平阳霉素抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304的实验研究

目的 探讨平阳霉素抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304的量效和时效关系及其相关机制.方法 用不同浓度的平阳霉素作用于ECV304细胞24、48、72 h,MTT法观察细胞增殖抑制情况,电镜及DNA电泳实验分析细胞凋亡情况,流式细胞术分析细胞凋亡率、细胞周期及Fas、Bcl-2蛋白的表达.结果 MTT法显示不同浓度平阳霉素组间细胞生长抑制率有显著差异,浓度越高、作用时间越长,抗增殖效应越明显;流式细胞术显示细胞凋亡率随药物浓度和作用时间增加而升高,平阳霉素各浓度作用24 h后,G2-M期百分率增高,S期百分率降低,G0-G1期百分率无明显变化;Fas表达随药物浓度增加而递增,Bcl-2表达随药物浓度增加而递减.结论 平阳霉素能明显抑制ECV304细胞生长,并具有浓度和时间依赖性;平阳霉素可能是通过上调Fas蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达,从而诱导细胞在G2-M期发生凋亡.     

平阳霉素对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及其机制

目的:观察平阳霉素(PYM)对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及可能机制。方法:采用甲基三氯硅烷(MTS)比色法检测PYM对EA.hy926细胞体外生长的作用;流式细胞术测定PYM作用细胞24h后细胞凋亡、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达、线粒体膜电位的变化;免疫印迹(Western-blot)法检测PYM对EA.hy926细胞中Caspase-8、Caspase-9蛋白表达水平的影响。结果:PYM可明显抑制EA.hy926细胞的增殖,且生长抑制率具有浓度时间依赖性;流式细胞术检测结果显示PYM各浓度作用24h后,细胞凋亡百分率随药物浓度增加而增高,活化Caspase-3表达在PYM各浓度组均增强,线粒体膜电位在各浓度组均下降;Western-blot法检测结果显示PYM作用EA.hy926细胞后,Caspase-8、Caspase-9蛋白均可出现明显的剪切带。结论:PYM能抑制EA.hy926细胞的增殖,这种抑制作用是可通过诱导细胞凋亡实现的,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9参与了PYM诱导EA.hy926细胞凋亡的过程。     

麦门冬汤对肺纤维化大鼠肺功能及内质网应激作用的影响

目的探讨麦门冬汤改善博来霉素所致肺纤维化模型大鼠肺功能及内质网应激(ERS)作用的相关机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、麦门冬汤1组(麦门冬与大枣质量比4∶1)、麦门冬汤2组(麦门冬与大枣质量比20∶1),经气管插管雾化注射博来霉素建立肺纤维化大鼠模型。造模后第14天每日早晚2次灌胃麦门冬汤,连续给药20 d。观察大鼠一般情况,通过HE和Masson染色观察肺组织的病理变化,检测大鼠用力肺活量(FVC)、0.4秒率(FEV0.4/FVC)、质量FVC、吸气阻力(Ri)、呼气阻力(Re)、肺顺应性(Cydn),并用Western blot和免疫组织化学染色分析肺组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况。结果与正常组相比,模型组FVC降低、0.4秒率升高、质量FVC下降、Cydn降低;与模型组相比,麦门冬汤1组和麦门冬汤2组FVC升高、0.4秒率降低,麦门冬汤2组质量FVC回升,麦门冬汤1组和麦门冬汤2组Cydn升高。病理可见模型组大鼠的肺组织实变区内慢性炎性细胞浸润,大量胶原沉积,高表达的GRP78和CHOP蛋白主要定位于空泡化的Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡs)。麦门冬汤2组大鼠炎症缓解,胶原沉积减少,肺组织中GRP78和CHOP蛋白的表达均减少。结论麦门冬汤能够明显改善大鼠肺功能,减少肺间质胶原沉积,可能与调节纤维化肺组织实变区内AECⅡs的GRP78和CHOP蛋白表达,缓解ERS压力,恢复AECⅡs的正常功能有关。     

热量限制抑制内质网应激对脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨能否通过热量限制(CR)抑制脑缺血再灌注后内质网应激通路葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达对脑缺血再灌注损伤(CIRI)起保护作用.方法 选取6～8周雄性健康C57BL/6J小鼠30只,将其随机分为假手术组(Sham组)、造模组(CIRI组)及CR组,每组10只,持续干预至第...     

平阳霉素在治疗口腔颌面部海绵状血管瘤的作用机制

探讨平阳霉素注射入口腔颌面部海绵状血管瘤后,破坏血管内皮细胞,使瘤体缩小,从而达到治疗的目的。根据肿瘤大小口腔颌面部海绵状血管瘤可单次或多次进行治疗,最大限度地保留了颌面部的正常形态和功能。     

褪黑素减轻高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的机制

目的 探究褪黑素(MLT)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及其可能的分子机制。方法 培养HUVEC并分为3组：对照组、模型组和治疗组。对照组用葡萄糖浓度为5.5 mmol/L的DMEM培养基处理,模型组用高糖(葡萄糖浓度为30 mmol/L)的DMEM培养基处理,治疗组用含有100μmol/L MLT的高糖DMEM培养基处理。MTT法检测高糖及MLT对HUVEC增殖的影响,试剂盒法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,流式细胞术检测活性氧(ROS)的生成,Hoechst 33342/PI双染检测细胞凋亡和坏死情况,Western blot检测高糖及MLT对HUVEC内质网应激和细胞焦亡相关蛋白表达的影响。结果 与对照组相比,模型组的细胞增殖水平下降;细胞培养上清液中LDH释放量增加;HUVEC中ROS生成增加;双染试验显示,蓝色荧光和红色荧光增加,GRP78、ATF4、CHOP、IRE1α、PERK、ATF6α、NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β蛋白表达量增加。与模型组相比,治疗组的细胞增殖水平升高;细胞培养上清液中LDH释放量减...     

睾酮在体外对人卵巢颗粒细胞SVOG凋亡的影响及其内质网应激机制

目的：探讨睾酮在体外对颗粒细胞凋亡的诱导作用,并阐明其作用机制。方法：噻唑蓝(MTT)比色法检测人卵巢颗粒细胞SVOG的细胞增殖抑制率,筛选最佳药物作用浓度后,将SVOG细胞分为对照组、睾酮组(1.0×10^-5 mol·L^-1睾酮)、睾酮+氟他胺组(1.0×10^-5 mol·L^-1睾酮+1.0×10^-5 mol·L^-1氟他胺)、睾酮+牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)组(1.0×10^-5 mol·L^-1睾酮+1.5 g·L^-1 TUDCA)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组SVOG细胞中剪切型X盒结合蛋白1(XBP1s)、激活转录因子4 (ATF4)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)和死亡受体5(DR5)mRNA表达水平,流式细胞术检测各组SVOG细胞凋亡率。结果：与对照组比较,睾酮组SVOG细胞形态改变,异型细胞增多,胞质中出现较多颗粒,培养基中细胞碎片增多,SVOG细...     

蛋白酶体抑制剂通过内质网应激诱导DU145细胞凋亡机制的探讨

目的探讨蛋白酶体抑制剂(EPO)诱导前列腺癌DU145细胞凋亡机制是否与内质网应激(Er-stress)有关。方法用不同浓度的EPO处理DU145细胞,MTS检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Er-stress相关分子同源蛋白质(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、X盒结合蛋白1(XBP-1)、剪接型X盒结合蛋白1信使核糖核酸(XBP-1s m RNA);Western blot检测CHOP和GRP78的表达。结果 EPO抑制DU145细胞生长,并且呈现浓度梯度依赖性,处理组细胞凋亡率高于未处理组,高剂量组凋亡率高于低剂量组。EPO处理后,CHOP、剪接型X盒结合蛋白1(XBP-1s)、GRP78 m RNA明显升高,72 h最明显。低剂量组与高剂量组48 h CHOP和XBP-1s的表达比较差异均有统计学意义,两组48和72 h GRP78比较差异均有统计学意义。EPO处理后,XBP-1和XBP-1s基因转录水平升高,而XBP-1s随处理时间增长基因转录水平变化不明显。EPO处理后,CHOP和GRP78不断增加,72 h两种蛋白质均达到最高值,并且低剂量组与高剂量组在72 h比较差异有统计学意义。结论 EPO能抑制DU145细胞生长,诱导凋亡,其机制可能与激活Er-stress,诱发内质网的相关分子CHOP、XBP-1s、XBP-1、GRP78的表达有关。     

平阳霉素诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的 探讨平阳霉素(DYM)对体外培养的喉癌细胞凋亡的作用，并研究其作用的量-效关系。方法 取入喉鳞状细胞癌株Hep-2细胞进行细胞培养，PYM作用不同浓度不同时间后，以TUNEL，染色、电镜、流式细胞仪检测凋亡情况。结果 高浓度(100，1000μg/ml)PYM作用下，靶细胞呈典型凋亡改变。低浓度(1，10μg／ml)PYM作用下未见明显凋亡改变。在一定范围内，PYM诱导细胞凋亡作用呈浓度、时间依赖性。结论 PYM可诱导人喉癌Hep-2细胞出现凋亡。PYM诱导细胞凋亡浓度较高，诱导喉癌细胞凋亡可能是PYM化疗作用的重要机制之一。     

内质网应激与蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的相关性研究

目的 探讨CAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、海马葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和caspase-12在蛛网膜下腔出血（SAH）后的表达及其在早期脑损伤（EBI）中的作用。方法 选取健康雄性SD大鼠78只,采用随机数字表法将其分为空白对照组（6只）、假手术组（36只）与SAH组（36只）。将假手术组和SAH组分别于1、6、12、24、48、72h,采用简单随机抽样法选取6只大鼠,神经功能缺陷评分后处死。比较各组不同时间点光镜及电镜下大鼠海马神经元形态改变、CHOP、GRP78、caspase-12相对表达水平、海马神经元凋亡细胞水平、脑水肿严重程度及神经功能缺陷评分情况。结果 通过Western blot法检测CHOP、GRP78和caspase-12的表达,SAH组与空白对照组、假手术组在12、24、48、72h比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,且在SAH后24h达到峰值。TUNEL法检测大鼠海马区神经元凋亡显示,SAH组与对照组、假手术组在6、12、24、48、72h比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,在电镜下,SAH后24h节点可见明显的神经元凋亡。SAH组12、24、48、72h的神经功能缺陷评分及脑水肿程度明显重于空白对照组及假手术组,在24h达高峰,差异均有统计学意义（P<0.05）。SAH组大鼠的CHOP、GRP78和caspase-12 Western blot法检测结果与脑水肿严重程度及神经元凋亡结果之间呈极显著正相关,与神经功能缺陷评分呈极显著负相关（P<0.05）。结论 SAH后72h内确实造成了EBI,同时发生了内质网应激,内质网应激与EBI严重程度之间均呈正相关,揭示内质网应激在SAH后EBI的病理过程中发挥了重要作用。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B对脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）诱导脐静脉内皮细胞的凋亡效应。方法用不同浓度SEB感染脐静脉内皮细胞（HUVEC）2、4、8与12h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果SEB各浓度均可诱导HUVEC发生凋亡,与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）。当SEB浓度为5μg/ml时诱导细胞凋亡的能力最强;5μg/mlSEB作用HUVEC细胞2h后,即可诱导细胞产生明显的凋亡,且随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加（P〈0.01）。结论SEB可以诱导脐静脉内皮细胞凋亡,并表现出明显的时间、剂量效应关系,这可能与金葡菌L型垂直感染影响宫内胎儿发育的机制有关。     

TNF-α或mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI-1的影响及其机制

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)或弱氧化修饰低密度脂蛋白(mmLDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)PAI-1活性和mRNA表达的影响及其分子机制。方法用发色底物法测定HUVECs培养液中PAI-1的活性。用Northern印迹分析法检测PAI-1基因mRNA的表达情况,并分别用蛋白激酶C穴PKC雪或促分裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)抑制剂干预上述诱导实验。结果TNF-α或mmLDL作用HUVEC后,PAI-1活性和mRNA基因表达均明显增加。促分裂原活化蛋白激酶-激酶穴MAPKK雪的抑制剂PD98059(60μmol/L)能明显阻断TNF-α穴100U/ml雪或mmLDL穴50μg/ml雪对PAI-1活性和mRNA的诱导,但PKC的抑制剂Staurosporine(10nmol/L)和H7(15μmol/L)无显著阻断作用。结论(1)TNF-α或mmLDL能增强血管内皮细胞PAI-1活性与mRNA表达;穴2雪PAI-1活性提高与其mRNA表达增加有关;(3)MAPK途径可能在TNF-α或mmLDL诱导血管内皮细胞PAI-1表达中起重要作用。     

芍药苷对LPS诱导的脐静脉内皮细胞HMGB1及ICAM-1表达的影响

目的:观察芍药苷对LPS诱导的脐静脉内皮细胞(ECV304)高迁移率族蛋白1(HMGB1) 和细胞间粘附分子(ICAM-1)释放和表达的影响.方法:体外培养的脐静脉内皮细胞传至3代后,转种于放置了无菌处理盖玻片的6孔培养板中,细胞分为对照组、LPS刺激组(100 ng/m L )、芍药苷组(LPS 100 ng/mL+芍药苷0.625 mg/mL),同时经LPS诱导刺激,以免疫细胞化学法检测内皮细胞HMGB1和ICAM-1的表达.结果:LPS刺激20 h后,脐静脉内皮细胞释放HMGB1 增多,ICAM-1表达上调;芍药苷可以抑制内皮细胞HMGB1的释放,下调ICAM-1表达.结论: 芍药苷可能通过抑制HMGB1释放、下调ICAM-1的表达等途径对内皮细胞起保护作用.     

Corilagin抗PAF诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究Corilagin抗血小板活化因子（PAF）损伤人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的保护作用及其机制．方法用PAF损伤HUVEC,采用MTT法测定Corilagin对HUVEC活性的影响;以Fura-2／AM荧光探针负载细胞,用双波长荧光分光光度法测定HUVEC细胞内游离钙离子浓度;用ELISA法测定培养的细胞上清液中t-PA、PAI-1含量的变化．结果1μmol／L的PAF刺激内皮细胞2h后,可明显降低HUVEC的吸光度值,细胞内钙离子浓度升高,PAI-1含量明显升高,t-PA含量无明显变化;50～200μmol／L的Corilagin可升高PAF引起HUVEC吸光度值的降低,呈浓度依赖性显著降低HUVEC内游离钙浓度;Corilagin明显抑制PAF诱导的PAI-1分泌增高,对t-PA水平无明显影响．结论Corilagin对PAF诱导的HUVEC损伤具有保护作用,其机理可能与降低细胞内钙离子浓度、抑制PAI-1产生、调节t-PA／PAI-1平衡密切相关．     

阿托伐他汀抑制肺炎嗜衣原体诱导人脐静脉内皮细胞表达ICAM-1

目的观察阿托伐他汀在肺炎嗜衣原体感染人脐静脉内皮细胞过程中对细胞间粘附分子-1表达的影响。方法用HEP-2细胞培养Cpn，随后用Cpn感染人脐静脉内皮细胞，同时加入阿托伐他汀，观察内皮细胞表面ICAM-1的表达情况。结果Cpn能感染体外培养的人脐静脉内皮细胞，且阿托伐他汀能抑制Cpn诱导其表达ICAM-1。结论Cpn可能是动脉粥样硬化的始动因子之一，阿托伐他汀在预防心血管病事件中，非调脂机制可能是其重要机制。     

人参皂苷对波动性高糖致内皮细胞损伤ROS和HO-1表达的影响

目的 :观察人参皂苷对波动性高糖致内皮细胞损伤的活性氧(ROS)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法 :体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、波动性高糖模型组及人参皂苷低、中、高剂量治疗组。DCFH-DA为荧光探针检测细胞内ROS水平,Western blot及RT-PCR检测各组细胞HO-1的蛋白和m RNA表达。结果:波动性高糖导致内皮细胞ROS水平上升,并上调了HO-1的蛋白和m RNA的表达。人参皂苷能显著降低波动性高糖所致的脐静脉内皮细胞ROS水平,进一步上调HO-1的蛋白和m RNA的表达。结论:人参皂苷可能通过上调HO-1的表达而发挥其抗波动性高糖所致内皮细胞损伤的氧化应激损伤作用。     

疡愈涂剂对人白细胞与血管内皮细胞黏附影响的分子机制

目的研究疡愈涂剂(YangYuTuJi,YYTJ)对白细胞与血管内皮细胞黏附影响的分子机制,探讨其促进皮肤创伤愈合的机制。方法用虎红染色法观察YYTJ高(132.5mg/L)、中(66.3mg/L)、低(33.2mg/L)浓度对中性粒细胞(polymorphonuclear,PMN)、人单核细胞(THP-1)与肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)黏附的影响,用荧光免疫细胞化学法观察YYTJ对HUVEC表面细胞间黏附分子-1(inter cell ularadhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和CD44表达的影响。结果 YYTJ和TNF共同作用HUVEC12h后,高浓度YYTJ能明显抑制HUVEC与PMN以及THP-1黏附(P<0.05),能明显抑制HUVEC表面ICAM-1和CD44表达(P<0.05)。中浓度YYTJ能明显抑制HUVEC表面VCAM-1和CD44表达(P<0.05,P<0.01)。低浓度YYTJ能明显降低HUVEC表面CD44表达(P<0.05)。结论疡愈涂剂通过降低TNF诱导的HUVEC表面黏附分子的表达,抑制白细胞与血管内皮细胞的黏附,从而抑制过度的炎性反应。     

CGRP对氧化损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及Caveolin-1表达的影响

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对过氧化氢（H2O2）诱导离体培养的人脐静脉内皮细胞（hU-VECs）损伤的保护作用及其机制。方法 CGRP预孵育hUVECs后,用不同浓度H2O2处理hUVECs,噻唑蓝比色法（MTT）观察hUVECs活性;Western-blot检测Caveolin-1表达。结果 CGRP（0.1-100.0 nmol/L）能呈浓度依赖性提高hUVECs活性。H2O2（0.2-5.0 mmol/L）能呈浓度依赖性降低hUVECs活性。CGRP（10~100 nmol/L）预孵育hUVECs 30 min能明显提高H2O2诱导的hUVECs抗损伤能力（P（0.05）;与0.1%FBS组比较,100 nmol/LCGRP和0.05 mmol/L H2O2处理组细胞Caveolin-1蛋白水平表达下降（P（0.05）;0.8 mmol/L H2O2处理组细胞Caveolin-1蛋白表达水平上升（P〈0.05）;与H2O2处理组比较,100 nmol/L CGRP预孵育hUVECs 30 min能显著降低细胞Caveolin-1蛋白水平的表达（P（0.05）。结论 CGRP对H2O2诱导的hUVECs损伤有一定的保护作用,其机制可能与下调氧化应激导致的hUVECs Caveolin-1的表达有关。     

内质网应激中GRP78和ATF4–CHOP–Puma信号通路与帕金森病的关系及其治疗靶点的研究进展

内质网是真核细胞中重要的细胞器之一,与维持细胞稳态关系密切。当缺乏葡萄糖、缺氧、体内钙平衡紊乱或者发生氧化应激时,会引起细胞内未折叠蛋白或错误折叠蛋白的积累,导致内质网应激。帕金森病是一种慢性进行性脑变性疾病,典型的病理变化是黑质纹状体多巴胺能神经细胞变性丢失导致的多巴胺神经递质缺乏。目前对帕金森病的治疗多为缓解症状,但不能阻止疾病的进展。通过对内质网应激中的信号通路的研究发现：在帕金森病的发病过程中,多巴胺能神经元的选择性死亡与内质网应激有关。内质网应激过程中的中心调节因子：葡萄糖调节蛋白78（GRP78）及其下游ATF4–CHOP–Puma信号通路与帕金森病的发病过程有密切的联系,本文对GRP78及其下游ATF4–CHOP–Puma信号通路近些年来的研究进展进行综述,以期为帕金森病的治疗提供新的靶点和思路。