三七总皂苷对脑损伤模型大鼠神经行为学损伤区VEGF及FGF表达影响的研究

目的通过观察三七总皂苷(PNS)对脑损伤大鼠损伤区血管内皮生长因子(Vscular Endothelial Growth Factor,VEGF)以及碱性成纤维生长因子(Fibroblastic Growth Factors,FGF)表达的影响,探讨三七总皂甙(PNS)对脑损伤大鼠发挥脑保护作用可能的相关机制。方法采用自由落体法建立大脑急性损伤大鼠模型,随机将60只健康雄性Wistar大鼠分为假手术组、对照组和PNS治疗组。应用神经行为学评分评价大鼠神经功能症状,Western blot法检测大鼠损伤区VEGF及FGF的阳性表达情况。结果对照组与PNS治疗组比较脑损伤大鼠的神经功能评分显著提高(P0.01);PNS治疗组VEGF及FGF蛋白阳性表达较假手术组和对照组均明显增高(均P0.001)。结论 PNS的治疗干预可以使急性脑损伤模型大鼠的行为学症状得到明显改善,其机制可能是通过促进急性脑损伤大鼠脑组织VEGF及FGF表达,抑制神经细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

伽玛刀对癫痫大鼠模型的治疗作用及机制研究

目的 研究伽玛刀照射对癫痫大鼠的放射生物学作用,探讨伽玛刀治疗癫痫的作用机制.方法 制备海人酸大鼠癫痫模型,利用自行设计的伽玛刀动物定向头架,分别应用100Gy和20Gy的伽玛射线对癫痫大鼠海马组织进行照射,观察大鼠行为学、脑电图、MRI及超微结构、脑组织氨基酸含量及GABA能神经元表达变化.结果 伽玛刀照射后大鼠癫痫发作次数明显减少.100Gy组照射后2个月MRI表现为靶区高信号,20Gy组5个月MRI未见改变.伽玛刀照射后兴奋性氨基酸含量显著低于癫痫组,GABA能神经元表达低于正常,但高于癫痫组.结论 伽玛刀照射对癫痫大鼠具有治疗作用,高剂量伽玛射线(100Gy)对致痫灶有毁损作用.低剂量伽玛射线(20Gy)通过抑制兴奋性神经元释放兴奋性氨基酸使癫痫发作减少.     

放射性脑损伤的血管损伤机制及贝伐珠单抗临床应用的研究进展

放射性脑损伤的发生机制尚不明确,多项研究提示其发生发展可能与放疗后血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的过表达相关,放疗后血管通透性的改变、血脑屏障的破坏及血管源性脑水肿等变化都与之密切相关,而作为人源化抗-VEGF单克隆抗体的贝伐珠单抗(bevacizumab),越来越多地被研究者应用于临床,本文就放疗后与血管损伤相关的多种病理生理改变及贝伐珠单抗的作用机制、临床应用、动物实验和安全性等方面的研究进展进行综述。     

黄芪甲苷对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用和机制研究

目的探讨黄芪甲苷对大鼠脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用和机制。方法应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型(模型组),建模成功大鼠经腹腔注射黄芪注射液(每毫升含黄芪甲苷1 mg)干预治疗(黄芪治疗组,再随机分为黄芪低剂量组、中剂量组和高剂量组)。另设对照组(插线进入大鼠颈内动脉10 mm后即刻退出)。Longa法评价大鼠神经行为功能,苏木精-伊红染色观察大鼠皮质区神经元形态结构,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组化检测脑源性神经营养因子(BDNF)、血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白表达。结果经黄芪注射液治疗后,大鼠脑组织BDNF、VEGF、VEGFR2蛋白表达较对照组显著增加,且BDNF主要在海马区表达,VEGF及VEGFR2主要在皮质区表达,脑组织凋亡细胞数量显著减少,大鼠神经行为功能显著改善。结论黄芪注射液可通过增加BDNF、VEGF及VEGFR2的表达而抑制细胞凋亡,刺激神经再生,促进受损神经的修复,改善大鼠的神经行为功能,黄芪中剂量和高剂量作用更为明显。     

荧光实时监测贝伐单抗治疗胶质母细胞移植瘤的实验研究

目的探讨贝伐单抗(Avastin)对人胶质母细胞瘤移植瘤瘤体和血管生成的影响。方法免疫缺陷的RAG-KO小鼠,接种稳定表达荧光素酶的人胶质母细胞瘤U373-luc细胞7 d后将合格的载瘤小鼠随机分成4组(每组6只):对照组(给予PBS),低剂量贝伐单抗组,常规剂量贝伐单抗组,高剂量贝伐单抗组。每隔3 d记录各组小鼠重量,荧光成像系统每周2次测量颅内肿瘤体积随贝伐单抗治疗进程的改变。给药3周后,处死小鼠取材免疫组化检测肿瘤组织的CD31表达,计算微血管密度。小鼠处死前一天抽血测定血清血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果与对照组相比,瘤体和血浆内VEGF水平显著下降,常规剂量和高剂量治疗组前两周肿瘤体积明显减少,血管密度减低,但3周起肿瘤体积反弹。常规剂量与高剂量治疗组之间各项指标未见明显差异。结论贝伐单抗对人胶质母细胞移植瘤瘤体和血管生成早期有明显抑制作用,可缩小肿瘤体积,减少血管密度,但随着治疗的延长,肿瘤生长反弹。接受高剂量和常规剂量贝伐单抗注射的载瘤小鼠均无明显不良反应。     

骨髓基质干细胞移植对脑损伤大鼠神经行为学和血管再生的影响

目的探索移植骨髓基质干细胞(BMSCs)对局灶性脑损伤大鼠的神经功能修复的作用及血管再生的影响,探讨BMSCs移植促进大鼠脑损伤修复的机制。方法 30只大鼠制备大鼠局灶性脑损伤动物模型,随机分为假手术组、脑损伤组和BMSCs移植组,每组10只大鼠。取供体鼠BMSCs,体外扩增,DAPI荧光标记。在脑立体定向仪引导下将BMSCs移植到脑损伤大鼠局部损伤灶边缘,于3d、7d及14d通过观察大鼠神经行为能力的变化,评价移植细胞后大鼠神经功能的修复情况;14d后取脑组织荧光显微镜观察移植细胞存活的情况,采用免疫组化法检测脑组织微血管密度(MVD)来评估血管再生情况、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体(Flt-1、Flk-1)的蛋白表达情况。结果脑损伤组和BMSCs移植组于移植后3d时神经行为学评分差异无统计学意义(P>0.05),而在移植后7d、14d,BMSCs移植组与脑损伤组在神经行为学评分指标上差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs移植组与脑损伤组比较,脑组织微血管密度明显增加,VEGF和Flt-1、Flk-1表达明显增加。结论骨髓基质干细胞移植后可促进脑损伤大鼠神经功能的恢复,其机制可能与其增加VEGF和Flt-1、Flk-1表达促进血管再生有关。     

VEGF在实验性脑积水大鼠脑组织中的表达

目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）在脑积水后脑组织中的表达状况。方法 雄性Wistar大鼠60只，随机分为实验组和对照组，其中实验组48只，再随机平均分为A、B、C、D四个亚组，应用显微外科技术向枕大池内注入25％白陶土混悬液0．1ml，分别在白陶土注射后第1、2、4、6周行MRI检查，获取鼠脑冠状切面的T2图象，鉴定脑积水是否形成。之后24h内处死动物并迅速取脑组织，应用免疫组织化学方法分别测定各组大鼠脑组织不同部位VEGF表达情况。其余12只用同样方法向枕大池内注入生理盐水作为对照组。结果 34只大鼠成功诱发脑积水。与对照组相比，实验组脑组织中VEGF表达均明显升高，尤其是脑室周围白质更为明显。结论 VEGF可能参与脑积水的病理损害和恢复过程。     

放射性脑损伤大鼠血中性粒细胞CD18的表达

目的 探讨中性粒细胞CD18的表达变化与放射性脑损伤的关系。方法 用10MeV X射线垂直照射大鼠全脑，接受剂量30Gy。照射2周后，颈总动脉取血．梯度离心、取中性粒细胞层．用Northern杂交分析流式细胞术分析法，测定血液中性粒细胞CD18 mRNA表达水平和膜蛋白数量。结果 大鼠脑组织接受照射后．光镜下出现明显的细胞损伤改变，血液中性粒细胞CD18 mRNA表达水平和膜蛋白数量在照射后均有明显提高。结论 CD18介导的中性粒细胞粘附参与了放射性脑损伤的发生和发展。     

bFGF、VEGF在大鼠创伤脑组织中的表达

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠创伤脑组织中的表达及它们之间的关系，从分子水平探讨颅脑损伤后的病理机制，为临床治疗脑损伤的新途径提供实验基础。方法 改进Marmarou大鼠加速弥漫性脑损伤模型，制作成弥漫性轴索损伤同时合并局灶性脑挫伤的新的动物模型，取挫伤灶周围脑组织免疫组化染色观察bFGF、VEGF基因表达情况。结果 脑挫伤灶周围脑组织bFGF基因表达在伤后1h明显增加，伤后12h达高峰；VEGF基因表达伤后逐渐增加，24h达高峰。结论 bFGF、VEGF基因表达与脑损伤密切相关，bFGF、VEGF作为生长因子可能参与颅脑损伤后神经元保护及损伤后修复过程。     

人脐带沃顿胶间充质干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠脑损伤区微循环的影响

目的 探讨人脐带沃顿胶间充质干细胞(WJCs)对脑创伤区周围微循环的影响. 方法 72只健康SD大鼠采用随机数字表法分为4组:(1)假手术组;(2)移植对照组;(3)WJCs移植组;(4)正常组.每组18只.移植对照组和WJCs移植组采用Feeney自由落体硬脑膜外撞击法建立中度创伤性颅脑损伤模型,再分别注射0.3 mL的生理盐水和WJCs混悬液;假手术组颅骨钻孔后不损伤脑组织不移植细胞;正常组不做任何处理.分别于移植后3d及7d进行大鼠行为学评分;取移植后ld、3d、7d和2周的脑组织切片行免疫组织化学检测,检测大鼠损伤灶周围血管内皮生长因子(VEGF)及CD34的表达;实时定量PCR(RT-PCR)检测的VEGF mRNA表达;测定微血管面密度(MVD);移植后2周和4周行免疫组化观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)蛋白表达水平. 结果 移植后7d,WJCs移植组大鼠mNSS评分明显高于移植对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).WJCs移植组移植后3d、7d和2周损伤灶周围皮层脑组织VEGF和CD34的表达均高于移植对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).移植后2周和4周WJCs移植组损伤区免疫组织化学染色均发现GFAP和NSE阳性细胞,其他3组均未发现.RT-PCR检测到WJCs组VEGF mRNA的表达量高于移植对照组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 WJCs移植后可增加损伤区脑组织VEGF及CD34阳性表达,参与调控损伤区微血管的变化,改善损伤区的微循环,促进大鼠神经功能的恢复.     

贝伐珠单抗抑制大鼠创伤性脑损伤半暗带区BCFB破坏和减轻炎症损伤的机制研究

目的 评价贝伐珠单抗(BV)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠半暗带区恢复血-脑脊液屏障(BCFB)完整性和减轻炎症损伤的效果,以及NF-κB/MMP-9途径在实验性TBI中的潜在作用。方法大鼠被随机分成创伤组(TBI组)、创伤后应用BV组(药物干预组,TBI+BV组)、假手术组(Sham组)。采用改进的菲尼自由落体法建立大鼠TBI模型,然后用BV抑制TBI中血管内皮生长因子(VEGF)的表达。通过蛋白印迹(Western blot)和免疫组化检测VEGF在各组大鼠中的表达,采用改良神经功能评分(mNSS)、伊文思蓝染色、脑组织含水量、酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot研究了VEGF的抑制对炎症反应、BCFB完整性以及神经功能恢复的影响。结果 研究发现TBI诱导损伤半暗带区VEGF升高,并导致紧密连接蛋白减少,破坏BCFB完整性和介导炎症损伤。与Sham组相比,TBI组及TBI+BV组mNSS评分明显升高,BCFB完整性被显著破坏(脑水肿程度增加和紧密连接蛋白下调),炎症因子白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-10 (IL-10)和转化生长因子β (TGF-β)明...     

贝伐单抗在抗血管生成方面治疗高级别胶质瘤的进展

高级别胶质瘤是目前脑肿瘤中最常见的恶性肿瘤,尽管采取诸多积极治疗方案,但患者预后仍不理想。目前,抗血管生成药物(特别是血管内皮生长因子Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)作为术后辅助化疗药物成为研究热点。贝伐单抗能特异性结合血管内皮生长因子,从而使肿瘤内部血管正常化,改善内部微环境,抑制肿瘤生长。本文就贝伐单抗在抗血管生成方面的作用机制以及其在治疗高级别胶质瘤化疗中的疗效进行综述。     

大鼠正常脑组织伽玛刀照射后VEGF表达的实验研究

目的研究伽玛刀(γ-刀)立体定向放射外科照射大鼠正常脑组织后亚急性期血管内皮细胞生长因子(VEGF)随时间变化的表达,探讨VEGF与放射损伤的关系。方法30只Wistar大鼠,随机分为6组,每组5只。其中1组为假照射组,其余5组行γ-刀照射。运用Leksell23004B型γ-刀4 mm准直器以50Gy照射大鼠右侧尾壳核。不同组别的大鼠分别在照射后1、2、4、8、12周深度麻醉下断头取出脑组织,行免疫组织化学染色观察VEGF的表达。结果假照射组及照射后1、2周靶区内无VEGF阳性细胞：照射后4周靶区发现有少数细胞呈弱阳性表达；照射后8周时可见照射侧VEGF阳性细胞数目增加；照射后12周可见VEGF阳性细胞进一步增多。结论γ-刀放射外科以50Gy照射大鼠单侧尾壳核后,照射靶区VEGF出现阳性表达,并且随时间延长呈增高趋势。     

自体骨髓内皮祖细胞移植治疗动脉粥样硬化大鼠急性脑缺血的实验研究

目的 探讨自体骨髓内皮祖细胞移植治疗动脉粥样硬化大鼠急性局灶性脑缺血的有效性.方法 高脂膳食制备20只动脉粥样硬化大鼠模型,采集骨髓,分离血管内皮祖细胞(EPCs)并扩增培养,检测其表面标记物的表达;第7天采用线栓法制作急性局灶性脑缺血模型,造模后3 h进行移植,其中实验组经颈静脉自体移植BrdU标记的EPCs,对照组给予等量的PBS.急性脑缺血术后6 h和第1、3、7、10、14天通过神经功能缺损评分(mNSS)量表行行为学评价,免疫组化染色观察BrdU标记的EPCs在缺血脑组织的分布和血管密度.结果体外培养大鼠骨髓来源的EPCs,细胞数目可达到5×106;CD34免疫荧光和FLK-1免疫组化鉴定呈阳性,并能特异性吸附FITC-UEA和内吞DIL-Ac-LDL.第14天实验组mNSS得分为6.13±0.30.对照组为8.50±0.46,比较差异具有统计学意义(P<0.05),实验组神经功能的恢复优于对照组.第28天实验组脑缺血区和血管壁可见BrdU标记的EPCs,而对照组则为阴性.免疫组化染色显示实验组大鼠缺血脑组织血管数为16.87±5.52,对照组大鼠缺血脑组织血管数为12.76±4.94,比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 从活体大鼠骨髓中分离的EPCs通过自体移植后可以进入脑缺血区并长期存活,其能够促进神经功能恢复,这可能与血管再生有关.     

bFGF、VEGF在大鼠创伤脑组织中的表达及关系

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)在大鼠创伤脑组织中不同时间的表达及其它们之间的关系，从分子水平探讨颅脑损伤后的病理机制，为临床治疗脑损伤的新途径提供实验基础。方法 改进Marmarou大鼠加速弥漫性脑损伤模型，制作成弥漫性轴索损伤同时合并局灶性脑挫伤的新的动物模型。SD雄性大鼠48只，随机分为8组。每组6只。取挫伤灶周围脑组织免疫组化染色观察bFGF、VEGF基因表达情况。结果 脑挫伤灶周围脑组织，bFGF基因表达在伤后1h明显增加。伤后12h达高峰；VEGF基因表达伤后逐渐增加，24h达高峰，12h恢复到对照水平。结论 bFGF、VEGF基因表达与脑损伤密切相关，作为生长因子，bFGF、VEGF可能参与颅脑损伤后神经元保护及损伤后修复过程。     

抑胶素对大鼠脑胶质瘤细胞血管内皮生长因子作用的体内试验

目的研究抑胶素对大鼠脑胶质瘤血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法采用脑立体定向术,在Wistar大鼠脑尾状核接种C6细胞,应用免疫组织化学方法检测应用抑胶素前后对鼠脑胶质瘤血管内皮生长因子的影响。结果经抑胶素治疗后可见肿瘤内血管内皮生长因子阳性细胞密度下降,随浓度增加阳性率呈下降趋势。实验组(抑胶素浓度32μg/kg)较对照组表达降低(P<0.05);实验组(抑胶素浓度64μg/kg)与对照组比较有显著性差异(P<0.01);而实验组、(抑胶素浓度分别为8μg/kg及16μg/kg)与对照组相比较,无统计学意义;而顺铂组瘤体内VEGF与实验组比较无显著性差异(P>0.05)。结论抑胶素对肿瘤细胞的抑制作用可能通过血管内皮生长因子而起作用,但这种抑制作用与抑胶素本身的浓度有关,高浓度抑胶素抑制作用强。     

大鼠静脉窦血栓形成后VEGF和VEGF mRNA的表达及意义

目的 观察大鼠颅内静脉窦血栓形成(CVST)后脑组织内血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF mR-NA的动态表达并其意义.方法 采用大鼠上矢状窦结扎并注入脑磷脂白陶土法建立CVST模型,根据CVST后的不同时间分为1d、3d、7d组及假手术对照组.免疫组化法检测VEGF蛋白的表达;RT-PCR法检测VEGF mRNA动态变化.结果 CVST1d VEGF免疫组化呈显著阳性反应,之后逐渐增强,CVST 7d达高峰;同时CVST后VEGFm-RNA转录水平明显升高.结论 颅内静脉窦血栓形成可诱导脑组织内VEGF表达增强,VEGF持续表达可能与促进血管新生和侧支循环形成有关.     

低剂量贝伐单抗治疗放射性脑坏死的临床疗效

目的评估低剂量贝伐单抗治疗放射性脑坏死的临床疗效。方法回顾性分析经类固醇激素及甘露醇治疗失败的放射性脑坏死患者29例。所有患者均给予贝伐单抗5mg/Kg,每14天重复一次,治疗1~6周期。每周期治疗前均行MRI检查,比较治疗前后MRI T1WI相增强病灶的变化情况及T2WI相病灶水肿情况;记录患者的临床症状、KPS评分改变情况及药物的副作用。结果分别有2例、6例、10例、5例、3例和3例患者分别完成了1周期、2周期、3周期、4周期、5周期、6周期治疗。贝伐单抗应用后第2天起,患者临床症状开始逐渐改善。2疗程结束后,患者KPS评分平均提高32.2分;MRI T1WI增强相可见强化区域病灶较治疗前平均缩小42.9%(P0.001),MRI T2WI相可见水肿区域较治疗前平均缩小80.9%(P0.001)。未见严重治疗相关副作用;平均随访时间8.7个月(3~26个月),16例患者病情改善维持,8例患者复发,5例患者因肿瘤进展死亡。结论低剂量贝伐单抗能明显改善放射性脑坏死患者的临床症状并提高生活质量。     

血管内皮生长因子在高原脑水肿形成中作用的实验研究

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在高原脑水肿形成中的作用。方法:建立大鼠模拟高原模型,应用脑干湿重比率法定量脑水肿情况、应用荧光素钠透过率测定BBB通透性、应用实时荧光定量RT-PCR法检测脑组织VEGF mRNA含量以及应用蛋白印迹法半定量脑组织VEGF含量。结果:大鼠在高原24 h后脑组织含水率明显增高(P<0.05),荧光素钠透过率显著增加(P<0.01);VEGF mRNA转录及其表达显著增高(P<0.001)。结论:VEGF表达在高原脑水肿形成中起重要作用。     

bFGF、VEGF在大鼠创伤海马脑组织中的表达

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在大鼠创伤海马组织中不同时间的表达及其它们之间的关系，从分子水平探讨颅脑损伤后的病理机制，为临床治疗脑损伤的新途径提供实验基础。方法 改进Marmarou大鼠加速弥漫性脑损伤模型，取海马区创伤脑组织免疫组化染色观察bFGF、VEGF基因表达情况。结果 海马CAl区伤后6h，bFGF基因表达增加，12h达高峰；VEGF基因表达伤后24h达高峰，72h回复到对照水平。结论 bFGF、VEGF基因表达与脑损伤密切相关，作为生长因子，bFGF、VEGF可能参与颅脑损伤后神经元保护及损伤后修复过程。