两种表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂对小鼠肺纤维化的干预作用比较

目的比较两种表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼与厄罗替尼对博莱霉素致小鼠肺纤维化的干预作用。方法 40只雌性BALB/c小鼠分为对照组(NS组)、博莱霉素纤维化组(BLM组)、吉非替尼组(GE组)和厄罗替尼组(ER组)。实验第1d,BLM组、GE组和ER组小鼠经气管滴入博莱霉素致肺纤维化,NS组气管内滴入生理盐水;同时,GE组及ER组分别口服吉非替尼(20mg.kg-1.d-1)和厄罗替尼(25mg.kg-1.d-1),余两组口服生理盐水。持续给药2周后杀鼠取肺,左肺石蜡包埋切片行HE染色与Masson染色,免疫组化检测总EGFR及磷酸化EGFR;右肺匀浆检测羟脯氨酸含量。结果吉非替尼与厄罗替尼均能明显减轻博莱霉素引起的肺结构破坏、胶原沉积,降低磷酸化EGFR表达及纤维化小鼠肺羟脯氨酸含量(P0.05),两者的上述作用无明显差异(P0.05)。结论 EGFR-TKI通过抑制EGFR磷酸化,有效减轻博莱霉素诱导的肺纤维化形成,为肺纤维化的靶向治疗提供了新思路。     

双氢杨梅树皮素对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响

目的通过体内模型研究双氢杨梅树皮素的抗肺纤维化作用,为寻找抗肺纤维化药物奠定基础。方法将60只BALB/c小鼠按体重随机数表法随机分为6组,每组10只,即生理盐水空白对照组、博来霉素模型组(3 mg/kg)、地塞米松组(2.5 mg/kg),以及双氢杨梅树皮素不同剂量干预组(200、100、50 mg/kg)。除空白对照组外,各组以博来霉素为诱导剂诱导BALB/c小鼠肺纤维化模型,采用无创气管内滴注法肺部滴注博来霉素溶液(3 mg/kg)分别于第1 d和第14 d各滴注1次,实验周期为28 d。各干预组在模型构建期间分别使用地塞米松(2.5 mg/kg)与双氢杨梅树皮素(200、100、50 mg/kg)进行干预,空白对照组与模型组同法给予生理盐水。28 d后分别测定小鼠各项指标,肺功能测定仪测定呼吸功能(吸气阻力、肺动态顺应性、每分钟最大通气量),计算肺脏器系数,测定肺组织羟脯氨酸水平,并进行肺组织病理学检查。结果模型组小鼠呼吸功能较空白对照组显著下降(P0.05),药物高剂量干预能显著改善呼吸功能(P0.05);模型组小鼠肺脏器系数显著增加(P0.05),其余各组肺脏器系数均显著下降(P0.05);模型组肺部羟脯氨酸水平显著升高(P0.05),而药物干预组羟脯氨酸含量显著降低(P0.05);模型组小鼠肺泡壁显著增厚,胶原纤维显著增加,肺泡炎症与纤维化评分明显升高(P0.05),而药物干预组症状减轻。结论双氢杨梅树皮素能抵抗由博来霉素诱导的小鼠肺纤维化,改善呼吸功能衰退的症状,减少胶原蛋白的形成,产生抗小鼠肺纤维化的作用。     

吡非尼酮下调NOX4减轻由博来霉素诱导的小鼠肺纤维化

目的 观察NOX4在博来霉素诱导的小鼠纤维化肺中的表达及其意义,探讨PFD对NOX4表达的影响。方法 72只C57健康雌性小鼠采用数字表法随机分为PFD干预组(A组)、模型组(B组)、正常对照组(C组)3组,每组各18只。采用气管内注入博来霉素(3.5mg/kg)的方法构建小鼠肺纤维化模型。小鼠肺组织行病理切片HE和Masson染色,检测肺组织羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组织化学方法检测NOX4在肺组织中的表达。结果 Masson染色显示:造模后B组于第7天、第14天、第28天3个时间点肺纤维化评分较C组均增加(P<0.05);A组肺纤维化评分较B组降低(P<0.05)。造模第7、14、28天3个时间点B组肺组织Hyp含量较C组均增高(P<0.05);A组肺组织Hyp含量较B组减低(P<0.05)。免疫组化显示造模第7、14、28天3个时间点B组小鼠肺组织均可见在气道平滑肌细胞、上皮细胞、肺泡上皮细胞,以及血管平滑肌细胞、内皮细胞,肺成纤维细胞中NOX4广泛的强表达;C组NOX4表达较B组弱(P<0.05);A组NOX4表达较B组减弱(P<0.05)。结论 NOX4在肺组织广泛表达,其表达上调可能与博来霉素诱导的肺纤维化形成相关。PFD可下调NOX4表达,提示NOX4有望成为治疗肺纤维化的新靶点。     

三种方法气管灌注博来霉素诱导小鼠肺纤维化的比较

目的利用腰穿针气管插管、留置针气管插管和气管切开三种不同方法对C57BL/6J小鼠进行气管注射博来霉素诱导肺纤维化,探索腰穿针气管插管造模法、留置针气管插管造模法及气管切开造模法这三种方法对小鼠的影响。方法将120只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、腰穿针气管插管模型组、留置针气管插管模型组和气管切开模型组,分别利用不同方法气管注射博来霉素,观察小鼠的一般情况(体重变化和存活率)、组织病理学改变(HE和Masson染色)和羟脯氨酸水平。结果腰穿针气管插管模型组、留置针气管插管模型组造模后28 d小鼠体重均高于气管切开模型组,有统计学差异(P0.01、P0.001);各组小鼠存活率存在差异,除空白组外,气管切开模型组最低,留置针气管插管模型组最高,空白组和气管切开模型间有统计学差异(P0.05),其余各组间没有统计学意义;肺组织肺泡炎及肺纤维化程度由高到低依次为气管切开模型组、腰穿针气管插管模型组和留置针气管插管模型组,且造模后21 d最重;气管切开模型组病灶分布均匀,腰穿针气管插管模型组和留置针气管插管模型组分布不均匀,以气管周围肺组织较重;腰穿针气管插管模型组和气管切开模型组造模后28 d羟脯氨酸水平显著高于空白组(P0.01、P0.001)。结论综合多种因素,腰穿针气管插管造模法是三种造模方法中的最佳方法。     

血管紧张素转化酶抑制剂对博来霉素诱导肺纤维化大鼠肺功能改变的影响

目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）对博来霉素诱导肺纤维化大鼠肺功能改变的影响。方法在博来霉素诱导肺纤维化大鼠模型的基础上,采用卡托普利对肺纤维化大鼠进行干预。检测大鼠肺泡炎、肺纤维化半定量评分,支气管肺泡灌洗液（BALF）中转化生长因子-B1（TGF-B1）、干扰素1（INF-1）、白细胞介素（IL）-1、IL-2、IL-4、IL-5水平,肺组织匀浆中过氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及肺组织羟脯氨酸（HYP）水平,BALF和血清中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP-1）水平,并在显微镜下观察大鼠肺组织形态学改变。结果卡托普利可显著减轻博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的肺纤维化评分,升高BALF中TGF-p。水平,并降低INF-γ,IL-1、IL-2、IL4、IL-5水平;肺组织匀浆SOD水平升高,MDA及HYP水平降低;血清及BALF中MMP-9、TIMP-1均呈降低趋势,镜下观察肺纤维化明显减轻。结论卡托普利对博来霉素诱导肺纤维化大鼠的肺功能下降有明显的抑制作用。     

百部汤对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的抑制作用

研究百部汤对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的抑制作用。一次性气管滴注博来霉素建立肺纤维化小鼠模型,每天灌胃给予百部汤1次,连续给药14 d,以尼达尼布作为阳性对照。分离肺组织,计算肺系数,测定羟脯胺酸含量,HE和Masson染色观察肺组织病理改变情况。结果显示,模型组小鼠体重下降,肺系数、羟脯氨酸含量、肺组织炎性、胶原等指标均明显升高;百部汤醇提物和水提物均有改善各项病理指标的作用或趋势,表明二者均有改善小鼠肺纤维化的作用,但醇提物效果优于水提物;而由不同化学型(分别主含新对叶百部碱、对叶百部碱和百部新碱)对叶百部组成的百部汤均可显著降低羟脯氨酸含量、减少肺组织胶原沉积,且其影响程度无明显区别,说明不同主成分对叶百部为君药组成的百部汤均能够明显改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化,其作用机制及物质基础有待进一步研究。     

胚胎干细胞治疗博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的研究

 目的 研究静脉注射胚胎干细胞（ESC）对肺纤维化小鼠的治疗作用。方法 气管内滴注博来霉素8.5mg/kg制作C57/BL6雌性小鼠的肺纤维化模型。治疗组(n=20)静脉注射S8小鼠ESC，对照组(n=10)注射生理盐水。治疗组又分为单次治疗(n=10)和重复治疗(n=10)，两者均在造模后1h静脉注射ESC，重复治疗组在造模后3d再次静脉注射ESC。记录小鼠的生存时间，测定小鼠肺组织的羟脯氨酸含量，肺脏病理学观察炎症状态。利用秩和检验统计3组小鼠生存时间，方差分析3组小鼠肺羟脯氨酸含量的差异。结果 接受干细胞治疗后，肺纤维化模型小鼠的生存时间(d)延长，重复治疗组更加明显（对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为7.8±2.8、8.4±3.8、13.5±5.6，P<0.01）；肺羟脯氨酸含量(μg/mL)降低 [对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为（8.59±1.14）、（8.23±1.09）、（5.51±0.39），P<0.01）]；肺脏病理检查显示肺组织炎症程度降低，结构破坏减轻。结论 静脉注射胚胎干细胞可以减轻博来霉素诱导的小鼠肺部炎症和肺纤维化，延长肺纤维化小鼠的生存时间。     

胚胎干细胞治疗博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的研究

目的 研究静脉注射胚胎干细胞（ESC）对肺纤维化小鼠的治疗作用。方法 气管内滴注博来霉素8.5mg/kg制作C57/BL6雌性小鼠的肺纤维化模型。治疗组(n=20)静脉注射S8小鼠ESC,对照组(n=10)注射生理盐水。治疗组又分为单次治疗(n=10)和重复治疗(n=10),两者均在造模后1h静脉注射ESC,重复治疗组在造模后3d再次静脉注射ESC。记录小鼠的生存时间,测定小鼠肺组织的羟脯氨酸含量,肺脏病理学观察炎症状态。利用秩和检验统计3组小鼠生存时间,方差分析3组小鼠肺羟脯氨酸含量的差异。结果 接受干细胞治疗后,肺纤维化模型小鼠的生存时间(d)延长,重复治疗组更加明显（对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为7.8±2.8、8.4±3.8、13.5±5.6,P<0.01）;肺羟脯氨酸含量(μg/mL)降低 [对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为（8.59±1.14）、（8.23±1.09）、（5.51±0.39）,P<0.01）];肺脏病理检查显示肺组织炎症程度降低,结构破坏减轻。结论 静脉注射胚胎干细胞可以减轻博来霉素诱导的小鼠肺部炎症和肺纤维化,延长肺纤维化小鼠的生存时间。     

百部生物碱对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的保护作用

对叶百部总生物碱及其主要成分新对叶百部碱对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的保护作用进行研究,并采用细胞模型初步探讨其作用机制。实验分为假手术组、模型组、总碱组(60 mg/kg)和新对叶百部碱低、高(10、20 mg/kg)剂量组,泼尼松(6.67 mg/kg)为阳性对照药,以肺组织羟脯氨酸含量、TGF-β1水平、炎性水平、胶原沉积和α-SMA表达等为指标考察其抗肺纤维化效果。结果表明,总碱和新对叶百部碱均能显著改善模型小鼠的肺组织炎症和损伤,降低羟脯氨酸含量和胶原沉积;新对叶百部碱能显著降低模型小鼠肺组织α-SMA表达和TGF-β1水平。初步机制研究表明,新对叶百部碱能抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞中α-SMA的升高,表明抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞转化是其作用机制之一。     

抑制PARP1活性对博来霉素诱导的肺纤维化的改善作用

目的:探讨抑制聚ADP核糖多聚酶1(PARP1)活性对于博莱霉素导致的肺纤维化的改善作用,阐明抑制PARP1活化改善肺纤维化的作用机制。方法:48只雌性ICR小鼠随机分为对照组(腹腔注射生理盐水)和5、10、15 mg·kg^-1博莱霉素组(模型组)。3个模型组分别在第1、4、8、11、15、18、22和25天腹腔注射相应浓度的博莱霉素。60只雌性ICR小鼠随机分成对照组、10 mg·kg^-1博莱霉素模型组及不同剂量PARP1抑制剂PJ34治疗组(腹腔注射博来霉素20min前尾静脉注射1、5和10 mg·kg^-1 PJ34)。上述实验中,分别于第14、21和28天每组选取3只小鼠,处死后取肺。HE染色观察肺泡结构,Masson染色分析纤维化程度。肺上皮源性细胞A549用于博莱霉素刺激后,Real-time PCR法分析PJ34对上皮间充质转化(EMT)标志基因表达的影响。结果:与博莱霉素模型组比较,PJ34治疗组小鼠肺泡结构的破坏及胶原在肺间质中的沉积明显减轻;Real-time PCR法分析,与博莱霉素模型组比较,PJ34治疗组肺上皮细胞A549中E-cadherinmRNA表达水平升高(P<0.05),α-SMA和TGF-βmRNA表达水平下降(P<0.05或P<0.01)。结论:抑制PARP1活性可以影响EMT标志基因的表达及肺纤维化的产生,PARP1抑制剂可用于预防博来霉素治疗肿瘤过程中产生的肺纤维化。     

中和白细胞介素 17 对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的干预作用

目的??初步探讨中和白细胞介素 17（IL-17）对博来霉素（BLM）诱导小鼠肺纤维化形成过程的 干预作用及其机制。方法??96 只小鼠随机分为 4 组,即抗体干预组、同型抗体对照组（IgG2A 组） 、博来霉素 组（BLM 组） 、正常对照组（NC 组） 。气管内注射 BLM 使小鼠急性肺损伤诱导肺纤维化形成, NC 组则给予 等量生理盐水。复制模型后第 4、9、14、19 和 22 天抗体干预组小鼠尾静脉注射 IL-17A 中和抗体, IgG2A 组 注射同型抗体 IgG2A; BLM 组和 NC 组则注射等量生理盐水。在培养的第 7、 14 和 28 天将 4 组小鼠分批处死, 取气管肺泡灌洗液（BALF）涂片进行细胞计数, ELISA 法检测 IL-1β、 IL-10、 IL-17A、 IFN-γ 含量的变化; 检测小鼠肺组织羟脯氨酸（HYP） 、丙二醛（MDA）及活性氧（ROS）等生化指标,并评价各组小鼠肺组织 的纤维化程度。结果??抗体干预组与 BLM 组比较,BALF 中细胞总数、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞的 个数, IL-1β、IL-10、IFN-γ 的含量, 以及 HYP、MDA、ROS 的含量在各个时间点均降低（ P <0.05） ; 而 IgG2A 组上述指标在各个时间点与 BLM 组比较,差异无统计学意义（ P >0.05） 。结论??中和 IL-17A 对 BLM 所致的实验性小鼠肺纤维化模型具有一定的防治作用, 有利于延缓肺纤维化的进程。     

mTOR信号通路在博来霉素诱导小鼠肺纤维化中的作用机制研究

目的探讨mTOR信号通路在博来霉素诱导小鼠肺纤维化中的作用机制。方法将60只C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组。对实验组气管内滴注博来霉素(2.5 mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组在相同条件下注入等体积0.9%氯化钠。在造模第21 d取小鼠肺组织标本行HE和Masson染色分析肺组织形态学变化,同时对肺泡灌洗液行细胞总数和分类分析;运用Ashcroft评分评估肺纤维化程度;Westen blot方法检测mTOR信号通路的变化;RT-PCR法检测胶原蛋白1(Collagen1)和胶原蛋白3(Collagen3)mRNA的表达水平。结果实验组与对照组相比,肺泡炎和肺纤维化程度明显加重,肺组织内充填大量炎细胞及纤维病灶。实验组Ashcroft评分较对照组显著升高(P0.05),同时mTOR信号通路在肺组织内明显活化并伴有Collagen1和Collagen3 mRNA水平增加。结论 mTOR信号通路的异常活化促进了肺纤维化形成。     

喜炎平注射液对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的作用及机制研究

目的 观察喜炎平注射液对博莱霉素(bleomycin,BLM)所致小鼠肺纤维化的作用并探讨可能的机制.方法 将昆明小鼠随机分为对照组、喜炎平(XYP)组、博来霉素(BLM)模型组、BLM+XYP组.经气管内1次性灌注BLM复制肺纤维化动物模型,治疗组造模后同时予尾静脉注射喜炎平直至第28天实验结束,药物干预后第7天、28天分别处死动物,第7天测定肺湿干重比(W/D),髓过氧化物酶(MPO)活性,苏木精-伊红(HE)染色观察肺泡炎症,第28天测定羟脯氨酸(HYP)含量及前Ⅰ型胶原蛋白mRNA(procollagenl mRNA)表达水平,Masson染色观察肺纤维化程度.结果 第7天,BLM+ XYP组小鼠较BLM组的肺泡炎程度明显减轻,肺W/D及MPO活性降低(P＜0.05),第28天,BLM+ XYP组小鼠肺组织HPY含量、procollagen I mRNA表达水平较BLM组明显降低(P＜0.05),Massor染色显示胶原沉积减少,肺纤维化程度减轻.结论 喜炎平对博莱霉素所致小鼠肺纤维化具有一定的干预作用,其机制可能与其抗炎作用有关.     

姜酮在博来霉素诱导小鼠肺纤维化中的保护作用及机制研究

目的 观察并探究姜酮(zingerone, ZO)在博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化中的疗效及潜在分子机制。方法 将40只雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为4组,依次为:对照组、模型组、低剂量ZO治疗组和高剂量ZO治疗组。给予小鼠单次气管内注射BLM (5mg/kg)建立肺纤维化模型。低剂量ZO治疗组和高剂量ZO治疗组小鼠给予不同浓度ZO灌胃处理。HE染色及Masson染色观察肺病理损伤及纤维化状况;试剂盒检测肺组织氧化应激水平;碱水裂解法检测肺组织羟脯氨酸的含量;Western blot法检测肺组织中collagen Ⅰ、α-SMA及NRF2的蛋白表达状况。结果 与对照组比较,模型组小鼠出现了明显的肺病理损伤及纤维化,同时氧化应激明显升高而NRF2蛋白表达明显降低;ZO预处理可明显减轻BLM所致的小鼠肺纤维化和氧化应激,同时上调NRF2蛋白表达。结论 姜酮具有减轻博来霉素小鼠肺纤维化的潜力,其机制与NRF2的激活有关。     

Prominin-1/CD133＋肺上皮祖细胞抑制博来霉素诱导的肺纤维化

博来霉素诱导的肺损伤小鼠模型为研究特发性肺纤维化及预后不良的进行性间质性肺疾病提供了一条有效的途径。瑞士学者Germano D等发现以祖细胞为基础的治疗策略联合其抗炎作用在整体肺纤维化中发挥组织修复的保护作用。该研究发表于Am J Respir Crit Care Med上。