利用串联质谱技术分析新生儿血斑中未衍生化游离氨基酸

目的:建立新生儿血斑中未衍生化游离氨基酸的串联质谱检测方法,为氨基酸代谢性疾病的诊断提供新的思路。方法:应用超高效液相色谱-三级四极杆串联质谱,采用多反应监测(MRM)扫描模式同时结合产物离子确证扫描(PICS),对新生儿血斑未衍生化游离氨基酸进行定性定量分析。结果:在1 min内可以同时定量分析9种氨基酸,分别为Phe、Tyr、Pro、Val、Thr、Leu(XIe)、Lys(Gln)、Met、Glu,而且每种氨基酸在0.5～200μmol/L范围内均有良好的线性关系。结论:PICS模式可以在真正的血斑样品分析中,提供更加准确的一种或几种氨基酸的定性信息,建立的方法适合于新生儿血斑样本的临床分析及研究。     

串联质谱技术在柳州地区高危儿的应用价值

目的 运用串联质谱技术(MS/MS)检测柳州地区临床高危儿氨基酸及酰基肉碱水平,了解本地区临床高危患儿群体遗传代谢疾病的发生情况。方法 选取2013年1月-2015年12月本院住院及门诊高危患儿共2 215例,串联质谱分别检测其氨基酸及肉碱水平。初筛阳性患儿结合临床表型,进一步经不同确诊手段检测分析后,确定确诊病例,并进行随访治疗。结果 在2 215例高危儿的检测结果中,初筛阳性为195例,占8.80%;确诊例数为30例为1.35%。确诊遗传代谢病14种共计30例患儿,其中疾病种类以肉碱缺乏症、希特林蛋白血症、戊二酸血症Ⅰ型为主,其余类型病种均有出现。结论 在广西柳州地区高危儿群体,遗传代谢疾病的比例及病种均有一定发生率,在高危儿遗传代谢疾病的诊疗过程中,运用串联质谱技术可以针对该群体进行早期筛查与疾病预防。     

非衍生化串联质谱技术分析0~2岁儿童死亡与先天性遗传代谢性疾病的关系

目的 探讨先天性遗传代谢性疾病与0~2岁儿童死亡的关系和串联质谱技术筛查先天性遗传代谢性疾病的可行性。方法 对170例北京市2011年和2012年死亡的0~2岁儿童用串联质谱技术检测其新生儿期采集的滤纸干血片中11种氨基酸代谢指标和13种脂肪酸指标水平,将170例分为0~3、4~6、7~12、13~24月四组,分析每组的儿童死亡人数、出生体重、母亲孕周与氨基酸代谢水平和脂肪酸代谢水平及有机酸代谢障碍之间的关系。结果 170例死亡儿童中有氨基酸代谢指标异常5例,脂肪酸代谢指标异常7例,有机酸代谢障碍4例,共16例,占分析死亡人数的9.4%。0~3月组死亡108例,异常9例,占异常总数的56.25%(9/16);4~6月组死亡26例,异常4例,占异常总数的25.0%(4/16);7~12月组死亡26例,异常3例,占异常总数的18.75%(3/16);13~24月组死亡10例,异常0例。结论 先天性遗传代谢性疾病是造成儿童死亡的原因之一,快速、灵敏、特异的串联质谱技术是早期评价先天性遗传代谢性产物异常的有效方法。     

非衍生化串联质谱法检测新生儿31种酰基肉碱参考区间的确立

目的 确立宣城市新生儿滤纸干血片中31种酰基肉碱的参考区间,为临床诊断脂肪酸和有机酸类遗传代谢病提供诊断依据.方法 选取2020年1-6月宣城地区6 093例新生儿滤纸干血片样本,采用非衍生化串联质谱法进行31种酰基肉碱水平测定,通过SPSS 22.0软件进行统计分析,采用单样本Kolmogorov-Smirnov检验判断数据正态性,应用百分位数法制定参考区间,选用第99.5百分位值与第0.5百分位值作为切值的上下限.结果 宣城地区31种酰基肉碱为非正态分布,参考区间P0.5～P99.5分别为(μmol/L):游离肉碱(9.11～48.60),乙酰基肉碱(4.01～37.12),丙酰基肉碱(0.54～4.30),丙二酰基肉碱(0.03～0.27),丁酰基肉碱(0.10～0.46),甲基丙二酰基肉碱(0.09～0.38),异戊酰基肉碱(0.05～0.36),甲基巴豆酰基肉碱(0.00～0.01),戊二酸基肉碱(0.05～0.19),已酰基肉碱(0.01～0.09),己二酰基肉碱(0.03～0.30),辛酰基肉碱(0.02～0.14),辛烯酰基肉碱(0.05～0.28),癸酰基肉碱(0.02～0.21),癸烯酰基肉碱(0.02～0.14),癸烯二酰基肉碱(0.00～0.03),十二烷酰基肉碱(0.02～0.23),十二烯酰基肉碱(0.01～0.17),十四烷酰基肉碱(0.06～0.34),十四烯酰基肉碱(0.03～0.21),十四二烯酰基肉碱(0.01～0.04),3-轻基十四烷酰基肉碱(0.00～0.03),十六烷酰基肉碱(0.71～6.14),十六烯酰基肉碱(0.03～0.36),3-轻基十六烯酰基肉碱(0.01～0.10),3-羟基十六烷酰基肉碱(0.01～0.04),十八烷酰基肉碱(0.28～1.62),十八烯酰基肉碱(0.49～2.45),3-羟基十八烯酰基肉碱(0.01～0.03),十八二烯酰基肉碱(0.06～0.53),3-羟基十八烷酰基肉碱(0.00～0.02).结论 通过非衍生化串联质谱法检测确立宣城市新生儿滤纸干血片中31种酰基肉碱的参考区间,可为该地区临床诊断脂肪酸和有机酸类遗传代谢病提供诊断参考依据,更有利于新生儿遗传代谢病的群体筛查.     

高胆红素血症患儿氨基酸的表达与应用

目的探讨人体常见氨基酸在高胆红素血症患儿体内的表达及应用价值。方法选取2015年7-12月在该院住院的55例新生儿高胆红素血症患儿为研究组,随机选取同期正常新生儿120例为对照组,运用串联质谱技术检测分析两组对象常见氨基酸苯丙氨酸(Phe)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸(Met)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、缬氨酸(Val)、精氨酸(Arg)、瓜氨酸(Cit)水平,统计分析其代谢含量之间的变化。结果研究组新生儿Leu、Thr、Val水平明显高于对照组,Arg、Cit水平低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);Phe、Met、Trp水平两组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论高胆红素血症患儿因机体基础差,易在疾病期出现肝脏功能受损而引起氨基酸代谢缺陷,早期检测此群体氨基酸水平应用价值较高,可为临床诊疗高胆红素血症及相关疾病提供科学参考依据。     

串联质谱技术在新生儿遗传代谢病筛查中的应用

目的了解串联质谱技术(MS/MS)在新生儿遗传代谢病筛查中的应用效果。方法采用高效液相串联质谱技术对2015年7月-2016年9月在合肥市助产机构分娩的85 189例新生儿足底血干滤纸血片进行27项遗传代谢病筛查,对可疑患儿进行尿有机酸检测和静脉血二代测序基因检测以明确诊断。结果 85 189例新生儿中,共筛查出患病儿童30例,总体检出率为1/2 840。其中氨基酸代谢障碍性疾病21例,有机酸代谢障碍性疾病2例,脂肪酸代谢障碍性疾病6例,尿素循环障碍性疾病1例。结论 MS/MS可以及早有效发现遗传代谢病患儿,是新生儿疾病筛查发展的趋势,是出生缺陷防控的重要措施。     

宿迁地区新生儿氨基酸代谢病串联质谱筛查及基因突变分析

目的 应用串联质谱技术对新生儿氨基酸代谢病进行筛查,对宿迁地区确诊为氨基酸代谢病的新生儿遗传特征、发病率、疾病谱、基因突变谱进行分析。方法 分析2016年9月—2021年12月参加宿迁市新生儿疾病筛查的新生儿氨基酸串联质谱检测结果,筛选出符合条件的215 263例样本进行统计学分析。结果 发现7种氨基酸代谢病,共81例,其中苯丙氨酸羟化酶缺乏症占86.42%,是宿迁地区氨基酸代谢病中发病率最高的疾病;9种突变基因PAH、PTS、MAT1A、CBS、TAT、SLC25A13、OTC、ASS1、CPS1中发现76种不同的突变位点,包括一些热点突变,如在PAH基因中发现c.158G>A、c.728G>A、c.611A>G、c.331C>T、c.1197A>T、c.721C>T、c.1068C>A突变,在SLC25A13基因中发现IVS16ins3kb突变。结论 通过串联质谱筛查确定了宿迁地区新生儿氨基酸代谢病的遗传特征、发病情况、疾病谱及基因突变谱,为宿迁地区新生儿疾病筛查和遗传咨询、诊断工作提供了依据。     

非衍生化-气相色谱法测定人血清游离脂肪酸谱

目的 :建立非衍生化 气相色谱法 (GC)测定人血清游离脂肪酸 (FFA)谱的方法。　方法 :采用GC法测定血清FFA。色谱柱为化学键合相FFAP毛细管柱 (30m× 0 .32mmI.D ,涂层厚 0 .2 5 μm) ,火焰离子化检测器。血清样品前处理方法为 :以庚酸 (C7∶0 )和正十七酸 (C1 7∶0 )为内标 ,用正己烷 异丙醇 (4∶1 ,v/v)提取血清中FFA后直接进样。　结果 :除乙酸和丙酸外 ,其余脂肪酸的回收率在 81 .0 8%～ 1 1 8.2 9%。日内变异系数均 <8.95 % ,日间变异系数均 <8.4 7% ,用各FFA与内标色谱峰面积的比值对浓度做标准曲线 ,γ2 在 0 .992 5～ 0 .9998。　结论 :该方法简便可靠 ,符合生物样品的分析要求 ,可用于生物样品中FFA的测定     

串联质谱筛查新生儿遗传代谢疾病中氨基酸浓度波动性及其影响因素分析

目的研究串联质谱技术应用于新生儿遗传代谢病筛查中检测多种氨基酸浓度的稳定性,以及影响其浓度波动的原因。方法采用串联质谱技术,对2013年7月-2016年6月济南市新生儿疾病筛查中心54613例新生儿进行多种氨基酸、有机酸和脂肪酸代谢性疾病筛查,统计氨基酸浓度的变异系数及其浓度每月变化趋势,并初步分析氨基酸浓度随季节性波动的原因。结果在检测的所有11项氨基酸中,精氨酸(ARg)、蛋氨酸(Met)的变异系数分别为28.45%和14.53%,明显高于其他氨基酸的变化(<10%)。精氨酸和蛋氨酸的浓度变化具有季节规律性,夏季浓度低,冬季浓度高,与环境温度和湿度变化呈现反比例关系。结论串联质谱技术应用于新生儿疾病筛查,所检测的精氨酸和蛋氨酸稳定性较差,在递送及储存环节中易受环境温度和湿度的影响。针对其浓度随季节波动的特性,在不同的季节分别统计相应的临床参考范围,有利于建立合适的截断值设定标准。     

串联质谱技术在发育迟缓患儿早期诊断中的应用价值

目的探讨串联质谱的定量检测在发育迟缓患儿早期诊断中的应用价值。方法应用串联质谱方法对155例发育迟缓患儿进行血氨基酸和酰基肉碱的定量检测,并分析检出结果与临床症状及治疗转归情况。结果155例患儿中确诊10例氨基酸及肉碱缺乏疾病。其中4例确诊为甲基丙二酸血症,1例丙酸血症,1例中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症,1例鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症,3例苯丙酮尿症。临床表现主要为运动及智力发育迟缓。经过治疗,大部分好转。结论对氨基酸及肉碱的检测,有利于运动及发育迟缓患儿的病因诊断及疗效判断。     

串联质谱分析在遗传代谢病高危儿童中的意义

目的研究末梢血串联质谱分析对于遗传代谢病高危儿童的诊断价值。方法本研究自2010年1月-2013年12月收集临床疑似遗传代谢病的病例617例,对末梢血进行氨基酸、酰基肉碱串联-质谱筛查,对筛查阳性的病例进行了尿代谢筛查或基因检测,得到了确诊。并总结分析了相关临床数据。结果 617例病例共诊断出遗传代谢病10种,共24例,总阳性率3.9%,其中氨基酸代谢病4例(16.7%),以瓜氨酸血症多见(3例,12.5%),有机酸代谢病14例(58.3%),以甲基丙二酸血症多见(8例,33.3%);脂肪酸氧化障碍6例(25%),以中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、线粒体脑肌病多见(各2例,8.3%)。结论儿科医生应重视对遗传代谢病高危儿童进行末梢血氨基酸、酰基肉碱串联质谱分析以达到早诊断,早干预的目的。     

宁夏地区新生儿遗传代谢病串联质谱切值的建立

目的 建立宁夏地区新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中氨基酸、有机酸、脂肪酸切值(cut-off值)的范围,为本地新生儿遗传代谢病的筛查提供理论依据。方法 利用串联质谱技术非衍生法,使用两个批次的试剂盒和美国CDC质控品做质控,对宁夏地区符合筛查纳入标准的45 602例活产新生儿进行多种遗传代谢病检测;采用百分位数法制定宁夏地区氨基酸、有机酸、脂肪酸的cut-off值,第1百分位数(P₁)为低值阳性,第99百分位数(P₉₉)为高值阳性;Wilcoxon秩和检验比较宁夏地区串联质谱切值与上海新华医院的差异。结果 串联质谱筛查新生儿45 602例,确诊阳性病例31例,其中高苯丙氨酸血症 20例,枫糖尿症1例,高甲硫氨酸血症2例,瓜氨酸血症Ⅰ型1例,甲基丙二酸血症 3例,异戊酸血症1例,短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例,中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例,肉碱棕榈酰转移酶Ⅱ缺乏症 1例。宁夏地区新生儿串联质谱切值与上海新华医院相比,精氨酸(ARG)、甘氨酸(GLY)、酪氨酸(TYR)、鸟氨酸(ORN)、亮氨酸(LEU)、缬氨酸(VAL)、异戊酰肉碱(C5)、 十二碳酰肉碱(C12)、C0/(C16+C18)等检测指标差距较大。结论 随着筛查数量的不断增加及筛查范围的不断扩大,逐步积累筛查经验和阳性预测值,对宁夏地区新生儿遗传代谢病串联质谱筛查的cut-off值进行相应调整。     

液相色谱-质谱/质谱联用技术分析18种游离氨基酸

目的：建立氨基酸的液相色谱-质谱检测方法。方法：无需衍生处理，直接用乙腈：水：甲酸（5：95：0．1．v／v／v）为流动相进行反相液相色谱分离，用电喷雾正离子源进行离子化，选择反应监测方式（SRM）对这18种氨基酸的母离子及子离子进行监测，三级四极质谱测定。结果：该方法抗干扰能力强，方法重现性好，RSD0．4％。3．7％，回收率95％～104％，相关系数0．9931-0．9999，检出限0．5～8mol／ml。结论：该方法简单、快速、准确、灵敏，适合测定各种样品中的游离氨基酸。     

四川省部分地区新生儿遗传代谢病串联质谱筛查情况分析

目的 了解四川省部分地区新生儿遗传代谢性疾病(IMDs)的发病率及病种情况,为确定筛查方案及政府制定相关政策提供依据。方法 采用串联质谱技术(非衍生法)对四川省部分地区39 648例新生儿进行遗传代谢病筛查,初筛异常样本召回复查,复查异常者送检尿有机酸及基因分析确诊。结果 共筛查新生儿39 648例,其中初筛异常1 594例,初筛阳性率为4.02%,最终确诊遗传代谢病9种共15例,总阳性预测值为1.05%,总发病率为1∶2 643。确诊病种包括短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症5例,原发性肉碱缺乏症2例,甲基丙二酸血症2例,丙酸血症1例,异戊酸血症1例,2-甲基丁酰甘氨酸尿症1例,3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症1例,苯丙氨酸羟化酶缺乏症1例,Citrin缺乏致新生儿肝内胆汁淤积症1例。结论 四川省部分地区IMDs病种多样,发病率较高;短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症为本地区最常见的IMDs;串联质谱筛查对IMDs的早期发现及诊治具有非常重要的意义。     

虾仁中氯霉素的同位素稀释技术GC/ITMS-MS测定方法的建立

目的用氯霉素氘代同位素作为内标,建立虾仁中氯霉素的GC/ITMS-MS检测方法。方法样品中加入同位素内标,用乙酸乙酯提取,正己烷脱脂肪,经SPEC18柱净化,SylonBFT(BSTFA-TMCS)衍生后进样,采用GC/MS-MS,多级反应离子监测(MRM)检测。结果方法的线性范围为10~500pg,r=0.9958,测定限为0.3ng/g;0.3,0.5和1.0ng/g加标水平的平均回收率分别为104%,111%和95%,相对标准偏差小于20%。结论该方法灵敏度高,准确,可靠,满足虾仁中氯霉素的痕量检测需要。     

桂中地区66471例遗传代谢疾病筛查结果分析

目的 回顾性分析桂中地区66 471例新生儿及高危儿遗传代谢疾病串联质谱筛查及确诊患儿的基因检测结果,研究该地区不同人群遗传代谢病的发生率。方法 选择2014年1月－2018年4月柳州市妇幼保健院新生儿疾病筛查中心接收桂中地区63 190例新生儿以及3 281例高危儿干血滤纸片样本,检测其氨基酸与酰基肉碱谱筛查遗传代谢疾病,可疑阳性患儿进一步通过基因手段确诊。结果 63 190例新生儿串联质谱初筛阳性717例,确诊患儿19例,群体发生率为1/3 326。其中正常体重儿57 688例,确诊患儿12例,检出率为1/4 807;低出生体重儿5 502例,确诊患儿7例,检出率为1/786。高危儿3 281例,确诊患儿16例,检出率为1/205。共确诊35例13种遗传代谢疾病。结论 桂中地区遗传代谢疾病有一定发生率,低出生体重儿较正常体重儿更易发生遗传代谢疾病。应加强本地区新生儿及高危儿群体的遗传代谢疾病筛查,增强临床医生对患儿的干预及后期指导能力,从而进一步提高诊疗水平,减少漏诊、误诊,降低新生儿死亡率及致残率,提高本地区出生人口素质。     

不同方法检测血浆游离氨基酸结果比较

目的　比较不同方法检测血浆游离氨基酸的准确性。方法　应用全自动氨基酸分析仪（Li+系统）测定40例健康志愿者血浆游离氨基酸,与中外文献不同方法健康志愿者氨基酸测定结果进行对比分析。结果　本研究氨基酸分析仪（Li+系统）测定40例健康志愿者血浆游离氨基酸结果中,天冬酰胺（Asn）、谷氨酸（Glu）、谷氨酰胺（Gln）、缬氨酸（Val）、酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、鸟氨酸（Orn）、精氨酸（Arg）等主要氨基酸的正常值与国内外氨基酸分析仪测定结果相近（均P＞0.05）,且与液相色谱 质谱联用法（LC MS/MS）测定结果较为相近（均P＞0.05）,除Glu、Tyr外,其他氨基酸测定结果与高效液相色谱法（HPLC）测定结果偏差大（均P＜0.05）。结论　采用氨基酸分析仪法（Li+系统）和液相色谱 质谱联用法（iTRAQ试剂）检测的结果较为客观和准确,适用于分析血浆游离氨基酸。