硫酸乙酰肝素在MDA-MB-231细胞增殖抑制中的作用

目的:探讨硫酸乙酰肝素(heparan sufate,HS)在抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖过程中对葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated pr otein,GRP78)及相关凋亡蛋白表达的影响.方法:培养人乳腺癌上皮MCF-7细胞株,生长达汇合期及汇合后期时收集培养液,提取其中的HS链.采用噻唑蓝比色法检测HS对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.应用Westem blot法分别检测GRP78蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果:HS对MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用,且具有剂量和时间依赖性(P<0.05).HS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,并随着剂量的增大,细胞的凋亡率升高(P<0.05).HS抑制MDA-MB-231细胞GRP78蛋白的表达(P<0.05).HS可促进Bax蛋白表达(P<0.05),但抑制Bcl-2蛋白的表达(P<0.05).结论:HS通过减少MDA-MB-231细胞的GRF78、Bcl-2的表达,增加Bax表达来促进肿瘤细胞的凋亡,发挥其抗肿瘤作用.     

二甲双胍对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231体外抑制作用的研究

目的探讨二甲双胍对三阴乳腺癌细胞的抑制作用和可能的损伤机制。方法利用MTT、流式细胞仪检测二甲双胍对MDA-MB-231乳腺癌细胞周期的影响及诱导凋亡作用;应用Western blot技术检测加药后MDA-MB-231乳腺癌细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)磷酸化表达水平变化。结果不同浓度二甲双胍作用MDA-MB-231乳腺癌细胞系24、48h后细胞增殖被不同程度抑制,并呈时间和浓度依赖性(P0.05);可促进MDA-MB-231乳腺癌细胞系凋亡,并呈浓度依赖性(P0.05);细胞周期检测,与对照组比较,G0/G1期比例增加(P0.05),S期比例逐渐降低(P0.05),G2/M期比例无明显变化(P0.05);药物处理MDA-MB-231乳腺癌细胞系24h后,Western blot检测示随药物浓度的增加,细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)磷酸化表达水平下降(P0.05)。结论二甲双胍对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖有抑制作用,下调P-ERK1/2的表达可能是其抗肿瘤机制之一,可能成为三阴乳腺癌潜在的维持治疗药物。     

甘氨双唑钠和塞来昔布联合应用对宫颈癌Hela细胞同步放化疗的影响

目的:探讨甘氨双唑钠和塞来昔布联合应用对宫颈癌Hela细胞同步放化疗(顺铂10μg/mL+放疗2 Gy)的影响,为将两药联合作为同步放化疗增敏剂应用于临床上中晚期及复发宫颈癌的治疗提供实验依据。方法:用不同浓度的甘氨双唑钠及塞来昔布分别处理Hela细胞24 h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖活性,并求出无毒浓度;用两药的无毒浓度分别及同时联合同步放化疗处理Hela细胞24 h后,MTT法检测细胞的增殖活性,倒置显微镜及透射电镜观察细胞形态的改变。结果:联合组对细胞增殖的抑制作用比同步放化疗组更显著,且两药联合组的抑制作用强于单药联合组及同步放化疗组;倒置显微镜及透射电镜下两药联合组细胞呈现出凋亡形态。结论:甘氨双唑钠和塞来昔布对Hela细胞同步放化疗有增敏作用,且两药与同步放化疗联合应用有一定的协同增敏效应。     

大蒜素对人乳腺癌细胞株的抑制作用

目的探讨大蒜素对人乳腺癌细胞株（MDA-MB-231）的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同浓度（5、10、20、40、80mg／L）大蒜素对增殖MDA-MB-231的抑制率。通过药物半数抑制浓度（IC50）计算软件计算IC50。相差倒置显微镜下观察细胞形态的改变情况。结果10、20、40mg／L组大蒜素对MDA-MB-231的增殖有明显抑制作用（P〈O．01）。24、48、72hIC50值分别为16．50、8．28、7．82mg／L。相差倒置显微镜下观察可见MDA-MB-231细胞分裂相减少，部分细胞漂浮，残存细胞形态不规则，状态差，反光差，出现细胞碎片。16．50、8．28、7．82mg／L的大蒜素作用24、48、72h后，琼脂糖凝胶电泳可见DNA凋亡梯形条带。结论大蒜素可使MDA-MB-231的增殖受到抑制，促进肿瘤细胞凋亡，具有抗肿瘤作用。     

塞来昔布对肺癌细胞的增殖抑制作用研究

目的研究非甾体类抗炎药塞来昔布对肺癌细胞的体外抑制作用。方法选用肺癌A549细胞系体外培养,在不同塞来昔布浓度作用下,MTT法检测肺癌细胞的增殖抑制,流式细胞仪测定肺癌细胞周期分布以及RTPCR法观察肺癌细胞血管内皮生长因子mRNA(VEGFmRNA)的表达水平。结果塞来昔布对肺癌细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖关系,IC50为50μmol/L;塞来昔布可将肺癌细胞阻滞在G0/G1期,有剂量依赖性;RTPCR法中,对照组肺癌细胞VEGFmRNA的表达水平高于药物组(P<0.05),药物组中肺癌细胞VEGFmRNA表达水平与塞来昔布浓度相关。结论塞来昔布对肺癌细胞有明显的体外增殖抑制作用,与VEGFmRNA的表达下调和阻滞细胞周期在G/G期有关。     

塞来昔布联合 PDTC 对人结肠癌细胞 HT-29 的抑制增殖和促凋亡作用及其机制

目的研究塞来昔布联合吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）对人结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及其对COX-2、NF-κB、Caspase-3基因表达的影响,探讨塞来昔布联合用药抗肿瘤的机制。方法用不同浓度的塞来昔布（30、60、120、240μmol／L）（单药组）以及不同浓度塞来昔布联合不同浓度的PDTC（50、100μmol／L）（联合组）分别处理人结肠癌细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞COX-2、NF-κB、Caspase-3表达的变化。结果塞来昔布单药组对结肠癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡作用,其作用随着药物浓度、给药时间的增加而增强（P均〈0．05）;同时检测到COX-2、NF-κBKBmRNA的表达降低（P均〈0．05）,Caspase-3表达升高（P〈0．05）,且具有浓度依赖性;联合组较同一塞来昔布浓度的单药组上述作用更明显（P均〈0．05）。结论塞来昔布单药组和联合组均能抑制人结肠癌细胞的增殖,促进其凋亡;联合组作用强于单药组;其机制可能与COX-2、NF-κB的下调和Caspase-3表达上调有关。     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度>40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

二甲双胍对三阴性乳腺癌细胞作用的实验研究

目的探讨二甲双胍对三阴性乳腺癌的作用及可能机制。方法不同浓度的二甲双胍作用三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot技术检测ERK1/2、pERK1/2的表达水平,将肿瘤细胞接种裸鼠后给予二甲双胍治疗,观察肿瘤组织的抑瘤率。结果不同浓度的二甲双胍与乳腺癌MDA-MB-231细胞共培养后,随着二甲双胍浓度的逐渐增加,MDA-MB-231细胞的增殖抑制也逐渐增加。经统计学分析发现,二甲双胍20mM组与对照组比较;二甲双胍30mM组与20mM组、对照组比较;二甲双胍40mM组与30mM组、20mM组、对照组比较;二甲双胍50mM组与40mM组、30mM组、20mM组、对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=16.04;4.36、29.24;21.33、23.46、40.61;3.70、31.80、33.16、64.17,P均<0.05)。乳腺癌MDA-MB-231细胞经二甲双胍处理后,细胞凋亡率(27.31%)明显高于对照组(2.36%),两者比较,差异有统计学意义(t=29.93,P<0.05)。经二甲双胍处理的MDA-MB-231细胞,其ERK1/2的磷酸化水平降低。将乳腺癌MDA-MB-231细胞接种于裸鼠,经二甲双胍治疗后,肿瘤组织的抑瘤率明显高于对照组,两者比较,差异有统计学意义(t=37.63,P<0.05)。结论二甲双胍对三阴性乳腺癌细胞有抑制作用,其机制可能是抑制EGFR信号通路的分子活化。     

洛伐他汀联合塞来昔布对宫颈癌Caveolin-1的表达及下游信号分子的影响及意义分析

目的探讨洛伐他汀联合塞来昔布对宫颈癌Caveolin-1的表达及下游信号分子的影响。方法分别将不同水平的塞来昔布、洛伐他汀联合塞来昔布与Hela细胞体外共孵育,采用MTT法分别检测其对HeLa细胞增殖的影响。采用流式细胞术检测塞来昔布、洛伐他汀联合塞来昔布对HeLa细胞凋亡的影响。同时采用蛋白免疫印迹(Western-blot)检测Caveolin-1及下游信号分子磷酸化的转录活化因子3(p-STAT3)和p-Akt的蛋白表达情况。结果 HeLa细胞经过不同水平的塞来昔布、洛伐他汀联合塞来昔布处理24h后,塞来昔布的IC50值为50μM,洛伐他汀联合塞来昔布的IC50值为30μM;塞来昔布、洛伐他汀联合塞来昔布均能抑制HeLa细胞的增殖,诱导HeLa细胞的凋亡,且呈剂量和时间依赖性,洛伐他汀联合塞来昔布作用更显著;塞来昔布与HeLa细胞共孵育24h后,Caveolin-1的蛋白表达轻微上调,而洛伐他汀联合塞来昔布能够显著增加Caveolin-1的表达;塞来昔布能抑制p-STAT3和p-Akt的表达,而洛伐他汀联合塞来昔布共同处理HeLa细胞后,p-STAT3和p-Akt的表达进一步下降。结论洛伐他汀联合塞来昔布能够显著抑制HeLa细胞的增殖,诱导其凋亡,同时上调宫颈癌Caveolin-1的表达,从而抑制下游信号分子的激活。     

塞来昔布对人甲状腺髓样癌TT细胞增殖及细胞周期分布的影响

目的探讨塞来昔布对甲状腺髓样癌TT细胞体外生长及细胞周期分布的影响。方法采用3H-TdR掺入法比较不同浓度的塞来昔布对TT细胞增殖的抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞周期分布的变化情况。结果 3H-TdR掺入法显示不同浓度的塞来昔布均对肿瘤细胞的增殖有明显抑制作用,并在80μmol/L以下时呈浓度依赖性（F=93.83,P〈0.05）,随时间的延长及浓度高于80μmol/L时虽然CPM值有下降的趋势,但无统计学意义（P〉0.05）。流式细胞仪检测发现塞来昔布使TT细胞周期发生了G0/G1期阻滞,并成浓度、时间依赖性,G2期与S期细胞数均较用药前减少,G2期无显著差异（P〉0.05）,S期有显著差异（P〈0.05）。结论塞来昔布可通过抑制环氧合酶-2活性,抑制甲状腺髓样癌TT细胞的增殖,阻止细胞周期进展,明显降低其增殖指数,在诱导其凋亡中起重要作用,COX-2可作为甲状腺癌治疗的新靶点。