肿瘤相关抗原RCAS1重组质粒的构建与GST-RCAS1融合蛋白的表达和纯化及鉴定

目的：构建RCAS1的重组质粒、表达GST—RCAS1融合蛋白并进行纯化和生物学活性鉴定。方法：从MCF-7细胞提取总RNA，通过RT—PCR得到RCAS1的扩增产物，纯化后用EcoRⅠ和BarnHⅠ双酶切。选择pGEX-2T作为载体，用EcoRⅠ和BarnHⅠ双酶切后与上述酶切后DNA连接，转化感受态JM109大肠杆菌，挑单个菌落提取质粒进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒重新转化BL21大肠杆菌，用终浓度0．1mmol／L的IPTG诱导表达GST—RCAS1蛋白，用GST亲和层析纯化并通过SDS—PAGE电泳和Western印迹试验证实。利用特异性抗RCAS1多抗（N-18和C-20）鉴定所表达的融合蛋白，通过流式细胞仪检测GST—RCAS1融合蛋白诱导活化T细胞凋亡的作用。结果：通过RT—PCR得到大小为642bp的产物，重组质粒通过双酶切和测序鉴定正确。通过IPTG诱导在BL21大肠杆菌中表达并纯化得到GST—RCAS1蛋白，通过SDS—PAGE电泳鉴定分子量为52kMr，与预测一致，并由Western印迹试验证明为GST融合蛋白。该融合蛋白能被特异性抗RCAS1（N-18和C-20）多抗识别。GST—RCAS1对诱导活化的T细胞凋亡有一定的作用。结论：成功构建RCAS1的重组质粒，并表达GST—RCAS1融合蛋白，对其生物学活性作了初步研究。     

一种新的胆管癌相关抗原的制备及其临床应用

一种新的胆管癌相关抗原的制备及其临床应用Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆａｎｅｗｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａｒｅｌａｔｅｄ一ａｎｔｉｇｅｎａｎｄｉｔｓｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ梁平，韩本立（第三军医大学附属新桥医院肝胆外科）重庆，６３０...     

新的肿瘤标志物——胆管癌相关抗原（CCRA）

从人胆管癌组织中提纯了一种新的胆管癌相关抗原（ＣＣＲＡ）。将人胆管癌组织匀浆经饱和硫酸铵沉淀、ＤＥ－５２层析柱阶段洗脱和连续梯度洗脱、两次琼脂糖６Ｂ过滤后获得纯化的ＣＣＲＡ，抗原纯化程度达１０５．７２倍，抗原活力达９８０．００μｇ／ｍｇ蛋白质；经鉴定认为ＣＣＲＡ是一种不同于ＣＥＡ、ＡＦＰ和β２－ＭＧ的一种新的肿瘤相关抗原；分子量为１１４×１０３ｕ，蛋白电泳迁移于α２和β带之间，对胰蛋白酶和胃蛋白酶敏感，易被其破坏。免疫组化显示ＣＣＲＡ主要分布在胆管癌组织中，在胰腺癌和肝癌组织中为弱阳性，在其它肿瘤和正常消化道组织中无ＣＣＲＡ着色。     

肿瘤相关抗原与消化道肿瘤关系的研究进展

1概况本世纪50年代初，通过纯系小鼠移植肿瘤实验，初次证明化学致癌物与病毒诱发的肿瘤具有肿瘤特异性移植抗原（Tumor－spe－cifictransplantationantigen，TSTA），亦称肿瘤特异性抗原（Tumor－specificantigen，TSA），是指仅存在于某种肿瘤细胞表面，而不存在于相应正常细     

SERPA技术及其在肿瘤相关抗原鉴定中的应用

血清蛋白质组分析方法是近年出现的一种鉴定肿瘤相关抗原和自身抗体的新方法,它的主要优点在于可以直接用肿瘤组织或细胞提取的蛋白作为抗原来源进行筛选。目前国内外有许多实验室运用该技术鉴定了重要的候选肿瘤相关抗原。随着该技术的不断改进,相信会有更多的肿瘤候选抗原被鉴定,为肿瘤的诊断、治疗效果评价和预后判断提供帮助。     

一种新的胃癌相关糖脂糖蛋白抗原的研究

报告一株鼠抗人胃癌单克隆抗体(单抗)MG7相应抗原的纯化及鉴定。单抗MG7经盐析沉淀,DEAE-52纤维素柱层析纯化后,与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联,制备免疫吸附剂,用免疫亲和层析的方法从胃癌组织可溶性抗原提取液中纯化出MG7相应抗原。经高效薄层色谱,TLC放射免疫自显影,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印渍等实验分析,证实MG7相应抗原含有中性糖脂和糖蛋白,抗原决定簇存在于糖链上,是一种新的胃癌相关抗原。     

肿瘤相关抗原CA-X体内外的差异性表达

目的：探讨肿瘤相关抗原ＣＡ－Ｘ体内外表达的差异性。方法：采用蛋白质印迹和流式细胞术分别检测肺腺癌细胞株移植裸鼠前后抗原表达的变化。结果：ＣＡ－Ｘ为高分子量糖蛋白,体外培养的ＳｐｃＡ１细胞株不表达ＣＡ－Ｘ,而一旦移植入裸鼠后,肿瘤重又表达该抗原。结论：肿瘤相关抗原ＣＡ－Ｘ移植入裸后重新表达,说明ＣＡ－Ｘ的表达调控受体内某些因素的调控,也可能与细胞间信号转导有关。     

识别肿瘤相关抗原TCR Vβ基因亚家族表达特征的研究

目的：探讨特异性识别肝癌和不同组织肿瘤相关抗原（TAA）的TCR Vβ基因亚家族的表达特征。方法：用McAb共激活的健康人PBLs，作用于肝癌细胞系BEL－7402和HepG2-2215，以及将不同肿瘤患者PBLs，用RT－PCR、Southern印迹分析TCR Vβ基因亚家族识别癌抗原的优势取用。结果：不同的肝癌细胞系和不同的肝癌患者TCR Vβ、Vβ15表达较高，而另外两例非肝癌患者TCR Vβ7表达而Vβ15不表达。结论：TCR Vβ7可能是TAA的识别基因，而Vβ15可能为肝癌抗原的识别基因。     

RCAS1在多种肿瘤细胞系中的表达

目的采用多种方法检测多种肿瘤细胞系中S iSo细胞表达的受体结合肿瘤抗原(RCAS1)的表达情况。方法采用实时定量聚合酶链反应(PCR)、Northern b lot检测、免疫组化法和酶联免疫吸附实验对10个人肿瘤细胞系及2个正常人细胞系RCAS1分子的表达进行了检测。结果实时定量PCR及Northern b lot结果显示,除了正常肝细胞LO2,各肿瘤细胞及正常人胚肾细胞293均见RCAS1 mRNA表达;免疫组化见各肿瘤细胞和293细胞的细胞膜和细胞浆中均有RCAS1蛋白,但在LO2细胞中未见RCAS1蛋白;除了HuH-7和LO2细胞,其余10个细胞培养上清液中的RCAS1蛋白量均明显高于DMEM全培液(P<0.001)。结论RCAS1广泛表达于多种肿瘤细胞系中。     

宫颈癌组织中RCAS1的表达及其临床意义

目的：研究RCAS1在宫颈癌组织中的表达及其与宫颈癌的临床病理特征之间的关系。方法选取2008年1月-2011年3月在该院行手术治疗的宫颈癌组织标本和宫颈良性病变组织标本,应用免疫组化法检测RCAS1蛋白的表达表达量,并研究RCAS1蛋白和宫颈癌临床病理特征之间的关系。结果宫颈癌组织中RCAS1阳性表达率(86.15%)显著高于良性宫颈组(19.35%)差异有统计学意义(字2=40.946,P=0.000<0.05)。 RCAS1的表达与组织类型无关,差异无统计学意义(字2=0.700,P=0.403跃0.05),与临床分期无关,差异无统计学意义(字2=1.319,P=0.251跃0.05)。低分化癌组织中RCAS1的表达显著高于高分化癌,差异有统计学意义(字2=10.877,P=0.001<0.05)和中分化癌差异有统计学意义(字2=10.819,P=0.001<0.05)。伴有淋巴结转移者RCAS1的表达率显著高于无淋巴结转移者,差异有统计学意义(字2=8.715,P=0.003<0.05)。结论RCAS1在宫颈癌的发生发展中具有重要意义,RCAS1的表达水平和宫颈癌组织的恶性程度和侵袭力相关。     

星形细胞肿瘤中RCASl的mRNA及蛋白表达的临床意义

目的：探讨RCASl在人星形细胞肿瘤中的基因及蛋白表达，及其与肿瘤发生、发展的关系。方法：RT-PCR法检测59例新鲜星形细胞肿瘤组织及6例正常脑组织中RCASl的mRNA表达。免疫组织化学法检测71例星形细胞肿瘤及6例正常脑组织病理切片中RCASl的蛋白表达。结果：弥漫型星形细胞瘤（GradeⅡ）和间变型星形细胞瘤之间（GradeⅢ）、间变型星形细胞瘤和胶质母细胞瘤（GradeIV）之间RCASlmRNA的表达有统计学差异（P〈0．05），而RCASl蛋白表达仅在间变型星形细胞瘤和胶质母细胞瘤之间存在统计学差异（P〈0．01），RCASl蛋白表达与肿瘤级别呈正相关（r=0．573，P〈0．001）。在正常脑组织中未检测到RCASl蛋白。结论：RCASl的表达与星形细胞肿瘤的病理分级有关。星形细胞肿瘤中RCASl的表达在转录和转录后水平受到调节。[第一段]     

星形细胞肿瘤中RCAS1的mRNA及蛋白表达的临床意义

目的:探讨RCAS1在人星形细胞肿瘤中的基因及蛋白表达,及其与肿瘤发生、发展的关系.方法:RT-PCR法检测59例新鲜星形细胞肿瘤组织及6例正常脑组织中RCAS1的mRNA表达.免疫组织化学法检测71例星形细胞肿瘤及6例正常脑组织病理切片中RCAS1的蛋白表达.结果:弥漫型星形细胞瘤(GradeⅡ)和间变型星形细胞瘤之间(Grade Ⅲ)、间变型星形细胞瘤和胶质母细胞瘤(Grade Ⅳ)之间RCAS1 mRNA的表达有统计学差异(P＜0.05),而RCAS1蛋白表达仅在间变型星形细胞瘤和胶质母细胞瘤之间存在统计学差异(P＜0.01),RCAS1蛋白表达与肿瘤级别呈正相关(r=0.573,P＜0.001).在正常脑组织中未检测到RCAS1蛋白.结论:RCAS1的表达与星形细胞肿瘤的病理分级有关.星形细胞肿瘤中RCAS1的表达在转录和转录后水平受到调节.     

巨噬细胞株分泌的RCAS1对正常小鼠骨髓单个核细胞凋亡的影响

目的 研究巨噬细胞株分泌的RCAS1对正常小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)凋亡的影响.方法 RT-PCR方法检测巨噬细胞株RCAS1基因表达,10例正常小鼠骨髓基质细胞RCAS1基因表达作为正常对照组.流式细胞术检测8例经巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡,8例经正常小鼠骨髓基质细胞培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡作为正常对照组.对8例巨噬细胞株RCAS1的表达强度与8例经巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡率进行相关分析.结果 ①巨噬细胞株RCAS1 mRNA的表达强度为(1.98±0.24),明显高于正常对照组(0.84±0.21)(P＜0.01).②巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡率为(16.66±1.97)%,明显高于正常对照组(2.10±0.25)%(P＜0.01).③巨噬细胞株RCAS1 mRNA的表达强度与巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡率呈正相关(r=0.95,P＜0.01).结论 巨噬细胞株高表达RCAS1,RCAS1对正常小鼠BMMNC有促凋亡作用.     

缺氧对细胞滋养细胞MMP9/TIMP1基因表达及细胞侵袭力的影响

目的 探讨缺氧对细胞滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)及其抑制物1(TIMP1)mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭能力的影响.方法 将永生化的早孕细胞滋养细胞进行化学缺氧(150 μmol/L CoCl2),用免疫组化、荧光定量PCR、Western blot等方法检测正常和缺氧细胞滋养细胞系MMP9/TIMP1基因的表达,应用Transwell侵袭模型检测缺氧对细胞滋养细胞侵袭能力的影响.结果 缺氧组的细胞滋养细胞MMP9、TIMP1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05),MMP9/TIMP1比值升高,且呈时间依赖性.缺氧组细胞滋养细胞的侵袭力较对照组增强(P<0.05).结论 在生理性缺氧条件下,早孕细胞滋养细胞的侵袭力是增加的,并与MMP9/TIMP1比值的升高有关;同时TIMP1除了调节MMP9外,还可能促进细胞滋养细胞的增殖与分化.     

新型甲型H7N9流感病毒PB1-F2蛋白基因进化和变异分析

目的：对新型甲型H7N9流感病毒PB1-F2蛋白基因的进化和变异进行分析,为进一步研究致病性禽流感的致病机制和毒力因子奠定基础。方法：从IRD数据库中下载2013年2月19日至2013年10月31日的H7N9流感病毒PBl基因序列63条,运用MEGA5．2．1软件进行序列分析,用邻接法构建基因进化树;通过氨基酸序列分析PB1基因95～367片段的PB1-F2蛋白氨基酸位点变化;应用Excel表格对氨基酸构成进行计算;运用Predictive Analytics Software（PASW）18．0软件对氨基酸构成改变进行统计分析。结果：63株甲型H7N9毒株中有17株毒株的PB1-F2蛋白在其氨基酸序列第25位后发生断裂。新型甲型H7N9的进化主要分为两个系别,系别I主要由完整型PB1-F2蛋白毒株构成,系别Ⅱ主要由52aa截短型PB1-F2蛋白毒株构成。完整型PB1-F2蛋白与截短型PB1-F2蛋白各类氨基酸构成存在差异。结论：H7N9流感毒株中存在着截短型PB1-F2蛋白毒株,并且H7N9流感病毒毒株PB1-F2蛋白断裂位点均在25位氨基酸后,这将成为H7N9流感毒株进化过程中重要的特征。完整型PB1-F2蛋白与截短型PB1-F2蛋白氨基酸构成的差异对于甲型H7N9流感病毒致病性的影响有待进一步研究。