γ射线照射后免疫细胞表面Fas表达变化规律的研究

目的 观察γ射线照射后小鼠脾赃淋巴细胞凋亡的变化规律与Fas(CD95)表达的关系。方法 采用PI染色、双荧光流式细胞术及免疫组织化学的ABC方法研究不同剂量γ射线照射后不同时间,小鼠脾脏淋巴细胞凋亡及CD95表达的规律。结果 小鼠脾脏淋巴细胞对不同剂量照射的凋亡敏感性有显著性差异,4Gy照射后凋亡率最高(在2～6Gy之间观察),淋巴细胞表面Fas的表达随照射后细胞凋亡率的变化而改变。结论 B细胞较T细胞具有更高的辐射凋亡敏感性;脾脏淋巴细胞在辐射后表现出明显的Fas介导凋亡。     

苯甲酸雌二醇对辐射诱导小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响

目的:观察苯甲酸雌二醇对γ射线诱导小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响,以探讨其抗放射作用机制.方法:昆明种小鼠,随机分为正常组、单纯照射组和用药照射组3组,每组各15只.单纯照射组小鼠用γ射线照射4.0 Gy;用药照射组干照射前10 d每只小鼠肌内注射0.1 mg苯甲酸雌二醇,同时用γ射线照射4.0 Gy;正常对照组不作任何处理.采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测骨髓造血细胞DNA裂解片段,采用流式细胞术观察各组小鼠照射后4 h、8 h、12 h骨髓造血细胞凋亡、Fas和Bcl-2表达的变化情况.结果:γ射线照后8 h.骨髓造血细胞DNA裂解片段增加,出现了典型DNA"梯状"条带,而用药照射组和正常对照组均未见明显"梯状"条带.照射后4 h、8 h、12 h,用药照射组骨髓造血细胞凋亡率均明显低干单纯照射组(P<0.01);Fas表达较正常对照组略有增加,并未出现单纯照射组所呈现典型的高峰期,与单纯照射组比较显著降低(P<0.01);Bcl-2表达不降反而升高,与单纯照射组相比差异显著(P<0.01).结论:苯甲酸雌二醇可能是通过下调Fas和上调Bcl-2的表达抑制了γ射线诱导的小鼠骨髓造血细胞凋亡.     

γ射线致Wistar大鼠脾细胞凋亡的实验研究

目的　研究体外分离大鼠脾细胞并应用γ射线诱导脾细胞凋亡的实验方法。方法　无菌条件下手术切除Wistar大鼠脾脏 ,制备脾细胞悬液 ,在RPMI 16 4 0培养基 (含 10 %小牛血清 )中培养 2 4～ 4 8h后 ,γ射线照射诱导脾细胞凋亡 ,通过细胞形态学观察、流式细胞术测定及DNALadder测定检测大鼠脾细胞生物学改变及凋亡率。结果　γ射线照射后 ,脾细胞出现形态学及分子生物学改变 ;通过流式细胞术测定辐射剂量分别为 5 0 0 0rad和 10 0 0 0rad的实验组脾细胞凋亡率分别为 76 .6 3%± 3.5 3%和 82 .99%± 2 .0 4 % ,与对照组 36 .0 4 %± 2 .98%相比较有显著性差异 (P <0 .0 0 5 )。结论　体外条件下γ射线可以高效诱导大鼠脾细胞凋亡 ,为进一步体内研究凋亡脾细胞对机体免疫应答和临床应用奠定了基础。     

补肝肾益气血方对60C0γ射线所致小鼠骨髓造血细胞损伤的影响

目的 探讨补肝肾益气血方对辐射损伤的防护作用及机理。方法 设正常对照组、病理模型组、补肝肾益气血方高、低剂量组、阳性药物组5组。补肝肾益气血方给予补肝肾益气血药物，阳性药物组给予复方阿胶浆，其余给予生理盐水。灌胃10天后，以^60C0γ射线全身照射小鼠造成辐射损伤，观察补肝肾益气血方对辐照小鼠骨髓各细胞系变化的影响。结果 中药组能升高受照鼠骨髓增殖性红细胞量，对粒系造血细胞保护作用显著，能促进成熟淋巴细胞的生成，减少细胞退变，减轻病理损伤，能促进辐射小鼠骨髓造血机能的恢复。结论 补肝肾益气血方能促进受损骨髓造血细胞的恢复，对^60C0γ射线所致小鼠辐射损伤有较好保护作用。     

电磁辐射对γ射线诱导HL60细胞凋亡影响的初步研究

研究了脉冲磁场与γ射线联合作用对ＨＬ６０细胞凋亡的影响。采用１３７Ｃｓ照射源剂量为４Ｇｙ，磁场强度为２０ＭＴ，频率为２５０Ｈｚ照射人早幼粒白血病细胞。结果表明，ＨＬ６０细胞经电磁场作用后，可以提高γ射线对它的杀伤效果，增加γ射线诱发ＨＬ６０细胞凋亡明显高于单独γ射线照射。     

细胞凋亡和相关基因Fas和bax在食管癌中的表达

目的：探讨细胞凋亡和相关基因Fas和bax蛋白在食管癌发生发展中的作用。方法:应用DNA末端标记、流式细胞术和细胞免疫荧光技术检测70例食管鳞癌组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因Fas和bax蛋白的表达。结果:凋亡指数与肿瘤病理分级和淋巴结转移密切相关(P＜O．05)。Fas蛋白的表达与肿瘤病理分级密切相关(P＜O．05)。凋亡指数与Fas和bax蛋白表达呈正相关(P＜O.05)。结论:细胞凋亡及相关基因Fas和bax和蛋白异常表达在食管癌发生发展中起重要作用。     

原核表达小鼠可溶性Fas抑制活化诱导的脾细胞凋亡研究

目的 观察原核表达、制备小鼠可溶性Fas用于抑制活化诱导的脾细胞凋亡的效果.方法 通过RT-PCR从小鼠胸腺中扩增可溶性Fas基因,克隆至原核表达载体pET-28a( ),构建pET-sFas重组质粒,转化大肠杆菌BL21,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得高表达的可溶性Fas.经镍柱亲和层析纯化后用于抑制刀豆素A(ConA)刺激下的脾细胞活化诱导凋亡.结果 基因测序、Western-blot鉴定证实为可溶性Fas的原核表达蛋白,该蛋白能抑制小鼠脾细胞在ConA刺激下发生的凋亡[对照组凋亡率(70.3±4.9)%和实验组凋亡率(8.5±0.4.35)%有极显著差异(P<0.01)].结论 原核表达的可溶性Fas能够抑制小鼠脾细胞在ConA刺激下发生凋亡,为进一步抑制活化的T淋巴细胞凋亡及体外大量制备抗原特异性T细胞提供思路.     

60Co-γ射线对小鼠骨髓基质细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的 探讨辐射对培养小鼠骨髓基质细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响及凋亡率变化。方法 采用流式细胞术和RT—PCR法。结果 经8．oGy射线照射后1h，骨髓基质细胞VEGF mRNA水平即较正常对照显著升高，12h达到高峰，24h恢复至正常水平；照射后不同时间，骨髓基质细胞凋亡率与正常对照无显著差异。结论 8．oGy^60Co—γ射线照射后骨髓基质细胞中VEGF mRNA表达增强，这可能与骨髓基质纫胞的辐射抵抗能力有关。     

补肝肾益气血方对60COγ射线所致小鼠骨髓有核细胞周期及凋亡的影响

目的 探讨补肝肾益气血方对辐射损伤的防护作用机理。方法 设正常对照组、病理模型组、补肝肾益气血方高、低剂量组、阳性药物组5组。补肝肾益气血组给予补肝肾益气血方，阳性药物组给予复方阿胶浆，其余给予生理盐水。灌胃10天后，以^60COγ射线全身照射小鼠造成辐射损伤，观察补肝肾益气血方对辐照小鼠骨髓有核细胞细胞周期及调亡影响。结果 该方能使受照鼠骨髓有核细胞S期延长，G2期阻滞，显著提高造血细胞增殖指数。结论 补肝肾益气血方对^60COγ射线所致小鼠辐射损伤有较好保护作用，其作用机理可能与骨髓有细胞周期的调控有关。     

RMP在γ射线诱导的肝癌细胞凋亡中的表达

目的研究RPB5调节蛋白RMP在γ射线诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡过程中的表达,探讨RMP在细胞凋亡及维系细胞DNA稳定性中的作用。方法不同剂量60Coγ射线照射SMMC-7721肝癌细胞和HL-7702正常肝细胞,观察细胞形态变化;PI染色观察细胞凋亡;流式细胞技术检测肝癌细胞周期变化及细胞凋亡;半定量RT-PCR法检测RMP基因在肝癌细胞及正常肝细胞中的表达以及凋亡相关基因bax、bcl-2在肝癌细胞中的表达。结果随着照射剂量增加,肝癌细胞形态发生明显改变;PI染色观察细胞凋亡增多;流式细胞仪检测结果显示随着照射剂量增加,细胞凋亡明显增多,差异有统计学意义（P〈0.05）,细胞周期G1期增高,而S期降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;RMP基因相对表达量增加,bax/bcl-2增加,与未照射组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论γ射线照射可诱导人肝癌细胞凋亡,RMP基因可能在提高细胞DNA稳定性中起重要作用。     

低分化胃腺癌种植瘤Fas表达及细胞凋亡的实验研究

目的　研究低分化胃癌细胞Fas表达及细胞凋亡情况 ,以及两者之间的关系。方法　建立胃低分化腺癌细胞系SGC - 790 1的裸鼠原位种植瘤模型 ,采用免疫组化染色技术及TUNEL法 ,检测Fas表达状态及细胞凋亡。结果　胃癌组织的自发凋亡指数和Fas表达的标记指数均显著低于正常胃粘膜组织 (P <0 .0 1)。结论　低分化胃癌组织存在凋亡明显受抑现象 ,正常粘膜组织的Fas表达高于癌组织。胃癌组织中凋亡受抑制可能与Fas表达低下有关     

Fas抗原表达与慢性乙型肝炎关系的进展

细胞凋亡为近年来国内外医学界研究的热门课题 ,有其进展日新月异之感觉。研究认为 ,肝细胞凋亡和肝细胞坏死有非常密切的关系。肝内细胞毒性Ｔ细胞 (ＣＬＴ)包括ＣＤ 4及ＣＤ 8,其ＣＴＬ可以通过释放穿孔素 ,颗粒酶以及ＦａｓＬ系统引起肝细胞凋亡及坏死。国内外许多学者发现乙型肝炎患者肝细胞表达Ｆａｓ及ＦａｓＬ。肝内侵润的Ｔ细胞表达的ＦａｓＬ ,肝内Ｆａｓ及ＦａｓＬ表达程度和病情轻重程度相关。肝内表达ＦａｓＬ可以自身导致肝细胞凋亡 ,也可能做活化Ｔ细胞形成免疫耐受[1 ] 。1　Ｆａｓ系统与细胞凋亡Ｆａｓ是人体多种细胞的一种…     

再生障碍性贫血造血细胞Fas抗原表达与T淋巴细胞功能的研究

目的 研究造血细胞凋亡与T淋巴细胞免疫在再生障碍性贫血(再障，Aplastic anemia，AA)发病机制中的作用及两者相关性。方法 采用流式细胞仪测定40例AA患者和15例非血液、免疫系统疾病对照者骨髓单个核细胞(BMMNC)的总CD34^ 、CD34^ Fas^ 、CD34^ Fas^-、CD3^ 、CD8^ 、CD3^ 、CD3^ CD25^ 标记值。结果 (1)与对照组比较，AA组总CD34^ 细胞％明显减少而其Fas表达率(以占总CD34^ 细胞％为计)明显增高。(2)AA组CD34^ 细胞％数与其Fas抗原表达率无明显负相关。(3)AA组T细胞％明显增多，且以CD8^ 细胞和CD3^ CD25^ 细胞增多为主。(4)AA组CD34^ 细胞％数与其T细胞活化状态无显著负相关。(5)AA组CD34^ 细胞Fas表达率与其T细胞活化状态无显著正相关。结论 AA骨髓存在着造血细胞数量减少和T淋巴细胞亚群数量、功能的异常，造血细胞数量减少还可能与Fas以外途径诱导的凋亡过度有关。骨髓造血细胞凋亡过度可能有活化T淋巴细胞免疫以外的途径诱导Fas途径或活化T淋巴细胞可以通过Fas之外的途径诱导造血细胞凋亡。     

Fas、Bcl-2在γ射线体外诱发的白血病小鼠骨髓细胞中的表达

目的 :观察 Fas、Bcl- 2在 γ射线体外诱发的急性淋巴细胞白血病小鼠骨髓细胞中表达情况 ,以探讨辐射致癌的机制。方法 :采用 4次 1.75 Gyγ射线全身照射 BAL B/ c小鼠诱发白血病模型 ,通过流式细胞仪对照射后白血病组、未癌变组及对照组小鼠骨髓细胞中 Fas、Bcl- 2的表达进行检测 ;应用抗 Fas抗体诱导细胞凋亡 ,进一步观察 Fas、Bcl- 2的表达对骨髓细胞凋亡的影响。 结果 :白血病小鼠骨髓细胞 Fas表达较未癌变组及对照组明显下降 (P<0 .0 1) ,而 Bcl- 2的表达明显增强 (P<0 .0 1) ;白血病小鼠骨髓细胞明显耐受抗 Fas抗体诱导的细胞凋亡。 结论 :Fas低表达、Bcl- 2高表达导致了细胞凋亡受到抑制 ,这可能是辐射引起小鼠急性淋巴细胞白血病的机制之一。     

鼠缺血脑组织中Fas抗原表达及细胞凋亡的动态研究

目的：探讨脑缺血后Fas抗原表达及与细胞凋亡的关系。方法：以鼠局灶脑缺血为动物模型，在缺血后不同时间点(30min,60min,24h,3d,7d）分别以免疫组化法和TUNEL法动态检测Fas抗原表达和细胞凋亡情况。结果：缺血后30min,Fas抗原呈阳性表达，60min至高峰，24h开始回落，3d时忆为阴性。TUNEL阳性细胞于缺血后60min开始出现，3d达高峰，1周时有回降。结论：脑缺血后有细胞凋亡发生，Fas抗原的大量表达与神经细胞凋亡有密切关系。     

Fas基因转导大肠癌细胞株的表达

目的：建立表达外源性Fas基因的大肠癌细胞株，观察Fas基因在转导前后的表达，方法：采用分子克隆技术将Fas基因插入真核表达载体pBK-CMV的多克隆位点之间，以脂质体介导法将Fas基因导入受体细胞LoVo ,用G418筛选克隆细胞，以dot blotting,Westting blotting检测转导细胞Fas基因的表达，结果：成功建立了Fas基因表达株，转导株在RNA及其蛋白水平表达均明显高于非转导株，转导细胞增殖速度，倍增时间，对数生长期等均比非转导株更为缓慢，但无显著性差异，在Fas抗体作用下，转导株细胞生长明显受到抑制，有非常显著性差异，结论：Fas基因在大肠癌细胞中处于低表达状态，通过真核表达载体介导，Fas基因在RNA及其蛋白水平能有效表达，Fas表达株在Fas抗体作用下可明显抑制体外培养的大肠癌细胞的生长增殖。     

Fas基因与细胞凋亡

Fas抗原和Fas配体是细胞表面的两种跨膜蛋白;Fas介导的细胞凋亡对维持机体免疫功能和在某些疾病的发生发展中有十分重要的作用.     

Fas系统参与介导烧伤后心肌细胞凋亡及牛磺酸的影响

目的观察Fas系统在烧伤后心肌细胞凋亡中的作用及牛磺酸的影响。方法选健康Wistar大鼠,随机分成对照组(Sham)、烧伤组(造成40%TBSAⅢ度烧伤)和牛磺酸保护组(烫伤后即刻腹腔注射牛磺酸400 mg/kg)。用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,RT-PCR检测Fas mRNA表达,免疫组化检测Fas/FasL和Caspase-8/3蛋白表达和荧光法分析Caspase-3活性。结果烧伤组大鼠伤后6 h和24 h心肌细胞凋亡指数分别为8.96±2.10和18.67±2.48,较对照组(0.92±0.34)有显著性升高,Fas蛋白阳性表达指数分别为13.51±1.56和14.55±1.89,也显著性高于对照组(2.46±0.75);Caspase-3活性分别为1.38±0.16和1.96±0.71,较对照组(0.35±0.06)有显著性差异。烧伤组凋亡指数与Fas表达之间有良好的相关性(r=0.86)。牛磺酸保护组细胞凋亡指数为2.14±0.68,Fas蛋白表达为3.71±0.82,Fas mRNA表达为0.17±0.03,Caspase-3活性为0.88±0.16,较烧伤组均有显著性降低。结论Fas系统参与了介导烧伤后心肌细胞凋亡,牛磺酸对烧伤后心肌细胞Fas表达及其信号转导有较好的拮抗作用。     

γ干扰素上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)对骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用及其相关机制。方法将IFN-γ应用于体外培养的骨肉瘤OS732细胞,采用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜、荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变。并采用免疫细胞化学及RT-PCR方法检测不同浓度IFN-γ作用下OS732细胞的Fas表达。结果IFN-γ对OS732有显著抑制作用,细胞形态观察及凋亡率测定也显示,IFN-γ可诱导骨肉瘤细胞凋亡;IFN-γ可上调OS732细胞的Fas表达,且调节作用呈浓度依赖性(P<0.01)。结论IFN-γ可诱导OS732细胞凋亡,这可能与其上调OS732细胞的Fas表达有关。     

Fas及Fas配体在盘状红斑狼疮皮损中的表达

目的　研究细胞凋亡与红斑狼疮发病的关系。方法　采用免疫组化法检测了 30例盘状红斑狼疮 (DL E)患者皮损及 5例正常对照皮肤 Fas及 Fas配体 (Fas L )的表达。结果　 DL E皮损中表皮角质形成细胞、真皮血管周围及部分皮肤附属器周围浸润的淋巴细胞可见较多的 Fas、Fas L阳性表达。少数毛囊、汗管可见 Fas阳性表达。正常对照的 Fas及 Fas L表达弱阳性或阴性。结论　 Fas、Fas L途径诱导的细胞凋亡可能与红斑狼疮发病有关。