河南不同地区赤霞珠葡萄表皮酵母菌多样性研究

该研究采用富集分离方法,从河南省内不同地区（安阳、长垣和漯河）葡萄种植园的赤霞珠葡萄表皮分离酵母菌,并利用分子生物学技术结合形态观察对菌株进行鉴定。结果表明,共分离得到193株酵母菌,为10种表型,且被鉴定为4个属6个种,分别为仙人掌有孢汉逊酵母（Hanseniaspora opuntiae）、葡萄有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）、陆生伊萨酵母（Issatchenkia terricola）、橡树假丝酵母（Candida quercitrusa）、葡萄酒有孢汉生酵母（Hanseniaspora vineae）和Pichia terricola。其中,H. opuntiae和H. uvarum分布范围广,且漯河地区所蕴含的酵母菌种类最多。不同地区的赤霞珠葡萄表皮蕴含着多种类型的酵母菌资源,且不同地区的酵母菌种类及数目上的分布存在一定差异。     

甘肃河西走廊葡萄酒产区高产β-葡萄糖苷酶酵母菌株筛选

以甘肃河西走廊葡萄酒产区成熟葡萄浆果自然发酵过程中分离得到的115 株酵母菌株为出发菌株,采用对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷为底物的平板初筛,摇瓶复筛,对高产β-葡萄糖苷酶酵母菌株进行WL营养培养基和赖氨酸培养基初步分类以及26S rDNA D1/D2区序列分析。结果表明：6 株酵母β-葡萄糖苷酶活性与商业酵母ICV-D254酶活性相似,酶活力可达（51.40±4.74） mU/mL,其中菌株QLFE、MQFEH-1、MQFSC-3、MQFEH-2和MQFSM-3为酿酒酵母属,菌株QLFE-4为梅奇酵母属,与分子鉴定结果一致。     

赤霞珠葡萄自然发酵过程中酵母菌的分离与鉴定

对赤霞珠葡萄自然发酵过程中的酵母菌进行了分离和鉴定,目的是探寻赤霞珠葡萄酒发酵过程相关酵母菌群的变化规律。研究共分离到123株酵母菌,其中2009年分离到71株,2010年分离到52株。经菌落形态鉴别,培养基培养进行初步分类,共获得10种培养类型,其中有5种培养类型重复出现于2个年份。进一步采用5.8S rDNA-ITS区域RFLP分析法,从分子水平区分为9种类型。再通过基因序列分析,将其鉴定为分属于7个属的8种酵母菌:Aureobasidium pullulans、Hanseniaspora uvarum、Hanseniaspora vineae、Rhodotorula mucilaginosa、Pichia caribbica、Cryptococcus flavescenss、Candida zemplinina及Saccharomyce cerevisiae。酵母属(Saccharomyce)酵母是自然发酵中后期的主导菌,发酵前期主要是非酵母属酵母。     

宁夏玉泉营地区酿酒葡萄酵母菌的分离筛选及分子鉴定

为进一步探究宁夏玉泉营地区酿酒葡萄酵母菌的多样性,更好地开发利用本土葡萄酒产区酵母菌资源,从宁夏玉泉营地区的葡萄园土壤、葡萄果实表皮以及葡萄自然发酵过程中进行酵母菌的分离筛选,对得到的22株酵母菌株运用WL营养琼脂培养基进行初步聚类分类,并采用26S rDNA D1/D2区序列分析法进行菌株鉴定。结果表明,供试菌株共鉴定为6种,分别为大隐球酵母（Cryptococcus magnus）、美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）、葡萄酒有孢汉生酵母（Hanseniaspora vineae）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、克鲁维毕赤酵母（Pichia kluyveri）、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientalis）。     

烟台干红葡萄酒发酵过程中酵母种类鉴定

利用WL培养基对分离自烟台葡萄果皮和干红葡萄酒发酵过程中的117株酵母菌进行归类,采用26S rDNA D1/D2区序列分析进行分子鉴定,共得到6属8种。并对发酵过程不同时期的酵母种类进行分析,结果表明发酵过程中酵母种类持续减少。     

红提葡萄中酵母菌多样性的研究

为研究红提葡萄酵母菌多样性,以石河子地区的红提葡萄为原料,采用传统分离培养方法从中筛选酵母菌,并通过形态 观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定。 结果表明,共筛选鉴定出24株酵母菌。 其中毕赤酵母属（Pichia）16株、汉逊 酵母属（Hanseniaspora）4株、梅奇酵母属（Metschnikowia）4株。 库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）为优势种,占分离菌株的50%。 该 研究可为红提葡萄酵母菌资源的开发与利用提供理论依据。     

贵州传统小曲酵母菌分子指纹图谱分析

采用26S rRNA基因D1/D2区域序列分析方法将59株分离自贵州5个不同地区传统小曲的酵母菌鉴定为6个酵母菌种：1株阿萨丝孢酵母（Trichosporon asahii）、32株扣囊覆膜孢酵母（Saccharomycopsis fibuligera）、8株Saccharomycopsismalanga、4株伯顿丝孢毕赤酵母（Hyphopichia burtonii）、6株异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）和8株酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。本研究展示了6个酵母菌种的WL培养基菌落特征和5.8S rRNA基因ITS区限制性片段长度多态性酶切图谱特征，为这6个菌种的快速鉴定提供依据。在菌种鉴定的基础上，本研究进一步采用串联重复-tRNA指纹图谱法分析酵母菌的种内差异，共展示了17个基因型，H. burtonii、W. anomalus与S. fibuligera分别鉴定出4、3种和8种基因型，其中S. fibuligera基因型10、11、12、15、16与17之间的遗传关系较近，而其余菌种内部基因型之间的遗传关系相对较...     

食品中酵母菌的分离鉴定及其致腐能力

参照食品安全GB 4789.15-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》中酵母菌的检测方法,从水果、蜂蜜中分离筛选酵母菌并根据其26S rDNA D1/D2区序列进行鉴定。从蜂蜜、草莓、香蕉、橙子、油桃、芒果中共分离得到3 株固囊酵母（Citeromyces matritensis）、3 株异常威客汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）、12 株季也蒙毕赤酵母（Meyerozyma guilliermondii）、1 株长孢洛德酵母（Lodderomyces elongisporus）、2 株葡萄有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）和1 株海洋酵母菌（Metschnikowiareukaufii）。将每种酵母菌接种于苹果、油桃和香蕉中与空白对照进行对比,以食品腐烂的速率来判断酵母菌的腐败能力,确定了W. anomalus和 C. matritensis是上述3 种水果中主要的腐败酵母菌,除此之外,M. reukaufii对油桃有较强的腐败作用,M. guilliermondii对香蕉的腐败效果明显。食品工业中加强对上述这些腐败酵母菌的检测与控制,可以更好地防止腐败酵母对于食品工业造成的危害。     

新疆传统发酵酸奶中酵母菌的分离鉴定及系统发育分析

从新疆塔城地区哈萨克族不同牧场家庭中自然发酵牛乳采集18份样品,从中分离筛选得到47株酵母菌,并进行形态鉴定、生理生化鉴定、聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）,26S rDNA分子生物学鉴定,构建系统发育树。结果表明,47株菌中包括库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）18株,阿萨希丝孢酵母菌（Trichosporon asahii）10株,酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）7株,丝孢酵母（Trichosporon coremiiforme）4株,马克斯克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）4株,东方伊萨酵母（Issatchenkia orientalis）2株,发酵毕赤酵母（Pichia fermentans）1株,近平滑假丝酵母（Candida parapsilosis）1株。鉴定结果对进一步认识并利用哈萨克族传统发酵酸奶中酵母菌资源具有重要意义。     

野生毛葡萄产地来源耐酸降酸酵母的筛选鉴定及其特性研究

采用苹果酸降解指示培养基从野生毛葡萄产地来源土壤、毛葡萄果实和自然发酵醪中快速筛选苹果酸降解酵母菌,从946株初筛酵母菌中获得3株苹果酸强降解酵母菌。经菌落形态、培养特征、生理生化特征以及分子生物学方法鉴定,分别命名为酿酒酵母L3（Saccharomyces cerevisiae L3）、酿酒酵母Y1（Saccharomyces cerevisiae Y1）和解苹果酸裂殖酵母D2（Schizosaccharomyces malidevorans D2）。降酸特性试验结果表明,3株菌均能有效降解苹果酸,其中酿酒酵母L3的降解率达到86．4％。实验结果为实现毛葡萄酒一步发酵产酒和降酸提供了优良酵母资源。     

不同株系赤霞珠葡萄表皮酵母菌的多样性研究

通过采用富集分离方法,从3个赤霞珠株系（R5、ISV-FV5和169）的葡萄果实表皮共分离得到酵母菌36株。利用26S rDNA的D1/D2和5.8S-ITS区序列分析并结合形态学特征对这些菌株进行了多样性研究。共鉴定出3个酵母菌属的4个已知种群,分别为Cryptococcus magnus、Cryptococcus uzbekistanensis、Rhodosporidiobolus ruineniae和Hanseniaspora uvarum。Hanseniaspora uvarum为株系R5所特有,Cryptococcus uzbekistanensis和Rhodosporidiobolus ruineniae为株系ISV-FV5所特有,而Cryptococcus magnus同时存在于株系ISV-FV5和169上。结果表明,不同株系的赤霞珠葡萄表皮蕴含着多种类型的酵母菌资源,而且尽管其生长的客观条件是一致的,但因为株系的不同其所含酵母菌种群的组成上也存在明显的差异。     

几株酵母菌的分子系统学鉴定

通过对酵母菌5.8S核糖体RNA的ITS区域PCR扩增及限制性酶切片段多态性(RFLP)的图谱分析以和26S rDNA D1/D2区及5.8S-ITS区的序列分析,共鉴定13株分离自新疆鄯善地区的葡萄酒相关酵母菌。5.8S-ITS区的4种内切酶(HaeⅢ、Hin6Ⅰ、HinfⅠ、AluⅠ)的酶切分析产出4种特异性图谱。根据26S rDNA D1/D2区的序列分析和BLAST比对,将供试菌株鉴定为4个属4个种,分别为Saccharomyces cerevisiae、Candida zemplinina、Hanseniaspora uvarum、Pichia kluyveri var. kluyveri;而根据5.8S-ITS-RFLP及5.8S-ITS序列分析,将供试菌种鉴定为Saccharomyces cerevisiae、Candida zemplinina、Hanseniaspora uvarum、Issatchenkia terricola 4个属4个种。3种方法对供试的10个菌株的鉴定结果一致,而对另外3株的鉴定结果不同。     

酸奶中污染酵母菌和霉菌的分离及鉴定

以室温放置直至变质的市售酸奶为样品,从中分离出2株酵母菌和4株霉菌,分别命名为Y1、Y2、M1、M2、M3、M4。酵母菌采用形态学和26SrDNAD1/D2区序列分析鉴定,确定Y1为乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis),Y2为马克思克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)。霉菌经菌落及菌体形态学鉴定,确定M1、M2、M4为青霉(Penicillum),M3为白地霉(Geotrichum candidum)。     

5株酵母菌的系统发育树分析以及发酵性能测定

从四川藏区高原威代尔冰葡萄渣泥中分离纯化出5株酵母,用18S rDNAD1/D2 区域序列,通过序列比对及构建系统发育树分析,通过WL培养基的培养观察和普通光学显微镜观察,并且进一步对5种酵母菌的发酵性能进行测定。结果表明：JH、JH1、JH2、JH3和JH4分别鉴定为葡萄汁有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）、美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、解脂耶罗维亚酵母（Yarrowia lipolytica）和异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）。该5种酵母菌均有一定的发酵能力,并且发酵液总酚、还原糖、果糖以及总酸含量等均有不同变化。总体来说,JH2的发酵性能最好。     

笃斯越桔中酿酒酵母菌的筛选、鉴定及特性研究

从口感好、自然发酵的笃斯越桔果汁中分离出140株酵母菌.经过对酵母菌产气、产酒精情况的测定以及发酵酿酒后感官评定,筛选出4株酵母菌,分别编号为C13、C18、D07和D15.对这4株酵母菌进行形态学和生理学特征鉴定以及26SrDNA D1/D2区序列分析,最终鉴定出4株酵母菌为同一种菌,即酵母属(Saccharomyces )中的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae).结合商业葡萄酒活性干酵母进行比较分析,选择优良菌株D15作为实验菌株,测定其生物特性,结果表明D15具有较好的发酵特性、耐受特性和快速生长特性.D15在20°Bx、pH 3.5笃斯越桔果汁中24℃发酵9d,残糖量为2.8 g/L,酒精度(V/V)为12.5%,可以作为笃斯越桔酒酿造的优选菌株.     

传统发酵牦牛酸乳中酵母菌的分子生物学鉴定

通过提取羊八井地区传统发酵牦牛酸乳中分离到的36 株酵母菌的基因组DNA,经聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增其26S rDNA并测定序列,将序列输入GenBank中通过基本局部序列检索工具（Basic Local Alignment Search Tool,BLAST）检索确定种属（同源性≥99%）。结果表明：传统发酵牦牛酸乳中酵母菌主要为马克斯克鲁维酵母17 株（47.2%）、酿酒酵母6 株（16.7%）、平常假丝酵母5 株（13.9%）、喜仙人掌毕赤酵母4 株（11.1%）、发酵毕赤酵母3 株（8.3%）,1 株鉴定失败。并构建系统发育进化树结合分子鉴定结果分析酵母菌的遗传多样性。     

天山冻土中嗜冷酵母菌生物多样性

采用麦芽浸膏富集平板涂布天山冻土中可培养酵母菌,通过麦芽浸膏分离培养基筛选菌株.采用酵母菌常规生理生化实验、最适生长温度、最适pH对分离菌株的生理学进行研究.以NL1和NL4为PCR扩增引物,通过26S rRNA基因D1/D2区序列同源性分析,初步确定酵母菌株的系统进化地位.分离筛选到4株嗜低温酵母菌,分属于隐球酵母(Cystofilobasidium infirmominiatum)、掷孢酵母(Sporobolomyces patagonicus)、棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)和毕赤酵母(Pichia kluyveri).     

辽宁传统发酵豆酱中乳酸菌及酵母菌分离鉴定

以采自辽宁省不同地区农家38 份传统发酵豆酱样品为试材,通过选择性培养分离出豆酱中的优势乳酸菌及酵母菌疑似菌株,再利用16S rDNA和26S rDNA D1/D2序列分析方法,对其进行初步鉴定并保藏。结果表明,14 个地区38 份样品中共分离到乳酸菌62 株,初步鉴定结果为L. plantarum 19 株、E. faecium 14 株、T. halophilus12 株、L. sakei 11 株、L. fermentum 4 株、P. pentosaceus 2 株。分离到酵母菌56 株,初步鉴定结果为Zygosaccharomyces 18 株、Candida 13 株、C. parapsilosis 14 株、D. hansenii 7 株、Debaryomyces 4 株。丹东市、沈阳市、阜新市等地区的样品中乳酸菌和酵母菌的多样性较好。