期及哺乳期给予不同剂量BDE-209(100、300、600、1200mg/kg)胃灌,分别为A组、B组、C组、D组;E组胃灌等量花生油,21 d仔鼠断乳后各组选取15只雄鼠,HE染色后光镜观察仔鼠海马组织的变化,ELISA法检测海马CaMKⅡ含量.结果 HE染色后光镜下观察发现C、D组仔鼠海马组织形态学变化明显,神经元数量明显减少.随着暴露剂量增加,仔鼠海马CaMKⅡ含量逐渐下降,C、D组与E组比较差异有统计学意义(P<0.05),A、B组与E组比较差异无统计学意义(P>0.05).实验组间比较,A组与D组差异有统计学意义(P<0.05),B、C组与D组差异无统计学意义(P>0.05).结论 高剂量母源性BDE-209暴露可以导致仔鼠海马组织结构发生改变,神经无数黾减少,CaMKⅡ含量下降,影响仔鼠神经系统的发育.     

GM_1对大鼠全脑缺血再灌注中钙平衡紊乱、氧自由基代谢异常以及病理损伤的影响

目的　研究单唾液酸四已糖神经节苷脂（ＧＭ１）对大鼠全脑缺血再灌注中钙平衡紊乱、氧自由基代谢异常以及病理损伤的影响。方法　运用大鼠全脑缺血再灌注模型（４ＶＯ）,观察假手术组、脑缺血３０ 分钟再灌注６０ 分钟生理盐水（ＮＳ）处理组（ＮＳ组）和缺血３０ 分钟再灌注６０ 分钟ＧＭ１ 处理组（ＧＭ１ 组）的脑海马组织线粒体钙（ＭＣａ）、钙调素（ＣａＭ）、丙二醛（ＭＤＡ）及海马ＣＡ１ 区病理改变。结果　ＮＳ组海马组织ＭＣａ、ＣａＭ、ＭＤＡ含量显著升高（Ｐ＜ ０．０１）,海马ＣＡ１ 区神经元呈较严重缺血损伤性改变,而ＧＭ１ 组较ＮＳ组生化和病理变化明显改善。结论　ＧＭ１ 能改善脑缺血再灌注中钙平衡紊乱和氧自由基代谢异常,减轻脑缺血再灌注病理损伤。     

Alzheimer病患者海马中神经元退变与钙－钙调素的变化

为了探讨Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者海马神经元退变与钙－钙调素的关系，以尸检人脑海马组织为研究对象，根据患者年龄分为青年组、老年组和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病组（前两组为对照组）。在钙ｖｏｎＫｏｓｓａ法染色后，借助显微分光光度计观察海马神经元中钙离子的变化，在荧光染色后通过显微荧光光度计了解钙调素的相对活性。结果显示与对照组比较，钙离子在老年组和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病组中增高，尤其是在Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病组；钙调素相对活性则明显增加，且有统计学意义。老年人和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者钙沉积增加，提示体内钙平衡有一定变化，钙调素相对活性增加，提示神经元退变的过程可能同时伴随钙相对调节功能的增加，钙的内环境稳定和钙调素的相对活性的变化在某种程度上，可能对Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病神经元退变起一定的作用。     

全脑缺血再灌注损伤大鼠海马细胞周期依赖性蛋白激酶-5的变化

目的 探讨急性全脑缺血-再灌注(isehemia-reperfusion,I-R)损伤时大鼠海马细胞周期依赖性蛋白激酶-5(Cdk-5)的变化.方法 用三血管结扎法建立急性全脑I-R大鼠模型.将大鼠随机分为假手术对照组、脑缺血组、I-R组及尼莫地平(nimodipine,NIM)处理组.用免疫沉淀法测定Cdk-5酶活性,用Fura-2负载及荧光测定细胞内游离Ca2+浓度{[Ca2+]I}.结果 与假手术对照组比较,脑缺血组及除I-R 5 h亚组外的其余I-R亚组大鼠海马神经元[Ca2+]I升高(P＜0.05)且伴细胞内Cdk-5活性升高(P＜0.05).NIM处理组大鼠海马细胞[Ca2+]I低于缺血组及I-R 30 min组(P＜0.05,P＜0.05),而Cdk-5的活性也低于I-R 30 min组(P＜0.05).结论 急性全脑缺血和/或再灌注时大鼠海马神经元Cdk-5活性升高,神经元[Ca2+]I升高对Cdk-5活性升高可能起重要作用.     

脑损伤与钙及钙调素

近年来研究表明,中枢神经系统损伤后存在神经细胞钙离子(Ca~(2+))超载。认为神经细胞内Ca~(2+)超载及钙调素活性异常增高是引起继发性脑损害加重的关键。钙拮抗剂可抑制脑细胞Ca~(2+)内流,对颅脑损伤的救治有一定意义。     

糖皮质激素对大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴Ca~(2+)/CaMPKⅡ的影响

目的研究糖皮质激素醋酸可的松对大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPAA)游离钙(Ca2+)及钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMPKⅡ)的影响。方法用流式细胞仪及钙荧光探针Flou-3/AM来测定细胞中的Ca2+,通过液体闪烁仪测定γ-32P-ATP参入反应底物的摩尔数,用来表示蛋白激酶的活性。结果醋酸可的松组大鼠下丘脑细胞[Ca2+]i荧光强度为129.32±17.74,显著高于对照组60.65±10.64,P<0.05。而醋酸可的松组大鼠下丘脑、肾上腺组织中CaMPKⅡ活性分别为14.07+3.15和3.87+1.47(nmolPi.min-1.mg-1protein),与对照组的7.91+3.2和2.23+0.52(nmolPi.min-1.mg-1protein)相比显著升高,差异有统计学意义,P<0.001。结论糖皮质激素对下丘脑-垂体-肾上腺轴的调控作用与Ca2+、CaMPKⅡ密切相关。     

骨髓间充质干细胞治疗血管性痴呆大鼠行为学及海马CaM、CaMK Ⅱ表达水平的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs)侧脑室移植治疗血管性痴呆(vascular dementia,VaD)模型对大鼠行为学及海马钙调蛋白(calmodulin,CaM)、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)表达的影响。方法以全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs);流式细胞仪对所培养BMSCs进行表面抗原鉴定;成纤维生长因子(basic fibroblast growth factorbfic,b FGF)和丁羟基茴香醚(beta hydroxy acid,BHA)诱导BMSCs分化为神经元细胞,并对诱导后的细胞,进行神经元特异性的免疫组化鉴定;采用改良四血管法制备Va D模型,设立对照组,造模4 w后将VaD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、BMSCs治疗组。观察4 w后实验大鼠的行为学表现及应用Real-time PCR检测海马CaM、CaMKⅡ表达水平。结果 BMSCs治疗组行为学表现有明显改善。其海马CaM、CaMKⅡmRNA表达比模型组降低(P<0.05)。结论侧脑室移植BMSCs显著改善VaD大鼠行为学表现,并使其海马CaM、CaMKⅡ表达降低。