骨桥蛋白促进卵巢癌细胞SKOV3侵袭潜能的实验研究

目的检测卵巢癌细胞株SKOV3中骨桥蛋白（OPN）的表达,探讨OPN对卵巢癌细胞侵袭潜能的影响。 方法pcDNA3.1(-)/OPN重组质粒转染SKOV3细胞,以空质粒转染作对照。采用RT PCR及Western blot法检测OPN mRNA和蛋白表达水平,并用基质凝胶侵袭实验检测两组细胞侵袭力。 结果重组质粒转染SKOV3细胞后OPN mRNA和蛋白表达明显升高。侵袭实验证实重组质粒转染组细胞侵袭力明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论OPN对卵巢癌细胞的侵袭潜能有促进作用。     

Genistein对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3体内和体外侵袭的抑制作用

目的研究genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3 体内外侵袭能力的抑制作用.方法建立Borden小室体外侵袭模型以及瘤细胞体内皮下移植瘤侵袭模型,观察genistein对SKOV3的影响.结果 20 μmol/L genistein处理SKOV3细胞3 d后,细胞侵袭重建基底膜明显受到抑制,其抑制率呈剂量效应曲线.40 μmol/L genistein作用细胞后侵袭至滤膜下表面的细胞数最低.体内实验半定量分析结果表明,对照组SKOV3细胞的体内侵袭程度随时间延长而呈进行性,genistein处理组可明显阻止侵袭的进程,使肿瘤局限于0级或Ⅰ级,并明显降低Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级的侵袭百分比.结论 Genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3 体内和体外的侵袭均有抑制作用.     

genistein抑制人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3体外侵袭作用的分子机制

目的 探讨 genistein 抑制人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系 SKOV3体外侵袭作用的分子机制.方法 利用微孔滤膜培养小室进行双室联合培养,建立体外趋化运动模型,观察 genistein 对SKOV3趋化运动能力的影响;用免疫组化和原位杂交方法检测 genistein 对细胞表面黏附分子CD44v6、基质金属蛋白酶及其组织抑制物MMP-9/TIMP-1,MMP-2/TIMP-2蛋白和mRNA表达水平的影响.结果 20 μmol/L和40 μmol/L genistein处理SKOV3细胞后,细胞的运动能力分别下降至对照组的 (46.9±5.8)%和(28.3±4.7)%,差异显著(P＜0.01).免疫细胞化学和原位杂交检测结果表明:和对照组相比,20 μmol/L genistein处理SKOV3细胞后48 h,CD44v6、 MMP-9及MMP-2的蛋白和mRNA表达均减弱(P＜0.05),而TIMP-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平增强(P＜0.05).结论 genistein明显抑制SKOV3细胞的趋化运动能力、降低SKOV3细胞黏附分子CD44v6的表达、下调MMP-9与MMP-2表达,并上调TIMP-1与TIMP-2表达,这可能是其抑制人卵巢癌细胞系SKOV3体外侵袭作用的重要分子基础.     

δ-catenin促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨δ-catenin在卵巢癌中的生物学作用.方法 在SKOV3和SW626卵巢癌细胞系中通过siRNA干扰降低δ-catenin表达,在OVCAR3细胞中转染δ-catenin增加δ-catenin的表达;通过MTT、集落形成实验、软琼脂集落形成实验和基质胶侵袭实验,检测δ-catenin对卵巢癌细胞的增殖和侵袭的作用;通过流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 在SKOV3和SW626卵巢癌细胞系中敲减δ-catenin后细胞增殖能力和侵袭能力明显降低,同时在OVCAR3细胞中转染δ-catenin后细胞增殖能力和侵袭能力显著提高;δ-catenin可以通过cyclin D1促进G1～S转换,调节细胞周期进展,进而促进卵巢癌细胞的生长.结论 δ-catenin为研究卵巢癌的生物学作用提供了一个好的开端,可能成为卵巢癌治疗中的一个新的靶点.     

MicroRNA-140抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨microRNA-140(miR-140)在胃癌中的表达及其在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用.方法:采用荧光定量PCR检测胃癌及癌旁组织、胃癌细胞系及正常人胃黏膜上皮细胞中miR-140表达水平,通过胃癌细胞株过表达及干扰miR-140,分析miR-140对胃癌细胞增殖和侵袭的作用.结果:胃癌组织miR-140表...     

HYAL2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的：利用RNA干扰（RNAi）技术抑制人卵巢癌SKOV3细胞株HYAL2基因的表达,探讨siRNA-HYAL2对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法：将靶向HYAL2的siRNA及对照分别转染人卵巢癌SKOV3细胞株,RT-PCR测定HYAL2基因mRNA表达情况,MTT法检测SKOV3细胞增殖,FCM检测细胞周期变化,构建Transwell小室体外侵袭模型观察其对细胞侵袭能力的影响.结果：转染siRNA-HYAL248 h后HYAL2基因mRNA表达水平明显降低,细胞存活率下降（P〈0.05）,S期细胞百分比降低、G0/G1期细胞百分比升高（P〈0.05）;转染24 h后平均穿膜细胞数减少（P〈0.05）.结论：siRNA-HYAL2能特异性抑制HYAL2的mRNA表达水平,HYAL2基因沉默后,卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力降低,HYAL基因可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点.     

Genistein抑制肝细胞肝癌侵袭性生长的体外研究

目的研究genistein对肝癌细胞侵袭性生长的抑制作用及其作用机制.方法以体外培养的Bel 7402肝癌细胞株为研究对象,分别给予5靏/mL和10 靏/mL genistein干预,绘制细胞生长曲线,测定细胞活力和不同时间点细胞体外黏附能力变化,以Transwell小室测定细胞的体外侵袭能力,同时行局部黏着斑激酶(FAK)表达、细胞DNA含量的双参数流式细胞仪检测和细胞凋亡的流式细胞仪检测.结果genistein显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的生长,其细胞活力显著下降,肿瘤细胞抑制率在G5组平均为26.71%,在G10组平均为42.64%;细胞体外黏附能力受到显著抑制,在genistein作用的前40 min内最为明显,40 min时的黏附抑制率在G5组为43.52%,G10组为84.18%;细胞体外侵袭能力显著下降,G10组的侵袭抑制率可达28%;细胞凋亡显著增加;细胞周期分析显示S期细胞比率显著降低,细胞生长主要阻滞在G2/M期;信号转导分子FAK表达在G10组(12.89±0.36)%显著低于对照组(19.75±1.12)%(P＜0.05).结论genistein可以显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的体外侵袭性生长,FAK表达改变与genistein抑制作用的发挥相关.     

卵泡刺激素对卵巢癌细胞株增殖、凋亡和迁移侵袭的影响

目的 观察卵泡刺激素（FSH）对卵巢癌细胞株SKOV-3和ES-2细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响。方法将FSH以不同浓度（10、20、40、80、160mU／m1）分别作用于1×10^5或2．5×10^6个SKOV-3细胞和6×10^4或1．5×10^6个ES-2细胞,FSH0mU／ml为对照组,其中FSH作用于SKOV-3细胞的适宜时间为48h,ES-2细胞为24h,分别测定细胞的增殖活性;细胞凋亡和细胞周期情况;细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2（MMP-2）的活性;SKOV-3和ES-2细胞内MMP-2蛋白及mRNA表达的变化;细胞的迁移侵袭能力。结果 （1）随着FSH浓度的增加,SKOV-3细胞的增殖活性升高,与对照组相比差异均有统计学意义（均P〈0．01）。（2）随着FSH浓度的增加,SKOV-3细胞的凋亡率下降,分别为0．94％±0．06％、0．71％±0．03％、0．22％±0．02％、0．32％±0．02％、0．55％±0．05％,与对照组（1．30％±0．10％）比,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。（3）FSH浓度自40mU／ml起,SKOV-3细胞G0／G1（均P〈0．05）。（4）FSH可提高SKOV-3细胞MMP-2mRNA和胞质中MMP-2蛋白含量及细胞培养上清液中MMP-2的活性。（5）侵袭实验：SKOV-3细胞加FSH组和对照组穿透基底膜细胞数分别为（157±20）、（27±9）个／高倍镜（×200）,两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;划痕实验也显示FSH提高了SKOV-3细胞的迁移能力。FSH作用于ES-2细胞的表现与SKOV．3细胞基本一致。结论 FSH可促进卵巢癌细胞株SKOV-3和ES-2细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡。     

Clusterin基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖与侵袭的影响

目的通过RNA干扰技术抑制卵巢癌SKOV3细胞分泌型clusterin(sCLU)基因的表达,研究其对卵巢癌细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法通过脂质体介导靶向sCLU基因的siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞,实验分为4组:实验组(sCLU-siRNA+脂质体)、阴性对照组Ⅰ(negative control siRNA+脂质体)、阴性对照组Ⅱ(sCLU-siRNA)、空白对照组(等体积的完全培养液)。RT-PCR和蛋白质印迹分析法检测sCLU表达;利用MTT法、Transwell小室体外侵袭实验及流式细胞仪AnnexinⅤ/PI法检测评价sCLU基因抑制后对卵巢癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。结果靶向sCLU基因的siRNA明显、特异性地抑制了sCLU mRNA和蛋白的表达水平;MTT实验结果显示实验组细胞增殖能力较各对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪AnnexinⅤ/PI法检测结果显示实验组细胞凋亡率较各对照组明显升高,达到(15.84±1.53)%,较空白对照组升高了约9%,差异有统计学意义(P<0.01)。侵袭实验结果提示实验组细胞侵袭能力受到明显抑制,实验组穿膜细胞数量为(26.52±6.22)个/视野,较各对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 sCLU基因沉默明显抑制了卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭能力,并增加了其凋亡率,sCLU基因有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

c-cbl 基因沉默对卵巢癌 SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的：探讨 c-cbl 在卵巢癌的表达及其对卵巢癌细胞增殖、侵袭的影响。方法通过免疫组织化学法（S-P 法）检测c-cbl 蛋白在卵巢癌组织的表达;EdU 检测卵巢癌 SKOV3细胞沉默 c-cbl 基因后细胞增殖能力变化;Transwell 检测卵巢癌 SK-OV3细胞侵袭能力;Western blot 检测 P21蛋白和 P53蛋白的表达。结果 c-cbl 蛋白在卵巢癌中表达位于细胞质,在卵巢癌中, c-cbl 蛋白呈强阳性表达,在正常卵巢组织 c-cbl 蛋白呈弱阳性或者阴性表达。与正常卵巢组织比较,c-cbl 蛋白在卵巢癌表达明显增高（P＜0．05）;c-cbl 蛋白在卵巢癌的表达与 FIGO 分期相关（P＜0．05）;沉默卵巢癌 SKOV3细胞 c-cbl 基因后,卵巢癌细胞增殖能力和侵袭能力降低（P＜0．05）;沉默 c-cbl 基因后,P21和 P53蛋白表达上调（P＜0．05）。结论 c-cbl 蛋白在卵巢癌表达上调,沉默 c-cbl 基因可能与上调 P21和 P53蛋白有关。     

Inhibitory Effect of Coxsackie Adenovirus Receptor on Invasion and Metastasis Phenotype of Ovarian Cancer Cell Line SKOV3

Tumor metastasis is the most common causeof death in cancer patients. More and more studiesindicate that adhesion molecules take an importantpart in the malignant progression. Coxsackie andadenovirus receptor (CAR) originally identified asa cellar receptor for coxsackie B viruses and adeno viruses is expressed ubiquitously in most normalepithelial tissues[1]. The function of CAR is notfully understood, but its localization in the tightjunctions suggests a role in…     

茶多酚对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及顺铂敏感性的影响

目的 探讨茶多酚(TP)对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及顺铂(DDP)敏感性的影响.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测单独使用不同浓度TP、DDP及低毒剂量TP联合DDP对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖抑制作用,分别计算抑制率、半数抑制浓度(IC50)及增敏倍数.结果 TP、DDP单药均以剂量依赖的方式抑制卵巢癌细胞株SKOV3的增殖.低毒剂量的TP联合DDP作用于细胞后,增殖抑制率明显增加,IC50由单用DDP时的6.555 mg/L下降到3.021 mg/L,敏感性提高到单用DDP的2.17倍.结论 TP对人卵巢癌细胞株SKOV3有生长抑制作用,低毒剂量TP与DDP联合应用可提高SKOV3细胞对DDP的敏感性,减少DDP的用量.     

姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抗增殖作用

目的:探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制增殖作用及其机制.方法:采用MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对SKOV3的抑制增殖效应,流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率,透射电镜观察细胞的超微结构变化,免疫细胞化学法检测凋亡相关基因蛋白的表达.结果:姜黄素可抑制SKOV3细胞的生长,其抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系,72h的中效浓度(IC50)为79.96μmol/L,流式细胞仪分析证实姜黄素能使SKOV3细胞聚积在G2/M,电镜观察发现姜黄素可诱导细胞凋亡,姜黄素作用72h后,免疫细胞化学表明突变型P53蛋白(MTP53)及Bcl-2表达减弱,Bax及Fas表达增强.结论:姜黄素对SKOV3细胞有抑制增殖作用,通过下调MTP53、Bcl-2的表达及上调Bax、Fas的表达而诱导细胞凋亡.     

米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3增殖和CEACAM6表达的影响

目的  观察米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3增殖和癌胚抗原相关黏附分子6（CEACAM6）表达的影响。方法  不同浓度米非司酮（空白对照、1×10-7、1×10-6、1×10-5、5×10-5mol/L）干预卵巢癌细胞系SKOV3 24、48、72h;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测米非司酮对SKOV3的抑制作用;逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记（Western blot）检测不同浓度米非司酮干预下CEACAM6 mRNA和蛋白表达水平的差异,并进行半定量分析。结果  与空白对照组比较,1×10-7和1×10-6mol/L米非司酮对SKOV3的生长没有明显的抑制作用（P＞0.05）;5×10-5mol/L米非司酮显著抑制SKOV3的生长（P＜0.01）,并降调SKOV3细胞中CEACAM6 mRNA和蛋白的表达水平（P＜0.05）。结论  米非司酮可明显抑制SKOV3的体外增殖,其作用机制可能与抑制CEACAM6的表达有关。     

舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞作用的初步研究

目的:研究舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞的生长和细胞运动的影响以及对基质金属蛋白酶2(MMP2)、环氧合酶-2(COX-2)表达的影响:方法:将不同浓度的舒林酸加入培养液中观察其对SKOV3细胞形态的影响,采用MTT法观察舒林酸对SKOV3细胞生长的影响,通过划痕试验观察舒林酸对SKOV3细胞运动的影响,利用免疫细胞化学方法研究舒林酸对SKOV3细胞MMP2、COX-2表达的影响。结果:舒林酸与SKOV3细胞体外培养可使肿瘤细胞伪足回缩、细胞变圆,MTT试验提示舒林酸可抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长,划痕试验提示舒林酸可抑制SKOV3细胞的运动,免疫细胞化学实验提示舒林酸显著抑制SKOV3细胞MMP2、COX-2的表达,有时间和剂量依赖效应。结论:舒林酸可能通过抑制MMP2、COX-2的表达而抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长和运动。