姜黄素对人结肠癌细胞HT-29中β-catenin、血管内皮生长因子的影响

目的研究姜黄素对体外培养人结肠癌HT-29细胞增殖及对细胞株中β-catenin、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用不同浓度的姜黄素作用于HT-29细胞,MTT法检测细胞增殖情况;Western印迹检测药物处理后β-catenin及VEGF蛋白的表达。结果姜黄素对HT-29细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量-时间依赖性(P<0.05),测得IC50为19.27μmol/L;在蛋白水平,姜黄素处理后,β-catenin、VEGF的蛋白表达水平降低。结论姜黄素能够抑制HT-29细胞的增殖,并下调结肠癌细胞HT-29中β-catenin、VEGF的表达。     

分化抑制因子1对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的 检测分化抑制因子1(Id1)对结肠癌HT-29细胞VEGF表达的影响,探讨其在结肠癌增殖中的作用.方法 HT-29转染Id1表达质粒,RT-PCR方法和Western印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况;合成Id-1干扰序列转染HT-29细胞后,RT-PCR及Western印迹检测HT-29细胞VEGF mRNA和蛋白的表达情况,采用MTT法检测各组细胞增殖情况.结果 Id1表达质粒空白组、对照组(空载体组)、过表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.002 99±0.000 687、0.003 49±0.001 34、0.0313±0.00605(P＜0.01);VEGF/GAPDH蛋白分别为:0.132±0.035 1、0.131±0.053 0、0.245 ±0.032 6(P ＜0.01),MTT实验显示相对对照组,过表达组增殖明显快(P＜0.01).Id-1干扰空白组、对照组(空载体组)、抑表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.006 16±0.000 829、0.006 26±0.000 447、0.002 3±0.000 308(P ＜0.01);VEGF/GAPDH蛋白分别为:0.450 ±0.039 3、0.464±0.023 1、0.231±0.027 3(P ＜0.01).MTT实验显示相对对照组,抑表达组增殖明显减慢(P＜0.01).Id1过表达能显著上调VEGF mRNA和蛋白表达,提高细胞的生长,Id1抑制后能显著下调VEGF mRNA和蛋白表达,减缓细胞的生长.结论 在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1通过Id1 ↑ →VEGF ↑途径来影响结肠癌细胞增殖,在肿瘤血管生成中发挥重要作用.Id1有望成为结肠癌治疗的一个新靶点.     

表皮生长因子对HT-29细胞内游离Ca~(2 )和C-AMP的影响

本文应用荧光比色法和放射免疫法动态检测了表皮生长因子对大肠癌HT-29细胞内Ca~(2 )和C-AMP水平的影响。结果发表EGF可呈剂量依赖性升高Ca~(2 )水平,而EGF-R抗体则可阻断此作用;EGF可短时降低C-AMP水平,提示Ca2 和C-AMP参于EGF作用的信息传递。     

姜黄素对结肠癌细胞SW480 FasL基因表达和侵袭能力的影响

目的研究姜黄素对人结肠癌SW480细胞FasL mRNA表达及对其侵袭能力的影响,为中药抗肿瘤提供实验依据。方法根据MTT法得到姜黄素对SW480细胞的半数有效抑制浓度（IC50）,确定药物作用浓度。SW480细胞分别经姜黄素不同浓度（0．5 IC50、IC50）作用后,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测姜黄素作用前后人结肠癌SW480细胞FasL mRNA的变化;应用Transwell细胞侵袭试验检测姜黄素对SW480细胞侵袭能力的影响。结果姜黄素处理后SW480细胞FasL mRNA表达水平均明显高于对照组（P〈0．01）;而且FasL mRNA表达水平随姜黄素作用浓度增加显著上调,姜黄素不同浓度组比较均有显著性差异（P〈0．01）;随姜黄素作用浓度升高,SW480细胞侵袭能力明显增强,不同浓度组比较均有显著性差异（P〈0．01）。结论姜黄素在一定时间内均可上调人结肠癌SW480细胞FasL mRNA的表达,而且这种上调作用在一定范围内呈剂量依赖性,可使结肠癌细胞的侵袭能力增强。     

姜黄素对胆汁酸诱导的人结肠癌细胞HT-29增殖的抑制作用

/L、作用6 h时和浓度≥0.5μmol/L、作用12 h时,即可抑制DCA诱导的COX-2 mRNA表达;姜黄素浓度≥1μmol/L、作用24～48 h和浓度>5 μmol/L、作用6～12 h,即可抑制DCA诱导的COX-2蛋白表达和PGE2合成.结论 姜黄素可以浓度和时间依赖模式抑制DCA诱导的HT-29细胞的增殖、COX-2 mRNA和蛋白的表达以及PGE2的合成,这可能是姜黄素抑制HT-29细胞增殖的机制之一.     

神经酰胺对结肠癌HT-29细胞凋亡和增殖细胞核抗原表达的影响

目的 探索神经酰胺(C_2-cer)影响人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和增殖细胞核抗原(PCNA)表达.方法 12.5、25 μmol/L的C_2-cer处理HT-29细胞,用MTT法、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、Western印迹等方法检测HT-29细胞增殖、凋亡和PCNA表达.结果 以12.5、25 μmol/L的C_2-cer处理HT-29细胞,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡明显增加,PCNA表达明显降低,并呈剂量-效应关系.结论 C_2-cer可诱导细胞凋亡,该效应可能与下调PCNA表达有关.     

阿司匹林对HT-29、SW480结肠癌细胞株CD133表达的影响

目的:观察阿司匹林对人结肠癌肿瘤干细胞标志物CD133表达的影响,探讨其对结肠癌干细胞的作用.方法:流式细胞仪检测结肠癌细胞株HT-29和SW480在不同浓度阿司匹林(0、2.5、5.0、10.0mmol/L)作用下CD133的表达变化.结果:流式细胞仪检测结果显示CD133+细胞在HT-29细胞株中的比例为88.37%±1.00%,在SW480细胞系中的比例为65.22%±1.50%.用阿司匹林干预后,随着阿司匹林浓度的增加,CD133在结肠癌细胞系HT-29和SW480中的表达呈下降趋势,差异有统计学意义(45.41±1.09,55.31±1.07vs73.45±1.04;28.28±0.30,42.27±0.78vs58.96±0.09,均P<0.05).结论:阿司匹林能抑制结肠癌细胞株HT-29和SW480中CD133的表达,呈剂量依赖性.     

c-myc反义寡核苷酸对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的:研究体外c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法:利用脂质体LipofectamineTM2000介导将c-myc ASODN转染入大肠癌HT-29细胞中, 逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Westernblot方法检测c-myc基因mRNA及蛋白的表达,MTT、流式细胞仪(FCM)检测c-myc ASODN对人结肠癌HT-29细胞增殖抑制及其对奥沙利铂敏感性影响.结果:转染c-myc ASODN后, HT-29细胞内c-myc mRNA水平显著降低(0.464±0.029 vs0.974±0.027, 0.945±0.012, 均P<0.01). 在HT-29细胞中存在分子质量62 kDa的特异性条带, 与c-myc分子质量相符, ASODN组在PVDF膜上的特异性条带明显弱于对照组; MTT结果显示转染c-myc ASODN 48 h后的HT-29细胞的增殖速度较对照组细胞明显减慢. FCM显示c-myc ASODN转染后72 h后, 奥沙利铂+ c-myc ASODN组细胞凋亡率显著高于对照组( P<0.05).结论:体外c-myc ASODN可抑制c-myc mRNA及蛋白的表达, 阻断c-myc可抑制HT-29细胞增殖并增强其对奥沙利铂的敏感性, 可能为大肠癌的基因治疗提供新的靶点.     

肠复康对人结肠癌细胞HT-29增殖及浸润转移的影响

[目的] 探讨肠复康中药对人结肠癌细胞HT-29增殖及浸润转移影响的分子机制。[方法] 采用体外培养，应用免疫组化方法，检测其对核增殖抗原Ki-67、金属基质蛋白酶(MMP2)及其相应组织抑制物(TIMP2)表达的影响。[结果] 经中药血清处理过的HT-29细胞表现出增殖受抑，MMP2表达减少及TIMP2分泌增加，且其表达与中药血清浓度有量效关系，以30％血清组效果最明显。[结论] 中药肠复康通过抑制Ki-67的表达及影响MMP2、TIMP2的相互平衡来影响结肠癌细胞的增殖及浸润转移。     

表皮生长因子对HT-29细胞内游离Ca^2＋和C-AMP的影响

本应用荧光比色法和放射免疫法动态检测了表皮生长因子对大肠癌HT-29细胞内Ca^2 和C-AMP水平的影响。结果发表EGF可呈剂量依照性升高Ca^2 水平，而EGF-R抗体则可阻断此作用；EGF可短时降低C-AMP水平，提示Ca^2 和C-AMP参于EGF作用的信息传递。     

胃癌中NDRG2基因甲基化及其表达缺失的研究

目的探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)基因启动子甲基化与胃癌发生、发展的关系。方法取40例手术的胃癌组织及40例相应癌旁正常组织(距癌5 cm以上),MSP法检测其启动子区甲基化状况,免疫组化检测蛋白的表达水平。结果胃癌组织中NDRG2甲基化率为72.5%(29/40),而癌旁正常组织中仅8例(20.0%)发生了甲基化,差异有统学意义(χ2=22.17,P0.01)。NDRG2甲基化与性别、年龄、TNM分期及有无淋巴结转移无相关性(P0.05)。NDRG2蛋白在癌旁正常组织中的表达阳性率为87.5%(35/40),胃癌组织中为10.0%(4/40),差异有统计学意义(χ2=48.08,P0.01)。结论 NDRG2基因可能参与胃癌的发生、发展。     

姜黄素对人结肠癌细胞SW480作用的体外实验研究

目的 研究姜黄素促进人结肠癌细胞系SW480凋亡的作用.方法 人结肠癌细胞系SW480与不同浓度的姜黄素共孵育48 h,MTT法检测细胞存活率,并用相差显微镜观察细胞形态学改变.用流式细胞术(检测细胞凋亡相关指标Annexin V/PI)和Ho-echst3258染色检测细胞凋亡.结果 姜黄素能够不同程度地抑制人结肠癌细胞系SW480的生长.姜黄素对SW480细胞的IC50(半数抑制浓度)为65 mg/mL.Hoechst3258荧光染色与流式细胞术分析SW480细胞的结果一致.结论 姜黄素可促进SW480细胞凋亡,为姜黄素治疗结肠癌提供依据.     

槲皮素对结肠癌HT-29细胞增殖及周期的影响

目的:探讨槲皮素(Qu)对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡影响的分子机制．方法:以40×10-6,80×10-6,160×10-6mol／L的槲皮素作用结肠癌HT-29细胞,以溶剂为对照组,采用MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RT-PCR等方法观察槲皮素对结肠癌细胞增殖,细胞周期,细胞凋亡,及Caspase-3 蛋白表达、Caspase-3、bcl-2、bax mRNA表达的影响．结果:40×10-6mol／L Qu明显促进HT-29细胞增殖(P<0．05),80×10-6,160×10-6mol／L Qu 明显抑制细胞增殖(P<0．05或P<0．01),呈时间 (?)效应．40×10-6,80×10-6,160×10-6mol/L槲皮素作用HT-29细胞72 h,其增殖率分别为 (111．8±9．6)％,(64．6±8.3)％和(26．1±5．7)％, G0／G1期细胞分别为(32．7±5．4)％、(58．1± 18．3)％和(71．6±20．8)％,S期细胞分别为(48．6 ±17．5)％、(27．4±13．4)％和(15．4±10．1)％,细胞凋亡率分别为(7．0±1．3)％、(15．6±3．6)％和(26．4±6．2)％,80×10-6,160×10-6mol／L能明显提高G0／G1期细胞(P<0．01),明显降低S期细胞(P<0．01),细胞凋亡明显增加(P<0．01)．80 ×10-6,160×10-6mol／L的Qu增加细胞中bax mRNA,Caspase-3 mRNA及其蛋白的表达,降低 bcl-2 mRNA的表达．40×10-6mol／L的Qu增加 Caspasc-3 mRNA表达,但其蛋白表达未见明显增加,细胞增殖明显增加．结论:槲皮素能促进结肠癌HT-29细胞增殖, 也能诱导细胞凋亡,其机制可能是通过上调 Caspase-3和bax表达,降低bcl-2表达来实现的．     

姜黄素对人结肠癌SW620细胞凋亡机制的影响

目的 探讨体外姜黄素对人结肠癌SW620细胞生长及凋亡的影响.方法 体外培养SW620细胞,用不同浓度的姜黄素作用为实验组,同时设对照组,以CCK8法测细胞增殖抑制作用、流式细胞仪检测细胞凋亡及p53和Bcl-2蛋白表达情况.结果 不同浓度姜黄素作用SW620细胞24 h增殖抑制显著(P<0.05),其抑制效应具有剂量依赖性,同时诱导SW620细胞凋亡、上调p53基因表达、下调Bcl-2基因表达(P<0.05).结论 姜黄素可抑制SW620细胞的生长且具有剂量依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关.     

EGCG对结肠癌HT-29细胞生长的影响及机制

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人结肠癌细胞株HT-29生长的影响及可能作用机制.方法 采用不同浓度的EGCG处理HT-29细胞,四唑盐比色试验(MTT)法观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况;Western Blot洁检测表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的表达.结果 EGCG处理后HT-29细胞生长明显抑制,呈现时间、剂量依赖性;HT-29细胞凋亡率升高;EGFR和ERK的磷酸化水平表达下调.结论 EGCG可明显抑制结肠癌HT-29细胞的生长;其可能机制为下调EGFR和ERK的磷酸化水平,从而干预EGFR-ERK信号转导通路.     

MK886和celecoxib对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的 探讨通过5-脂氧合酶(LOX)抑制剂MK886及环氧合酶(COX)-2抑制剂celecoxib阻断花生四烯酸途径对结肠癌HT-29细胞增殖的影响。方法 CCK-8及EdU法分别检测不同浓度的MK886(200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μmol/L)和celecoxib(200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μmol/L)对体外培养的结肠癌细胞HT-29细胞的增殖抑制情况;采用细胞平板集落形成及细胞迁移能力实验检测经过MK886(25.0μmol/L)处理后的细胞克隆形成及迁移能力。结果 CCK-8结果显示,MK886及celecoxib均对HT-29细胞生长的增殖抑制率呈明显剂量和时间依赖性增加(P<0.05);EdU结果显示,MK886和celecoxib均能明显抑制结肠癌HT-29细胞DNA合成,且呈明显剂量依赖性(P<0.05);MK886对HT-29细胞克隆形成及迁移能力均有明显抑制作用(P<0.05)。结论 阻断花生四烯酸途径对结肠癌HT-29细胞增殖有明显抑制作用,但具体机制仍需进一步研究。     

绿茶水提取物诱导大肠癌LOVO和HT-29细胞系的凋亡

茶叶(Tea，Camellia sinensis)是倍受人们喜爱的保健饮料之一，与人类的健康有密切关系，茶叶的防病治病特别是其防癌抗癌功能，受到了广泛重视。我们用绿茶(湖南省江永县铜山岭农场产品)水提取物直接作用于体外培养的大肠癌LOVO和HT-29细胞，用MTT法证实绿茶水提取物对这两株大肠癌细胞有抑制作用。     

脂联素对结肠癌HT-29细胞的增殖及凋亡研究

目的探讨脂联素对结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡的影响。方法以不同浓度脂联素干预细胞,MTT法检测细胞增殖能力;AnnexinV／PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡。结果随着脂联素浓度的不断升高和培养时间的延长,HT-29细胞的生长逐渐受到抑制,脂联素可以诱导细胞凋亡。结论脂联素可抑制HT-29细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

藤梨根提取物对HT-29荷瘤裸鼠的抑制及诱导凋亡作用的影响

目的:研究藤梨根提取物(ethanol extract from radix of Actinidia chinensis,EERAC)对人大肠癌HT-29荷瘤裸鼠移植瘤的抑制和诱导凋亡作用.方法:提取EERAC,以大肠癌HT-29细胞对40只Balb/c-nu/nu裸鼠进行荷瘤造模,并随机将分为3个EERAC处理组(低剂量组5mg/kg、中剂量组10mg/kg、高剂量组20mg/kg),空白对照组(生理盐水)和阳性对照组(5-Fu,25mg/kg),每组8只,连续用药8d后,测定各实验组的肿瘤抑制率、脾脏指数.通过脾脏效应细胞培养,测定NK细胞的活性度.免疫组织化学法测定各组荷瘤裸鼠体内凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达水平.结果:与空白对照组相比,EERAC对HT-29移植瘤均有明显的抑制作用,各剂量组的抑瘤率为9.12%、20.13%、37.81%,与药物剂量呈正比;EERAC各剂量组对荷瘤裸鼠脾脏指数较生理盐水组和5-Fu组有显著增加(P<0.05);不同剂量的EERAC均可使NK细胞活性度增加(P<0.05);EERAC作用后,HT-29荷瘤裸鼠体内的Bcl-2表达减弱,Bax、Caspase-3表达水平增高,Bcl-2/Bax比值下降,其作用也呈剂量相关性.结论:EERAC对大肠癌细胞HT-29荷瘤裸鼠具有抑制瘤体生长和诱导癌细胞凋亡的作用,其作用机制可能为抑制荷瘤裸鼠体内Bcl-2的表达,提高Bax、Caspase-3表达水平,下调Bcl-2/Bax.EERAC对荷瘤裸鼠免疫系统无不良影响,且能一定程度上提高机体的免疫功能.