MALDI-TOF MS技术在鲍曼不动杆菌鉴定及同源性分析中的应用

目的评价基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对我院鲍曼不动杆菌属的鉴定及同源性分析的能力。方法对2014年9月至2015年2月我院29株经PhoneixTM100全自动微生物鉴定仪鉴定为鲍曼不动杆菌属的菌株进行MALDI-TOF MS鉴定,用MALDI-Biotyper软件进行同源性分析,并用16S rRNA基因测序进行验证。结果 MALDI-TOF MS鉴定结果为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)26株,院内不动杆菌(Acinetobacter nosocomialis)3株。MALDI-TOF MS鉴定为院内不动杆菌的3株菌株的16S rRNA基因测序结果显示,2株为院内不动杆菌,1株为鲍曼不动杆菌。26株质谱鉴定为鲍曼不动杆菌的菌株分为2大簇(Ⅰ型,Ⅱ型),Ⅱ型又分为2小簇(Ⅱa、Ⅱb)。Ⅰ型、Ⅱ型分布在我院4个病区。结论MALDI-TOF MS技术鉴定鲍曼不动杆菌精准,可以鉴别鲍曼不动杆菌和院内不动杆菌。MALDI-Biotyper数据库软件进行同源性分析十分快捷。     

国产MALDI-TOF MS系统microTyper MS对革兰阴性菌的鉴定性能评估

目的 评估国产基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)系统microTyper MS鉴定革兰阴性菌的性能.方法 使用国产MALDI-TOF MS系统microTyper MS与进口质谱系统VITEK MS系统同步鉴定该实验室储存的标准菌株及2018年6月至2019年6月临床分离的革兰阴性菌株.鉴定结果不一致时,使用表型试验或16 s rDNA测序进行确认,以此评估microTyper MS对革兰阴性菌的鉴定能力.结果 纳入鉴定的革兰阴性菌株一共45属4509株.VITEK MS系统准确鉴定4419株,准确率为98.0％;microTyper MS准确鉴定4405株,准确率为97.7％.结论 microTyper MS在革兰阴性菌鉴定方面具有与VITEK MS系统相仿的临床细菌鉴定能力.     

不同检测方法对鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌的鉴定结果比较及同源性分析

目的 比较基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、细菌生化鉴定两种方法对鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌的鉴定能力差异,评价两种方法对鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌鉴定的准确性.方法 收集2019年3-4月临床分离的非重复鲍曼不动杆菌敏感菌株、大肠埃希菌敏感菌株各40株,经16S rRNA基因测序鉴定后,分别...     

MALDI-TOF MS微生物鉴定的室内质量控制体系建立

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDITOF MS)具有快速、准确、低成本、操作简单的特点,是临床微生物鉴定的首选技术之一。MALDI-TOF MS的准确鉴定依赖于良好的仪器状态、有效的菌株蛋白质抽提及规范的操作与结果判读原则,任一环节的失误均直接影响鉴定结果的准确性。因此,严格的室内质量控制对MALDI-TOF MS微生物鉴定至关重要。该实验室根据6年的应用经验及研究,建立了一套较为完整的MALDI-TOF MS微生物鉴定室内质量控制体系,覆盖硬件、软件及人工操作各个环节,内容包括仪器参数设置、维护与校准,菌株与试剂的准备以及谱图采集与结果判读分析,使鉴定结果异常时可迅速溯源并及时处理。     

MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌的实验条件优化

目的 构建用于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)鉴定马尔尼菲篮状菌的数据库,并探索用于MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌的最佳培养条件和前处理方法 .方法 利用8株马尔尼菲篮状菌构建自建数据库,比较不同培养基[沙保弱葡萄糖琼脂培养基(SDA)、沙氏葡萄糖肉汤培养基(SDB)]、培养...     

百日咳鲍特菌MALDI-TOF MS谱库的扩展及鉴定效果评价

目的对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定百日咳鲍特菌谱库进行扩展。方法采用Microflex LT软件,用经全基因组测序确认的9株百日咳鲍特菌和1株副百日咳鲍特菌构建蛋白质指纹谱库,对布鲁克数据库进行扩展。对标准菌株ATCC 29213、ATCC 25922、ATCC 700603、ATCC 27853进行MALDI-TOF MS鉴定,评价扩展库的准确性。选取6株百日咳鲍特菌,每个菌株取3个菌落分别用MALDI-TOF MS鉴定,评价试验的精密度。采用36株临床分离株验证扩展谱库对百日咳鲍特菌的识别能力,并进行扩展库前后鉴定结果比较。结果成功构建9株百日咳鲍特菌和1株副百日咳鲍特菌参考谱库,并扩展现有布鲁克数据库Taxonomy(5989)数据库为Taxonomy(5989+)。扩展库准确鉴定4株标准菌株ATCC 29213、ATCC 25922、ATCC 700603、ATCC 27853,对鲍特菌鉴定无干扰;6株百日咳鲍特菌的重复鉴定符合率为100%,精密度良好。用于外部验证的36株菌经扩展后数据库鉴定,种水平鉴定率达86.1%。结论百日咳鲍特菌质谱库的扩展提升了地区性分离菌株鉴定能力。     

MALDI-TOF MS微生物鉴定数据库应用研究进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)具有灵敏、准确、高通量等特点,已经逐步应用于临床、食品卫生、环境等方面的微生物鉴定。但目前MALDI-TOF MS数据库中收录的大多是较常见微生物种类,对于新发现及罕见微生物以及来自不同地域和环境的微生物收录不足甚至缺乏,导致微生物鉴定的准确性受到影响。该文对MALDI-TOF MS的工作原理和应用领域、数据库的现状以及扩展数据库的重要性、基本步骤及其注意事项作一综述。     

自建MALDI-TOF MS霉菌数据库的研究

目的 建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)霉菌数据库,提高引起临床相关感染的各种霉菌的鉴定能力.方法 收集临床标本来源的霉菌266株,纯培养后进行霉菌18S rDN A扩增测序,获得菌种鉴定结果.选取210株霉菌用于数据库的构建,通过甲酸萃取法提取蛋白,应用M A LDI-T O F MS配...     

渗透压选择性裂解法在MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性标本中的应用

摘要：目的?采用渗透压选择性裂解法联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定阳性血培养瓶中病原菌，为临床早期诊断和治疗提供可靠依据。方法?收集2018年12月至2019年3月杭州迪安医学检验中心微生物室送检的阳性血培养瓶179例，采用渗透压选择性裂解法直接进行MALDI-TOF MS检测。结果?血培养阳性标本经裂解离心、甲酸萃取后得到的谱峰丰度最高，鉴定分值最优；174份单种菌血培养的种、属水平鉴定的符合率分别是67.8%(118/174)、85.1%(148/174)。革兰阴性杆菌的种、属水平鉴定的符合率是74.7%(62/83)、91.6%(76/83)，革兰阳性球菌的种、属水平的鉴定符合率是69.4%(50/72)、80.6%(58/72)，革兰阳性杆菌鉴定种水平的准确率显著低于革兰阴性杆菌(P<0.05)和革兰阳性球菌(P<0.05)。结论?MALDI-TOF MS采用渗透压裂解法对血培养阳性标本直接鉴定，具有简单、快速的优点，但其对菌种鉴定的准确性以及前处理步骤优化方面仍然需要进一步研究。     

Microflex~(TM) MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统对肠杆菌科细菌鉴定能力的比较

目的比较MicroflexTM基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact)对肠杆菌科细菌的鉴定能力。方法采用MicroflexTMMALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact同时对545株肠杆菌科质控菌株和临床分离菌株进行鉴定,鉴定结果不一致者采用沙门菌血清凝集试验或细菌16S r DNA基因测序予以确证。结果 MicroflexTMMALDI-TOF MS对545株细菌的种和属的鉴定率分别为97.1%、2.9%。Vitek 2 Compact对545株细菌的种、群、属的鉴定率分别为83.3%、13.9%和2.2%,鉴定错误率为0.2%,未鉴定率为0.4%。结论 MicroflexTMMALDI-TOF MS对肠杆菌科细菌的鉴定符合率高于Vitek 2 Compact,且操作快速、简便,成本低,可用于临床肠杆菌科细菌的常规快速鉴定。     

巴尔通体MALDI-TOF MS数据库的建立与鉴定方法的评价

目的 建立巴尔通体的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)数据库和质谱鉴定方法,利用野生菌株进行验证、评价.方法 应用MALDI-TOF MS采集巴尔通体ATCC标准菌株和国内流行菌株的质谱数据,每株菌采集24张的质谱图集,获得特定的蛋白指纹图谱,汇总成不同种巴尔通体的标准质谱图,建立巴尔通体MA...     

MALDI-TOF MS在细菌耐药性检测中的应用进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)已经发展成为微生物实验室鉴定菌种的常规工具。MALDI-TOF MS在微生物学耐药性检测中的应用尚处于研究阶段。该文就MALDI-TOF MS在细菌耐药性检测中的方法及其适用病原体的研究现状做一综述。     

MALDI-TOF MS在NTM临床分离株快速鉴定中的应用研究

目的 建立临床非结核分枝杆菌(NTM)分离株的快速鉴定方法,为临床NTM病的诊断和治疗提供参考。方法 收集2018-2020年泉州某三甲医院的临床疑似NTM感染患者的痰液、肺泡灌洗液、胸部穿刺液和脑脊液等标本,借助基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术,通过改良前处理方法(甲酸提取法),摸索上机检测条件,建立临床NTM分离株的快速鉴定方法,并以16S rRNA测序为金标准,验证鉴定的准确性。结果 收集的50株临床NTM菌株,采用传统(常规)处理方法进行质谱鉴定,仅鉴定出4株,检出率为8.0%,而采用甲酸提取法共鉴定出24株,检出率为48.0%,两种方法检出率比较,差异有统计学意义(P<0.01),且改良处理后鉴定出的24株鉴定结果与PCR测序结果完全一致,符合率为100.0%。结论 初步建立的NTM甲酸提取前处理的质谱鉴定方法检出率明显提高,具有一定的临床应用价值。     

MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性病原的临床应用

目的 了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接快速检测血培养报阳样本的可行性.方法 收集同济大学附属同济医院报阳血培养样本682例,从血培养瓶直接抽取血液至分离胶采血管离心富集细菌后,采用MALDI-TOF MS进行直接鉴定(快速质谱法).同时对报阳血培养标本进行涂片镜检及转种培养后,分别采...     

MALDI-TOF MS直接涂靶法快速鉴定丝状真菌的临床应用

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱直接涂靶法（质谱直涂法）快速鉴定丝状真菌的临床应用价值。方法对2010年1月至2017年12月首都医科大学附属北京同仁医院临床标本中分离的133株丝状真菌分别进行形态学、基因序列分析及质谱直涂法鉴定，并将鉴定结果进行分析比较。 采用SPSS 16.0软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验。结果以基因序列分析结合形态学鉴定的结果为标准，将133株丝状真菌鉴定到种、复合群和属的鉴定率:质谱直涂法分别为64.66%、79.70%和96.24%，基因序列分析则分别为69.17%、83.46%和99.25%，而形态学鉴定分别为68.42%、84.21%和93.23%。 质谱直涂法与另外两种方法的种、复合群和属的鉴定率的差异无统计学意义（χ2值分别为0.611、0.625、2.728和0.516、0.915、1.206，P值均＞0.05）。 质谱直涂法将77株曲霉属中61.04%、88.31%和98.70%的菌株分别鉴定到种、复合群和属，将14株青霉属中64.29%和92.86%的菌株分别鉴定到种和属，还将42株其他丝状真菌中的71.43%和92.86%的菌株分别鉴定到种和属；因数据库中真菌种类不足，致3.76%（5/133）的真菌无效鉴定。结论MALDI-TOF MS直接涂靶法鉴定丝状真菌的能力可与形态学鉴定和基因序列分析相媲美，因其快速且操作简便，临床应用值得推广。     

MALDI-TOF MS在短期培养后胸腹腔积液中细菌快速鉴定的应用

目的 对临床胸腹腔积液样本进行短期培养,使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)进行细菌鉴定,以建立可用于胸腹腔积液的快速细菌检测方法。方法 收集360例细菌感染的胸腹腔积液(胸腔积液163例、腹腔积液197例),所有样本分为三份:一份常规培养并使用微生物鉴定仪检测; 第二份直接离心集菌后用MALDI-TOF MS鉴定; 第三份与营养肉汤混合并短期培养2 h,离心洗涤后用MALDI-TOF MS鉴定。以微生物鉴定仪结果作为金标准,评估MALDI-TOF MS对短期培养后胸腹腔积液中致病菌的鉴定效能。结果 MALDI-TOF MS对短期培养后两种样本的正确检出率分别为94.5%和90.9%,总的未检出率只有7.5%; 单一细菌生长的样本鉴定结果与常规方法符合率达到94.1%; 能从混合细菌生长的样本中准确鉴定优势菌。结论 经过短期培养后的胸腹腔积液样本,MALDI-TOF MS检出率高,结果可靠; 所需时间比常规培养缩短至少12 h,可为临床准确快速提供病原菌报告。     

MALDI-TOF MS在人工关节置换术后病原菌快速鉴定中的价值

目的 了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联合HB&L微生物培养系统(简称HB&L系统)在人工关节置换术后病原菌快速鉴定中的价值.方法 收集104例人工关节置换术后患者关节液样本,分别接种于血培养瓶及常规培养琼脂平板,将阳性培养物分别进行2种直接MALDI-TOF MS鉴定、常规MALDI-...     

MALDI-TOF MS技术在快速鉴定革兰阴性杆菌血流感染中的应用

目的 探讨VITEK MS质谱仪基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在快速鉴定革兰阴性(G^-)杆菌血流感染中的应用。方法 收集昌吉回族自治州人民医院2020年1月—2021年12月检测的血培养阳性瓶,经涂片染色确认为单一G^-杆菌的163份标本,采用分离胶促凝管短时培养法,在规定时间(1 h、2 h、4 h、6 h)内使用VITEK MS质谱仪MALDI-TOF MS技术进行快速鉴定,并采用传统转种培养VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统验证鉴定结果。结果 与传统转种培养法结果比较,除4份未给出鉴定结果外,其余159份样本经MALDI-TOF MS技术鉴定结果均相符,在规定时间(1 h、2 h、4 h、6 h)内成功鉴定率分别为78.6%(125/159)、85.5%(136/159)、96.2%(153/159)、100.0%(159/159)。结论 采用MALDI-TOF MS技术结合分离胶促凝管短时培养法,对病原菌的鉴定时间可由原来的1～2 d缩短至1～6 h,该方法对血培养阳性G^-...