体外培养胆碱能神经元的乙酰胆碱酯酶组化染色

体外培养神经细胞是神经生物学中研究神经细胞发育再生的一种重要手段。但胆碱乙酰化酶免疫组化法价格昂贵，我们采用乙酰胆碱酯酶组化方法同样能清晰显示胆碱能神经元的生长发育情况。本文对体外培养神经细胞的ＡｃｈＥ组化染色的方法要点，时间控制及其原理进行了讨论，并与鼠脑切片标本ＡｃｈＥ组化法作比较分析。     

单侧穹窿伞损伤对老年大鼠空间记忆及海马胆碱能纤维的影响

对老年大鼠行单侧穹窿伞横断术，术后２周，用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫试验及乙酰胆碱脂酶染色观察大鼠的学习记忆及海马ＡｃｈＥ阳性纤维密度的变化。结果表明；海马ＣＡ１、ＣＡ３及齿状回的ＡｃｈＥ纤维明显减少，而且减少程度与学习记忆的下降成正相关关系。     

大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞体外培养和鉴定

目的 建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（简称ＡＴ－Ⅱ）的改良体外原代培养法，并比较其鉴定方法的优劣。方法 ＡＴ－Ⅱ分离、用胰蛋白酶消化地并用ＩｇＧ包被的培养瓶粘附纯化，原代培养后通过鞣酸多彩、碱性磷酸酶（Ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＫＰ）、肺表面活必不知所措霜关蛋白Ａ（ＳＰ－Ａ（）免疫组化三种染色法和电镜鉴定ＡＴ－Ⅱ。结果 胰酶消化加ＩｇＧ粘附纯化后所得的ＡＴ－Ⅱ纯度为９０％。ＡＫ 色鉴定     

介绍一种敏感显示乙酰胆碱酯酶的组织化学方法

介绍一种敏感显示乙酰胆碱酯酶的组织化学方法首都医学院北京神经科学研究所刘玉军，鲁强，佟大山，张国风显示胆碱酯酶阳性神经元的乙酰胆碱酯酶（ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ，ＡＣｈＥ）组织化学方法在组织学、神经解剖学研究中应用广泛。传统染色方法虽...     

电镜包埋前厚切片胆碱酯酶细胞化学染色

电镜包埋前厚切片胆碱酯酶细胞化学染色姜远虹李炳太（山西医科大学科技处电镜室太原０３０００１）关键词胆碱酯酶细胞化学染色电镜技术中图号Ｒ３６１．３乙酰胆碱是一种重要的神经递质，乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）参与乙酰胆碱的代谢，是反映乙酰胆碱代谢的重要标志酶。...     

人类骨髓基质细胞系免疫组化标本的制备

采用体外培养技术作人类骨髓基质细胞系,在８ｃｍ＾２平皿中制备原代和传代细胞标本,用ＡＢＣ法在 直接行Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、Ｄｅｓｍｉｎ、ａ－ＳｍｏｏｔｈＭｕｓｃｌｅＡｃｔｉｎ单克隆抗体和ＶｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄＦａｃｔｏｒ抗体染色。     

脑溢安颗粒剂对缺糖损伤后海马神经细胞凋亡的影响

根据ｓａｄｒｏｚａｄｅｎ报道的方法复制胎鼠海马神经细胞原代培养缺糖损伤模型。采用细胞形态学、ＤＮＡ裂解率、流式细胞仪方法,观察缺糖损伤后,原代培养的胎鼠海马ＣＡ１神经细胞的形态结构,ＤＮＡ完整性、神经细胞发生凋亡的数量;结果,缺糖损伤后,培养神经细胞ＤＮＡ裂解率随时间延长而增加,１２ｈ达到８３％,脑溢安颗粒剂（ＮＹＡ）对缺糖损伤后神经细胞ＤＮＡ裂解率的抑制作用大于模型组,差异具有统计学意义（Ｐ＜０     

蝙蝠葛苏林碱抑制NMDA引起的细胞游离钙升高而减少神经毒性

目的 :研究蝙蝠葛苏林碱 (ｄａｕｒｉｓｏｌｉｎｅ ,ＤＡＵ )拮抗Ｎ 甲基 Ｄ 精氨酸 (Ｎ ｍｅｔｈｙｌ Ｄ ａｓｐｒａｔａｔｅ ,ＮＭＤＡ)引起的神经毒性作用 ,并对其作用机制进行了分析。方法 :ＮＭＤＡ损伤原代培养的海马神经细胞 ;培养细胞内游离钙浓度的测定 ;大鼠动脉条内86Ｒｂ 外流率的测定。结果 :ＤＡＵ能对ＮＭＤＡ损伤的原代培养的海马神经细胞有明显的保护作用 ,能剂量依赖性地抑制损伤后培养细胞中ＬＤＨ的释放 ;ＤＡＵ还能剂量依赖性地抑制ＫＣｌ,Ｂａｙ ,Ｋ86 44 ,ＮＭＤＡ ,去甲肾上腺素 (ＮＥ)以及咖啡因 (ｃａｆｆｅｉｎ…     

黄芪超微结构观察及其脂酶同工酶比较

通过对红杆、绿杆的蒙古黄芪Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ Ｂｇｅ．或Ａ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ．）Ｂｇｅ．ｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ（Ｂｇｅ．）Ｈｓｉａｏ〔１，２〕及叶表有毛、无毛的膜荚黄芪Ａ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ）Ｂｇｅ．〔３〕的花粉、叶表面纹饰、子房柱头电镜扫描观察以及脂酶同工酶分析比较，发现红杆、绿杆蒙古黄芪及有毛无毛的膜荚黄芪存在着明显的差     

人类骨髓基质细胞系免疫组化标本的制备

采用体外培养技术制作人类骨髓基质细胞系，在８ｃｍ２平皿中制备原代和传代细胞标本，用ＡＢＣ法在皿中直接行Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、Ｄｅｓｍｉｎ、αＳｍｏｏｔｈＭｕｓｃｌｅＡｃｔｉｎ单克隆抗体和ＶｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄＦａｃｔｏｒ抗体染色。结果显示：平皿中细胞分布均匀，无污染、破损和脱片，方法简易，优于盖玻片法，可用于贴壁粘附细胞的免疫组化研究。     

实验性氟中毒大鼠脊髓前角神经元的酶细胞化学研究

目的：探讨慢性氟中毒对神经元某些酶类的影响,为氟中毒脊髓病临床症状产生的机理提供形态学依据。方法：采用生后４０日龄Ｗｉｓｔａｒ系雄性大鼠,以喂饲高氟１００ｐｐｍ／Ｌ水的方法制造慢性氟中毒模型。对其脊髓前角运动神经元的镁激活腺苷三磷酸酶（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ,ＡＴＰａｓｅ）,硫胺素焦磷酸酶（Ｔｈｉａｍｉｎｅｐｙ－ｒｏｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ,ＴＰＰａｓｅ）,乙酰胆碱酯酶（Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ,ＡＣｈＥ）及胆碱乙酰化酶（Ｃｈｏｌｉｎｅａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＣｈＡｃ）进行定性定量研究。结果：氟中毒组脊髓前角神经元的ＡＴＰａｓｅ,ＴＰＰａｓｅ及ＡＣｈＥ的活性明显降低,而ＣｈＡｃ的变化不明显。结论：慢性氟中毒对脊髓前角运动神经元的ＡＴＰａｓｅ,ＴＰＰａｓｅ及ＡＣｈＥ的活性有明显的影响,而对ＣｈＡｃ的影响不明显。     

新生大鼠海马神经细胞原代培养方法的改良

（1）目的：建立较理想的新生大鼠海马神经细胞体外原代培养方法。（2）方法：采用低浓度，长时间胰酶消化和机械分离相结合的方法进行单层原代培养。（3）结果：在体外培养条件下神经细胞结构特征明显化，并能形成典型的神经细胞网络。（4）结论；该培养技术是海马神经细胞体外培养的理想方法。     

海洋甾体YC—1抑制低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元的凋亡

目的：观察海洋甾体ＹＣ－１对低钾（５ｍｍｏｌ／Ｌ,ｌｏｗ Ｋ＾＋）诱导小脑颗粒神经元凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法：小脑颗粒神经元原代培养;采用二乙酸荧光素（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ,ＦＤＡ）和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８ＤＮＡ染色法观察神经元存活率及形态学特征;用琼脂糖凝胶电泳分析神经元死亡的生化特征。结果：低钾引起小脑颗粒神经元凋亡,Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ＤＮＡ染色     

大鼠海马神经细胞原代培养及塑料孔板原位鉴定

目的 原代培养大鼠海马神经细胞,探讨简单、有效的塑料孔板原位鉴定方法.方法 采用Hiroaki等的方法并做了改良,在塑料孔板里进行胎鼠海马神经细胞原代培养,7 d后分别用传统和改良的甲苯胺蓝(TB)染色法、改良的神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)染色法对海马神经细胞进行鉴定.结果 无血清细胞培养法神经细胞结构特征明显,能形成明显的神经网络结构.传统的TB染色法染色单一,均为淡蓝色;改良的TB染色法红蓝匹配,对比度好;改良的免疫组化NSE染色法胞质阳性.结论 无血清培养法是海马神经细胞培养的理想方法,塑料孔板细胞培养原位染色简单易行,对细胞及分子水平研究有重要意义.     

胎鼠海马神经细胞的原代培养及鉴定

目的建立较理想的SD大鼠胎鼠海马神经细胞体外原代培养方法。方法孕18 d(E18)SD大鼠的胎鼠,采用胰酶消化和机械分离相结合的方法进行海马神经元的原代无血清培养。结果在体外培养条件下神经细胞结构特征明显化,并能形成典型的神经细胞网络。结论该培养技术是海马神经细胞体外培养的理想方法。     

胎儿胃食管角乙酰胆碱酯酶阳性神经分布

用Ｋａｒｎｏｖｓｋｙ－Ｒｏｏｔ法，观察到胎儿胃食管角肌间丛、粘膜下丛、，上皮丛内有丰富的乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）阳性神经。是丛和粘膜下丛内有深当析大型多极形、卵圆形ＡｃｈＥ阳性神经元，数量少，布于丛的周缘，也有染色浅的中小型圆形ＡｃｈＥ了性神经元在丛内密集分布。本文还与胃食管角邻近的食管壁内的神经形态比较。     

脊髓神经细胞的培养及鉴定

目的:探索体外培养原代脊髓神经细胞的方法,为研究脊髓损伤及修复的分子机制、药物作用机制提供前提条件。方法:将妊娠15 d的孕鼠处死后取出胎鼠脊髓,分离出神经细胞作为原代细胞进行培养,观察神经元细胞形态学特征,并采用DAPI和NSE双重染色对所培养细胞进行鉴定。结果:胎鼠脊髓神经细胞在体外培养生长好,纯度高,经免疫荧光鉴定,所培养细胞荧光染色符合神经细胞特点。结论:采用该实验方法进行脊髓神经细胞培养方法简便,纯度高,能满足各种神经科学研究的需要。     

胚鼠大脑皮质神经元原代培养中NMDA诱导c—fos mRNA表达

为了进一步研究对神经元的早期保护，本实验观察Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）在胚鼠大脑皮层神经元原代培养诱导ｃ－ｆｏｓ基因表达特点。结果显示：ＮＭＤＡ可诱导快速、短暂的ｃ－ｆｏｓ基因表达，并呈剂量、时间依赖关系；ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达可被ＮＭＤＡ竞争性或非竞争性受体拮抗剂Ａｐ－５（５０μｍｏｌ／Ｌ）ＭＫ－８０１（１０μｍｏｌ／Ｌ）完全阻断，Ｍｇ＾２＋（２ｍｍｏｌ／Ｌ）可部分阻滞，异搏定、尼凡     

胚鼠大脑皮质神经元原代培养中NMDA诱导c－fosmRNA表达

为了进一步研究对神经元的早期保护，本实验观察了Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）在胚鼠大脑皮层神经元原代培养诱导ｃ－ｆｏｓ基因表达特点。结果显示：ＮＭＤＡ可诱导快速、短暂的ｃ－ｆｏｓ基因表达，并呈剂量、时间依赖关系；ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达可被ＮＭＤＡ竞争性或非竞争性受体拮抗剂Ａｐ－５（５０μｍｏｌ／Ｌ）ＭＫ－８０１（１０μｍｏｌ／Ｌ）完全阻断，Ｍｇ２＋（２ｍｍｏｌ／Ｌ）可部分阻滞，异搏定、尼凡地平与安定则无阻断作用。     

新生鼠下丘脑结节乳头核组胺能神经细胞的原代培养

目的 探讨新生鼠下丘脑结节乳头核(TM)组胺能神经细胞的体外培养方法。方法 从新生鼠(24h内)下丘脑后部分离出TM神经细胞，采用含有B27的Neurobasal Medium培养液进行体外原代培养。应用免疫细胞化学染色对培养的细胞进行鉴定。结果 从新生鼠下丘脑中分离的TM神经细胞，在本实验条件下生长良好。原代培养7～9d的神经细胞在形态上趋向成熟。免疫细胞化学染色结果表明培养的神经细胞呈组胺免疫反应阳性。为组胺能神经细胞。结论 新生鼠下丘脑TM神经细胞可进行体外原代培养，它可作为研究中枢组胺神经系统的体外细胞模型。