胃癌细胞凋亡过程中胞内Ca2+和三磷酸肌醇浓度的改变

目的　探讨顺铂诱导胃癌细胞凋亡过程中细胞内游离Ｃａ２＋ 浓度（［Ｃａ２＋］ｉ） 和三磷酸肌醇（ＩＰ３） 浓度的变化特点和意义。方法　选择顺铂诱导胃癌细胞凋亡,采用光镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡。Ｆｕｒａ２ 荧光负荷技术测［Ｃａ２＋］ｉ,竞争性蛋白结合法测定ＩＰ３ 浓度。结果顺铂浓度为２ μｇ／ｍｌ 作用于ＢＧＣ８２３ 胃癌细胞２４ 小时出现典型的凋亡改变。胃癌细胞凋亡过程中,胞内［Ｃａ２＋］ｉ 明显升高,以凋亡早期更为明显。胃癌细胞凋亡早期（３０ 秒）,ＩＰ３ 浓度明显升高,到凋亡晚期（２ ～２４ 小时） ,ＩＰ３ 浓度明显降低。结论　在胃癌细胞凋亡过程中,［Ｃａ２＋］ｉ 表现为上调趋势。ＩＰ３ 浓度在凋亡早期,表现为上调趋势,在稍晚阶段,表现为下调趋势,这为治疗胃癌提供新靶点     

NP和MVP方案治疗非小细胞肺癌的初步比较

「目的」初步比较ＭＰ和ＭＶＰ方案对晚期非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的疗效和不良反应。「方法」４５例Ⅲ和Ⅳ期ＮＳＣＬＣ患者随机分为Ａ组和Ｂ组，Ａ组应用ＮＰ（去甲长春花碱＋顺铂）方案化疗，Ｂ组应用ＭＶＰ（丝裂霉素＋长春花碱酰胺＋顺铂）方案化疗，至少连用２周期后评价疗效和不良反应。「结果」两组均无完全缓解病例，Ａ组有效率为４５．５％（１０／２２），Ｂ组３５．０％（７／２０），差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。     

MVP方案与CAP方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效比较

「目的」对比ＭＶＰ方案与ＣＡＰ方案治疗ＮＳＣＬＣ的疗效。「方法」７４例病人随机分为ＭＶＰ组和ＣＡＰ组。ＭＶＰ组：ＭＭＣ６ｍｇ／ｍ＾２，ｄ１，ＶＤＳ３ｍｇ／ｍ＾２，ｄ１，ｄ８，ＰＤＤ３０ｍｇ／ｍ＾２，ｄ１￣ｄ３。ＣＡＰ组：ＣＴＸ６００ｍｇ／ｍ＾２，ｄ１，ＡＤＭ（３０￣４０）ｍｇ／ｍ＾２，ｄ１，ＰＤＤ（２０￣３０）ｍｇ／ｍ＾２，ｄ１－３。两方案皆以２１天为一周期，使用二个周期后进行评价。「结果」ＭＶＰ     

MVP与CFP方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效比较

「目的」比较ＭＶＰ与ＣＦＰ方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效和毒性。「方法」统计分析用ＭＶＰ（丝裂霉素、长春地辛、顺铂）方案及ＣＦＰ（环磷酰胺、氟尿嘧啶脱氧核苷、顺铂）方案治疗的１０５例星期非小细胞肺癌病例的临床资料。「结果」ＭＶＰ组有效率５０．９＾（２７／５３），ＣＦＰ组有效率４８．１％（２５／５２），无统计学差异。毒副反应主要为骨髓抑制（以白细胞下降明显），ＭＶＰ组白细胞下降占６２．５％（２２／５     

维甲类化全物Ro13—7410对HL—60细胞的作用

目的：探讨合成的第三代维甲类化合物（Ｅ）－４「２－５，６，７，８－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ－５，５，８，８－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ－２－ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｙｌ－１－ｐｒｏｐｅｎｙｌ」ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ（Ｒｏｌ３－７４１０）对白血病细胞ＨＬ－６０的影响。方法：采用ＮＢＴ还原能力测定检测细胞分化，电和程序性细胞死亡检测试剂盒鉴别凋亡细胞，Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光法测定胞浆内Ｃａ＾２＋浓度，ＰＣＲ－Ｅ     

维甲酸对HeLa细胞缝隙连接蛋白Cx43信号转导机制的调控作用

目的：探讨细胞分化诱导剂维甲酸对人子宫颈癌细胞系ＨｅＬａ中缝隙连接蛋白Ｃｘ４３信号转导途径的调控作用。方法应用特异指示剂Ｆｌｕｏ－３ＡＭ,在激光扫描共聚焦显微镜（ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ,ＬＳＣＭ）下,动态观察经维甲酸处现后细胞质内信号分子游离钙离子（「Ｃａ＾２＋」ｉ）浓度及分布变化。应用流式细胞仪（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒ,ＦＣＭ）、结合免疫蛋白电泳     

食管癌术后早期肠内营养支持对机体免疫功能的影响

「目的」观察食管癌术后早期肠内营养对机体免疫功能的影响。「方法」随机将５０例食管癌病人分成两组，早期肠内营养（ＥＥＮ）组（２５例）和对照组（２５例）；分别在术前１天、术后、天、７天检测ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ及Ｔ细胞亚群、转铁蛋白。「结果」ＥＥＮ组术后体液免疫（ＩｇＡ、ＩｇＧ）Ｔ细胞亚群９ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋ＣＥ４＾＋／ＣＤ８＾＋）及转铁蛋白对照组相比均有显著性差异（Ｐ〈０．０１），ＥＥＮ组术后并     

钙通道拮抗剂和钙调素拮抗剂对白血病耐药细胞的耐药基因和细胞内Ca^2＋浓

目的：探讨白血病药细胞的发生机制与细胞内钙离子关系。方法：分别用Ｆｕｒａ－２／Ａｍ方法测定细胞内游离钙浓度及ｄｏｔ杂交法测定细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达，结果：ＣＡｓ有降低肿瘤细胞内Ｃａ＾２＋浓度和降低ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达的作用。ＣａＭＡｓ是无降低Ｃａ＾２＋浓度的作用，但可使ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达降低，从而了Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞的耐药性，结论：细胞内Ｃａ＾２＋浓度的变化可能与ＭＤＲ产生有一定关系；ＣＡｓ     

钙通道拮抗剂和钙调素拮抗剂对白血病耐药细胞的耐药基因和细胞内Ca~(2+)浓度的影响

目的：探讨白血病耐药细胞的发生机制与细胞内钙离子浓度的关系。方法：分别用Ｆｕｒａ２／Ａｍ方法测定细胞内游离钙浓度及ｄｏｔ杂交法测定细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达。结果：发现ＣＡｓ（Ｖｅｒ或Ｄｉｌ）有降低肿瘤细胞内Ｃａ２＋浓度和降低ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达的作用，ＣａＭＡｓ虽无降低Ｃａ２＋浓度的作用，但可使ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达降低，从而降低了Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞的耐药性。结论：细胞内Ｃａ２＋浓度的变化可能与ＭＤＲ产生有一定关系；ＣＡｓ导致的Ｃａ２＋浓度的变化可能也是其逆转肿瘤细胞ＭＤＲ的机理之一，ＣＡｓ及ＣａＭＡｓ尚可影响耐药性肿瘤细胞的ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达     

小鼠肝癌腹水瘤Hca—F25／CL—A2细胞胞液磷酸化酶a活性与Ca^2＋浓度的关系

本文测定了６１５近交小鼠肝癌腹水瘤Ｈｃａ－Ｆ２５／ＣＬ－Ａ２细胞经ＤＭＳＯ促分化前后胞液磷酸化酶ａ活性和Ｃａ＾２＋浓度。结果发现，经ＤＭＳＯ诱导分化后，胞液磷酸化酶ａ活性明显升高，而胞液Ｃａ＾２＋浓度则显著下降。结果提示，肿瘤细胞分化前后，激活磷酸化酶ａ的磷酸化酶ｂ激酶对Ｃａ＾２＋的敏感性不同，使磷酸化酶ａ活性不能与胞液Ｃａ＾２＋浓度同时升降。     

新型线粒体靶向铂类配合物Mor-platin抑制肝癌细胞HepG2增殖和抑制细胞球侵袭的研究

  目的  探讨新型线粒体靶向性铂类配合物Mor-platin对人肝癌细胞HepG2的细胞增殖和细胞球侵袭的影响。  方法  运用细胞毒性实验CCK-8法,比较新型线粒体靶向性铂类配合物Mor-platin和经典铂类抗癌药顺铂(cisplatin)对人肝癌细胞HepG2的细胞增殖抑制作用;利用激光共聚焦显微镜观察Mor-platin是否靶向于线粒体;利用透射电子显微镜观察Mor-platin对细胞线粒体形态的影响;流式细胞仪检测Mor-platin作用细胞后细胞凋亡的改变;建立三维肿瘤细胞球模型,探讨Mor-platin对细胞球侵袭的影响。  结果  Mor-platin能够抑制HepG2细胞增殖,半数抑制浓度(IC₅₀)少于cisplatin;Mor-platin能够靶向到线粒体;加Mor-platin后,细胞线粒体膜结构不完整,嵴不清晰或消失以及线粒体中有大片空白区域;Mor-platin引起的细胞凋亡具有剂量依赖性;三维肿瘤细胞球模型显示,Mor-platin处理的细胞球面积小于对照组。  结论  新型线粒体靶向性铂配合物Mor-platin能够靶向于细胞的线粒体,引起线粒体形态变化,抑制细胞增殖,最终导致细胞凋亡,Mor-platin还能抑制三维肿瘤细胞球侵袭,比cisplatin具有更好的抗癌效果。上述研究结果提示Mor-platin具有成为新抗肿瘤药物的潜质。      

livin在人胃癌组织中的表达及其沉默后对胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨凋亡抑制蛋白livin在人胃癌组织中的表达及其与临床病理的关系,研究小分子干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞系(SGC-7901)livin基因表达的抑制作用,以及livin基因沉默后对胃癌细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法和Western blot法检测胃不同组织中livin基因mRNA和蛋白的表达,分析livin表达与临床病理的关系;设计两条针对人源livin基因的siRNA,分别转染SGC-7901细胞;RT-PCR法检测转染前后livin基因的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化以及细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂的半数抑制浓度(IC_(50))的改变,流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化。结果40例胃癌组织中,livin表达阳性率为47.5%(19/40);在癌旁组织和良性病变胃黏膜组织中,livin表达呈阴性。组织分化程度差、淋巴结转移者的livin表达率高(P<0.05)。livin特异性siRNA转染48h后,SGC-7901细胞中的livin mRNA表达受到抑制,细胞增殖能力减弱,对5-Fu和顺铂凋亡敏感性增加,同时IC_(50)降低(P<0.05)。结论livin在胃癌组织中表达增高,且与组织分化程度和淋巴结转移有关,可作为辅助胃癌预后判断的分子标志之一;RNA干扰可明显抑制livin基因表达,并使胃癌细胞的凋亡敏感性增加;livin有可能成为通过诱导细胞凋亡增强胃癌治疗效果的一个分子靶点。     

过表达miR-205对顺铂诱导的肾上腺皮质癌细胞株SW-13凋亡的影响及其机制

目的 研究过表达miR-205对顺铂（cisplantin,CDDP）诱导的肾上腺皮质癌细胞株SW-13凋 亡的影响及其机制。方法 设转染pcDNA3.1( + )-miR-205的SW-13细胞和转染 pcDNA3.1( + )的SW-13 细胞分别为实验组和对照组。在不同浓度顺铂作用下,采用CCK-8法比较两组细胞对CDDP敏感度; H33342及AnnexinV-FITC/PI荧光观察细胞凋亡,AnnexinV-PE/7AAD荧光流式细胞术检测细胞凋亡 率;用Western blot检测目的蛋白的表达水平;qPCR检测相关基因mRNA水平的变化。结果 不同浓度 顺铂作用下,实验组细胞生长抑制率、凋亡率明显高于对照组（P＜0.01,P＜0.05）;在0、20、30 μg/ml浓度的CDDP处理后,实验组促凋亡蛋白Bax、Caspase-9以及E2F1和VEGF-A mRNA水平较对照 组升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达则降低。结论 上调SW-13细胞miR-205可降低E2F1、VEGF-A的表 达水平,促进顺铂诱导细胞的凋亡,增强肾上腺皮质癌细胞对顺铂的敏感度。     

大黄素对人胃癌细胞MKN45增殖抑制作用及其分子机制的探讨

目的:研究大黄素(Emodin)对人胃癌细胞MKN45的作用及探讨其诱导MKN45凋亡的分子机制。方法:用MTT法观察大黄素对MKN45的生长抑制作用;荧光染色法及流式细胞仪分析诱导凋亡作用;蛋白质印迹法检测p53和p21蛋白水平的变化;细胞免疫化学法检测Fas的表达。结果:与对照组相比,大黄素能明显抑制MKN45细胞的生长且呈浓度、时间依赖性,其IC50(48h)为(47.5±0.3)μmol/L;大黄素处理胃癌细胞后,吖啶橙(AO)染色观察示,细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光、新月型改变、核固缩或片段化及凋亡小体的形成。流式细胞仪分析显示,大黄素能浓度依赖性诱导MKN45细胞凋亡和G2/M期阻滞。蛋白质印迹法检测显示,随着药物浓度的不断增加,p53和p21WAF1蛋白水平表现出明显增强的趋势;细胞免疫化学方法显示,大黄素处理后的细胞Fas/APO-1表达较对照组明显增多。结论:大黄素对人胃癌细胞MKN45有明显的生长抑制作用,且该作用与p53依赖性诱导凋亡以及Fas表达水平的上调有关。     

顺铂诱导人结肠癌细胞凋亡的实验研究

 采用细胞培养方法，通过AO染色，DNA微电泳及电镜观察顺铂作用下结肠癌细胞凋亡过程。实验结果表明：结肠癌SW1116细胞在不同浓度的顺铂作用2小时后，呈现不同程度的凋亡。电镜观察到凋亡的细胞表现为细胞核皱缩，核内染色质结块状，趋边缘性分布；DNA微电泳呈拖尾现象，提示凋亡细胞内DNA片断化；凋亡细胞AO染色呈阳性反应，其阳性率随顺铂的浓度增高而递增，与对照组相比，差异有显著意义（P＜0．05）。因此认为顺铂可诱导和促进结肠癌细胞凋亡，这一现象可能是顺铂抗癌作用之一。     

ABT-737对顺铂诱导乳腺癌T47D细胞凋亡的增敏作用

目的 探讨Bcl-2抑制剂ABT-737联合顺铂对乳腺癌T47D细胞株凋亡的影响.方法 常规培养T47D细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ABT-737联合顺铂对T47D细胞增殖的影响,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达,采用荧光染色法观察T47D细胞凋亡的形态学变化,采用流式细胞仪检测T47D细胞的凋亡率.结果 MTT法检测结果显示,ABT-737可明显降低顺铂在T47D细胞中的IC50[由顺铂单药的(26.00±1.41) μmol/L降为联合用药的(13.00±1.11)μmol/L].ABT-737增加顺铂对T47D细胞的抑制作用,并呈剂量依赖性,而ABT-737单药对T47D细胞的抑制作用不明显.Western blot检测多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的剪切结果显示,ABT-737明显降低了顺铂诱导T47D细胞凋亡的浓度,加快了凋亡诱导时间,ABT-737对顺铂诱导T47D细胞凋亡的增敏作用呈剂量依赖性,单药对T47D细胞的作用不明显.与单药组相比,ABT-737与顺铂联合时T47D细胞中PARP和caspase3的剪切明显增加,而Bcl-2、Bcl-XL和Bax的表达无明显变化.荧光染色和流式细胞术检测结果均显示,ABT-737联合顺铂时,T47D细胞的凋亡率明显增加.结论 ABT-737可显著提高顺铂对乳腺癌T47D细胞的凋亡诱导作用.     

Intervention Effects of Nedaplatin and Cisplatin on Proliferation and Apoptosis of Human Tumour Cells in Vitro

Objective: To study synergistic effects of nedaplatin and cisplatin on three human carcinoma cell lines(esophageal carcinoma cell line Eca-109, ovarian carcinoma Skov-3 and cervical carcinoma Hela). Methods:Inhibition effects were evaluated by MTT assay and cell apoptosis was detected by flow cytometry. In addition,changes of Ki-67, Bax and Bcl-2 at mRNA and protein levels were quantified by RT-PCR and Western blotting.Results: Growth inhibition in each cell lines was dose-dependent after exposure to nedaplatin or cisplatinalone. The interaction of the two drugs was synergistic at higher concentrations according to the median-effectprinciple. The inhibition rates with nedaplatin, cisplatin and combined treatment were 41.9±4.1%, 47.4±2.9%,52.5±0.9%(Eca-109), 39.0±1.26%, 45.0±1.45% , 56.2±1.44% (Skov-3) and 44.8±2.11%, 46.9±0.99%, 56.6±1.83%(Hela) respectively, with increase in apoptosis. Compared with the nedaplatin or cisplatin alone treatment group,the combinative treatment group’s Ki-67 and bcl-2 mRNA (protein) expression was decreased while that of BaxmRNA (protein) was increased. Conclusion: Compared to the effects of nedaplatin or cisplatin alone at highconcentrations, combination of nedaplatin and cisplatin at low concentrations proved to be much more effectivefor inhibition of proliferation and the induction of apoptosis in the Eca-109, Skov-3 and Hela cell lines.     

益康唑诱导白血病细胞凋亡的实验研究

目的为了研究益康唑(Econazole)诱导鼠粒单核白血病细胞WEHI-3凋亡的机制。方法利用Annexin-V/PI双染实验测定细胞凋亡,Fura-2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i),并抽取WEHI-3 细胞内质网部分蛋白,利用Western blot测定Caspase-7、Caspase-12的蛋白表达。结果Econazole作用后WEHI-3出现典型的凋亡改变。细胞内游离[Ca2 ]i较对照明显升高,Western blot结果显示随着细胞内钙离子浓度的提高,Caspase-12和Caspase-7表达逐渐增加。结论Econazole能诱导WEHI-3细胞凋亡,Caspase-12在此过程中起重要作用。