细小病毒H-1感染对有丝分裂原激活蛋白激酶信号传导相关基因表达的影响

目的 探讨具有选择性杀伤和抑制肿瘤细胞生长特性的细小病毒H－1所诱导的胃癌细胞死亡的信号传导通路及可能机制。方法 采用RT－PCR的方法，检测H－1病毒感染后胃癌细胞HGC27的有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号传导途径相关基因在mRNA水平的表达改变。结果 MAPK信号传导相关基因的扩增结果显示：在H－1病毒感染HGC27细胞48h后，细胞CREB基因的表达明显增高，ERK1、STAT2、p38-γ、MEK2、β－RAF、MTK1基因的表达明显降低，而JNK2、ETS2、ERK2大mRNA水平的表达无明显改变。结论 细小病毒H－1的细胞毒作用可能与其影响胃癌细胞MAPK信号传导途径中相关基因的表达有关。即H－1病毒通过干预癌细胞信号传导的特定通路而诱导细胞死亡。由此我们认为，可修饰改造的细小病毒H－1，将是抗肿瘤研究中的一个非常有价值的工具。     

细小病毒H-1感染对胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响

背景:细小病毒H鄄1对肿瘤细胞和转化细胞具有选择性杀伤和抑制生长的作用,是很好的基因治疗用载体。但肿瘤细胞对细小病毒H鄄1杀伤作用敏感或耐受的分子机制目前尚不十分清楚。目的:从mRNA水平观察细小病毒H鄄1感染对胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响,探讨细小病毒H鄄1对胃癌细胞细胞毒作用的相关机制。方法:选取对细小病毒H鄄1敏感的人胃癌细胞株HGC鄄27和不敏感的人胃癌细胞株BGC鄄823,于细小病毒H鄄1感染48h后提取细胞总RNA。应用不同荧光染料标记的dUTP逆转录制备荧光探针,与含有8000点人类体细胞基因序列的基因表达谱芯片杂交,再经计算机荧光扫描以分析敏感细胞株HGC鄄27凋亡相关基因表达谱的改变。采用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)对敏感细胞株HGC鄄27部分凋亡相关基因,如SARP1、BCL鄄10、CL鄄20、NCDRP和RAIDD等的表达作进一步检证,并比较其与不敏感细胞株BGC鄄823相应凋亡相关基因的表达差异。结果:基因表达谱芯片检测结果显示,HGC鄄27细胞感染细小病毒H鄄148h后,所检测的64对凋亡相关基因中有15对基因表达水平下调至原水平的50%以下,仅有1对基因表达水平上调至2倍以上。RT鄄PCR扩增结果显示,感染细小病毒H鄄148h后,敏感细胞株HGC鄄27的SARP1、BCL鄄10、CL鄄20和NCDRP基因表达明显下调,RAIDD基因     

基因芯片技术在细小病毒H-1诱导胃癌细胞基因表达研究中的应用价值

目的 探讨基因芯片技术在细小病毒H-1诱导胃癌细胞HGC27相关基因表达改变研究中的应用价值。方法 分别收集H-1病毒感染前与感染48h后胃癌细胞HGC27，分离并纯化细胞mRNA，运用基因芯片技术，通过荧光染料标记、芯片杂交、洗涤、扫描及数据分析等步骤，得到H-1病毒感染前后胃癌细胞HGC27中表达改变的相关基因谱。对基因芯片结果中部分表达有改变的基因进行RT-PCR、Northern blot的分析鉴定。结果 胃癌细胞HGC27感染H-1病毒48h后的基因芯片结果显示：在被检测的8000条目的基因中，920条基因的表达明显改变，β-raf、creb、p38-γ、rad21、sarp1等部分表达有改变基因的RT-PCR和Northern blot鉴定结果显示，与表达谱芯片的结果基本一致。结论 基因表达谱芯片技术是大规模平行监测多基因表达的一种有效方法，可有效地用于细小病毒H-1抗肿瘤机制的研究。     

胃癌细胞对细小病毒H-1敏感性差异的实验研究

目的 探讨不同胃癌细胞株对细小病毒细胞毒作用的敏感性差异及可能的机制。方法共选用HGC27(未分化)、BGC823(未分化)、MKN45(低分化)、AGS(低分化)、SGC7901(中分化)和MKN28(高分化)等6株不同分化状态的胃癌细胞株，用流式细胞仪分析其各自的细胞周期，H-1病毒感染后采用MTT方法检测不同胃癌细胞株对其细胞毒作用的敏感性差异，用RT-PCR来检测H-1病毒中的非结构蛋白基因(NS-1)在6株不同胃癌细胞中的表达。结果 HGC27、BGC823、MKN45、AGS、SGC7901和MKN28等不同分化状态细胞株中，S期细胞的比率分别为24．72％，30．15％，27．10％，29．03％，31．82％和33．73％。其中HGC27细胞对H-1病毒的细胞毒作用敏感；SGC7901细胞其次；MKN45、AGS细胞对H-1病毒的细胞毒作用中等敏感；MKN28细胞对H-1病毒的细胞毒作用不敏感；而BGC823则对H-1病毒的细胞毒作用抵抗。病毒NS-1的mRNA在HGC27、BGC823、MKN45和SGC7901等细胞中的表达水平较高，而在AGS和MKN28中的表达水平却较低。结论 H-1病毒的细胞毒作用在不同的胃癌细胞株中的差异显著。总体上，与高分化细胞株MKN28细胞相比，分化差的细胞对细小病毒H-1的细胞毒作用敏感性增加。其机制至少部分与分化差细胞中病毒NS-1蛋白的产生和积聚能力增高相关。未分化的BGC823细胞对H-1病毒的细胞毒作用抵抗，进一步证实并非所有的肿瘤细胞都对细小病毒的溶胞性作用敏感。     

细小病毒H-1非结构蛋白NS1基因对人胃癌细胞的抑制作用研究

前期研究表明细小病毒H-1（H-1PV）对胃癌细胞生长具有一定抑制作用,非结构蛋白NSl可能是其细胞毒作用的效应蛋白。胃癌细胞CD44^＋群体中可能含有肿瘤干细胞。目的：探讨H-1PV非结构蛋白NSl基因对不同分化程度的人胃癌细胞的影响。方法：以双酶切和质粒测序鉴定真核表达质粒pcDNA3．1-NSl,采用脂质体法将重组质粒转染高分化胃癌MKN28细胞、中分化胃癌SGC7901细胞和低分化胃癌MKN45细胞,并设置空质粒转染对照。G418筛选稳定转染的细胞克隆．以RT-PCR法检测NSl基因表达、裸鼠体内成瘤实验检测NSl基因对不同分化程度胃癌细胞的作用．流式细胞术分析CD44表达。结果：重组质粒pcDNA3．1-NSl转染的三种胃癌细胞均稳定表达NSl基因。以10^6／300μl浓度的肿瘤细胞皮下接种裸鼠3周后,MKN28细胞空质粒转染组和重组质粒pcDNA3．1-NSl转染组均观察到肿瘤生长;SGC7901、MKN45细胞空质粒转染组形成瘤体,而重组质粒pcDNA3．1-NSl转染组未见瘤体。转染重组质粒pcDNA3．1-NSl后,MKN28细胞不表达CD44,SGC7901和MKN45细胞CD44表达明显降低。结论：H-1PV非结构蛋白NSl基因表达对中低分化的胃癌细胞有较好的抗肿瘤活性．可能与其降低胃癌干细胞表型CD44的表达有关。     

胃癌金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达增强

近来基质金属蛋白酶（ matrix metalloproteinases, MMPs）在肿瘤浸润、转移中的作用日益受到人们的关注。金属蛋白酶组织抑制因子（ tissue inhibitors of metalloproteinase, TIMPs）可抑制 MMPs的活性,它们有无抑制肿瘤转移的作用,对此我们采用逆转录共扩增定量 PCR方法研究了胃癌金属蛋白酶组织抑制因子— 1基因表达的情况,现报告如下。 　　一、资料和方法 　　1．研究对象：本组 30例胃癌患者中男 23例,女 7例;平均年龄（ 50± 6）岁。内镜下取胃癌组织,经病理检查确诊;所有患者均行手术治疗。另选 19例慢性胃炎患者作为…     

白藜芦醇诱导胃癌细胞凋亡的分子机制

白藜芦醇是从多种葡萄属植物中提取的多酚类化合物[1] 。近年来发现白藜芦醇具有抗癌作用[2 ,3 ] 。通过透射电镜和ＴＵＮＥＬ法 ,在体外定性、定量地研究白藜芦醇与胃癌细胞凋亡的关系 ;通过免疫组化法和ＲＴ ＰＣＲ检测凋亡相关基因ｂｃｌ 2和ｂａｘ的表达 ,研究白藜芦醇诱导胃癌细胞凋亡发生的可能机制。　　一、材料与方法1.细胞系 :胃癌细胞株ＳＧＣ 790 1,由山东省立医院中心实验室传代培养。2 .白藜芦醇对胃癌细胞的生长抑制率测定 :将细胞以10 5/ｍｌ浓度接种于 96孔板 ,每孔 10 0 μｌ,2 4ｈ后分别加入不同浓度的白藜芦醇 ,分别培…     

基因表达谱技术在胃癌研究中的应用

肿瘤的异常不仅表现在组织细胞结构和生理功能等方面，它还具有基因组、蛋白质组、代谢组等多方面的系统异常。除幽门螺杆菌（H.pylori）外，人们对胃癌的发生机制、病因、行为、治疗等方面的认识还很有限，也缺少有效的早期诊断手段。新近发展起来的系统生物学，拟全方位地进行肿瘤的研究，其中基因表达谱的技术发展相对最为成熟和稳定，并得到广泛的应用。本文就基因表达谱技术在胃癌肿瘤标志物、分子分型和预后等方面的最新研究作一综述，并探讨各种基因表达谱技术的特点和在胃癌研究中的应用．展望基因表达谱技术在基础和临床方面的应用。     

猪细小病毒的致病机制与防控策略

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是细小病毒科细小病毒属的成员,引起初孕母猪的繁殖障碍、仔猪的皮肤炎症和肠炎性腹泻.这些疾病在临床表现和病理特点上各不相同.近年来,PPV与其他病毒混合感染发生较多,是导致很多疾病综合征的病原之一.本文主要针对猪细小病毒的病原、致病机制和防控策略做一综述,以期对动物细小病毒病的防治提供的借鉴.     

大剂量细小病毒H-1静脉接种后导致猕猴出血性胃窦炎、结肠炎

目的：观察股静脉接种细小病毒Ｈ－１对猕猴的毒副作用,为今后作为抗肿瘤制剂使用提供依据。方法：采用３只健康猕猴（简称Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３）经股静脉接种ＰＶＨ－１　１×１０~9ｐｆｕ, Ｍ２在第一次给病毒１４天后重复给一次,Ｍ１和Ｍ３只接种一次。动态观察动物一般状况、肝肾功能,并在２个多月时作有关脏器的病理检查。结果表明：动物接种ＰＶＨ－１后两个月内一般状况如常,未见有明显病毒血症样症状。Ｍ１、Ｍ２于病毒接种后第５７天和６５天分别出现消化道出血,其中ＭＩ给予抗生素治疗后很快得到了控制,Ｍ３在所观察的时间内看上去健康,未见有明显异常症状。解剖动物发现：Ｍ１胃肠道粘膜完全正常;Ｍ２、Ｍ３经病毒接种后消化道粘膜充血糜烂集中分布于胃窦和结肠,而且Ｍ２病变重于Ｍ３。血清ＡＬＴ在动物病毒接种后６０天时呈上升趋势。光镜下心、肺、肾、脑、小肠、牌和胰腺未见有明显形态上改变,部分肝细胞肿胀,胞浆疏松,少数呈气球样变性。结论：大剂量ＰＶＨ－１静脉接种后可导致猕猴出血性胃炎、结肠炎。     

胃镜下采集的疑似胃癌组织的基因表达谱分析

基因芯片等高通量的研究手段已在肿瘤研究中得到广泛的应用，胃癌方面的研究主要集中住手术切除标本，对胃镜下取得的疑似胃癌组织的基因表达比较研究则较少报道。目的：比较胃镜下取得的病理诊断为胃癌和非癌样品的基因表达谱特征，为识别胃癌早期诊断的指标和疾病的分子分型奠定基础。方法：内镜下取47例胃癌疑似病变组织和对应非病变组织，经病理学诊断为胃癌28例，非癌病变19例。提取RNA，采用含14592个点的人cDNA芯片，经RNA放大技术进行基因表达谱的检测，检测结果采用GeneSpring软件分析，数据标准化用局部加权回归分析（LOWESS）处理，胃癌和非癌两组样品的组内和组间差异的显著性分析应用差异显著性分析（SAM）方法。结果：以30％样品巾的表达调节水平大于1．5倍作为差异基因筛选标准，胃癌组表达上调的基因有133个，卜调的有143个。非胃癌样品中有51个基因表达上调，22个表达下调，其中分别有18个上调基因和13个下调丛因与胃癌组相同。组间差异分析筛选出40个基因，其表达调节可以由之进行胃癌和非癌组样品的区分。结论：基因表达谱芯片技术可以有效地应用于识别胃癌和非癌样品中的差异表达基因，并可用于肿瘤发病机制和分子分型的研究。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导胃癌细胞凋亡机制的研究

背景：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）可诱导不同胃癌细胞株的凋亡，但凋亡的途径尚不清楚。目的：通过研究TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的作用机制，为TRAIL的临床应用提供理论依据。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测SGC-7901胃癌细胞TRAIL受体（TRAILR），包括死亡受体TRAILR1、TRAILR2和诱惑受体TRAILR3、TRAILR4的表达；应用免疫组化法检测SGC-7901胃癌细胞Bcl-2和caspase-3的表达．并观察两者在不同浓度（50ng／ml和500ng／ml）的TRAIL处理后的变化。结果：SGC-7901胃癌细胞仅表达TRAILR1和TRAILR2，不表达TRAILR3、TRAILR4。TRAIL可引起SGC-7901胃癌细胞Bcl-2阳性表达，不同浓度的TRAIL作用12h、24h、48h其表达无影响；与对照组比较，不同浓度的TRAIL作用24h后SGC-7901胃癌细胞caspase-3表达均有显著增加（P〈0．01）。结论：TRAIL诱导胃癌细胞凋亡是因胃癌细胞仅表达TRAILR1、TRAILR2，不表达TRAILR3、TRAILR4。TRAIL是通过TRAILR1、TRAILR2增加细胞内caspase-3的表达而导致胃癌细胞凋亡，其诱导胃癌细胞凋亡的作用不受Bcl-2的影响。     

p16基因表达与胃癌组织类型的关系

目的：探讨ｐ１６基因的表达与人胃癌组织类型的关系。方法：选取２４例病理确诊的胃癌组织及相应正常胃粘膜组织,用蛋白质免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）技术检测ｐ１６基因在两种组织中的表达。结果：２４例胃癌组织中,６例无ｐ１６基因表达的癌组织为低分化腺癌或印戒细胞癌;２例ｐ１６基因表达可疑;分化较高的５例ｐ１６基因表达增多;其们１１例ｐ１６基因的表达同相应正常组织无区别。结论：ｐ１６基因在胃癌组织中     

采用cDNA芯片对人胃腺癌凋亡相关基因表达谱的研究

背景：细胞凋亡及其调控基因在肿瘤（如胃癌）的发生、发展中的作用是当今研究的热点，有必要全面筛查胃癌相关凋亡基因。目的：研究胃癌发病过程中凋亡基因表达谱的变化。方法：利用人细胞凋亡相关基因cDNA芯片研究胃腺癌和癌旁组织中相关基因的改变。采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和组织芯片技术验证IGFBP4基因的表达情况。结果：在458个凋亡相关基因中，有17个基因在癌组织和癌旁组织中出现2倍以上的明显改变；4个基因表达增强，13个基因表达下调。荧光定量PCR和组织芯片验证结果与cDNA芯片相符。结论：发生改变的17个凋亡相关基因可能与胃腺癌的发病机制有关，并涉及整个凋亡途径，值得进一步深入研究。     

PSME1基因对人胃腺癌细胞株SGC-7901生物学特性的影响

背景:PSME1基因编码蛋白PA28α是26S蛋白酶体的重要组成部分,研究显示其在多种人类恶性肿瘤中表达下调,可能影响肿瘤细胞的生物学特性。目的:探讨PSME1基因对胃癌细胞恶性表型相关生物学特性的影响。方法:将PSME1基因克隆入pcDNA3.1载体,构建PC-PSME1表达载体,以脂质体法转染人胃腺癌细胞株SGC-7901,筛选并鉴定稳定转染细胞株SGC-PSME1。以生长曲线法、克隆形成实验、流式细胞术和细胞迁徙/侵袭实验分析SGC-PSME1细胞株的生长、增殖、细胞周期、细胞凋亡和侵袭转移情况。结果:与转染空载体的SGC-PC细胞和空白对照组SGC-7901细胞相比,SGC-PSME1细胞的生长速度和克隆形成率降低,G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低,细胞凋亡率增高,差异均有统计学意义(P0.05);SGC-PSME1细胞的迁徙率与两对照组相比无明显差异。结论:PSME1基因对抑制胃癌细胞的恶性表型有一定意义。其可抑制胃癌细胞的生长、增殖,同时影响细胞周期,对细胞的侵袭转移能力可能无明显影响。     

hMLH1基因高甲基化在胃癌发生、发展中的作用

基因启动子区CpG岛甲基化使许多基因失活，从而导致恶性肿瘤的发生和发展。目的：检测hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化水平，探讨其胃癌发生、发展中的作用。方法：以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测41例胃癌、40例癌前病变和38例对照组织中hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化状态，并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果：胃癌组织中hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化阳性率为34．1％，显著高于癌前病变组的5．0％和对照组的0％（P〈0．05）。hMLHl基因甲基化阳性率与胃癌患者的年龄和肿瘤浸润深度有关（阳性率分别为46．4％对7．7％和55．0％对14.3％，P〈0．05），与性别、肿瘤分化程度和淋巴结转移无关（阳性率分别为34．8％对33．3％、28．0％对43．8％和38．1％对30．0％）。结论：胃癌组织中存在hMLHl基因启动子区CpG岛高甲基化，可能与胃癌的发生、发展有关．且可能在老年胃癌患者的肿瘤发生过程中起重要作用。     

胃癌血管靶向肽GX1抑制人胃癌血管内皮细胞增殖的机制研究

为提高胃癌血管抑制治疗的选择性,本课题前期研究应用噬菌体呈现肽库技术筛选获得了人胃癌血管靶向性环七肽GX1,并发现GX1能抑制人胃癌血管内皮细胞增殖,诱导细胞凋亡。目的：探讨GX1抑制人胃癌血管内皮细胞增殖的相关机制。方法：分别以40μmolfLGX1和40μmol／L对照肽Pep2处理正常人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和与人胃腺癌细胞株SGC7901体外共培养、产生肿瘤血管内皮相关特征的CO—HUVEC。流式细胞术检测细胞周期分布,基因芯片检测筛选GX1组与对照肽Pep2组CO—HUVEC差异表达基因并行GO分类,蛋白质印迹法检测凋亡相关基因蛋白表达。结果：与对照肽Pep2相比,GX1对CO．HUVEC和正常HUVEC的细胞周期分布均无明显影响（P〉0．05）。两组co-HUVEC共存在三百余个显著差异表达基因,其中与肿瘤生长、侵袭、转移相关者-百余个,功能主要涉及信号转导、凋亡、应激、细胞黏附、细胞代谢等。GX1组CO—HUVEC的Bax、CleavedCaspase-3蛋白表达明显上调,Bel-2蛋白表达明显下调,Caspase-8蛋白表达无明显变化。结论：GX1可能通过下调Bcl-2／Bax比值,经线粒体途径诱导靶细胞凋亡,实现对人胃癌血管内皮细胞增殖的抑制作用。