基因芯片研究血卟啉单甲醚对人肝癌细胞HEPG2基因表达的影响

目的：利用芯片技术观察血卟啉单甲醚（HMME）光动力疗法对人原发性肝癌HEPG2细胞表达的影响,以深入探讨其作用的分子机制。方法：HMME加激光照射处理培养的肝癌HEPG2细胞,H－E染色观察细胞形态;抽提细胞mRNA,利用荧光标记dUTP逆转录制备cDNA探针,与人肝癌表达谱基因芯片杂交,并对Cy3,Cy5荧光信号做扫描分析。结果：光照射后实验组细胞呈现凋亡形态;芯片扫描显示2．47％的检测基因（389／1538）出现明显表达差异,其中下调基因占80％,多与细胞增殖调控功能有关;而细胞凋亡通路中几个重要关键蛋白（CCP32、AIF、Mch2)的基因明显上调。结论：HMME激光疗法可诱导HEPG2细胞凋亡;线粒体调控可能是凋亡发生的重要机制。     

大蒜素对CNE-2Z细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的研究大蒜素对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于CNE-2Z细胞后,MTT法检测细胞的增殖抑制作用,TRAP-PCR-ELISA法研究细胞端粒酶活性的变化。结果大蒜素对CNE-2Z细胞的增殖具有一定程度的抑制作用,并呈时间、浓度依赖性;不同浓度的大蒜素能下调CNE-2Z细胞的端粒酶活性,且同样呈时间、浓度依赖性。结论大蒜素可抑制CNE-2Z细胞的增殖及端粒酶活性,可能是其抗肿瘤的重要机制之一。     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对人鼻咽癌(NPC)CNE-2细胞增殖及凋亡的影响.方法 不同浓度(0、10、20、40、60 μmol/L)姜黄素处理NPC细胞株CNE-2,利用噻唑蓝(MTT)实验检测CNE-2细胞增殖活性,利用流式细胞仪检测CNE-2细胞周期及凋亡率,利用Hoechest33258荧光染色法观察细胞凋亡情况.结果 姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且随姜黄素浓度增加,CNE-2细胞抑制率呈上升趋势(P＜0.05),姜黄素作用CNE-2细胞24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(23.54±0.36)、(18.31±0.42)、(8.56±0.37)μmol/L,即姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且呈现明显浓度、时间依赖性;流式细胞检测结果显示,0、10、20、40、60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞,凋亡率随着姜黄素浓度增加而上升;荧光染色结果可见,CNE-2细胞未给予姜黄素处理,细胞呈圆形或者椭圆形,细胞核大小均匀一致,染色质分布均匀的淡蓝色荧光;10 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24h后,细胞胞体缩小,细胞核染色质凝聚,呈颗粒状亮蓝色荧光;20 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞出现胞体缩小,细胞核浓缩、染色质不均匀,出现凋亡小体,甚至出现核碎裂;40和60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞凋亡小体数量增多,出现大量核碎裂.结论 姜黄素对NPC细胞株CNE-2细胞增殖具有明显抑制作用,且促进CNE-2细胞凋亡.     

小檗碱体内外对人鼻咽癌细胞CNE-2生长的抑制作用

目的观察小檗碱体内外对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响,探讨小檗碱的抗肿瘤作用机制。方法MTT法测定小檗碱对CNE-2细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测小檗碱对CNE-2细胞凋亡和周期的影响;透射电镜观察CNE-2细胞经小檗碱处理后凋亡形态变化;Westernblotting法检测小檗碱对CNE-2细胞的细胞周期相关蛋白(cyclin)B1、CDK1、cdc25c表达的影响;3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)和3H-亮氨酸(3H-Leu)标记前体掺入法检测小檗碱对CNE-2细胞DNA和蛋白质合成的影响;利用荷人鼻咽癌的裸鼠模型验证小檗碱的体内抗肿瘤作用。结果小檗碱能抑制CNE-2细胞生长,48h的半数抑制浓度(IC50)为(49.5±5.8)μmol/L,72h的IC50为(13.3±2.0)μmol/L;小檗碱能抑制CNE-2细胞DNA和蛋白质合成;小檗碱能诱导CNE-2细胞凋亡,细胞经过25.0μmol/L小檗碱处理48h后的凋亡指数为(48.9±10.4)%;50.0μmol/L小檗碱能诱导CNE-2细胞G2/M期阻滞,并且下调细胞周期相关蛋白B1、CDK1、cdc25c表达;小檗碱能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞在裸鼠体内的生长,30mg/kg剂量组的肿瘤体积中位数为317.9mm3,明显低于对照组(P<0.05)。结论小檗碱体内外均能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与其诱导细胞周期阻滞和凋亡,下调相关细胞周期蛋白有关。     

口虾蛄提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨口虾蛄乙酸乙酯提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖及凋亡相关蛋白表达的影响.方法 用MTT比色法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测细胞凋亡,Western Blot法检测用药前后凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的改变.结果 口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞的增殖有显著抑制作用,且可诱导细胞凋亡;随着口虾蛄乙酸乙酯提取物浓度升高,Bax蛋白的表达逐渐增多,而Bcl-2蛋白表达改变不明显.结论 口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞有显著抗增殖及诱导凋亡作用,其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制与凋亡相关基因Bcl-2/Bax蛋白比值下降有关,但诱导凋亡不是主要机制.     

光动力疗法对大鼠龋齿模型的防龋效果及机制

目的观察光动力疗法(PDT)对大鼠龋齿模型的防龋效果,并探讨其防龋机制。方法将以变异链球菌为致龋菌建立大鼠龋齿模型成功的40只21 d鼠龄、断奶的无特定病原体级Wistar雄性大鼠随机分为生理盐水组、血卟啉单甲醚(HMME)-PDT组、单纯激光组、单纯光敏剂组和氟化钠组,每组8只。生理盐水组大鼠用浸有150μL生理盐水的小棉球反复涂搽磨牙各面5 min;HMME-PDT组大鼠用浸有150μL 40 mg·L-1HMME的小棉球放于磨牙各牙面上,避光孵育5 min后,用532 nm的半导体激光垂直照射磨牙各面,功率密度为140 m W·cm~(-2),照射时间为90 s,能量密度为12.6 J·cm~(-2);单纯激光组大鼠不进行光敏剂HMME处理,仅用532 nm的半导体激光垂直照射磨牙各面,照射时间、功率密度、能量密度均同HMME-PDT组;单纯光敏剂组大鼠仅用浸有150μL 40 mg·L~(-1)HMME的小棉球放于磨牙各牙面上,避光孵育5 min,不进行激光照射;氟化钠组大鼠用浸有150μL 2 g·L-1氟化钠溶液的小棉球反复涂搽磨牙各面5 min;各组大鼠每周处理1次,连续4周,每次处理后及时采集大鼠口腔变异链球菌进行培养,平板菌落计数记录细菌抑制情况,连续4周后处死大鼠,记录龋齿Keyes计分,扫描电镜观察牙齿表面形态。结果时间因素对大鼠口腔变异链球菌的生长无影响(F=0.11,P>0.05),处理因素对大鼠口腔变异链球菌的生长有影响(F=230.89,P<0.05),且处理和时间因素存在交互效应(F=6.36,P<0.05)。第1、2、3、4周处理后,HMME-PDT组和氟化钠组大鼠牙齿变异链球菌菌落数均少于生理盐水组、单纯光敏剂组和单纯激光组(P<0.05);第1、2、3周处理后,HMME-PDT组大鼠牙齿变异链球菌菌落数均少于氟化钠组(P<0.05)。各组大鼠平滑面龋齿均未检出Dx级龋损;HMME-PDT组和氟化钠组大鼠平滑面龋齿均未检出Dm级龋损。HMME-PDT组、氟化钠组大鼠平滑面龋齿E、Ds级龋损的Keyes计分均显著低于生理盐水组、单纯光敏剂组和单纯激光组(P<0.05),但HMME-PDT组与氟化钠组大鼠平滑面龋齿E、Ds级龋损的Keyes计分比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠窝沟龋齿中,仅生理盐水组检出Dx级龋损。HMME-PDT组、氟化钠组大鼠窝沟龋齿E、Ds、Dm级龋损Keyes计分均显著低于生理盐水组、单纯光敏剂组和单纯激光组(P<0.05),但HMME-PDT组与氟化钠组大鼠之间窝沟龋齿E、Ds、Dm级龋损的Keyes计分比较差异无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜显示,生理盐水组和单纯光敏剂组大鼠牙釉质表面粗糙,凸凹不平,有大量凹坑状脱矿区和划痕;单纯激光组大鼠牙釉质表面相对光滑,有少量圆形凹坑并可见凹坑内熔融状结构;氟化钠组大鼠牙釉质表面相对光滑,脱矿区较少,并可见到脱矿区的再矿化;HMME-PDT组大鼠牙釉质表面较平整,点状凹陷减少,深脱矿区少,且脱矿区域大多表浅。结论 HMME-PDT可通过减少致龋菌数量、改善牙齿表面结构等途径对大鼠致龋模型起到明显的预防作用。     

吗啡对顺铂诱导的鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠 移植瘤生长抑制作用的影响

 【目的】 以人鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤为模型,探讨吗啡对顺铂抑制肿瘤生长作用的影响及其机制&#65377;【方法】 建立CNE-2细胞裸鼠移植瘤模型20只,随机分为4组,对照组,单纯顺铂用药组&#65380;单纯吗啡用药组和吗啡联合顺铂用药组,每组5只&#65377;吗啡5 mg/kg每天给药1次,顺铂3 mg/kg每3 d给药2次,均为腹腔注射&#65377;用药14 d后处死动物,完整剥离肿瘤,记净瘤质量&#65377;TUNEL染色计算细胞凋亡数,免疫组化染色检测肿瘤组织Bax,Bcl-2,cleaved-caspase-3以及CD34的表达情况&#65377;【结果】 单纯顺铂用药组的瘤质量明显小于其它3组(P < 0.05),吗啡联合顺铂用药组的瘤质量明显小于对照组(P < 0.05);TUNEL染色及cleaved-caspase-3染色显示单纯顺铂用药组的凋亡细胞数明显多于其他3组(P < 0.05)&#65377;单纯顺铂用药组与其他3组相比Bax蛋白表达量增多,而Bcl-2表达量减少,单纯吗啡组的Bcl-2表达最强&#65377;CD34微血管染色显示单纯顺铂用药组的微血管密度显著少于其它3组(P < 0.05),单纯吗啡用药组的微血管密度显著多于对照组(P < 0.05)&#65377;【结论】 吗啡通过拮抗顺铂诱导细胞凋亡及促进CNE-2细胞裸鼠移植瘤组织的血管生成,抵抗了顺铂抑制肿瘤生长的作用&#65377;     

血卟啉光动力疗法对克隆肿瘤细胞生长的影响

血卟啉光动力疗法(简称光疗)是一种肿瘤局部疗法,已在动物与人肿瘤的体内外治疗研究中取得疗效.光疗疗效机理与膜性结构改变和单态氧作用有关。应用光疗治疗食管癌多系首次治疗研究,仅个别为复发病例治疗研究,而一次光疗的延续效应与第二次治疗的连续效应问题尚未见报道.本实验分别用体外培养的人食管癌Eca 109细胞系及经过光疗后的Eca 109细胞建立亚克隆细胞系.观察光疗的连续效应与延续效应.     

鼻咽癌癌基因研究 I.鼻咽癌细胞株CNE-2DNA的转化活性

用低分化鼻咽癌细胞株CNE-2 DNA转染NIH3T3细胞,获得的转化细胞株经扩增进行二轮和三轮转染。转化细胞株含有人特异的DNA序列能在软琼脂上生长并在裸鼠体内形成肿块。     

白细胞介素24对鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖的影响

目的探讨白细胞介素24(IL-24)对鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖的影响。方法取鼻咽癌CNE-2Z细胞株,进行细胞培养;用细胞计数、四甲基偶氮唑蓝(MTT)抑制试验,以IL-240 pg/L为对照组,检测不同浓度、不同时间的IL-24对鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖的影响。结果细胞计数及MTT比色法检测得出:体外培养的鼻咽癌CNE-2Z细胞株在培养的48 h增殖状况最差,并且随着IL-24浓度的增加,其活细胞数也随着减少,当IL-24为50 pg/L时,其增殖状况最差;当IL-24为100 pg/L时,其增殖状况反而好转。结论 IL-24可呈时间和剂量依赖性地抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖。     

蛋白激酶C对鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性的影响

为进一步探讨蛋白激酶C（PKC）调控入低分化鼻咽癌CNE－2Z细胞生长的机制，观察了PKC对CNE－2Z酶粒酶活性的影响。结果显示：CNE－2Z细胞有较高的端粒酶活性；PKC的抑制剂Staurosporine显著降低细胞端粒酶活性（P＜0．001）。提示抑制PKC可以抑制CNE－2Z细胞的端粒酶活性，PKC可通过调控端粒酶活性从而影响CNE－2Z细胞的生长。     

姜黄素对鼻咽癌细胞株CNE-2Z-H5增殖的影响

目的:研究姜黄素对人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5生长、增殖的作用。方法:应用姜黄素体外干预培养人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5,以绘制生长曲线、MTT及平板克隆形成实验观察姜黄素对CNE-2Z-H5细胞生长、增殖的作用。结果:细胞生长曲线、MTT及平板克隆形成实验均表明姜黄素对CNE-2Z-H5细胞生长、增殖具有抑制作用,并呈剂量效应关系。同时,超过一定浓度的姜黄素对CNE-2Z-H5细胞还具有细胞毒作用,可以体外杀伤CNE-2Z-H5细胞。结论:姜黄素可以有效抑制CNE-2Z-H5细胞的生长和增殖,具有明显的量效关系,可能对鼻咽癌的治疗具有一定价值。     

山奈酚抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的 探讨山奈酚(Kaempferol)体外对人鼻咽癌细胞株CNE-2增殖和凋亡的影响.方法 以不同浓度的山奈酚作用于体外培养的CNE-2细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测IC50,用流式细胞仪、Hoechest33258染色及DNA片段化检测细胞凋亡.结果 山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞株的生长抑制作用随着其作用时间的延长和浓度的增加而明显增强,不同浓度山奈酚分别处理细胞24、48和72h后,其IC50值分别为(184.1±10.1)、(53.9±3.1)及(27.5±1.8)μmol/L,各IC50值间比较差异有显著性(P＜0.01);荧光显微镜下可见到典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞术显示,经不同浓度山奈酚作用72h后细胞凋亡率均增加,以80μmol/L显著(P＜0.01);60、80和100μmol/L山奈酚处理组可见明显的DNA梯带.结论 山奈酚可通过抑制CNE-2细胞株的增殖而诱导其凋亡.     

白桦脂酸抑制鼻咽癌细胞CNE-1生长及其机制探讨

目的 研究白桦脂酸(betulinic acid)对鼻咽癌细胞CNE-1生物学行为的影响并探讨其可能机制.方法 不同浓度(10、20、40、80、120、160 μg/mL)白桦脂酸处理CNE-1细胞,作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测CNE-1细胞增殖变化;不同浓度白桦脂酸(10、20、40 μg/mL)作用CNE-1细胞72 h后,流式细胞仪PI单染法和FITC-AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞周期和凋亡变化;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA表达水平的变化;Western blot 检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化.结果 MTT实验显示不同浓度白桦脂酸对CNE-1细胞均有抑制作用(均P＜0.05),抑制效果呈时间和剂量依赖性,24、48和72 h的IC50分别为(37.46±2.51),(24.28±1.87),(21.15±1.42)μg/mL;流式细胞术结果显示10、20、40 μg/mL白桦脂酸组与空白组比较均出现G0/G1期阻滞[(59.21±2.47)%、(72.20±4.28)%、(77.13±3.57)% vs (42.94±2.63)%,均P＜0.05]和凋亡比例的增加[(14.95±2.11)%、(21.71±2.84)%、(38.49±3.26)% vs (4.02±0.96)%,均P＜0.05];RT-PCR结果显示对照组与白桦脂酸20、40 μg/mL组的Bcl-2与内参β-actin吸光度积分值之比(Bcl-2/β-actin)随白桦脂酸浓度增加而减小,而Bax与内参β-actin吸光度积分值之比(Bax/β-actin)随白桦脂酸浓度增加而增加;Western blot结果显示白桦脂酸下调抑凋亡基因Bcl-2蛋白的表达,同时上调促凋亡基因Bax蛋白表达.结论 白桦脂酸通过介导细胞G0/G1期阻滞和诱导细胞凋亡抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖.其诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2/Bax表达比例相关.     

干扰TCAB1基因表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的:探讨siRNA抑制TCAB1表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响及分子机制。方法:构建靶向抑制TCAB1的siRNA干扰质粒及阴性对照质粒,转染至CNE-2细胞,RT-PCR和Western-blot检测TCAB1表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性参数D0、SF2等;QPCR检测转染前后CNE-2细胞端粒的相对长度变化。结果:成功构建CNE-2/phTCAB1-siRNA干扰质粒,转染后RT-PCR和Western-blot分析表明TCAB1mRNA和蛋白表达均受到明显抑制,干扰组细胞D0和SF2值分别为2.490和0.460,明显低于空白对照组(D0和SF2值分别为3.186和0.607),P<0.01;QPCR检测端粒相对长度发现干扰组T/S值(0.19±0.01)均小于正常细胞(0.52±0.06)和转染阴性质粒细胞(0.42±0.01),P<0.05,而正常细胞组和转染阴性质粒细胞T/S值比较差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:抑制TCAB1表达可以通过影响端粒长度增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,TCAB1有望成为一种新的肿瘤放射增敏靶点。     

鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2(R743)的建立及其差异表达蛋白的初步分析

目的 建立放射抗拒的人鼻咽癌(NPC)细胞株,探讨NPC细胞的放射抗拒机制.方法 应用X射线反复照射NPC CNE-2细胞,总剂量为51 Gy,筛选出放射抗拒的细胞株CNE-2(R743).采用克隆形成实验测定细胞的放射敏感性,流式细胞术检测细胞周期特征;采用双向凝胶电泳结合质谱分析法鉴定差异表达蛋白.结果 与CNE-...     

细胞因子CCL25对鼻咽癌CNE-2细胞迁移的影响

目的:研究CCL25是否影响鼻咽癌CNE-2细胞的迁移。方法:采用Transwell实验,上室中加入CNE-2细胞,下室中加入不同浓度的CCL25,观察其对CNE-2向下室迁移的影响。另外同时在下室中加入anti-CCR9,再观察CNE-2向下室的迁移情况。结果:CCL25具有趋化CNE-2细胞的作用,同空白对照组相比,50ng/ml的CCL25能明显增强CNE-2细胞的迁移率(P<0.01)。而1μg/ml的anti-CCR9能逆转CCL25对CNE-2细胞的促迁移作用(P<0.05)。结论:CCL25具有趋化CNE-2细胞,促进CNE-2细胞迁移的作用。Anti-CCR9能阻断CCL25对CNE-2细胞的促迁移作用。     

奈达铂提高鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的体外实验研究

目的:研究奈达铂(NDP)对鼻咽癌细胞的放射增敏作用及其机制。为寻求治疗鼻咽癌的新策略奠定理论基础。方法:用CCK-8法检测奈达铂对鼻咽癌CNE-2细胞增殖影响和IC50;用克隆形成实验分析奈达铂对CNE-2细胞的放射增敏作用。用流式细胞术(FCM)检测奈达铂对CNE-2细胞凋亡和周期的影响。结果:奈达铂能够抑制CNE-2细胞的增殖,其IC50为32.576 mg/L。1/5IC50浓度(6.515 mg/L)的奈达铂联合放疗与单纯放疗相比,其放射增敏比(SER)为1.542。奈达铂可诱导CNE-2细胞凋亡,奈达铂组、单纯放疗组凋亡率为(22.7+2.24)%、(30.4+2.17)%(P<0.05),奈达铂加放疗组凋亡率最高,为(44.3+1.85)%(P<0.01)。奈达铂作用48 h,对CNE-2细胞周期分布的改变无明显影响。结论:奈达铂通过增强鼻咽癌细胞的凋亡增加放射敏感性。     

Influence of Photodynamic Therapy on Apoptosis and Invasion of Human Cholangiocarcinoma QBC939 Cell Line

Objective To investigate the effect of photodynamic therapy (PDT) mediated by hematoporphyrin derivative (HPD) on apoptosis and invasion of cholangiocarcinoma QBC939 cell lines. MethodsIn vitrocultured cholangiocarcinoma QBC939 cell line was exposed to 2, 4, 6, 8, 10, 12, and 14μg/ml HPD with 5, 10, and 15 J/cm2 light intensity, respectively. The optical density at 450 nm of the QBC939 cells was measured by CCK8 assay and its growth inhibition ratio was calculated. Flow cytometry and transwell migration assay were applied to detect cell apoptosis and invasion respectively. RT-PCR and immunocytochemistry analyses were used to detect expressions of vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C), cyclooxygenase-2 (COX-2), and proliferating cell nuclear antigen (PCNA). Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was carried out to examine the secretion of VEGF-C and COX-2 in QBC939 cells. Results Exposure to HPD-PDT can significantly suppress the growth of QBC939 cells (allP<0.05). HPD-PDT can promote apoptosis of QBC939 cells at the early stage. When the concentration of HPD was 2μg/ml and light irradiation was 5 J/cm2, HPD-PDT had no obvious inhibitory effect on QBC939 cell growth, but can obviously inhibit cell invasion, and significant difference was observed between the HPD-PDT and control groups (P<0.01). The HPD-PDT can reduce the mRNA and protein expressions of VEGF-C, COX-2, and PCNA, and decrease the secretion of VEGF-C and COX-2 in QBC939 cells. Conclusion PDT could promote apoptosis and inhibit growth and invasion of cholangiocarcinoma cells QBC939in vitro.