九香虫抗菌肽CcAMP1的分离纯化和抗菌活性检测

【目的】从药用昆虫九香虫 Coridius chinensis 中分离纯化抗菌肽,为进一步开发九香虫抗菌肽资源及深入挖掘九香虫的药用功能奠定基础。【方法】用大肠杆菌Escherichia coli 和金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 混合物作诱导源刺激九香虫产生抗菌肽,对血淋巴进行提取、凝胶过滤层析、固相萃取及反相色谱纯化,活性组分经质谱测定。对分离得到的这种抗菌肽进行人工合成,并进行抗菌活性检测。【结果】本研究获得一种九香虫抗菌肽CcAMP1,由17个氨基酸残基组成,分子量为1 997.37 u,带1个正电荷,表面有5个疏水氨基酸。对人工合成的CcAMP1进行抗菌活性检测表明,该抗菌肽与九香虫血淋巴一样对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌都有较好的抗菌活性,且对革兰氏阴性菌的抗菌活性更强。【结论】从九香虫中分离得到具有较强抗菌活性的阳离子抗菌肽CcAMP1,有较大的开发利用价值。     

迟眼蕈蚊抗菌肽BhSGAMP-1-S在大肠杆菌中的优化表达及其活性分析(英文)

【目的】BhSGAMP-1 是迟眼蕈蚊唾液腺抗菌肽,为了能够更好的了解其分子特性,我们将其表达、纯化并进行了活性测定。【方法】依据大肠杆菌稀有密码子设计并合成了抗菌肽基因 BhSGAMP-1-S,以 pMAL-c2X 作为表达载体在大肠杆菌 TB1 中进行融合表达,融合蛋白通过麦芽糖亲和层析柱进行纯化,获得的融合蛋白经肠激酶切割后,混合物通过分子筛凝胶层析和反相高效液相色谱来获得单体重组抗菌肽 BhSGAMP-1-S,对获得的抗菌肽进行活性测定。【结果】在最优的表达条件下融合蛋白以可溶的形式表达,100 mL 诱导菌液经多步纯化后可得 0. 38 mg 的重组抗菌肽 BhSGAMP-1-S,抑菌活性测定表明所获得的抗菌肽对部分测试革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌有较强的抑菌活性。【结论】本研究第一次成功的在大肠杆菌中诱导表达了修饰合成的抗菌肽 BhSGAMP-1-S,纯化后的抗菌肽具有很好的抑菌活性,这为进一步研究和应用奠定了基础。     

黄鳍金枪鱼抗菌肽YFGAP在大肠杆菌中融合表达及其活性检测

【目的】抗菌肽YFGAP由32个氨基酸组成,分子量为3.4 kD,对革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G?)表现出强效的抑制作用,不具有溶血活性。在大肠杆菌中表达抗菌肽YFGAP,分离纯化抗菌肽并鉴定其生物学活性。【方法】化学合成EK-YFGAP和L-EK-YFGAP基因序列,构建表达载体pET22b-ELP20-EK-YFGAP、pET22b-ELP40-EK-YFGAP和pET22b-ELP40-L-EK- YFGAP,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,可逆相变循环纯化融合蛋白。肠激酶酶切,经Vivaspin Turbo纯化柱纯化,测定重组抗菌肽的抑菌活性和溶血活性。【结果】纯化出两种融合蛋白ELP40-EK-YFGAP和ELP40-L-EK-YFGAP,肠激酶酶切纯化后获得重组抗菌肽YFGAP,对4种病原菌均有抑制效果,溶血活性较低。【结论】以ELPs作为非色谱纯化标签,实现了抗菌肽YFGAP的融合表达,具有操作简单、成本低、易于扩大的优势,为重组抗菌肽的量化制备及应用提供了理论基础和技术支持。     

枯草杆菌BS-98分泌的抗真菌蛋白的分离纯化及其部分性质的研究

拮抗菌（Bacillussubtilis）BS-98菌株在BPY液体培养基中产生的蛋白质经硫酸铵分级盐析、SephsdexG-100柱层析、DEAE-纤维素柱层析和SephadexG－100柱再层析后,分离纯化得到的抗菌蛋白在电泳中显现出三条带。经初步纯化的抗菌蛋白对热稳定,对蛋白酶部分敏感。抑菌谱测定表明,抗菌蛋白对芦笋茎枯病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、灰霉菌、立枯丝核菌等病原真菌及黄瓜角斑病菌都具有强烈的抑制作用。     

百合枯萎病拮抗细菌的筛选、鉴定及其抑菌物质研究

【目的】筛选对百合枯萎病具有抑菌活性的拮抗细菌,对其抑菌活性物质进行初步分离纯化分析。【方法】以强致病力的百合尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为靶菌,采用系列稀释法和平板对峙法初筛拮抗细菌,并通过产铁载体能力、水解酶活性、土壤定殖力等多种生防特性指标进行复筛,结合形态学特征、生理生化指标和16S rRNA基因序列比对鉴定其分类地位;利用百合尖孢镰刀菌作为靶菌进行活性追踪,结合酸沉淀、快速柱色谱、HPLC等分离纯化手段,对菌发酵液中的抑菌活性物质进行纯化分析。【结果】在64株百合根际细菌和386株海洋细菌中进行初筛,得到9株对百合镰刀菌具有较强拮抗活性的菌株,最后筛选了1株拮抗活性较强且产铁载体能力和水解酶活性、土壤定殖能力较高的菌株11B91,鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),其抑菌活性物质初步推测可能为iturin和fengycin脂肽类化合物。【结论】菌株11B91在百合枯萎病的生物防治中具有潜在的应用价值,证实海洋来源的微生物也具有防治陆地植物病原菌的潜力,为植物病害的防治拓宽了思路。     

桑氏链霉菌KJ07抗菌蛋白的分离纯化及部分特性

【目的】桑氏链霉菌(Streptomyces sampsonii)KJ07对无性阶段的杨树紫纹羽病菌(Rhizoctonia violacea)有较强的拮抗作用。为研究其抗菌物质,对其发酵液中主要抗菌物质进行分离纯化并明确其部分性质。【方法】采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-50分子筛层析等方法进行分离纯化。【结果】获得单一抗菌活性蛋白,分子量约为28.4 k D。该抗菌蛋白抑菌谱较广,能使R.violacea菌丝畸形,菌丝隔膜不明显,细胞壁及胞内原生质开始降解,并产生黑色物质。稳定性试验显示抗菌蛋白最适温度为25°C,最佳p H为6.0,当温度≥60°C时,抑菌活性下降大于20%,当p H4.0或≥8.0时,抑菌活性下降大于12%。其活性还受金属阳离子影响,但对蛋白酶K不敏感。利用自动Edman降解法测得抗菌蛋白N端10个氨基酸序列,但通过NCBI BLAST程序未检索到与其相似性较高的已知抗菌蛋白。【结论】推测该抗菌蛋白可能是一种新的蛋白质。     

杨树溃疡病生防菌株N6-34抗菌活性物质的分离纯化与结构鉴定

【背景】杨树溃疡病是一种主要由葡萄座腔菌引起的杨树枝干病害,危害严重。前期从杨树中分离到一株内生拮抗细菌N6-34,研究表明该菌株拮抗效果好,对多种植物病原菌均有较强的拮抗作用。【目的】对拮抗细菌N6-34产生的抗菌活性物质进行分离纯化,并鉴定了活性物质组分的结构。【方法】通过硫酸铵盐析、甲醇抽提、分子筛、高效液相色谱等方法分离纯化N6-34菌株的抗菌活性物质,并对其进行结构鉴定。【结果】N6-34菌株发酵液经多步分离纯化,共获得14个组分,其中有13个组分具有抗菌活性,经一级质谱分析,获得了13种抗菌活性组分的分子量;经二级质谱分析,将13种抗菌活性物质鉴定为Fengycin A或Fengycin B的同系物或同分异构体。【结论】从N6-34菌株发酵液中分离获得了13种抗菌成分,为杨树溃疡病的生物防治提供了理论依据。     

家蝇幼虫抗菌肽的超声诱导及分离纯化和活性研究

目的:分离纯化家蝇(Musca domestica)幼虫免疫血淋巴中的抗菌肽,研究抗菌肽的性质和抑菌特性.为进一步研究家蝇幼虫抗菌肽的产生及应用提供实验基础.方法:通过超声处理诱导家蝇幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,结合高速离心,两步CM-Sepharose离子交换层析,冷冻干燥浓缩等步骤,分离得到一种具抗菌活性的蛋白质.用Tricine-SDS-PAGE鉴定抗菌肽的纯度和性质,抑菌试验分析抗菌肽的抑菌特性.结果:300W,50Hz超声处理60s能够诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示为一条带,相对分子量大约为5.8kD.纯化蛋白对阴沟肠杆菌,绿脓杆菌等G-杆菌的抑菌活性较强,而对金黄色葡萄球菌效果不显著.结论:诱导和纯化了一种家蝇幼虫抗菌肽,为此类活性物质的分离纯化提供了有效的方式.     

黄粉虫幼虫小分子量抗茵肽的分离纯化

昆虫抗菌肽具有良好的抑菌效果,有望开发成新一代抗生素。本文以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合液作为诱导源,采用针刺法使黄粉虫TenebriomolitorL．幼虫感染微生物产生抗菌肽,并对抗菌肽进行了提取、色谱分离纯化及抑菌活性检测。结果显示,诱导组和对照组的三氟乙酸粗提物无抑菌活性;经SephadexG50、SuperdexPeptide凝胶色谱分离后,从诱导组和对照组均可获得对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有抑菌作用的组分,而且诱导组活性明显高于对照组;通过Resource15RPC反相色谱分离纯化,从诱导组获得一具有明显抑制革兰氏阳性菌的组分,质谱检测该组分为混合肽,主要由分子量为1876．21u、1904．21u的小肽组成,可能是一种比Thanatin分子量更低的昆虫抗菌肽。     

Isolation and purification of small antimicrobial peptide from larvae of mealworm, Tenebrio molitor

昆虫抗菌肽具有良好的抑菌效果,有望开发成新一代抗生素.本文以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合液作为诱导源,采用针刺法使黄粉虫Tenebrio molitor L.幼虫感染微生物产生抗菌肽,并对抗菌肽进行了提取、色谱分离纯化及抑菌活性检测.结果显示,诱导组和对照组的三氟乙酸粗提物无抑菌活性;经SephadexG50、Superdex Peptide凝胶色谱分离后,从诱导组和对照组均可获得对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有抑菌作用的组分,而且诱导组活性明显高于对照组;通过Resource 15RPC反相色谱分离纯化,从诱导组获得一具有明显抑制革兰氏阳性菌的组分,质谱检测该组分为混合肽,主要由分子量为1 876.21u、1 904.21u的小肽组成,可能是一种比Thanatin分子量更低的昆虫抗菌肽.     

镧对华重楼生长及皂苷含量的影响

本研究以4年生华重楼（Paris polyphylla Smith var. chinensis（Franch.）Hara）为实验材料,分别采用0、5、20、80、160 mg/L的加镧营养液培养华重楼植株,通过比较不同营养生长指标及采用HPLC法测定根茎皂苷组分,研究不同施镧水平对华重楼生长及皂苷含量的影响。结果显示,镧对华重楼生长及皂苷含量均有显著影响,随着镧溶液浓度的增加,华重楼皂苷含量呈上升趋势,但当镧含量达到160.00 mg/L时,则会对华重楼的生长产生抑制作用,导致株高降低、比叶面积升高。研究结果表明80.00 mg/L的施镧水平最有利于华重楼的营养生长及根茎皂苷积累。     

蚤休、重楼和王孙

经过历史考证,作者确认:首载于《神农本草经》的蚤休为重楼属的Paris polyphyllaSmith var. chinensis (Fr.)Hara;首载于《滇南本草》中的重楼为重楼属的Paris polyphyllaSmith var. yunnanensis (Fr.) Hand. -Mazz.;《植物名实图考》中的王孙则是三白草科的三白草Saururus chinensis (Lour.) Bail.     

产甾体皂甙华重楼内生菌的筛选与鉴定

从华重楼(Paris polyphyllavar.chinensisFranch)的地下块茎中分离筛选得到2株可能产生甾体皂甙的内生菌(SS01和SS02),薄层层析检测菌株SS01、SS02的发酵产物分别有3条和2条层析带与重楼总皂甙的层析带迁移率相当。形态和生理生化特征初步表明SS01和SS02分属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)和芽孢杆菌属(Bacillussp.)细菌。扩增、测序得到SS01和SS02的部分16S rDNA序列,GenBank接收号分别为AY842143和AY842144。用Blastn调出与菌株16SrDNA同源的序列,用Clustal W进行多重序列对比,用软件Phylip按Neighbor-Joining方法构建16SrDNA系统发育树。菌株SS01和SS02分别与Cedecea davisae DSM4568、Paenibacillus daejeonensis处于同一分支,相似性分别为98.9%和97.7%,将它们鉴定为Cedecea davisae SS01和Paenibacillus daejeonensis SS02。     

多叶重楼遗传多样性的RAPD分析

应用RAPD技术检测了多叶重楼(Paris polyphyfzo)2个变种4个居群的遗传多样性,并与1个凌云重楼(P．cronquistii)居群进行了比较。选择的16个随机引物在5个居群中共检测到246个多态位点。在居群水平上,滇重楼2个居群的多态位点百分比(PP鳓分别为57．43％和54．67%,Shannon指数分别为0．3080和0．2830;七叶一枝花2个居群的PPB分别为56．33％和57．75%,Shannon指数分别为0、3080和0．3293。在变种水平上,滇重楼的PPB为75．14％,Shannon指数为0．3922,遗传分化系数(Gst)为0．3085;七叶一枝花的PPB为80．31％,Shannon指数为0．3992,遗传分化系数(Gst)为0．3726;在种的水平PPB达92．05%,遗传分化系数Gst达0．5151。聚类分析显示滇重楼和七叶一枝花有较近的亲缘关系,而与凌云重楼遗传距离较远。此结果从分子水平上支持了过去将滇重楼和七叶一枝花划分为1个种下2个变种的形态分类观点。     

几种重楼的染色体核型研究

作者对重楼属(Paris)的几个种:球药隔重楼(P.fargesii),毛重楼(P.mairei),花叶重搂(P.marmorata),黑籽重楼(P.thibetica),海南重楼(P.dunniana),巴山重搂(P.bashanensis),以及多叶重楼(P.polyphylla)的两个变种狭叶重楼(var.stenophylla)和华重楼(var.chinensis)的染色体核型进行了研究,发现种间及种内不同居群(population)间的核型都存在不同程度的差别。核型简式为:球药隔重楼K(2n)=2x=10=6m+2t(SAT)+2t+3bs,毛重楼K(2n)=2x=10=6m+4t+1bs,花叶重楼K(2n)=2x=10=6m+4t,黑籽重楼K(2n)=2x=10=2m+4m(SAT)+4t,海南重楼K(2n)=2X=10=6m+2t(SAT)+2t,巴山重楼K(2n)=2x=10=6m+4st,狭叶重楼K(2n)=2x=10=6m+1st+3t,华重楼K(2n)=2x=10=6m+4t。     

Antimutagenic activity of extracts from anticancer drugs in Chinese medicine

The antimutagenic activities of extracts of 36 commonly used anticancer crude drugs from Chinese herbs were studied by using the Salmonella/microsomal system in the presence of picrolonic acid or benzo[a]pyrene to test whether they contain direct or indirect antimutagens. Each crude drug was extracted with boiling water for 2 h, the method which is commonly used by Chinese people to prepare the drug for oral intake. The extracts of Pteris multifida P. showed the highest antimutagenic activity against picrolonic acid-induced mutation. The extracts of 6 other different kinds of Chinese herbs were shown to have a moderate antimutagenic activity against picrolonic acid-induced mutation, and they are: Actinidia chinensis P., Artemisia lavendulaefolia DC. and Crotalaria sessiflora L., Prunella vulgaris L., Paris polyphylla S. and Ampelopsis brevipedunculata T. The extracts of Smilax china L., Prunella vulgaris L. and Actinidia chinensis P. were demonstrated to inhibit the mutagenicity of benzo[a]pyrene completely. The 12 other kinds of extracts of Chinese herbs which had a moderate antimutagenic activity against benzo[a]pyrene were: Pteris polyphylla S., Ampelopsis brevipedunculata T., Duchesnea indica F., Gossypium herbaceum L., Lithospermum erythrorrhizon SZ., Artemisia lavendulaefolia DC., Selaginella doederleinii H., Dianthus superbus L., Centipeda minima ABA., Curcuma zedoaria R., Marsdenia tenacissima WA. and Kalopanax septemlobus K. Among them, there were 5 kinds of crude drugs, Actinidia chinensis P., Artemisia lavendulaefolia DC., Prunella vulgaris L., Paris polyphylla S. and Ampelopsis brevipedunculata T., containing antimutagenic factors against both picrolonic acid- and benzo[a]pyrene-induced mutation.     

一株产重楼皂甙内生细菌的分离与鉴定

从产自四川彭州的华重楼(Parispolyphyllavar·chinensisFranch)地下块茎中分离得到16株菌。经以薯蓣皂甙元为标准对照的薄层层析分析,表明其中编号为SNUS-1(AY842149)的菌株能分泌重楼皂甙或其类似化合物。16SrDNA序列(约1,500bp)系统发育分析表明:菌株SNUS-1与Pseudomonastolassii(AF255336)和Pseudomonastolassii(D84028)的遗传距离分别为0和0·003,在系统进化树上三者又严格聚为一族,结合形态及生理特征确定其为托氏假单孢菌(Pseudomonastolassii)。     

湖南重楼属植物小志

通过多年的调查、标本采集和分类研究,初步查明湖南产重楼属植物5种、6变种和1变型。其中有2种（凌云重楼Paris cronquistii,北重楼Paris verticillata)、3变种（滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis,卵叶重楼Paris delavayi var.petiolata,长药隔重楼Paris polyphylla var.pseudothibetica)和1变型（宽叶重楼Paris polyphlla var.stenophylla f.latifolia)为湖南新纪录。同时,还记录了各种、变种和变型的简要特点、分布和生境,并列出了它们的检索表。     

Microsatellite markers for assessing genetic diversity of the medicinal plant Paris polyphylla var. chinensis (Trilliaceae)

Paris polyphylla var. chinensis is a perennial herb with medicinal properties that is widely used in traditional Chinese medicine. However, this plant has been on the edge of extinction during the last few decades because of excessive deforestation based on the intense ethnopharmaceutical interest. We isolated 12 microsatellite loci from a (CT)(n)-enriched genomic library of P. polyphylla var. chinensis. The polymorphism at each locus was analyzed by screening 30 individuals from a natural population. The number of alleles ranged from 2 to 5. The observed and expected heterozygosities ranged from 0.000 to 0.467, with a mean of 0.247, and from 0.383 to 0.662 with a mean of 0.537, respectively. Six loci (Pp1, Pp3, Pp6, Pp7, Pp9, and Pp12) were found to significantly deviate from Hardy-Weinberg equilibrium. This may be due to the small population size, inbreeding or null alleles. Five of the pairwise comparisons (Pp1 and Pp4, Pp2 and Pp5, Pp2 and Pp9, Pp2 and Pp12, Pp11 and Pp12) exhibited significant linkage disequilibrium (P < 0.05). We conclude that these microsatellite markers will be useful for population genetic studies of P. polyphylla var. chinensis.