PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞株MBA-MB-231/ADR的多药耐药逆转作用

目的探讨PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用及其与PI3K/Akt信号转导关系。方法采用MTT法测定三阴性乳腺癌细胞系MBA-MB-231及其多药耐药细胞株MBA-MB-231/ADR对经典化疗药物阿霉素的半数抑制浓度(IC50),以及MBA-MB-231/ADR细胞株在PI3K抑制剂LY294002给药前后对阿霉素的敏感性差异。Western Blot检测MDA-MB-231/ADR细胞株LY294002给药前后,P-Akt、Akt、IκBα、NF-κB、P-gp和cleaved-caspase-3表达水平差异。结果 1MBA-MB-231和耐药细胞株MBA-MB-231/ADR对阿霉素的IC50分别为(0.36±0.03)μmol/L和(16.77±1.57)μmol/L,耐药倍数为46.58倍。2LY294002给药后,耐药细胞株MBAMB-231/ADR对阿霉素的IC50降至(2.59±0.07)μmol/L,耐药倍数降至6.475,对药物敏感性显著增加。3耐药细胞株MBA-MB-231/ADR中PI3K/Akt和NF-κB通路被激活,细胞耐药相关蛋白P-gp处于高表达水平;LY294002处理之后,MBA-MB-231/ADR细胞中PI3K/Akt和NF-κB通路被抑制,P-gp表达水平下调,细胞凋亡相关的cleaved-caspase-3表达上调。结论 PI3K抑制剂LY294002能有效逆转耐药细胞株MBA-MB-231/ADR的耐药性,从而增强耐药细胞MBA-MB-231/ADR对化疗药物阿霉素的敏感性。该研究结果提示LY294002通过阻断PI3K/Akt通路抑制下游NF-κB通路的活化和P-gp表达上调,从而参与MBA-MB-231/ADR耐药性的逆转。     

PI3K/Akt信号通路与脑出血的研究进展

磷脂酰激醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路作为经典的细胞信号转导途径,在细胞生长、增殖、分化和凋亡等多种生物学过程中发挥作用。脑出血是一种高致残率和高致死率的脑血管疾病,该通路在脑出血发生发展中的研究也备受关注。该文以PI3K/Akt信号通路为主线,对该通路的结构及生物学特点、与脑出血之间的关系以及基于该通路探讨药物对脑出血的作用进行综述,为临床脑出血的治疗提供新的思路。     

蛋白激酶B通路、乙酰肝素酶、NADPH氧化酶在心肌缺血再灌注损伤中的作用及相互关系的研究进展

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路影响多种细胞因子,在心血管系统中起重要作用。近年来,蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)及NADPH氧化酶(NADPH oxidase,Nox)在缺血再灌注损伤中的作用引发越来越多的关注。已有研究表明,HPSE、Akt、Nox均参与了心肌细胞缺血再灌注损伤过程,并且相互作用。HPSE调控PI3K/Akt通路,而PI3K/Akt通路导致Nox产生增加,Nox又可以通过改变Akt信号传导激活Akt通路。本文通过综述HPSE、Akt、Nox在心肌缺血再灌注损伤中的作用及相互关系,旨在为临床心肌缺血再灌注的诊治提供理论依据。     

电针对去神经支配骨骼肌萎缩大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:研究电针对去神经支配骨骼肌萎缩大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响,探讨电针延缓去神经支配骨骼肌萎缩的治疗机制。方法:SD雄性大鼠63只随机分为假手术组(n=21)、模型组(n=21)和电针组(n=21)。模型组、电针组通过暴露并切断坐骨神经的方法制作去神经支配腓肠肌动物模型,假手术组暴露坐骨神经但不切断。术后1d,电针组术侧进行电针治疗,其余两组不做任何处理。分别在术后7d、14d和21d取材,测定术侧腓肠肌湿重比,Masson染色测定腓肠肌纤维直径、截面积,Western Blot检测PI3K、Akt以及mTOR蛋白表达、Akt以及mTOR蛋白磷酸化,PCR检测PI3K、Akt和mTOR基因表达。结果:模型组与电针组大鼠腓肠肌的湿重比、肌纤维截直径以及面积均显著低于假手术组(P0.001),且模型组与电针组比较,差异具有显著性(P0.05);电针组的PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达量均高于模型组与假手术组(P0.05);电针组的PI3K、Akt、mTOR m RNA表达也明显高于其余两组(P0.05)。结论:电针可延缓去神经性骨骼肌萎缩,其作用机制可能与电针激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

肠三叶因子介导PI3K/Akt信号通路保护胃黏膜上皮细胞紧密连接

目的：探讨肠三叶因子对胃黏膜上皮细胞紧密连接的保护作用,并研究PI3K/Akt信号通路在其中的作用机制。方法：体外培养GES-1细胞,分别设正常对照组,LPS组,ITF组,LPS＋ITF组,LPS＋ITF＋LY294002组,ITF＋LY294002组。正常对照组：正常培养;LPS组：加入浓度为10mg/L的LPS;ITF组：加入浓度为100μg/L的ITF;LPS＋ITF组：加入浓度为10mg/L的LPS,同时加入100μg/L的ITF;LPS＋ITF＋LY294002组：加入浓度为10mg/L的LPS、100μg/L的ITF,同时加入PI3K/Akt信号通路的抑制剂LY294002（15μM）;ITF＋LY294002组：加入100μg/L的ITF,同时加入15μM的LY294002。培养48h,采用Western blot检测ITF对PI3K/Akt信号通路的作用,采用免疫荧光和Western blot检测细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的变化情况。结果：Western blot检测结果说明,与对照组相比,ITF提高了pAkt蛋白的表达水平,而LY294002抑制了ITF激活的pAkt蛋白的表达,说明ITF可以通过激活PI3K/Akt信号通路来调控GES-1细胞的生理活动。免疫荧光和Western blot结果显示LPS导致GES-1细胞的紧密连接遭到破坏,降低紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达水平,而ITF可以通过激活PI3K/Akt信号通路来保护GES-1细胞的紧密连接的完整性。结论：ITF保护胃黏膜上皮细胞紧密连接的完整性,提高紧密连接蛋白的表达水平,其发挥作用的主要分子机制是通过激活PI3K/Akt信号通路来实现的。     

PI3K/AKT信号通路与缺血性脑损伤引起的细胞凋亡研究进展

PI3K/AKT信号通路是细胞内调控信号转导的一个重要途径,其组成较为复杂,参与细胞增殖、凋亡、代谢等活动。缺血性脑损伤是一个复杂的病理过程,而细胞凋亡在此过程中发挥重要作用。PI3K/AKT信号通路是细胞存活的关键通路,在缺血性脑损伤、神经退行性疾病及肿瘤等诸多疾病中起调控作用。因此,研究该通路并探讨其在缺血性脑损伤中的作用对进一步探寻此类疾病的治疗具有重要意义。     

miR-451a/KIF2A轴对食管鳞状细胞癌顺铂耐药的影响

目的 探讨miR-451a通过调控PI3K/Akt通路对食管鳞状细胞癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药的作用及其可能机制.方法 人正常食管鳞状上皮细胞系Het-1A、人食管鳞状细胞癌细胞系Eca109、人食管鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系Eca109/DDP,采用实时荧光定量PCR法检测3种细胞miR-451a相对表达...     

eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,构建的eEF1A1表达慢病毒使基因敲除Jurkat细胞的eEF1A1表达明显回复。与阴性对照组相比,eEF1A1表达组Jurkat细胞增殖能力明显增强,凋亡明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少;随着S期、G2/M期细胞比例增多,pAk、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显升高。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,它的表达可有效促进Jurkat细胞的增殖并抑制凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

PI3K/Akt信号通路异常与白血病

PI3K/Akt途径作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游凋亡相关蛋白、细胞周期调节蛋白等效应分子的活化过程,在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用。PI3K/Akt通路分子的基因突变,或上游调控信号的异常放大,均可导致该通路过度激活,细胞生存与凋亡失衡,正常细胞发生恶性转化。近年来的研究发现,PI3K/Akt通路的持续性活化在白血病发病中起着重要作用,针对这一异常设计的靶向药物也已陆续在白血病治疗中得到应用。本文综述了PI3K/Akt通路异常与白血病关系的研究进展。     

GPR30-PI3K/Akt信号通路对乳腺癌细胞迁移能力的影响研究

目的研究G蛋白偶联雌激素膜受体(GPR30)-磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路对乳腺癌细胞迁移能力的影响。方法分别选取乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468、MDA-MB-453及MCF-7,采用免疫印迹法检测4种细胞中GPR30的表达情况,将表达量最高的细胞用于后期实验。通过细胞免疫荧光染色检测乳腺癌细胞中GPR30的定位情况;通过免疫印迹法检测不同剂量(0 ng、2 ng、6 ng、10 ng) GPR30激动剂E_2作用乳腺癌细胞后磷酸化PI3K(p-PI3K)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况;采用划痕实验检测GPR30-PI3K/Akt信号通路活化对乳腺癌细胞迁移能力的影响。结果 GPR30在4种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDAMB-468、MDA-MB-453及MCF-7中的相对表达量分别为0. 19±0. 03、0. 76±0. 07、0. 62±0. 08、0. 91±0. 09,差异具有统计学意义(P 0. 01)。因MCF-7细胞中GPR30的表达量最高,故以MCF-7细胞为实验对象。经免疫荧光染色可知,GPR30高表达于乳腺癌MCF-7细胞的胞质和胞膜上。随着激动剂E_2使用剂量的提高和刺激时间的延长,pPI3K、p-Akt蛋白表达量均明显增高(P 0. 05),具有时间和剂量依赖性。激动剂E_2最佳使用剂量为10 mg/ml,最佳干预时间为10 min,经激动剂E_2(10 mg/ml)刺激乳腺癌MCF-7细胞10 min后,p-PI3K蛋白表达量显著升高(P 0. 05);而提前采取GPR30特异性阻断剂(G15)进行预处理后,MCF-7细胞中的p-PI3K蛋白表达量显著降低(P 0. 05)。采用激动剂E_2干预后,乳腺癌MCF-7细胞迁移能力明显提升(P 0. 05);而采用GPR30特异性阻断剂(G15)、PI3K特异性阻断剂(LY294002)干预后,乳腺癌MCF-7细胞迁移能力显著降低(P 0. 05)。结论经体外实验表明,GPR30-PI3K/Akt信号通路在乳腺癌中可能具有一定的交叉关系,并且该信号通路异常活化具有参与乳腺癌细胞迁移的作用。     

PI3K/Akt信号通路在肝脏缺血再灌注损伤中的研究进展

肝脏缺血再灌注损伤是导致术后肝脏功能延迟恢复和功能障碍的重要原因。有研究表明,PI3K/Akt信号通路在缺血和再灌注的过程中被激活,通过抑制或增强下游相关靶蛋白的表达发挥对肝脏的保护作用。因此,PI3K/Akt信号成为预防和改善肝脏缺血再灌注损伤的重要靶向通路。本文就PI3K/Akt信号通路在肝脏缺血再灌注损伤中作用的研究进展进行综述。     

eEF1A1基因敲除对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨

本研究旨在探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)表达沉默对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用实时PCR法和Western blot法分别检测Jurkat细胞和3例健康成人外周血单个核细胞(PBMNC)中eEF1A1 mRNA和蛋白的表达。构建eEF1A1-shRNA慢病毒并感染Jurkat细胞,另设空白和阴性对照组,应用实时PCR法和Western blot法分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、AnnexinⅤ-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,Jurkat细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于健康成人PBMNC中的表达(P<0.01,P<0.05);构建的eEF1A1-shRNA慢病毒高效沉默Jurkat细胞eEF1A1的表达。与阴性对照组相比,eEF1A1-shRNA组Jurkat细胞增殖能力明显下降,凋亡明显增多,细胞周期被阻滞于G0/G1期,p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显下调。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,其表达沉默可有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

PI3K/AKt/mTOR信号通路与肿瘤关系的研究进展

近年来,随着人们对肿瘤信号通路的不断研究,其中尤以PI3K/AKt/m TOR信号通路已逐渐成为研究热点,胞內磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)作为该信号转导通路中重要的介导分子,发挥着不可或缺的作用。因此,本文就PI3K/AKt/m TOR信号通路的激活及其主要效应分子的作用机制,与肿瘤及血管瘤之关系的研究进展作一介绍。     

竹节香附素A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察竹节香附素A（RDA）对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 分别使用0、5、10、20及40μmol/L的RDA干预HeLa细胞48 h,CCK-8实验测定细胞增殖率,计算半抑制浓度（IC₅₀）,确定药物浓度。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测细胞中B细胞淋巴瘤2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化胱天蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的蛋白表达水平。将HeLa细胞分为4组,即空白对照组、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组、RDA组和联合用药组,检测及比较各组细胞增殖率、凋亡率和p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量。结果 随着RDA浓度的增加,HeLa细胞的增殖率降低、凋亡率升高（P均< 0.05）,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量升高（P均< 0.05）,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量降低（P均< 0.05）;IGF-1激活PI3K/Akt/mTOR信号通路后,RDA仍然能抑制HeLa细胞增殖（P均< 0.05）,降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量（P均< 0.05）。结论 RDA可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞产生抑制增殖与促进凋亡的效果。     

人胚胎干细胞Pten基因表达及PI3K/Akt/mTOR信号通路下游蛋白的磷酸化

背景:各种磷酸化蛋白质表达水平对人胚胎干细胞维持未分化状态或定向分化的影响逐渐成为人胚胎干细胞的研究热点,研究发现磷酸化蛋白质表达水平可能决定着人胚胎干细胞的命运。目的:对PI3K/Akt途径下游的关键蛋白磷酸化水平进行检测,寻找PI3K/Akt途径中能够维持人胚胎干细胞未分化状态的下游蛋白。方法:用胎鼠成纤维细胞作为饲养层,二维培养的方法培养人胚胎干细胞,胶原酶消化后待测;以饲养层细胞、K562细胞株为对照。观察人胚胎干细胞生长状态;RT-PCR检测Pten基因表达;WesternBlot检测p-PTEN、p-mTOR、p-P70S6Kp-4E-BP14种蛋白的表达。结果与结论:人胚胎干细胞在未分化状态时PtenmRNA表达高于肿瘤细胞K562,而且Pten抑制的mTOR信号通路中关键蛋白表达均明显低于K562,尤其以p-4E-BP1表达最低。提示PI3K/Akt/mTOR信号通路下游磷酸化蛋白在人胚胎干细胞活性较低,如果抑制负调节蛋白PTEN或直接激活该通路正调节关键蛋白,可能会加快人胚胎干细胞增殖、减少凋亡,进而为定向分化、再生医学提供更多的细胞来源。     

PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

肺癌是目前全世界范围内发病率和死亡率均最高的恶性肿瘤。磷酸酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路是所有人类癌症中最重要的致癌途径之一,该通路在肿瘤的发生、增殖以及诱导上皮-间质转化(EMT)等方面扮演者重要角色,并且对于肿瘤的获得性耐药也有影响。目前针对PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)的靶向治疗方面已进行了比较广泛的研究。本文就PI3K/AKT信号通路在NSCLC发生发展及治疗中作用的研究进展进行综述。     

EGFR/PI3K/Akt细胞信号传导通路与肿瘤

表皮生长因子受体(EGFR)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB,也称Akt)信号通路是生物体内一条非常重要的生存信号通路。EGFR通过二聚化后刺激Ras蛋白,导致磷酸化级联反应的发生来激活PI3K/Akt信号通路,从而引起肿瘤的发生发展。本文从EGFR/PI3K/Akt信号传导通路对肿瘤的调节机制等多个方面综述了EGFR/PI3K/Akt信号通路与肿瘤的关系。     

PI3K／AKT／mTOR信号通路在造血干细胞中作用的研究进展

PI3K／AKT／mTOR信号通路调节细胞生长、增殖和存活等生命过程,在多种细胞生命过程中起着关键的作用,在造血干细胞中同样也扮演着重要的角色。过度激活PI3K／AKT／mTOR信号通路会造成造血干细胞的耗竭,而抑制PI3K／AKT／mTOR信号通路,则B细胞的分化会受到显著的抑制。本文系统介绍PI3K／AKT／mTOR信号通路中关键节点的蛋白,包括PI3K,AKT,mTOR,FoxO和GSK-3等在造血干细胞中作用的最新研究进展。     

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路与肿瘤治疗

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路是细胞内重要信号转导通路之一,参与了细胞增殖、凋亡及分化等功能的调控作用.近年研究表明,在许多肿瘤中发现PI3K/Akt通路活性异常,而其通路的活性紊乱不仅能导致细胞恶性转化,并与肿瘤细胞的迁移、黏附及肿瘤血管生成等密切相关.因此,对于该通路的深入研究有助于推动肿瘤治疗领域的进一步发展.本文将PI3K/Akt信号通路的组成、功能及其目前与PI3K/Akt信号通路相关的各类肿瘤治疗的机制研究进展作一综述.     

PI3K抑制剂治疗癌症研究进展

针对性的使用细胞毒性药物是常用的抗癌方法,但该方法不能区分正常的细胞增殖和肿瘤细胞。PI3K依赖性信号转导通路可调节细胞的分裂、分化、凋亡等活动,但特定位点的基因遗传变异会导致PI3K依赖性信号通路过度表达,造成肿瘤细胞的发生和持续发展。使用PI3K信号通路的分子抑制剂被认为是针对癌症治疗的一个最有前途的方案。本文对PI3K抑制剂的临床开发和应用进行介绍,并对最新的研究进展和发展前景进行讨论。