miR-29对腹膜间皮细胞EMT的作用

目的观察miR-29a对高糖刺激人腹膜细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)导致上皮细胞-间充质细胞转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的影响。方法应用高糖刺激HPMCs,建立HPMCs EMT模型,运用Real time PCR检测高糖刺激HPMCs不同浓度及不同时间后上皮细胞标志物E-cadherin及间充质细胞标志物α-SMA和FN信号分子的表达水平及miR-29a表达水平变化。然后用miR-29a inhibitor转染HPMCs下调miR-29a表达,运用Real time PCR检测miR-29a表达水平及EMT相关标志物E-cadherin、α-SMA、FN等信号分子的变化水平。结果 Real time PCR结果显示,不同浓度及不同时间葡萄糖刺激均可使HPMCs的间充质细胞标志物α-SMA(不同浓度:1.5%1.970±0.153比1,F=7.692,P=0.008;2.5%3.291±0.265比1,F=4.479,P0.001;4.25%4.301±0.346比1,F=5.496,P0.001;不同时间:6h 2.161±0.202比1,F=6.563,P=0.001;12h 2.820±0.285比1,F=5.111,P0.001;24h 3.291±0.265比1,F=4.479,P0.001;48h 3.980±0.407比1,F=9.377,P=0.006)、FN(不同浓度:1.5%1.630±0.157比1,F=7.092,P=0.002;2.5%2.910±0.199比1,F=4.000,P0.001;4.25%3.601±0.301比1,F=5.575,P0.001;不同时间:6h 1.761±0.172比1,F=7.144,P=0.002;12h 2.390±0.170比1,F=4.499,P0.001;24h 2.910±0.199比1,F=4.000,P0.001;48h 3.601±0.300比1,F=4.570,P0.001)表达逐渐增加,上皮细胞标志物E-cadherin(不同浓度:1.5%0.693±0.065比1,F=4.665,P=0.001;2.5%0.452±0.045比1,F=4.994,P0.001;4.25%0.302±0.030比1,F=4.000,P0.001;不同时间:6h 0.802±0.084比1,F=4.000,P=0.012;12h 0.630±0.070比1,F=7.030,P=0.001;24h 0.452±0.045比1,F=4.994,P0.001;48h 0.290±0.030比1,F=4.000,P0.001)表达逐渐减少,提示HPMCs发生EMT改变。并且随着葡萄糖浓度升高及作用时间延长,miR-29a(不同浓度:1.5%1.452±0.147比1,F=13.411,P=0.001;2.5%3.120±0.320比1,F=10.372,P0.001;4.25%4.130±0.368比1,F=12.497,P0.001;不同时间:6h 1.330±0.114比1,F=5.788,P=0.001;12h2.310±0.173比1,F=5.546,P0.001;24h 3.100±0.236比1,F=10.372,P0.001;48h 3.310±0.211比1,F=4.929,P0.001)表达逐渐升高。Real time PCR结果表明,与高糖组相比,应用miR-29a inhibitor转染HPMCs后,α-SMA(1.871±0.206比3.291±0.265,F=0.104,P=0.002)、FN(1.782±0.156比2.910±0.199,F=0.091,P=0.002)表达减少,E-cadherin(0.873±0.085比0.452±0.045,F=0.760,P=0.002)表达升高。结论高糖以浓度依赖及时间依赖的方式诱导EMT,并且EMT与miR-29a表达正相关。应用miR-29a inhibitor下调miR-29a表达能够部分逆转HPMCs EMT的发生。     

不同血液净化技术的联合应用对维持性血液透析患者矿物质和骨异常的影响

目的通过观察不同血液净化方式的联合应用对血液透析患者血清中骨代谢指标及骨质疏松患病率的影响,来评价血液透析方式的不同组合对血液透析患者矿物质和骨异常(mineral and bone disorder,MBD)的影响。方法维持性血液透析患者90例,随机分为血液透析组(对照组或HD组)、血液透析加血液透析滤过组(HD+HDF组)、血液透析加血液灌流组(HD+HP组),每组30例,观察6个月,比较组内及组间6个月前后血钙、血磷、全段甲状旁腺激素(intact parathyroid hormone,iPTH)、成纤维生长因子23(fibroblast growth factor23,FGF-23)、β-I型胶原羧基末端肽(β-Type I collagen carboxy-terminal peptide,β-CTX)、I型前胶原氨基末端肽(Type I procollagen amino-terminal peptide,PINP)、骨质疏松患病率等指标的变化来评价不同透析方式的组合对血液透析患者MBD的影响。结果组内自身前后比较:HD组血磷[(2.21±0.55)mmol/l vs.(2.64±1.04)mmol/l,t=2.047、P=0.049]、iPTH[(427.7±44.00)pg/ml vs.(452.1±43.00)pg/ml,t=2.140,P=0.038]变化有统计学差异;HD+HDF组的iPTH下降有统计学差异[(465.3±43.02)pg/ml vs.(431.0±37.39)pg/ml,t=3.298,P=0.007];HD+HP组的iPTH[(457.4±60.01)pg/mlvs.(389.1±29.89)pg/ml,t=5.598,P=0.001)、β-CTX[(2.73±1.16)ng/ml vs.(2.13±1.51)ng/ml,t=2.142,P=0.045];PINP[(157.92±31.16)ng/mlvs.(140.76±36.13)ng/ml,t=2.106,P=0.047];FGF-23[(461.16±101.69)ng/ml vs.(397.30±63.18)ng/ml,t=2.922,P=0.011]下降均有统计学意义。组间比较6个月后,HD+HDF组PINP为(147.33±40.72)ng/ml,HD组PINP为(165.32±43.11)ng/ml,二者比较有统计学差异(t=1.969,P=0.048);HD+HDF组FGF-23(465.38±101.36)ng/ml,HD组FGF-23(403.56±96.81)ng/ml,二者比较HD+HDF组更低,有统计学差异(t=2.415,P=0.019);组间比较6个月后,HD+HP组与HD组比较,血磷[(2.02±0.81)mmol/L vs.(2.64±1.04)mmol/L,t=3.221,P=0.003]、iPTH[(389.1±29.89)pg/ml vs.(452.1±43.0)pg/ml,t=6.661,P=0.005]、β-CTX[(2.13±1.51)ng/ml vs.(2.95±1.28)ng/ml,t=2.278,P=0.031]、PINP[(140.76±36.13)ng/ml vs.(165.32±43.11)ng/ml,t=2.339,P=0.028]、FGF-23[(397.30±63.18)ng/ml vs.(465.38±101.36)ng/ml,t=3.114,P=0.003],上述指标HD+HP组较HD组更低,均有统计学意义;组间比较6个月后,HD+HP组与HD+HDF组比较iPTH分别为(389.1±29.89)ng/ml、(431.0±37.39)ng/ml,HD+HP组更低,有统计学意义(t=7.303,P=0.000)。骨质疏松患病率:对照组观察期后骨质疏松和骨量低下的病例数增加,但无统计学意义;HD+HDF组、HD+HP组骨质疏松的病例数有减少,亦无统计学意义(P0.05)。结论不同的血液透析方式的联合使用对维持性血液透析患者MBD影响不同;血液透析联合血液透析滤过或血液灌流的治疗方式较单纯血液透析有利MBD的改善;血液透析联合血液灌流在骨代谢指标的改善方面更具优势。     

干扰素-γ与间充质干细胞在免疫抑制中的协同作用及机制研究

目的 探讨干扰素-γ(IFN-γ)对正常人骨髓间充质干细胞(MSC)免疫活性的影响,阐明IFN-γ与MSC在免疫抑制中的协同作用.方法 ①ELISA法检测IFN-γ(终浓度100 ng/ml)对正常人骨髓来源MSC前列腺素E2(PGE2)、肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平的影响.②RT-PCR法检测100 ng/ml IFN-γ作用下MSC内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)基因表达水平变化.③体外刺激正常人外周血T细胞增殖,并与正常人骨髓来源MSC共培养,检测T细胞增殖水平;在共培养体系中分别加入重组人IFN-γ(100 ng/ml)及鼠抗人IFN-γ单克隆抗体(单抗,5μg/ml),检测T细胞增殖水平变化.结果 ①MSC单独培养24 ～ 48 h可检测到PGE2、HGF、TGF-β1三种细胞因子表达;IFN-γ可促进MSC上述细胞因子的表达[实验组及对照组PGE2、HGF、TGF-β1表达水平分别为(1715.5 ±628.6) pg/ml对(1344.5±709.4) pg/ml;(4031.8±1496.8) pg/ml对(2452.4±1375.3)pg/ml;(1753.5±413.8) pg/ml对(1026.6±450.5) pg/ml,P值分别为0.001、0.011及＜0.001].②MSC单独培养48 h后,RT-PCR法未检测到IDO基因表达.与IFN-γ共培养后,IDO基因呈高水平表达.③在体外MSC可以显著抑制T细胞增殖,外源性IFN-γ不影响MSC对T细胞增殖的抑制作用[T细胞增殖抑制率分别为(40.4±10.9)％和(36.7±7.4)％,P=0.272];在反应体系中加入抗IFN-γ单抗后,MSC抑制T细胞增殖作用显著减弱[T细胞增殖抑制率分别为(40.4±10.9)％和(23.9±7.6)％,P =0.002].结论 MSC组成性表达PGE2、HGF及TGF-β1等免疫抑制性细胞因子,在一定水平IFN-γ作用下,MSC分泌上述3种细胞因子水平明显上调,IDO mRNA表达水平显著增高,MSC免疫活性增强.骨髓MSC在体外可以显著抑制T淋巴细胞增殖,IFN-γ与MSC在免疫抑制中具有协同效应.     

白细胞介素17A与老年腹部手术患者术后认知功能障碍的相关性

目的探讨老年腹部手术患者术后血清白细胞介素(IL)-17A、转化生长因子(TGF)-β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平变化及与术后认知功能障碍(POCD)发生的相关性。方法试验组选取红旗医院2015年9月至2016年4月普外科56例老年腹部手术患者,最终50例完成试验,男32例,女18例,年龄65~79岁,ASA分级Ⅰ~Ⅱ级,简易智能量表(MMSE)>23分,所有患者术前1 d和术后7 d进行相同神经认知功能测评。采用国际POCD研究组推荐的Z分法进行患者术后认知功能判定,50例分为POCD组13例和非POCD组37例。分别在麻醉诱导前10 min(T0)、术毕30 min(T1)、术后1 d(T2)、术后3 d(T3)采集静脉血离心取血清酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清细胞因子IL-17A、TGF-β、IL-6和TNF-α的浓度。结果 IL-17A在T1、T2、T3时,POCD组[(93.85±16.12)、(111.03±17)、(83.76±20.82)ng/L]比非POCD组[(84.59±9.14)、(93.78±10.59)、(73.51±8.15)ng/L]明显升高(P值分别为0.007、0.047、0.004),IL-6在T1、T2时POCD组[(56.63±8.00)、(45.76±7.16)ng/L]比非POCD组[(42.9±7.91)、(36.09±6.92)ng/L]明显升高(P值分别为0.006、0.023),TNF-α在T1、T2时POCD组[(32.19±2.49)、(30.33±1.96)ng/L]比非POCD组[(30.61±1.95)、(30.61±0.77)ng/L]明显升高(P值分别为0.004、0.043),TGF-β在T3时POCD组[(42.81±2.46)μg/L]比非POCD组[(35.90±1.60)μg/L]明显升高(P=0.007)。Spearman相关分析,IL-17A在T2时与复合Z分显著相关(r=0.426,P=0.002),IL-6在T1时与复合Z分显著相关(r=0.346,P=0.014),TNF-α在T1时与复合Z分显著相关(r=0.382,P=0.047),TGF-β在T3时与复合Z分显著相关(r=0.537,P<0.001)。结论老年腹部手术患者术后血清IL-17A、IL-6、TNF-α和TGF-β增高促进POCD发生。     

非小细胞肺癌患者化疗前后血清VEGF/血小板数和TGF-β1检测的临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者化疗前后血清VEGF/血小板数和TGF-β1浓度的变化,探讨两者在病情监测中的临床价值。方法 72例NSCLC患者化疗前采用酶联免疫法测定血清VEGF/血小板数和TGF-β1浓度,化疗采用GP方案,连用2周期,治疗结束后1周再次测定血清VEGF/血小板数和TGF-β1浓度,并行胸部CT检查,根据CT结果分为化疗有效组(完全缓解+部分缓解)和无效组(病情稳定+疾病进展),组间比较采用t检验,以P0.05为差异有统计学意义。结果 NSCLC患者化疗前血清VEGF/血小板数、TGF-β1浓度分别为(0.803±0.078)10~(-6)pg、45.56±4.54ng/ml,均高于对照组的(0.539±0.027)10~(-6)pg、16.02±2.32ng/ml,差异有统计学意义(t=19.57、39.56,P0.05)。不同性别、年龄、病理类型和分化程度NSCLC患者之间血清VEGF/血小板数、TGF-β1浓度接近,差异均无统计学意义(P0.05)。化疗有效组化疗前血清VEGF/血小板数为(0.810±0.121)10~(-6)pg,化疗后下降至(0.415±0.098)10~(-6)pg,差异有统计学意义(t=16.84,P0.05);化疗无效组化疗前血清VEGF/血小板数为(0.815±0.104)10~(-6)pg,化疗后浓度明显升高,差异有统计学意义(t=24.42,P0.05)。化疗有效组化疗前血清TGF-β1浓度为42.57±4.47ng/ml,化疗后浓度下降至20.75±3.43ng/ml,差异有统计学意义(t=26.72,P0.05);化疗无效组化疗前血清TGF-β1浓度为41.90±5.26ng/ml,化疗后浓度为45.51±4.48ng/ml,差异有统计学意义(t=2.38,P=0.030)。结论血清VEGF/血小板数和TGF-β1浓度与肿瘤活动度密切相关,可用于判定NSCLC化疗近期疗效。     

iPSC-MSC来源的外泌体对LPS刺激肺泡巨噬细胞产生炎性因子的影响

目的探讨i PSC-MSC来源的外泌体(exosome,Exo)对LPS刺激的肺泡巨噬细胞释放炎性因子的作用。方法采用旋转超滤法提纯i PSC-MSC外泌体,以无外泌体培养基培养肺泡巨噬细胞NR8383,分别给予Exo(50μg/ml)、LPS(50ng/ml)、LPS(50ng/ml)+Exo(50μg/ml)培养24h,以不含Exo和LPS培养为对照组,利用酶联免疫标记法(ELISA)检测各组上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白浓度。结果提取物经透射电镜观察为圆形或半圆形囊泡,直径40~100nm,表达Exo标志物CD9和CD63;LPS组上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度(435.38±36.31pg/ml、319.76±39.14pg/ml和408.33±43.44pg/ml)与空白对照组(37.48±8.75pg/ml、33.51±7.88pg/ml和37.73±8.46pg/ml)和Exo组(38.71±9.14pg/ml、32.05±6.81pg/ml和42.84±6.54pg/ml)比较显著上调(P0.01);LPS+Exo组TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度(369.30±32.74pg/ml、249.23±36.77pg/ml和328.91±46.45pg/ml)与LPS组相比,明显减少(P0.05);空白对照组与Exo组的TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度无显著性差异。结论成功富集Exo;i PSC-MSC来源的Exo可抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞表达炎性因子。     

初诊活动性肺结核患者血浆IL-6，IL-17，IL-37及TIM-3水平表达及其临床意义

目的　探讨初诊肺结核患者血浆白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-37（IL-37）及T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)水平变化及其临床意义。方法　收集2018年1月～2020年10月百色市人民医院收治的活动性肺结核患者57例、肺炎患者50例和健康对照40例。57例肺结核患者中菌阳肺结核31例,菌阴肺结核26例。57例肺结核按病情轻重、病程长短及病变范围分为轻症组32例和重症组25例。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组血浆IL-6,IL-17,IL-37及TIM-3水平,并进行比较。结果　肺结核组血浆IL-6（41.37±13.50 pg/ml vs 26.28±9.16pg/ml,3.05±1.08 pg/ml）,IL-17（62.50±10.73pg/ml vs 30.47±7.18pg/ml,16.13±5.86pg/ml）,IL-37（14.63±4.18pg/ml vs 9.85±2.74pg/ml,4.10±1.02 pg/ml）及TIM-3（18.17±5.16ng/ml vs 11.80±3.52ng/ml,6.24±2.15 ng/ml）水平均明显高于肺炎组和对照组,差异均有统计学意义（t=7.338~13.273,均P＜0.001）。菌阳肺结核组血浆IL-6（52.60±15.71pg/ml vs 30.16±8.95 pg/ml）,IL-17（72.35±15.20 pg/ml vs 46.52±9.13 pg/ml）,IL-37（16.50±6.14 pg/ml vs 12.48±3.17 pg/ml）及TIM-3（21.70±7.93ng/ml vs 15.21±4.92 ng/ml）水平均明显高于菌阴肺结核组,差异具有统计学意义（t=8.472,10.161,6.925,9.106,均P＜0.001）。重症组血浆IL-6（56.38±17.26pg/ml vs 25.84±9.27pg/ml）,IL-17（79.50±16.38 pg/ml vs 48.20±8.74 pg/ml）,IL-37（18.48±6.20 pg/ml vs 10.82±3.26pg/ml）及TIM-3（23.26±8.15ng/ml vs 13.90±4.71ng/ml）水平明显高于轻症组,差异具有统计学意义（t=12.642,14.513,10.205,13.172,均P＜0.001）。结论　血浆IL-6,IL-17,IL-37及TIM-3水平在肺结核患者中明显升高,对判断肺结核严重程度有一定的价值。     

卵巢癌患者外周血调节性T细胞与TGF-β、IL-10检测及其临床意义

目的探讨卵巢癌患者手术前后及化疗前后外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)比例,与TGF-β1、TGF-β2、IL-10含量变化的意义。方法收集30例卵巢癌患者手术前后及化疗后的外周静脉血。采用流式细胞术检测外周血Treg比例;用ELISA法检测血清中细胞因子TGF-β1、TGF-β2、IL-10的含量,并以同期30例健康体检者为对照组。结果与健康对照组比较,卵巢癌患者CD4~+CD25~+CD127LOW占CD4~+T淋巴细胞的比率、CD4~+CD25~+Foxp3~+占CD4~+T淋巴细胞比率及TGF-β1、IL-10含量明显增高、TGF-β2明显降低,差异有统计学意义(P0.01),手术后及化疗后外周血CD4~+CD25~+CD127LOW占CD4~+T淋巴细胞的比率分别为[(1.610±0.465)%],[(1.182±0.195)%],[(1.033±0.210)%];CD4~+CD25~+Foxp3~+占CD4~+T淋巴细胞比率分别为[(2.305±0.77)%],[(1.573±0.45)%],[(0.986±0.37)%];细胞因子TGF-β1含量分别为(425.1±239.8)pg/ml,(287.5±239.8)pg/ml,(196.7±192.5)pg/ml;TGF-β2含量分别为(47.76±25.36)pg/ml,(32.22±17.81)pg/ml,(19.59±13.15)pg/ml;IL-10含量分别为(42.13±61.22)pg/ml,(17.34±11.21)pg/ml,(9.67±4.05)pg/ml,手术后及化疗后卵巢癌患者CD4~+CD25~+CD127LOW占CD4~+T淋巴细胞的比率、CD4~+CD25~+Foxp3~+占CD4~+T淋巴细胞比率及TGF-β1、TGF-β2、IL-10的含量较术前明显减低(P0.01)。结论卵巢癌患者手术后及化疗后外周血CD4~+CD25~+CD127LOW占CD4~+T淋巴细胞的比率、CD4~+CD25~+Foxp3~+占CD4~+T淋巴细胞比率及血清中细胞因子TGF-β1、TGF-β2、IL-10水平明显降低,动态监测它们的水平变化可作为评估卵巢癌患者免疫功能的可靠指标,对其辅助诊断及疗效观察的评价具有重要临床意义。     

Th17细胞/Treg细胞失衡在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

目的:探讨Th17细胞、CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)及其特异性转录因子RORγt和FoxP3在儿童过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)发病机制中的作用,为儿童HSP的治疗从调控Th17/Treg失衡作为切入点提供一条新思路。方法:以2012年2月——2013年3月我院(四川省人民医院)儿科诊治的初次发病的HSP急性期患儿40例作为研究对象,以及同期来我院体检的健康儿童40例作为对照,采用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术测定外周血单个核细胞中RORγt mRNA和FoxP3 mRNA的表达水平;用流式细胞术测定外周血T淋巴细胞中Th17细胞和Treg细胞的表达水平;用双抗夹心ABC-ELISA技术测定血清IL-17A、TGF-β1、IL-2和IL-6浓度。结果:HSP组Th17细胞(2.75±0.60%)及RORγt mRNA(1.11±0.51)明显高于对照组Th17细胞(1.41±0.29%)及RORγt mRNA(0.65±0.24)(P0.01),而Treg细胞(4.56±1.26%)及FoxP3 mRNA(1.15±0.45)明显低于对照组Treg细胞(7.85±1.97%)及FoxP3 mRNA(2.32±1.13)(P0.01);HSP组血清IL-17A(40.40±11.81 pg/ml)、IL-6(75.38±27.19 pg/ml)、TGF-β1(309.41±81.03 pg/ml)与对照组IL-17A(20.32±10.70 pg/ml)、IL-6(25.16±8.31 pg/ml)、TGF-β1(236.34±66.01 pg/ml)相比明显升高(P0.01),而血清IL-2(25.60±13.19 pg/ml)水平与对照组(34.42±11.69 pg/ml)比较则降低(P0.01);在HSP组Th17细胞表达与RORγt mRNA、IL-17A、IL-6表达呈正相关,相关系数分别为0.887,0.938,0.934(P0.01);Treg细胞表达与FoxP3 mRNA,IL-2表达呈正相关,相关系数分别为0.834,0.932(P0.01)。结论:急性期HSP患儿存在Th17细胞、RORγt mRNA及IL-17A表达水平升高,Treg细胞和FoxP3 mRNA表达水平降低,Th17/Treg细胞的失衡;急性期HSP患儿存在血清TGF-β1、IL-6水平增高,IL-2水平降低,且Th17细胞表达水平与IL-6表达呈正相关,Treg细胞表达水平与IL-2表达呈正相关。     

血清miR-181b及miR-210在妊娠期高血压疾病中表达及与炎性细胞因子的相关性

目的探讨妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders in pregnancy, HDP)患者血清miR-181b、miR-210表达变化,分析其与白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的关系。方法 HDP患者226例,其中妊娠期高血压(gestational hypertension, GH)60例(GH组)、轻度子痫前期(mild preeclampsia, MP)90例(MP组)、重度子痫前期(servere preeclampsia, SP)76例(SP组),同期健康孕妇60例为对照组。检测4组血清miR-181b mRNA、miR-210 mRNA相对表达量及IL-1β、IL-6及TNF-α水平;Pearson相关分析HDP患者血清miR-181b mRNA、miR-210 mRNA相对表达量与IL-1β、IL-6及TNF-α的相关性。结果对照组、GH、MP、SP组血清miR-181b mRNA相对表达量(1.42±0.65、5.73±1.60、10.94±4.28、17.13±8.16)、miR-210 mRNA相对表达量(0.84±0.13、3.62±1.05、4.74±1.36、7.92±2.17),IL-1β[(2.60±0.84)、(11.26±2.53)、(17.65±6.24)、(23.92±9.16)ng/L]、IL-6[(90.26±27.45)、(106.35±33.74)、(128.42±36.18)、(151.46±40.27)ng/L]及TNF-α[(12.40±2.28)、(19.25±4.42)、(35.84±6.53)、(64.73±9.50)ng/L]水平依次增高(P0.05);HDP患者血清miR-181b mRNA相对表达量与IL-1β、IL-6、TNF-α呈正相关(r=0.694,P0.001;r=0.735,P0.001;r=0.846,P0.001)、miR-210 mRNA相对表达量与IL-1β、IL-6、TNF-α呈正相关(r=0.548,P=0.003;r=0.718,P0.001;r=0.815,P0.001)。结论 HDP患者miR-181b及miR-210表达上调,且上调程度与HDP病情严重程度及IL-1β、IL-6、TNF-α水平变化相关,可能参与HDP的发生、发展。     

老年膝关节骨性关节炎患者血清脂联素和白细胞介素-17及转化生长因子-β_1水平变化及临床意义

目的探讨血清脂联素(adiponectin, APN)、白细胞介素-17(interleukin-17, IL-17)及转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1, TGF-β_1)水平与老年膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis, KOA)严重程度的相关性,评估其对老年KOA的诊断价值。方法 170例老年KOA患者为KOA组,70例体检健康者为对照组,采用ELISA法检测血清APN、IL-17及TGF-β_1水平,并进行2组及不同K-L分级患者间比较;绘制ROC曲线,分析APN、IL-17及TGF-β_1对老年KOA的诊断价值;采用Pearson相关性分析血清APN、IL-17、TGF-β_1水平与K-L分级等临床指标的相关性。结果 KOA组血清APN[(3 162.40±418.25)μg/L]、IL-17[(32.75±16.38)ng/L]及TGF-β_1[(54.87±13.16)μg/L]水平均高于对照组[(684.72±205.63)μg/L、(15.84±8.20)ng/L、(10.42±2.63)μg/L](P0.05),K-L分级Ⅳ级、Ⅲ级、Ⅱ患者血清APN、IL-17及TGF-β_1水平依次降低(P0.05);当血清APN、IL-17及TGF-β_1最佳截断值分别为2 483.50μg/L、27.42 ng/L、40.35μg/L时,三项联合诊断老年KOA的AUC(0.960)大于APN、IL-17、TGF-β_1单独检测的AUC(0.825、0.796、0.863),其敏感度为90.7%,特异度为83.5%;老年KOA患者血清APN、IL-17、TGF-β_1水平与K-L分级呈正相关(r=0.316,P=0.004;r=0.241,P=0.026;r=0.289,P=0.015),与年龄、性别、体质量指数无明显相关性(P0.05)。结论血清APN、IL-17及TGF-β_1水平升高与老年KOA严重程度密切相关,三项联合检测对老年KOA诊断有参考价值。     

尾加压素II在Dahl盐抵抗大鼠血压调节中的作用及机制研究

目的我们既往在容量超负荷而血压维持正常的腹膜透析患者中,发现血浆尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)水平升高,提示UⅡ在这类患者的血压调节中发挥作用,但其调节机制未明。本研究选取与容量超负荷而血压维持正常的特性相类似的Dahl盐抵抗大鼠模型,研究其在高盐负荷下血压调节,循环及肾脏的UII表达,探讨UⅡ在Dahl盐抵抗(dahl salt-resistant,SR)大鼠血压调节中的作用及机制。方法 Dahl盐敏感(dahl salt-sensitive,SS)和SR大鼠,UII受体敲除的小鼠及C57BL/6野生型小鼠,高盐负荷6~8周,检测基线及高盐负荷6~8周后血压,血浆UII,尿UII,肾脏及主动脉的UII及UII受体的m RNA及蛋白的表达,24h尿钠排泄,24h肌酐清除率。结果 1高盐负荷6周后SS大鼠血压显著高于SR大鼠[(160±13)mm Hg比(114±6)mm Hg,t=8.191,P0.001];SR大鼠血浆UII水平显著高于SS大鼠[(60.3±3.8)pg/ml比(51.6±13.5)pg/ml,t=2.450,P=0.021]。高盐负荷4周后SR大鼠尿UII的浓度显著高于SS大鼠[(236.90±27.89)ng/g比(114.70±6.28)ng/g,t=3.898,P=0.003)],24h尿钠排泄量[4周时:(3.243±0.306)mmol比(1.753±0.127)mmol,t=3.942,P=0.010];6周时:(2.870±0.134)mmol比(1.713±0.077)mmol,t=3.942,P0.001]和6w时肌酐清除率亦显著升高[(6.532±0.269)ml/min比(2.632±0.172)ml/min,t=12.210,P0.001]。2高盐负荷6w后,SR大鼠的肾脏UII受体(现称为UT)的蛋白表达明显高于SS大鼠[(0.059±0.008)比(0.036±0.001),t=4.540,P=0.010],UII及受体的表达主要位于肾小管上皮细胞3在高盐饮食后第4周,UII受体敲除的小鼠收缩压显著高于野生普通型小鼠[(113±3)mm Hg比(102±4)mm Hg,=4.750,t P=0.003],而第4周24h尿钠排泄量[(3.11±0.60)μmol比(4.29±0.68)μmol,t=-2.785,P=0.036]及第2周肌酐清除率显著降低[(0.23±0.02)ml/min比(0.11±0.01)ml/min,t=3.018,P=0.016]。结论本研究首次证实UII在高盐负荷后盐抵抗大鼠的血压调节中发挥作用,机制可能与UII对小动脉舒张作用及促进肾小管上皮细胞对钠的排泄有关。     

2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化患者外周血T淋巴细胞和相关细胞因子的变化及研究

目的探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)合并颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis, CAS)患者外周血T淋巴细胞比率、相关细胞因子表达及其与颈动脉内膜中层厚度(intima-media thickness, IMT)和糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin, HbA_1c)的相关性。方法 80例T2DM患者,其中有CAS斑块者40例为CAS组,无CAS斑块者40例为无CAS组;体检健康者40例为对照组。3组采用流式细胞仪测定外周血Th1、Th2、Th17及Treg细胞比例,采用ELISA法检测血清白细胞介素(interleukin, IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、干扰素(interferon, IFN)-γ水平,并测量IMT和HbA_1c水平,分析外周血T淋巴细胞与IMT和HbA_1c的相关性。结果 CAS组Th1细胞和Th17细胞百分率[(19.47±2.45)%、(2.34±0.33)%]及IL-2[(211.24±31.49)ng/L]、IL-17[(19.54±3.27)ng/L]、IFN-γ[(19.72±3.21)ng/L]水平、HbA_1c[(11.28±1.56)%]、IMT[(1.45±0.40)mm]明显高于无CAS组[(15.24±1.62)%、(1.50±0.28)%、(184.32±25.74)ng/L、(15.76±2.08)ng/L、(15.68±2.07)ng/L、(8.92±1.09)%、(1.01±0.27)mm]和对照组[(10.02±1.14)%、(0.96±0.25)%、(128.46±17.49)ng/L、(7.32±0.99)ng/L、(10.43±1.21)ng/L、(5.22±0.84)%、(0.76±0.13)mm](P0.05),无CAS组高于对照组(P0.05);CAS组Th2细胞和Treg细胞百分率[(2.25±0.49)%、(4.03±0.75)%]及IL-4[(4.72±0.32)ng/L]、IL-6[(11.21±1.04)ng/L]、IL-10[(11.07±1.27)ng/L]水平低于无CAS组[(2.97±0.67)%、(5.67±1.33)%、(5.36±0.61)ng/L、(13.24±1.96)ng/L、(14.77±1.93)ng/L]和对照组[(3.36±0.83)%、(6.57±1.52)%、(7.32±0.95)ng/L、(17.75±2.36)ng/L、(22.72±2.59)ng/L](P0.05),无CAS组低于对照组(P0.05);CAS组患者IMT与Th1、Th17细胞水平呈正相关(r=0.809,P0.001;r=0.648,P0.001),与Th2、Treg细胞水平呈负相关(r=-0.580,P0.001;r=-0.643,P0.001),HbA_1c与Th1、Th17细胞水平呈正相关(r=0.601,P0.001;r=0.528,P0.001),与Th2、Treg细胞水平呈负相关(r=-0.844,P0.001;r=-0.602,P0.001)。结论糖尿病合并CAS患者存在Th1、Th17细胞比率上调,Th2、Treg细胞比率下调,IL-2、IL-17、IFN-γ分泌增多,IL-4、-6、-10分泌减少,且与患者疾病进展程度相关。     

胰腺肿瘤细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达及意义

目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导分子(EMMPRIN)在胰腺肿瘤组织、血清以及肿瘤微环境中的表达及临床意义。方法应用QRT-PCR、免疫组化以及ELISA方法检测50例胰腺导管细胞癌(PDCA)、20例导管内乳头状黏液腺瘤(IPMN)、10例浆液性囊腺瘤(SCN)、10例黏液性囊腺瘤(MCN)、10例胰腺神经内分泌瘤(NET)患者肿瘤组织、10例健康对照组胰腺组织及血清中EMMPRIN的表达,分析EMMPRIN表达与患者性别、年龄、组织学分化程度、肿瘤神经浸润、淋巴结转移、临床分期的关系。结果胰腺各组肿瘤组织中EMMPRIN m RNA水平明显增高,即PDCA[(4 148.14±1 825.36)copies/μl,P=0.000]、NET[(4 654.23±2 168.48)copies/μl,P=0.000]、IPMN[(3 332.54±1 837.47)copies/μl,P=0.000]、SCN[(3 328.66±1 618.36)copies/μl,P=0.000]及MCN[(2 275.27±1 019.40)copies/μl,P=0.000]是正常胰腺组织[(649.90±408.22)copies/μl]的4.3~7.2倍,差异有统计学意义;在标本血清中EMMPRIN蛋白在PDCA[(5.53±4.14)ng/100μl,P=0.000]、IPMN[(3.28±2.77)ng/100μl,P=0.001]、NET[(5.48±4.21)ng/100μl,P=0.002]、SCN[(1.13±0.49)ng/100μl,P=0.007]、MCN[(2.77±4.24)ng/100μl,P=0.000]的表达均明显高于正常对照组[(0.63±0.18)ng/100μl],差异有统计学意义。EMMPRIN在肿瘤组织及血清中的表达与胰腺导管细胞癌的分期有关(χ2组织=0.278,P=0.041;χ2血清=0.424,P=0.001),伴有神经浸润患者较无神经浸润患者血清中EMMPRIN表达增加(χ2血清=4.728,P=0.03),EMMPRIN表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小及淋巴结转移无明显相关。结论 EMMPRIN在各种胰腺肿瘤组织及血清中高表达,可能与其恶性程度相关。     

Gas6在免疫性血小板减少症患者中表达增高及临床意义

目的探究Gas6在免疫性血小板减少症(ITP)患者中的表达情况及其临床意义。方法以2013年10月~2015年12月于上海长海医院血液科确诊的35例ITP患者外周血作为实验组,以同期体检的35例健康个体外周血作为对照组,两组样本分离血浆后以酶联免疫吸附法(ELISA)检测Gas6,IFN-α,IL-4,IFN-γ和IL-17蛋白表达水平,组间比较采用两独立样本t检验,对Gas6与IFN-α等细胞因子的关系进行Pearson相关性分析。结果 Gas6在实验组与对照组的表达水平为27.28±7.56ng/ml vs 20.51±5.39ng/ml(t=4.314,P0.0001);IFN-γ在实验组与对照组的表达水平为221.67±57.64 pg/ml vs 45.32±16.79 pg/ml(t=17.38,P0.0001);IL-4在实验组与对照组的表达水平为113.86±26.48 pg/ml vs 49.87±14.98 pg/ml(t=12.44,P0.0001);IL-17在实验组与对照组的表达水平为168.96±47.88 pg/ml vs109.56±28.97 pg/ml(t=6.28,P0.0001);IFN-α在实验组与对照组的表达水平为34.83±8.12 pg/ml vs 29.89±5.76pg/ml(t=2.936,P=0.0045),差异均具有统计学意义(P0.05)。Pearson相关性分析显示Gas6与IL-17,IL-4,IFN-γ呈正相关(r=0.564,0.486,0.449,P均0.05),差异具有统计学意义,与IFN-α不具有相关性。结论 Gas6可能通过影响Th细胞亚群细胞因子的分泌参与了ITP致病过程,是临床上治疗和预测该病的潜在靶位点。     

“补肾活血”法对骨性关节炎大鼠关节液中炎性因子的影响

目的探讨"补肾活血"法对骨性关节炎大鼠关节液中炎性因子的影响。方法 2016年5月,采用72只雄性10周龄SD大鼠,分别设为正常组、对照组和实验组,每组各24例。实验组给予牛膝煎煮液灌胃给药,正常和对照组给予同等量清水灌胃。6周后观察三组大鼠关节液中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平,同时分析膝关节软骨组织中MMP-13、ADAMTS-5 mRNA相对表达量和Makin评分。结果干预前实验组和对照组IL-1β、TNF-α、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA相对表达量和Makin评分水平均显著高于正常组,而TGF-β1均显著低于正常组(P0.05);实验组和对照组IL-1β、TNF-α、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA相对表达量、Makin评分和TGF-β1均无统计学差异(P0.05)。与干预前比较,干预后实验组IL-1β、TNF-α、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA相对表达量和Makin评分显著降低,而TGF-β1显著升高(P0.05)。干预后6w,实验组IL-1β显著低于对照组[(15.38±3.28)ng/L vs.(23.57±4.17)ng/L,P0.05];TNF-α显著低于对照组[(15.43±6.37)ng/L vs.(36.48±9.25)ng/L,P0.05];但TGF-β1显著高于对照组[(87.47±14.3)ng/L vs.(41.38±11.58)ng/L,P0.05];MMP-13 mRNA相对表达量显著低于对照组(0.54±0.21 vs.(0.92±0.28,P0.05);ADAMTS-5 mRNA相对表达量也显著低于对照组(0.61±0.21 vs.0.98±0.32,P0.05];Makin评分显著低于对照组(3.76±1.37 vs.8.54±4.12,P0.05)。结论 "补肾活血"法有助于降低骨性关节炎大鼠关节液中炎性因子水平和MMP-13等蛋白酶mRNA的表达。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中IL-37表达增高及临床意义

目的检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中IL-37的表达水平,进一步探究其在PBC致病过程中的临床意义。方法收集2013年6月~2015年8月于长海医院确诊的42例PBC患者和38例同期体检的健康对照者外周血,采用蔗糖密度梯度离心法分离PBMCs,以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PBMCs中IL-37的mRNA表达水平,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中IL-37,IL-6,IL-17,TNF-α,TGF-β,IL-18和IL-23的蛋白水平,同时记录PBC患者的病理性分期。对IL-37与IL-6,TNF-α,IL-17,TGF-β,IL-18,IL-23进行Pearson相关性分析,对IL-37与PBC疾病分期进行Spearman秩相关性分析。结果实验组与对照组IL-37的mRNA水平和蛋白水平分别为2.81±0.94 vs 1.09±0.56,356.14±169.36 pg/ml vs 86.68±48.23 pg/ml,差异具有统计学意义(t=9.811,9.462,P均0.000 1)。相关性分析表明:IL-37与IL-17,TNF-α,IL-6,TGF-β呈正相关(r=0.561 2,0.661 9,0.672 1,0.765 3;P值均0.001),与疾病分期(Ⅰ~Ⅳ)呈正相关(r_s=0.348 9,P0.05)。结论 IL-37可能参与了PBC的致病过程,对疾病预测与诊断有重要意义。     

再生障碍性贫血患者血清中IL-18及IL-18BP的表达水平及其临床意义

目的 探讨白介素18(IL-18)及IL-18结合蛋白(IL-18BP)在再生障碍性贫血(AA)患者血清中的表达及其临床意义.方法 采用ELISA法检测29例AA患者和22名正常人血清IL-18和IL-18BP水平;实时定量RT-PCR方法检测IL-18及IL-18BP的mRNA表达.结果 AA患者血清IL-18水平为(365.5±160.6) pg/ml,较正常对照组[(175.9 ±92.8) pg/ml]明显升高(P＜0.01);重型AA患者的IL-18水平[(441.3±116.9) pg/ml]较慢性AA患者的IL-18水平[(326.4±167.0)pg/ml]升高更为明显(P＜0.05);AA患者血清IL-18BP[( 1788.6±523.8)pg/ml]较正常对照组[(1083.6±489.6)pg/ml]明显升高(P＜0.05),IL-18/IL-18BP比值在AA患者明显升高.RT-PCR结果证实AA患者IL-18和IL-18BP较正常对照组均明显升高,IL-18/IL-18BP比值明显升高.结论 IL-18及IL-18BP在AA患者的免疫紊乱和发生、发展中起着一定的作用,重塑IL-18/IL-18BP平衡可能是AA治疗一个新的策略和方向.     

精索静脉曲张患者精浆TGF-β,IL-2 及IL-6 水平与精液质量的关系研究

目的 探讨精索静脉曲张（VC）患者精浆转化生长因子-β（TGF-β）, 白介素-2（IL-2）和白介素-6（IL-6）水平与精液质量的相关性。方法 选取江苏省兴化市第五人民医院2018 年1 月~2019 年12 月收治的40 例VC 患者（观察组）,同时抽取同期体检健康者40 例为对照组,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测两组研究对象精浆TGF-β, IL-2 和IL-6 等指标水平,同时采集精液进行精液质量常规检查,评价TGF-β, IL-2 和IL-6 等指标水平与VC患者精液质量的相关性。结果 观察组患者采集的精液量和精液pH 值分别为3.14±0.76ml 和7.30±0.15,对照组分别为2.97±0.81ml 和7.29±0.16, 两组比较差异无统计学意义（t=0.968,0.288,均P ＞ 0.05）,观察组患者精子密度、精子活动率、IL-2, IL-6 和TGF-β 分别为（34.65±9.02）×106/ml,(51.35±7.21)%,0.43±0.11ng/ml,0.53±0.08ng/ml 和138.61±24.92ng/ml; 对照组分别为(51.23±6.23)×106/ml, (68.04±5.16)%, 1.18±0.15ng/ml, 1.42±0.16ng/ml 和201.64±53.21ng/ml,组间比较差异具有统计学意义（t=9.566,11.906,25.501,31.466 和6.485, 均P ＜ 0.05）。精浆中的IL-2, IL-6,TGF-β 水平和VC 患者的精子密度、精子活动率呈明显的负相关性（r=-0.865 ～ -0.821, 均P ＜ 0.05）,IL-2, IL-6 和TGF-β 之间呈明显的正相关性（r=0.045 ～ 0.051, 均P ＜ 0.05）,与患者精液量和精液pH 值无明显相关性。结论 VC 患者IL-2, IL-6 和TGF-β 等细胞因子水平高低与精液质量呈明显的负相关,为阐明VC 不育机制和临床治疗提供依据。     

RAAS对血液透析患者透析过程中血压波动的影响及相关因素分析

目的研究维持性血液透析患者肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-angiotensin-aldosterone system,RAAS)水平与透析过程中血压波动的关系及相关影响因素的分析。方法选择上海市同济医院维持性血液透析的患者,根据透析过程中血压变化分为透析低血压组,透析高血压组及透析血压稳定组,比较各组患者生化、RAAS及内皮系统相关指标的变化及其相关性分析。结果透析高血压组较血压稳定组的血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)(37.022±9.482)U/L比(25.415±10.215)U/L(t=-3.618,P=0.023)、血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)(97.269±47.256)ng/L比(75.334±27.205)ng/L(t=-1.727,P=0.018)及醛固酮(aldosterone,ALD)(176.469±67.070)ng/L比(124.093±42.642)ng/L(t=-2.901,P=0.007)均明显升高,透析低血压组的ACE、Ang II及ALD较透析血压稳定组有升高趋势,但ALD水平较透析血压稳定组明显降低(163.034±53.266)ng/L比(124.093±42.642)ng/L(t=2.286,P=0.030)。血清一氧化氮(Nitric oxide,NO)水平变化趋势透析血压稳定组高于透析低血压组高于透析高血压组(74.371±27.650)μmol/L比(65.566±16.785)μmol/L比(60.430±17.906)μmol/L(F=2.024,P=0.143)。然而血清血管内皮素-1(endothelin-1,ET-1)水平与血清NO水平趋势相反[(3.650±1.291)pg/ml比(4.313±1.414)pg/ml比(4.819±1.938)pg/ml,(F=2.539,P=0.089),其中血压稳定组较透析高血压组降低明显(t=-2.208,P=0.034)。NO/ET-1比值透析低血压组及透析高血压组均低于透析血压稳定组[(15.756±3.257)及(14.035±4.845)比(20.614±7.485)],且存在统计学差异(t=-2.486,P=0.026;t=3.178,P=0.003)。通过多元逐步线性回归分析显示除RAAS及内皮功能外透析间期体质量增长(interdialysis weight gain,IDWG)(B=1.482,P=0.001)、心血管合并症(B=4.578,P=0.001)、糖尿病(B=3.038,P=0.024)、性别(B=-2.183,P=0.035)、透龄(B=-0.167,P=0.018)与透析血压变化相关。结论 1RAAS激活及内皮功能紊乱与透析患者透析过程血压波动密切相关。2透析间期容量负荷增加为导致透析高血压的原因之一。3IDWG、透龄、心血管并发症、糖尿病为影响透析过程血压波动的独立危险因素。