抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对OVA诱导的小鼠过敏性哮喘气道炎症的影响

目的观察抗小鼠TLR2胞外段单表位(mTLR2ECD)抗体(TSP-2)对OVA诱导的小鼠过敏性哮喘气道炎症的影响。方法用肺泡灌洗、组织切片及特异染色、免疫组化、ELISA法检测TSP-2对小鼠哮喘模型的气道炎症和炎症细胞的浸润以及肺组织中肺泡及支气管结构的影响。结果发现静脉给予抗体TSP-2能有效抑制气道炎症和炎症细胞的浸润。主要表现在肺泡灌洗液中的白细胞浸润减少、减轻血清中OVA特异性IgE抗体的降低以及抑制OVA诱导的小鼠肺泡毛细血管充血水肿等病理变化。结论抗体TSP-2对过敏性哮喘的病理变化有一定的抑制作用。     

抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发小鼠腹膜炎的影响

目的 观察抗小鼠TLR2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发的小鼠腹膜炎的主要作用.方法 用腹腔灌洗、细胞计数及特异染色、免疫组化、ELISA 等各种方法检测了抗体TSP-2对模型动物的扭身次数、腹腔灌洗液的伊文思兰渗出、腹腔白细胞浸润的数量变化、腹腔肥大细胞脱颗粒情况以及腹腔灌洗液离心上清中PAF和TNFa水平的影响.结果 与PBS处理组和正常兔IgG组相比,抗体TSP-2能促使小鼠因腹腔炎症引起的扭身次数减少,腹腔灌洗液中伊文思蓝OD值降低,腹腔灌洗液中白细胞渗透减少以及C48/80诱导的腹腔肥大细胞脱颗粒降低.结论 抗体TSP-2可能通过对肥大细胞脱颗粒的抑制作用减轻酵母多糖诱导的小鼠腹膜炎炎症症状.

Abstract：

Objective To observe the effect of the antibody TSP-2 against a single epitope of mouse Toll-like receptor 2 extracellular domain (mTLR2ECD) on the inflammation in mice with zymosan A-induced peritonitis. Methods In mice with peritonitis induced by intraperitoneal injection of zymosan A, pretreatments with PBS, normal rabbit IgG and TSP-2 antibody at two different doses (2.5 and 5.0 mg/kg) were administered via the tail vein. Six hours after intraperitoneal injection of zymosan A, Evans blue was injected through the tail vein, and the frequency of writhing of the mice within 20 min were recorded. The mice were then sacrificed for peritoneal lavage, and the lavage fluid was collected to assess the exudation of Evans blue in the supernatant. The peritoneal leukocyte count, mast cell degranulation and release of such inflammatory mediators as platelet activating factor (PAF) and tumor necrosis factor-a (TNFa) in the lavage fluid were observed by cell counting, specific cell staining, immunohistochemistry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results Compared with PBS or rabbit IgG groups, TSP-2 treatment resulted in significantly reduced writhing response of the mice and lowered Evans blue exudation and leukocyte count in the peritoneal lavage, with also decreased degranulation of the mast cells induced by C48/80. Conclusion TSP-2 antibody against a single epitope of mTLR2ECD inhibits the inflammatory response in mice with zymosan A-induced peritonitis.     

抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对小鼠溃疡性结肠炎外周血和肠系膜淋巴结CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞表达的影响

目的 观察抗小鼠Toll样受体2(Toll-like receptor 2)胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对溃疡性结肠炎小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞表达的影响.方法 采用硫酸葡聚糖钠(C6H7Na3O14S3,DSS)制备溃疡性结肠炎小鼠模型(UC模型),将实验小鼠随机分成四组:正常对照(NC)组、模型(MD)组、TSP-2治疗组和兔IgG治疗组.除NC组外,其他实验组均给予5％ DSS造模7d后停用造模药,药物治疗组给予后续干预治疗7d.记录分析疾病活动指数(DAI),14 d后处死小鼠,取结肠组织行HE染色;流式细胞仪检测外周血和肠系膜淋巴细胞中表达CD4+ CD25+Foxp3+的Treg细胞的百分比率,并进行统计学分析.结果 TSP-2治疗组小鼠第9～14天DAI明显低于MD组(P＜0.05);MD组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞占CD4+T细胞的百分率明显低于NC组(P＜0.05); TSP-2治疗组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg 细胞占CD4+T细胞的百分率明显高于MD组(P＜0.05);兔IgG治疗组与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TSP-2可以提高CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg数量,调节机体和肠道免疫功能,对UC发挥治疗作用.     

抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对小鼠溃疡性结肠炎肠黏膜细胞因子表达的影响

目的观察抗小鼠Toll样受体2(Toll-like receptor 2)胞外段单表位抗体TSP-2对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜细胞因子表达的影响。方法采用硫酸葡聚糖钠(C6H7Na3O14S3,DSS)制备溃疡性结肠炎小鼠模型,将实验小鼠随机分成4组:正常对照(NC)组、模型(MD)组、TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组;除NC组外,其他组均给予5%DSS造模7 d后停用造模药,TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组给予相应药物后续干预治疗7 d。记录分析疾病活动指数(DAI),14 d后处死小鼠,取结肠行HE染色;实时荧光定量RT-PCR法检测白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6和IL-1βmRNA的表达,ELISA法测小鼠肠黏膜IL-10、IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白水平,并进行统计学分析。结果 TSP-2治疗组小鼠第10～14天DAI明显低于MD组(P<0.05);TSP-2治疗组肠黏膜IL-10 mRNA和蛋白的表达量均明显高于MD组(P<0.05);同时TSP-2治疗组肠黏膜TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白的表达量均明显低于MD组(P<0.05);正常兔IgG治疗组与MD组比较,细胞因子检测数据差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 TSP-2可以提高抗炎细胞因子IL-10的水平并降低致炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平,通过抗炎和降低肠道过度的免疫反应,对溃疡性结肠炎发挥治疗作用。     

抗小鼠TLR-2胞外段B细胞识别表位抗体抑制肉瘤生长的初步研究

OBJECTIVE: To observe the effect of the antibody to a B cell epitope on mouse Toll-like receptor-2 (mTLR-2) extracellular domain on the growth of murine fibrosarcoma. METHODS: An immunogen was prepared by conjugating a 20-mer peptide, synthesized on the basis of prediction for B cell dominant epitope of mTLR-2, to a carrier protein. Rabbit polyclonal antibodies against B cell epitope of mTLR-2 were prepared and purified, and characterized by Western blotting, immunohistochemistry and flow cytometry. Murine fibrosarcoma S180 cells were inoculated into the left hindlimbs of Swiss mice, and in the treatment group, the injected cells were mixed with 100 microg anti-mTLR-2 antibody TSP-1, with the same dose of irrelevant rabbit IgG in the IgG control group and with buffer solution only in the blank control group. The mice in each group were anesthetized and sacrificed on days 10, 14, and 18 following the injections, respectively, and the weight of the tumors was measured and the inhibition rate calculated. RESULTS: A distinct band for the antibody TSP-1 was shown at the relative molecular mass of 95 000 by Western blotting. The antibody TSP-1 could also react with native mTLR-2 expressed on J774A.1 cells, as identified by immunohistochemistry and flow cytometry. The growth of the fibrosarcoma S180 was obviously inhibited by injections with the antibody TSP-1 mixture, and the weight of tumor in mice treated with TSP-1 was significantly lower than that in the two control groups (P<0.05), with an inhibition rate of 77% on day 10, 51% on day 14 and 53% on day 18. CONCLUSION: Local application of the antibody against B cell epitope on mTLR-2 extracellular domain can inhibit the growth of murine fibrosarcoma, especially in the early stage of tumor proliferation.     

抗小鼠TLR-2胞外段B细胞识别表位抗体抑制肉瘤生长的初步研究

目的 观察抗小鼠TLR-2胞外段B细胞识别表位抗体对小鼠肉瘤S180生长的影响。方法 在对小鼠Toll样受体2(mTLR-2)B细胞优势表位预测的基础上,合成B细胞识别表位20mer短肽,将其与载体蛋白偶联,制备免疫原。所得兔抗mTLR-2胞外段B细胞识别表位多克隆抗体TSP-1纯化后,采用Westernblotting、免疫组织化学和流式细胞仪进行初步鉴定。小鼠肉瘤株S180细胞注射小鼠左后肢,其中实验组混合100μg纯化抗体TSP-1,无关免疫球蛋白对照组混合100μg正常兔IgG,空白对照组仅接种S180。小鼠经麻醉分别于10、14、18d处死,称量瘤质量并计算抑瘤率。结果 Westernblotting显示在相对分子质量约95000处可见清晰的反应条带;免疫组织化学和流式细胞术检测显示抗体可与表达天然mTLR-2的J774A.1细胞反应;实验组小鼠肉瘤生长明显受到抑制,其瘤质量在10、14、18d与对照组相比差异显著(P<0.05);抑瘤率分别为77%、51%和53%。结论 局部应用抗mTLR-2胞外段B细胞识别表位抗体可抑制小鼠肉瘤S180生长,且表现在肿瘤生长的早期。     

抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB和细胞因子表达的影响

目的观察抗小鼠Toll样受体2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB(NF-κB)和细胞因子表达的影响。方法将雄性BALB/c小鼠随机分成4组:假手术组、模型组、TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组。采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症小鼠模型,分别于术后6、12和24 h取回肠组织,HE染色,免疫组织化学方法检测小鼠肠粘膜组织NF-κB的表达,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠肠粘膜TNF-α和IL-6蛋白表达水平。结果模型组NF-κB表达水平较假手术组显著上升;TSP-2治疗组NF-κB表达水平较模型组显著下调;模型组各时间点TNF-α和IL-6水平均高于假手术组(P<0.05);TSP-2治疗组与模型组相比,TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05),TNF-α和IL-6 mRNA水平也低于模型组(P<0.05)。正常兔IgG治疗组与模型组比较,结果无统计学意义(P>0.05)。结论抗体TSP-2能抑制脓毒症小鼠肠道NF-κB的活化,并下调致炎细胞因子TNF-α和IL-6水平,对脓毒血症引起的肠道炎症起到一定的控制作用,并延缓脓毒血症的病情发展。     

平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织TLR2和TLR4表达的影响

目的:观察平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织Toll样受体2(toll-like receptor2,TLR2)和TLR4表达的影响.方法:将30只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、平喘颗粒(31.2 g·kg-1)组,每组10只.除对照组外,采用腹腔注射加雾化卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏液[100μgOVA...     

人源抗TLR4抗体IgG2对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的：研究人源抗TLR4 抗体IgG2（human?TLR4 IgG2,hTLR4 IgG2）对对乙酰氨基酚（acetaminophen,APAP）诱导肝损伤的保护效应,探讨其在药物性肝损伤中的保护作用。方法：以人源抗TLR4 抗体Fab基因为模板,扩增其可变区基因,构建人源抗TLR4抗体IgG2真核表达载体,转染CHO?S细胞,筛选稳定表达细胞株,收集细胞上清,Protein G柱纯化抗TLR4抗体IgG2。将18只C57BL/6J 小鼠随机分成3组：生理盐水组、APAP（600 mg/kg）组和APAP +hTLR4 IgG2（5 mg/kg）组,统计小鼠腹腔注射APAP后 24 h的存活率;重复上述实验分组,检测小鼠腹腔注射APAP 8 h后,血清中丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase,AST）、白细胞介素?1（interleukin?1,IL?1）、白细胞介素?6（interleukin?6,IL?6）和肿瘤坏死因子?α（tumor necrosis factor?α,TNF?α）的表达水平,取肝脏做病理分析并使用Western blot检测凋亡蛋白的表达。结果：成功构建并表达纯化人源抗TLR4抗体IgG2;ELISA结果显示,抗体效价为1∶204 800。与APAP组相比,APAP+hTLR4 IgG2组小鼠的24 h存活率显著增加（P < 0.05）;血清AST、ALT以及炎性细胞因子的表达水平显著降低,具有统计学意义（P < 0.05）;病理分析结果显示,与模型组相比,人源抗TLR4抗体IgG2治疗组的小鼠肝组织炎性细胞浸润、充血和坏死等症状明显改善;Western blot结果显示凋亡相关蛋白的表达减少。结论：人源抗TLR4抗体IgG2能够抑制炎症因子的表达及细胞凋亡,对APAP诱导的小鼠肝损伤有显著的保护作用。     

体外检测RBL-2H3细胞脱颗粒方法的研究进展

<正>嗜碱性白血病细胞(RBL-2H3细胞)属于大鼠嗜碱粒细胞肿瘤株的一个亚系,1978年美国国立研究所从Wistar大鼠嗜碱性白血病细胞株反复克隆获得的[1-2]。RBL-2H3细胞具有肥大细胞的生物学特性,能模拟肥大细胞的多种功能,是体外研究与肥大细胞相关的各种药物作用机制的重要模型。笔者阐述了RBL-2H3细胞作为体外模型用于检测脱颗粒的不同检测方法。1 RBL-2H3细胞的特征     

c-erbB-2多克隆抗体的制备及特性分析

目的　制备针对表皮生长因子受体 (c erbB 2 )细胞表面受体的抗体 ,不仅可阻止生长信号的传递 ,从而抑制肿瘤生长 ,还可通过抗体介导的细胞毒作用杀伤肿瘤细胞 ,具有重要的临床治疗应用价值。方法　通过重组表达获得了纯化的c erbB 2基因产物———融合蛋白GST c erbB 2 ,用此抗原制备兔抗血清 ,经rProteinGAgarose和GlutathioneSepharose 4B亲和层析柱纯化获得IgG型抗c erbB 2蛋白的多克隆抗体。对此抗体进行了细胞表面特异识别、体外肿瘤细胞生长抑制等方面的功能研究。结果　抗体可特异性识别重组表达蛋白、细胞表面c erbB 2抗原 ,并与之结合 ;抗体对c erbB 2阳性的人乳腺癌细胞SK BR 3有特异性的杀伤作用 ,且呈剂量相关 ,而对c erbB 2阴性的人乳腺癌细胞MCF 7则无明显作用。结论　c erbB 2抗体通过其对c erbB 2阳性细胞的特异识别和生长抑制 ,有广阔的临床应用前景。     

E2、P、CRH在早产发病中的作用

目的观察妊娠晚期孕妇外周血中雌二醇(E2)、孕酮(P)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hor-mone,CRH)的变化及其在早产发病中的作用和它们之间的相互关系。方法选取正常妊娠组孕妇60例,先兆早产组孕妇63例(早产组21例,继续妊娠组42例),采集外周静脉血分离血浆,用免疫化学发光法测定E2、P,放射免疫法测定CRH水平。结果1)妊娠晚期正常孕妇血中的CRH质量浓度随着孕周增加而逐渐升高,而血E2质量浓度无明显变化,P质量浓度31~32周达到高峰,之后明显下降。2)正常妊娠组和先兆早产组各孕周组间血CRH、P比较差异均有统计学意义(P<0.01),而正常妊娠组和先兆早产组妊娠29~30周和31~32周2个孕周组间血E2比较差异无统计学意义(P>0.05),妊娠33~34周和35~36周2孕周组间比较差异有统计学意义(分别为P<0.01和P<0.05)。3)早产组CRH、E2显著高于继续妊娠组,差异有统计学意义(P<0.01)。早产组P显著低于继续妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1)CRH可能是分娩发动的重要因素。2)CRH在早产发病中起重要作用,CRH的异常升高可能决定了分娩时间的提前。监测孕妇血CRH的变化有望成为预测早产的可靠指标。3)与E2相比,P在早产发动中发挥更重要的作用。     

金银花提取物对化合物48／80、组胺及P物质诱导小鼠瘙痒模型的作用

目的：探讨金银花提取物对化合物48／80、组胺及P物质诱导的小鼠瘙痒模型的作用。方法采用0．3、0．8、2．4 g／kg 3个不同剂量的金银花提取物将小鼠灌胃给药1 h后,分别皮内注射致痒物质化合物48／80、组胺和P物质,随后将小鼠置于观察笼内,用摄像仪记录1h内小鼠的行为。结果金银花提取物可呈剂量依赖性的抑制P物质诱导的小鼠瘙痒,而对化合物48／80和组胺诱导的小鼠瘙痒没有明显的抑制作用。结论金银花提取物对P物质诱导的小鼠模型有明显的抗瘙痒作用,其抗瘙痒活性主要作用部位为角质形成细胞,而非肥大细胞。     

P44/42MAPK介导雷公藤甲素致肾上腺皮质细胞凋亡作用简

目的：了解P44/42丝裂素活化蛋白激酶在雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡中的作用。方法：体外分离培养大鼠肾上腺皮质细胞,以不同浓度梯度雷公藤甲素染毒相同时间,或相同浓度雷公藤甲素染毒不同时间,以蛋白因子添加素V和碘化丙啶联合标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白印迹法分析P44/42总蛋白量、磷酸化水平以及c-Fos的表达水平。结果：雷公藤甲素以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡;雷公藤甲素诱导P44、P42磷酸化水平升高及c-Fos的高表达。结论：一定剂量雷公藤甲素作用于肾上腺皮质细胞后,P44/42过度磷酸化,诱导c-Fos的高表达,导致细胞凋亡。     

抗HER2/neu单克隆抗体的制备及其对乳腺癌细胞生长的抑制性

目的 制备抗HER2／neu的特异性单克隆抗体，筛选出能够分泌抑制p185 HER2／neu蛋白过表达的肿瘤细胞生长的单抗杂交瘤细胞株。方法 原核表达含全长neu蛋白的融合蛋白，免疫Balb／c雌性小鼠后取效价高的小鼠尾静脉加强后行脾细胞与SP2／0细胞进行细胞融合。以ELISA、免疫细胞化学、免疫组织化学、细胞免疫荧光和MTT法进行筛选。结果 共获得8株稳定分泌HER2／neu单抗的杂交瘤细胞株，其中5株细胞产生的抗体体外实验能够抑制乳腺癌细胞HBT133的生长。结论 能够抑制HBT133细胞生长的5株杂交瘤细胞株可以用作人源化，具有较高的临床应用价值。     

P53siRNA对肺腺癌细胞A549中HMGN2表达的影响

目的 探讨P53基因调节人肺腺癌细胞A549中HMGN2蛋白表达情况.方法 采用小分子干扰RNA(P53-siRNA)真核细胞转染人肺腺癌细胞株A549作为实验组P53-si,转染无荧光RNA的A549细胞为空白对照组con-si,未转染任何载体的A549细胞为正常对照组con.Western blot检测HMGN2和P53表达的变化.结果转染P53-siRNA的实验组A549细胞株中HMGN2蛋白表达下调,空白对照组和正常对照组A549细胞中HMGN2的表达均无明显变化;相对于正常对照组,HMGN2的表达率分别为:实验组56％,空白对照组88％(P＜0.01).结论 P53基因能下调人肺腺癌细胞中HMGN2的活性,参与调控HMGN2蛋白的表达,从而为P53基因参与调节HMGN2在小鼠发育过程的机制研究提供实验基础.     

P38信号通路对大鼠神经干细胞增殖的影响

目的 探讨P38信号转导通路对大鼠海马神经干细胞增殖的影响.方法 体外培养大鼠海马神经干细胞,将培养细胞分为2组,对照组采用神经干细胞培养液进行培养,实验组中在神经干细胞培养液的基础上添加P38通路抑制剂SB203580,Westem blot方法检测细胞中P38及磷酸化P38的表达情况,MTT法检冽其对神经干细胞增殖的影响.结果 神经干细胞加入SB203580后P38磷酸化水平明显低于对照组,实验组可见干细胞球逐渐增大,MTT 法测定结果显示细胞增殖速度与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 P38信号转导通路被抑制后,神经干细胞的增殖能力明显增强.     

补肾调冲含药血清对离体卵巢颗粒细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响

[目的]探讨补肾调冲方对大鼠离体卵巢颗粒细胞原癌基因蛋白表达的影响。[方法]采用血清药理学的方法,以不同含药量的大鼠血清与体外培养的卵巢颗粒细胞共同孵育24 h,用免疫组化法检测Bcl-2、P53蛋白的表达。[结果]补肾调冲含药血清可增强Bcl-2蛋白的阳性表达。[结论]原癌基因作为卵巢内局部调节因子,参与卵巢颗粒细胞凋亡过程。补肾调冲含药血清可通过促进卵巢颗粒细胞内抑癌基因的蛋白表达,抑制颗粒细胞的凋亡。