微小按蚊rDNA内转录间隔２区序列差异

目的：比较不同地株微小按蚊核糖体ＤＮＡ（rDNA）内转录间隔２区（ＩＴＳ２）序列差异。方法：通过对ＰＣＲ扩增rDNAＩＴＳ２片段测序,比较其不同地株差异。结果：对６株微小按蚊测序比较,存在有微小按蚊Ａ和Ｃ型。结论：rDNAＩＴＳ２充阢差异可用于建立Ａ、Ｃ型的分子鉴别方法。     

基于rDNA-ITS2序列的中国按蚊属按蚊亚属部分种类的系统发育关系研究（双翅目：蚊科）

目的阐明中国按蚊属按蚊亚属蚊种的亲缘关系。方法根据核糖体DNA第2内转录间隔区（rDNA-ITS2）序列,采用邻接法（NJ）、最大简约法（MP）、最小进化法（ME）和最大似然法（ML）,对采自中国的按蚊亚属22种（分子型）蚊虫进行系统发育关系重建。结果rDNA-ITS2序列的长度范围为340~1754 bp,种内的p遗传距离均小于0.004,种间为0.009~0.420,平均值为0.224。各种方法重建的系统发育树均显示分为3大支,分别对应赫坎按蚊种团和须喙按蚊种团各一支,以及林氏按蚊与五斑按蚊种团聚为的一支,三者为并系关系;赫坎按蚊种团成员种分为主要的4支,其种间关系与形态分类结果一致,但分子型spLL1和spLL2的聚类位置不稳定。结论重建的分子系统发育树客观地阐明了中国按蚊属按蚊亚属各种团及蚊种之间的亲缘关系,序列具有足够的信息贡献量。     

按蚊rDNA ITS 2区段基因序列检测

目的 鉴定浙江传疟媒介种类，为制定浙江省疟疾防治策略提供依据。方法 利用媒介按蚊核糖体核酸内转录问隔2（rDNAITS2）区段基因特征，应用PCR基因鉴别技术。对浙江省现场捕捉的按蚊与嗜人按蚊、八代按蚊、中华按蚊、雷氏按蚊实验室标本进行基因鉴别和比较。结果 浙江省现场捕捉的按蚊DNA样本的PCR扩增产物均为250bp，与实验室中华按蚊标本一致。结论 浙江省的传疟媒介是中华按蚊，现场调查未发现嗜人按蚊。     

广东国境口岸不同蚊种COI序列分析和分子鉴定方法

[目的]建立国境口岸不同蚊种的细胞色素C氧化酶亚基I（COI）分子和氨基酸鉴定方法并分析其系统进化关系。[方法]设计1对扩增COI部分编码区的PCR引物，对广州机场、江门和湛江等国境口岸采集的致倦库蚊、三带喙库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊等成蚊和实验室喂养的蚊幼虫进行PCR扩增和序列测定，分析COI核苷酸和氨基酸的系统进化关系。[结果]5种蚊种的COI基因扩增片断长度均为415bp，A＋T含量为68．77％-70．6％。同源性比较表明，不同蚊种间COI片断碱基变异颠换数都明显高于转化数，核苷酸序列及其编码的氨基酸序列同源性分别为85．1％-93．7％和92．0％-99.3％。COI核苷酸系统进化关系显示，所有蚊虫的COI分子鉴定与其形态学结果吻合，但骚扰阿蚊位于一单独的分支上，其亲缘关系与其它蚊种最远。COI基因编码的氨基酸系统进化与蚊虫形态学亲缘关系一致，库蚊属、伊蚊属、阿蚊属聚类为库蚊亚科，中华按蚊与其它蚊种的亲缘关系最远。[结论]建立的COI核苷酸和氨基酸鉴别技术可成功地应用于国境口岸范围内成蚊和幼蚊的属和种的区分，后者更能区分高级分类阶元亚科和正确反映蚊虫的系统发育关系。这可以弥补蚊虫形态特征信息量的不足等传统分类系统的缺点，为广东口岸和其它国境口岸范围内外来的或新发现的蚊种的鉴别提供了分子水平的技术依据。     

PCR技术在赫坎按蚊复合体近缘种鉴别中的应用

目的应用聚合酶链反应（PCR）技术分析湖北省不同地区媒介按蚊的种型.方法采用传统的形态学方法和新建立的基因鉴别技术对现场捕获的按蚊分别进行形态特征鉴别和基因鉴别及比较.结果现场捕获181只按蚊,形态学确认176只为中华按蚊,而PCR鉴定172只为中华按蚊,另4只为八代按蚊;经形态学特征鉴别的5只嗜人按蚊中,PCR鉴别有4只为嗜人按蚊,另1只为八代按蚊.结论采用PCR基因鉴别技术能准确鉴别赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、八代按蚊等近缘种按蚊,较传统的按蚊形态学鉴别方法准确,适用于复合媒介地区的疟疾媒介调查和监测.     

广东省流行的3株登革热2型病毒基因组全序列测定及分析

目的测定广东省3株登革热2型病毒的全序列,探讨其来源及基因型。方法运用RT PCR法扩增来自广东省的登革热2型GD09/93、GD05/98和GD19/2001病毒株的全序列,采用遗传距离法构建进化树。结果3株登革热2型病毒的全基因组长度均为10 723 nt,5′及3′端各有一非编码区,结构基因和非结构基因位于基因组97~10 269 nt之间,共编码3391个氨基酸,读码结构完全相同。GD05/98与GD09/93、GD05/98与GD19/2001、GD09/93与GD19/2001之间的碱基序列同源性分别为93.3%、92.4%和97.6%,氨基酸序列同源性分别为96.7%、96.5%和98.5%。结论3株登革热2型病毒均对乳鼠致病,与对乳鼠不致病的参考株（DEN2-04株）比较共有18个氨基酸位点的差异引起极性或电荷变化,PrM-134、NS2A-153、NS4B-102所带电荷的变化对抗原性影响较大。GD05/98株与泰国分离株同为Ⅱ基因型,GD09/93和GD19/2001株与印度尼西亚、澳大利亚、台湾株分在Ⅳ基因型;表明我国登革热2型病毒有不同的基因型,而不同时期也存在同一种基因型传播。     

应用逆转录聚合酶链反应和序列分析对褐家鼠肺汉坦病毒进行分型研究

对来自北京西客站附近一集装箱仓库的2份汉坦病毒免疫荧光抗原阳性褐家鼠肺组织进行分型研究。方法；采用逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）和序列分析。结果：这两份褐家鼠肺标本均携带汉城型（SEO）汉坦病毒（HV）。RT－PCR扩增其中1份标本所携带病毒的M基因330bp片段，通过pGEM－T载体克隆进入大肠杆菌JM109，并进行核着酸序列测定，经与其它HV核着酸序列的同源性比较，其与SEO型毒株相应片段核着酸序列的同源性在93.9％～96.4％之间，而与其它血清型毒株的同源性在61.5％～75.8％之间。结论：首次证实北京地区宿主动物携带SEO型HV.     

广州市水产品监测中霍乱弧菌分离株的分子特征研究

目的　了解广州市水产品监测中霍乱弧菌分离株的毒力特征,对其菌株进行同源性分析,研究其分子特征及流行病学意义。方法　2 0 0 4年6月采集广州市3家较大的水产品交易市场的海、水产品以及广州以往水型霍乱流行沿海地区的河水和珠江入海口海水,采用聚合酶链反应(PCR)方法对样本检出的霍乱弧菌分离株进行霍乱肠毒素基因(ctx)、小带联结毒素基因(zot)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)和毒力协同菌毛蛋白亚单位基因(tcpA)这4种毒力基因的检测,用随机扩增多态性分析(RAPD)结合SPSS软件对以上菌株进行多态性分析,对霍乱弧菌毒力进行快速测定并进行分子分型。结果　共采集海、水产品样本16 0份、水体样本90份,从样本中检出34株霍乱弧菌,其中分离自青蛙12株、虎纹蛙6株、牛蛙5株、养殖水5株、罗氏虾3株,其他3株,根据流行病学调查证实均为海南输入株。毒力基因检测表明,34株霍乱弧菌均未检出ctx和tcpA基因;14株菌(41% )可同时检出ace和zot基因,另有2株菌(6 % )只检出ace基因。所有34株霍乱弧菌的RAPD结果经聚类分析可分为2个聚类群,其中31株属于同一来源,只有3株菌与其他菌株的同源性有差异,但亲缘关系较近。结论　该次水产品监测的霍乱菌株均为非流行株,但仍需加强监测,预防霍乱流行株的出现而导致的霍乱散发和暴发流     

2001至2005年广州地区霍乱弧菌主要致病相关基因特征分析

目的 应用多重聚合酶链反应（PCR）检测方法和测序研究近5年广州地区分离的霍乱弧菌的4种致病相关基因的携带情况及霍乱肠毒素基因ctxA的变异情况。方法针对霍乱肠毒素A亚单位基因（ctxA）、小带联结毒素基因（zot）、辅助霍乱肠毒素基因（ace）、毒素共调菌毛亚单位A基因（tcpA）设计引物,将多重PCR方法应用于广州地区分离的276株霍乱弧菌的致病相关基因的检测。对ctxA基因的PCR扩增产物进行核苷酸序列测定,探讨ctxA扩增产物的同源性。结果 近5年广州地区分离的276株霍乱弧菌中,人源株中93．9％为致病相关基因A型（ctxA^＋tcpA^＋ace^＋zot^＋型）菌,其余6．1％为致病相关基因C型（ctxA^-tcpA^-ace^-zot^-型）菌,临床分离的致病相关基因A型菌分离自轻、中、重型病例和带菌者,其中有68．5％分离自轻型病例,21．9％分离自带菌者,临床分离的致病相关基因C型菌中有63．6％分离自轻型病例,36．4％分离自带菌者,C型菌引起带菌者的比例高于A型菌;78株环境分离株中9．0％为致病相关基因A型菌,35．9％为致病相关基因B型（ctxA^-tcpA^-ace^＋zot^＋型）菌,55．1％为致病相关基因C型菌。霍乱肠毒素基因ctxA变异较小。结论 多重PCR方法揭示了广州地区霍乱弧菌致病相关基因模式的多态性,为深入研究人源和环境来源霍乱菌株致病相关基因的演化提供了有效手段,并对本地区霍乱的预防、控制和预警具有重要的指导意义。     

浙江省散发猪链球菌病临床分离株存在89K候选致病岛

目的 对浙江省临床分离猪链球菌血清2型(SS2)菌株进行89K候选致病岛检测.方法 用多种特异性引物进行PCR扩增检测,同时对89K的3个扩增片段进行测序,并结合有关资料进行生物信息学和流行病学分析.结果 8株SS2菌株,均检出89K(1&2)、89K(3&4)、89K(5&6)候选致病岛特异片段和种特异性16S rDNA、cps2J、mrp毒力基因,和1998年江苏省暴发疫情的菌株结果一致.ZJ0501号SS2分离株89K候选致病岛的3个PCR扩增片段序列和1998年江苏省暴发疫情的菌株有99%以上的相似性,其中编码DNA重组蛋白的序列片段和病乳链球菌及无乳链球菌有较高的同源性.结论 近年来在浙江省临床分离Ss2菌株中,存在89K候选致病岛片段.     

我国首次发现的HIV-2型病毒的分子生物学证据

「目的」从分子生物学角度进一步证实我们发现的１例ＨＩＶ感染者为国内首例ＨＩＶ－２型病毒携带才。「方法」从Ｇｅｎｅｂａｎｋ查询已知的ＨＩＶ－２核酸序列,通过序列比较以及酶切位点分析查找ＨＩＶ－２基因组中保守区,应用套式ＰＣＲ扩增出ＨＩＶ－２基因组ＬＴＲ－ＧＡＧ区的￣３３０ｂｐ的核酸片段,并经限制怀酶切位点和序列分析证实扩增片段为ＨＩＶ－２特异性片段。「结果」实验表明,扩增片段为ＨＩＶ－２特异性片段,     

Monitoring of MON810 genetically modified maize in foods in Brazil from 2005 to 2007

Regulations for the use and labeling of genetically modified (GM) products and derived ingredients were implemented in Brazil in 2003. In 2008, GM maize line MON810 was approved for commercialization in Brazil; nevertheless, maize Bt11, Bt176 and MON810 were found in Brazilian market products sold in 2000 and 2001. Nested polymerase chain reaction (PCR) method was employed to monitor the presence of MON810 in 81 maize-derived products (maize flour, corn meal, maize flour flakes and polenta) that are sold in Brazilian markets from 2005 to 2007, after the implementation of genetically modified organism (GMO) labeling regulation. The sensitivity of nested PCR for MON810 detection was 0.1%. CTAB protocol was suitable for the extraction of amplifiable maize DNA from maize flour, corn meal, maize flour flakes, and polenta. MON810 GM maize line was not detected by specific nested PCR in 81 samples of maize-derived food sold in Brazil from 2005 to 2007. This paper reports data concerning the detection of GM maize after publishing Brazilian regulations that stipulate directions for using and labeling of foods and ingredients containing GMOs.