鳕鱼(Gadous macrocephaius)皮水解蛋白亚铁修饰对大鼠营养性贫血改善的实验研究

以鳕鱼皮为原料,采用双酶水解法制备鱼蛋白水解物再经亚铁修饰获得鱼蛋白水解物亚铁复合物(Fe-FPH),并对Fe-FPH进行了抗营养性贫血的实验研究。结果表明:(1)以水解度(DH)为5%的鱼蛋白水解物为原料,在pH7.0、温度20℃、螯合时间15min的条件下可获得Fe-FPH6.7%;(2)Fe-FPH蛋白含量为85.1%,铁含量达40254mg/kg,氨基酸价为59.62;(3)抗营养性动物实验研究表明:Fe-FPH给药组第5天可显著提高营养性贫血大鼠的Hb含量,第11天时表现出极显著效果;Fe-FPH组,第11天有显著降低大鼠血中PPIX作用,到第18天时表现出极显著效果。因此,Fe-FPH不仅含有较高的营养价值,而且有显著抗营养性贫血功能,可望成为鳕鱼加工副产物高效利用的有效途径。     

双酶分步水解金枪鱼(Eleotridae)碎肉制备高F值酶解液的工艺研究

以金枪鱼碎肉为原料, 采用双酶分步水解法制备高F值酶解液, 通过Box-Behnken试验设计, 分别确定两步酶解的最佳条件, 酶解液经活性炭静态吸附去除游离芳香族氨基酸, 对脱芳后的酶解液进行氨基酸组成分析并测定F值。结果表明, 胃蛋白酶为第一步水解用酶, 酶解的最佳工艺条件为酶用量650U/g, 料水比1∶7(g/mL), 温度35.9℃; 风味蛋白酶为第二步水解用酶, 酶解的最佳工艺条件为酶用量50700U/g, pH 6.51, 温度51℃, 最终水解度达到36.87%±0.54%; 酶解液在pH 3.0, 温度35℃条件下, 经5%(质量体积分数)的活性炭吸附时间3h后, 脱芳率达到63.18%, F值为30.33, 符合高F值肽的要求。     

太平洋鳕鱼脑中硫苷脂的分离纯化和分析

以太平洋鳕鱼为原料,从鳕鱼脑中分离硫苷脂,确立了提取及纯化的条件,并对硫苷脂的纯度和分子种进行分析。首先,采用氯仿/甲醇(2∶1,v/v)提取总脂。然后,依次采用氯仿/甲醇/水(7∶3∶0.3,v/v/v)洗脱硅胶柱层析,含0.2mol/L乙酸铵的氯仿/甲醇/水(30∶60∶8,v/v/v)洗脱DEAE Sephadex-A25离子交换柱层析,40%甲醇脱盐和100%甲醇洗脱反相C8柱层析,获得硫苷脂纯品。最后,利用500YMC Diol液相色谱柱(3.0mm×250mm,5μm)分离,以正己烷/异丙醇(70∶30,v/v),异丙醇/水/甲酸/氨水(100∶13∶1∶0.14,v/v/v/v)为流动相梯度洗脱,采用负电喷雾电离(ESI)和母离子扫描模式,用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法分析了鳕鱼脑硫苷脂的纯度和分子种组成,并比较了其与哺乳动物脑中硫苷脂分子种组成的异同。结果表明,本实验制得的鳕鱼脑硫苷脂纯度为90.74%,与哺乳动物类似,鳕鱼脑硫苷脂的长链碱基以鞘氨醇为主,主要分子种为d18∶1-C24∶1,但脂肪酸的羟基化程度略低,且含少量独特的分子种,如d18∶1-22∶1和d18∶2-25∶2。     

从石鳖(Chiton sp.)和帽贝(Patella sp.)中提取海藻解壁酶的初步研究

本研究尝试从两种海洋贝类－石鳖和帽贝的消化腺中提取混合消化酶,以获得对海藻原生质体分离更有效的工具酶。通过对１９种青岛海滨常见藻类酶解效果的比较发展：（１）该酶对各种藻类均有一定的解离作用。尤其对红藻效果好,对绿藻次之;（２）解离时间相对较短,一般在１ｈ左右,对甘紫菜１０ｍｉｎ即可见效。石鳖和帽贝混合消化酶由于综合两种贝的食性特性,具有比单一动物消化酶更广泛的消化作用,同时还对这一混合工具酶的酶解     

扇贝边中酸性粘多糖的提取

通过蛋白酶水解和乙醇沉淀,从扇贝柱加工下脚料(扇贝边)中提取酸性粘多糖。用正交实验优选出酶解条件,当乙醇沉淀时,对乙醇浓度作了选择。用所选酶解条件水解扇贝边,水解液经脱色处理后,用60％(V/V)乙醇沉淀得粗制粘多糖,经精制后得到粘多糖3.2×10~(-4)(W/W)(相对于鲜冻原料)。     

从海洋生物中提取抗艾滋病新药

艾滋病又称为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。被看作“超级癌症”和“20世纪瘟疫”的艾滋病,主要是通过和患有艾滋病的病人及带毒者进行性接触或输入了含有艾滋病病毒(HIV)的血液制品而发的一种病毒性传染病。由于艾滋病对人类生存和发     

深海沉积物中微量DNA的提取及应用

采用化学裂解和酶解相结合的方法，进行了深海沉积物中微量DNA的提取，并采用DNA吸附树脂进行纯化。结果表明，该方法能有效地去除沉积物中的腐殖酸等抑制剂，每克湿重沉积物样品可得到DNA约16μg，回收率可达95％，所得到的DNA分子片段均在23kb左右，纯化后的DNA可直接应用于各种分子生物学操作。利用细菌16SrDNA通用引物对所提取的深海沉积物DNA进行了PCR—RRJ及系统发育分析，各主要细菌类群均能检出，证实该方法可以应用于深海等极端环境中微生物的多样性调查、系统发育分析以及特殊功能基因的筛选，同时还可应用于环境样品中生物量的半定量估计。     

从海洋蓝藻中高效率地提取甲烷

东京农工大学工学部的松永助教授发明了一种可以从海洋蓝藻中高效率地提取甲烷的新技术。松永助教授从九州、四国、关东、北海道附近海域采样、筛选,结果终于发现了繁殖速度很快的海洋生物“蓝藻”和能够迅速把蓝藻分解成甲烷的生产菌。     

鱼蛋白酶水解物制备及其生物学评价

提出用枯草杆菌中性蛋白酶水解，从Ｅｎｇｒａｕｌｉｓｊｏｐｏｎｉｃｕｓ中提取鱼蛋白酶水解物。指出依次用活性炭和β－环糊精处理水解物可以去苦味，可溶性氮产率达８９．８０％。水解物氨基酸组成平衡，游离氨基酸占总氨基酸６２．７０％。并对水解物作出生物学评价。通过大鼠氮平衡试验和生长试验表明，水解物具有较高营养价值。可以认为，该鱼蛋白水解物可用作手术前后病人的要素饮食或要素饮食添加剂。     

金枪鱼(Katsuwonus pelamis)碎肉蛋白降压肽的酶解制备及活性研究

以血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标,通过正交试验L9(34)确定碱性蛋白酶(Alcalase)对金枪鱼(Katsuwonus pelamis)碎肉蛋白的最佳酶解条件,利用D101大孔树脂建立了酶解物的脱盐工艺,利用超滤、葡聚糖凝胶(G-25)色谱和反相-高效液相色谱(RP-HPLC)分离降压肽,并确定其纯度,利用氨基酸序列分析和ESI-MS鉴定纯化多肽的结构。结果表明,碱性蛋白酶酶解金枪鱼碎肉蛋白制备降压肽的最佳酶解条件是:pH 9.5,酶用量1.5%,酶解温度50°C,酶解时间5h;D101大孔吸附树脂脱盐工艺条件为:上样浓度10 mg/mL、上样流速1.5 BV/h、解吸剂为75%乙醇;酶解物经超滤和Sephadex G-25分离获得一个纯度较高的四肽,经氨基酸序列分析和ESI-MS鉴定结构为Phe-GlyGly-Val(FGGV),ESI-MS检测给出分子离子峰m/z 379.50([M+H]+)。利用碱性蛋白酶酶解并经超滤和色谱技术制备的金枪鱼碎肉蛋白降压肽具有良好的ACE抑制活性,可作为降压药物、保健食品或添加剂进行开发。     

基于高通量测序技术解析鲣鱼(Katsuwonus pelamis)鱼油和鱼白调控肠道菌群结构作用

本研究利用高通量测序技术分析小鼠喂食鲣鱼(Katsuwonus pelamis)鱼油和鱼白酶解液后肠道微生物的多样性、群落组成以及结构的变化,探讨高蛋白、高脂肪饮食对人类健康的影响。研究结果显示:喂食鱼油组小鼠的肠道微生物丰富且多样。在门水平上,对照组和鱼油组的优势菌门为拟杆菌门(Bacteroidetes);鱼白组的优势菌门为厚壁菌门(Firmicutes)。在科水平上,对照组和鱼油组中的优势菌科为Muribaculaceae;鱼白组中的优势菌科为毛螺菌科(Lachnospiraceae)。在属水平上,对照组和鱼油组中的优势菌属为Muribaculum;鱼白组中的优势菌为Lachnoclostridium;对照组、鱼油组和鱼白组小鼠的肠道微生物群落中瘤胃球菌属(Ruminococcus)和拟杆菌属(Bacteroides)等丰度较高。在种水平上,对照组和鱼油组中的优势菌为Muribaculum intestinale;鱼白组中的优势菌为解糖梭菌(Clostridium saccharolyticum)。研究结果证明鲣鱼鱼油和鱼白可以调节菌群结构和组成,增加肠道有益菌,减少病原菌的丰度等。     

扁玉螺蛋白质、脂肪含量的季节变化

测定和分析了1999年12月－2000年11月的扁玉螺不同部位的蛋白质和脂肪。结果表明，扁玉螺蛋白质和脂肪的季节变化都与水温和繁殖季节有关，存在明显的季节性，但水存在明显的差别差异。蛋白质以足部最高，为82．04％；性腺和肝脏的蛋白质都比较低，小于70％。脂肪以足部最低，仅有1．83％；性腺和肝脏的脂肪都比较高，尤其是雌性性腺，年平均为12．85％，4月份可高达19．36％。     

白斑综合症病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因的克隆及在蓝藻中表达载体的构建

用蔗糖密度梯度离心法分离纯化白斑综合症病毒（WSSV）。设计并合成引物，提取WSSV中国株的基因组DNA作为模板，通过PCR，扩增克隆出VP28基因，利用BamHI和EcoRI切点将VP28基因插入克隆载体pUC19 的多克隆位点上，得到VP28基因的重组克隆质粒，对其进行双向DNA测序。测序结果表明，该基因含有615个核苷酸，与GenBank中已有不同来源的WSSV的序列片段同源性为100％。利用BamHI切点将VP28的基因插入到穿梭表达载体启动子PpsbA的下游，EcoRI酶切鉴定，得到正向连接的可在蓝藻表达的重组穿梭表达载体，命名为pRL-VP28。     

一种新蛋白源──青海钩虾(Gammarus suifunensis,Ueno,1940)营养价值的初步研究

对青海钩虾的营养价值进行了初步的研究。首先分析三种不同品级的青海钩虾，一般营养成分及氨基酸含量，并同两种鱼粉比较；第二，养鸡试验的结果表明，钩虾组在平均增量和总增重量等方面都优于鱼粉；第三，真鲷Pagrosomusmajor（Temminck＆Schlegel）的实验是按照逐次降低钩虾的含量的方法，分为4组。Ⅰ．钩虾：鱼粉＝6：4，Ⅱ．钧虾：鱼粉＝4：6，Ⅲ．钩虾：鱼粉＝2：8，Ⅳ．钩虾：鱼粉＝0：10。实验结果显示在其鲷的成活率、体长平均增长率、增重率和饲料系数等方面，含钩虾组较无钩虾（Ⅳ）为佳，而Ⅱ组具有最好的促增重效果和最经济的特点。最后，根据上述分析和实验结果，作者认为青海钩虾是一种可以代替鱼粉的新蛋白源，值得开发利用和推广。     

人工育苗条件下的大黄鱼胚胎发育及其仔、稚鱼形态特征与生态习性的研究

连续观察人工育苗中同一批受精卵,在水温２３．２～２３．４℃,盐度２７．００～２７．８０条件下,经过２６ｈ３６ｍｉｎ孵出仔鱼,并继续观察仔,稚鱼发育过程中的形态特征与生态习性,还比较了不同年份与不同批次的观察资料,讨论了水温等环境条件变化的对胚胎发育的影响,以及仔,稚鱼器官发育与日龄,生长速度等关系。     

绿鳍马面鲀(Navodon septentrionalis)鱼头酸溶性与酶溶性胶原蛋白的分离纯化及理化性质研究

利用酸溶法和酶溶法制备马面鲀鱼头酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC),并对所制备的ASC和PSC的氨基酸组成、SDS-PAGE、红外光谱、黏度和热变性温度,以及溶解度等性质进行分析。结果表明:马面鲀鱼头中ASC和PSC的提取率分别为0.94%±0.07%和3.91%±0.14%。Gly(265.0和251.8残基/1000残基)、Ala(111.0和107.6残基/1000残基)和Pro(87.0和83.1残基/1000残基)含量较高,而His和Tyr的含量较少,且未检测到Cys。ASC和PSC中亚氨基酸(Pro和Hyp)含量为169.3和160.6残基/1000残基。氨基酸组成分析、SDS-PAGE和红外光谱(FTIR)证实ASC和PSC均属于I型胶原蛋白,热变性温度分别为17.6°C和16.5°C。在酸性p H值范围内,ASC和PSC的溶解度较高;当Na Cl溶液浓度高于2%,ASC和PSC的溶解度会显著降低。综上,相对于哺乳动物类胶原蛋白,马面鲀鱼头ASC和PSC的亚氨基酸含量和热变性温度较低,结构稳定性差,易于降解,可作为胶原蛋白肽的制备原料进行开发。     

大黄鱼(Pseudosciaena crocea)热激蛋白的基因克隆、原核表达及抗血清的制备

应用trizol裂解法提取象山港网箱养殖大黄鱼肝脏总RNA,采用RTPCR获得大黄鱼cDNA;通过设计特异引物进行PCR扩增,将PCR产物转化到质粒并直接测序,得到1.7kb的目的基因;同时将此目的基因连接到表达质粒pSBET中,在大肠杆菌BL21中进行诱导表达以及表达产物的分析。克隆基因的表达产物经SDSPAGE分析表明,HSP基因的蛋白分子量为60kDa左右,与阅读框的编码大小一致;表达蛋白经纯化后免疫小鼠制备抗血清。Westernblotting检测结果表明,制备的抗血清与HSP蛋白起较强的特异性反应。HSP基因的系统进化分析表明,大黄鱼与非洲爪蟾最为接近,从侧面印证了脊椎动物中两栖纲动物与鱼纲动物的亲源关系。通过大黄鱼HSP基因的提取和分析,可为以后制备出核酸探针、筛选和克隆出一批具有优良性状的基因、构建基因文库等研究工作奠定基础。     

点带石斑鱼亲鱼培育、产卵和孵化的试验研究

采用经埋植外源激光法诱导所得的点带石斑鱼功能性雄鱼和人工养殖的雌鱼进行亲鱼培育、产卵和孵化的试验研究，在1999-2000年的两年中，繁殖仔鱼7103万尾，结果表明，雌鱼的绝对生死力为535.01万粒卵，相对生殖力为810.21粒/g体重，水泥池中培育的点带石斑鱼能自然产卵与水温相关，水温高于24℃时，产卵呈一定的周期性，即连续产卵5-7天，停产数天后再开始下一个产卵周期；水温低于24℃时，产卵受到抑制，水温对胚胎发育有明显的影响，水温25.5-28.5℃胚胎发育时间为21h53min，仔鱼活力好，盐度为30-33时，胚胎发育正常盐度降低造成孵化率下降。