同期放化疗诱导人结直肠癌细胞发生上皮-间质转化

目的:探讨放化疗抵抗的结直肠癌细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的意义.方法:采用5-FU化疗同期进行放疗对人结直肠癌野生型细胞(HCTll6)进行干预,诱导放化疗共同抵抗的细胞株(HCT1 16CRR)并采用克隆形成实验进行放化疗抵抗性的鉴定.高倍显微镜下观察细胞形态学变化.采用Real-time PCR和Western印迹,检测上皮表型标志物E-cadherin,间质表型标志物N-cadherin、波形蛋白(vimentin)、核转录因子(Snail)mRNA及其蛋白的表达.结果:放化疗抵抗的结直肠癌细胞发生与EMT相符的形态学改变,细胞呈纺锤体状,极性消失,并出现伪足;Real-time PCR和Western印迹结果显示E-cadherin mRNA及蛋白表达下调;N-cadherin,vimentin,Snail mRNA及蛋白表达上调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:放化疗抵抗后的人结直肠癌细胞发生EMT,其与结直肠癌的治疗抵抗相关.     

Oct4-shRNA慢病毒载体沉默结直肠癌Oct4基因并诱导细胞凋亡的初步研究

目的:探讨Oct4-shRNA慢病毒载体对人结直肠癌SW480细胞Oct4的抑制效率及对细胞凋亡的影响.方法:构建针对Oct4的4对Oct4-shRNA干扰慢病毒载体质粒,用Oct4与GFP融合的过表达质粒分别与4个干扰质粒共转染293T细胞,采用Western blot检测GFP的表达,筛选出干扰效果最好的Oct4-shRNA慢病毒载体,用293T细胞包装后转染SW480细胞,实时荧光定量PCR和Western blot检测Oct4的表达情况,流式细胞仪测定细胞凋亡.结果:与转染阴性对照病毒的对照组相比,转染Oct4-shRNA慢病毒载体的SW480细胞Oct4的mRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.01);细胞凋亡明显增加(P＜0.01).结论:Oct4-shRNA慢病毒载体可有效抑制SW480细胞Oct4表达,并显著增加细胞凋亡.     

SCUBE2过表达通过Wnt/β-catenin抑制结直肠癌细胞上皮-间质转化

目的:研究信号肽-CUB-EGF结构域蛋白2(SCUBE2)对结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及可能的分子机制。方法:首先,用real-time PCR与Western blot法检测人结直肠癌HCT116细胞和正常人结直肠上皮FHC细胞SCUBE2的表达;HCT116细胞转染GV144-SCUBE2质粒过表达SCUBE2后,MTT、Transwell和流式细胞术分别检测其对细胞活力、迁移和凋亡的影响。转染GV144-SCUBE2质粒6 h后加入10μg/L重组转化生长因子(TGF)-β1蛋白继续培养48 h,real-time PCR或者Western blot法检测EMT标志物[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail]、β-catenin、c-Myc和细胞周期蛋白(cyclin)D1的表达。随后,在HCT116细胞中使用Wnt/β-catenin通路激活剂氯化锂(Li Cl)或抑制剂XAV93920并加入TGF-β1且过表达SCUBE2,检测Wnt/β-catenin通路激活或阻断后对HCT116细胞EMT的影响。结果:HCT116细胞中SCUBE2的表达明显低于FHC细胞;过表达SCUBE2能够抑制HCT116细胞的活力与迁移,但是对其凋亡影响不大;SCUBE2增加了E-cadherin的表达,降低了TGF-β1诱导的vimentin、Snail、β-catenin、c-Myc和cyclin D1的表达,XAV93920增强了SCUBE2对EMT的影响,而Li Cl阻碍SCUBE2对EMT的影响。结论:过表达SCUBE2能够抑制结直肠癌细胞的生长与迁移,抑制其EMT的发生,这一过程可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用的。     

上皮-间质转化在蒿甲醚逆转结直肠癌细胞放化疗抵抗中的作用

目的:探讨上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在蒿甲醚(artemether,ARE)对同期放化疗抵抗人结直肠癌细胞HCT116(HCT1 16CRR)的逆转作用中的作用.方法:实验分为四组:1)对照组;2)单纯放化疗组;3)ARE联合放化疗组;4)ARE组.采用Real-time PCR和Westernblot,检测各组EMT相关指标E-cadherin,N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达情况.结果:Real-time PCR和Western blot结果显示E-cadherin mRNA及其蛋白的表达情况,单纯放化疗组＜ARE联合放化疗组＜对照组＜ARE组;N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达情况,单纯放化疗组＞ARE联合放化疗组＞对照组＞ARE组.结论:EMT在ARE逆转同期放化疗抵抗人结直肠癌细胞HCT116CRR细胞系的放化疗抵抗作用中有重要的作用,即上调E-cadherin mRNA及其蛋白的表达,下调N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达.     

HAS-2沉默抑制大肠癌细胞上皮间质转化

目的本研究主要探讨HAS-2沉默前后对大肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法分别用Realtime PCR及Western blot方法检测HAS-2 siRNA转染前后E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail mRNA、蛋白表达水平变化,用免疫荧光法观察HAS-2 siRNA转染前后E-Cadherin、Vimentin表达的变化。结果 E-Cadherin蛋白和mRNA在大肠癌细胞的表达水平在HAS-2 siRNA转染组比阴性对照组明显上调(0.05),而Vimentin蛋白和mRNA,Snail mRNA and Slug蛋白在大肠癌细胞的表达水平在HAS-2 siRNA转染组表达水平比阴性对照组明显下调(0.05)。结论 HAS-2沉默对大肠癌细胞EMT有抑制作用。     

沉默Twist基因对胃癌BGC-823细胞上皮-间质转化的影响

目的探讨干扰Twist基因表达对胃癌细胞株BGC-823细胞上皮-间质转化的影响。方法采用干扰技术并构建质粒、生物信息学软件、qRT-PCR技术、划痕实验、Transwell实验和Western blot法对BGC-823细胞进行体外实验。结果 Twist在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P0.05),且与胃癌患者的预后呈负相关性(P0.05)。干扰Twist表达后,胃癌细胞株的迁移、侵袭能力减弱(P0.05);E-cadherin的相对表达量增高(P0.01),而N-cadherin的相对表达量降低(P0.05)。结论胃癌细胞株BGC-823中Twist的表达可促进胃癌细胞发生上皮-间质转化,Twist在胃癌发生发展中起癌基因的作用。     

胃癌组织中Twist、HIF-1α表达与上皮间质转化的关系

目的分析Twist、HIF-1α在胃癌组织中的表达及与胃癌临床病理参数之间的相关性,探讨两者在判断患者预后中的意义及两种蛋白的表达与上皮间质转化的关系。方法采用免疫组化SABC法检测120例胃癌标本及其对应癌旁组织中Twist、HIF-1α、E-cad、N-cad的表达,分析Twist、HIF-1α的表达与患者临床病理参数、术后生存时间之间的关系;探讨两种蛋白的表达与上皮间质转化的关系。结果在胃癌组织中Twist、HIF-1α、N-cad、E-cad的阳性率分别为59.1%、61.7%、46.7%、37.5%,癌旁组织中的阳性率分别为18.3%、22.5%、10.8%、91.7%。4种蛋白在肿瘤组织中的表达率与癌旁组织中的表达率之比有明显差异性(P<0.05)。Twist与肿瘤远处转移、淋巴结转移及浸润深度明显相关(P<0.05)。HIF-1α与肿瘤的组织学分型、浸润深度、淋巴结转移呈明显相关性。Twist和(或)HIF-1α阳性的患者其五年生存率明显低于其阴性的患者。Twist、HIF-1α的表达与E-cad的低表达和N-cad的反常性高表达存在密切相关性。结论胃癌组织中Twist、HIF-1α表达与肿瘤的...     

结直肠癌中NAT10与上皮-间质转化的关系

目的 探讨结直肠癌中N-乙酰基转移酶10(N-acetyltransferase 10, NAT10)与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的关系及临床意义。方法 采用免疫组化MaxVision 3HRP法分别检测NAT10及EMT相关蛋白E-cadherin、β-catenin、vimentin在95例结直肠癌癌组织及30例癌旁组织中的表达,分析NAT10与EMT相关蛋白表达的相关性,及NAT10与结直肠癌临床病理特征的关系。结果 结直肠癌组织中NAT10的阳性率[70.5%(67/95)]高于癌旁组织[10%(3/30)]。结直肠癌组织中E-cadherin的阳性率[56.8%(54/95)]低于癌旁组织[96.7%(29/30)](P<0.001),β-catenin的阳性率[74.7%(71/95)]高于癌旁组织[0(0/30)](P<0.001),viminten的阳性率[35.8%(34/95)]高于癌旁组织[0(0/30)](P<0.001)。结直肠癌组织中NAT10与E-cadherin表达呈负...     

缺氧诱导MT1E表达对三阴型乳腺癌细胞上皮-间质转化的影响

目的 探究缺氧诱导金属硫蛋白1E(metallothionein 1E,MT1E)表达对缺氧状态下三阴型乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞体外上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 将MDA-MB-231细...     

肝细胞生长因子促进HeLa细胞上皮间质转化

目的探讨肝细胞生长因子对宫颈癌He La细胞上皮间质转化的影响。方法以不同浓度的HGF(0、5、10、20和40 ng/m L)处理细胞24 h或20 ng/m L肝细胞生长因子(HGF)处理细胞不同时间(0、6、12、24和48 h),MTT检测细胞活力;用HGF(20 ng/m L)处理细胞24 h,倒置显微镜观察He La细胞形态,划痕实验检测细胞的迁移及Transwell实验检测细胞的侵袭能力。Western blot检测上皮细胞的标志蛋白E-Cadherin及转录因子snail和间质细胞的表面标志蛋白vimentin的表达,HGF/c-Met信号通路分子的表达情况。结果 HGF促进He La细胞增殖,其中以20 ng/m L或20 ng/m L处理24 h生存率达到最高峰;此外,HGF可以促进He La细胞迁移、侵袭及上皮间质转化,并促进c-Met磷酸化,并且激活p-ERK、p-AKT以及促进snail的蛋白表达(P0.05或P0.01)。结论 HGF可以促进He La细胞上皮间质转化,其机制可能是通过HGF/c-Met/MAPK或HGF/c-Met/AKT通路上调snail表达,进而调控E-cadherin或vimentin表达有关。     

亚硒酸钠诱导结直肠癌SW480细胞系凋亡

目的探讨亚硒酸钠诱导结直肠癌SW480细胞凋亡的信号通路。方法将SW480细胞分为三组,分别进行亚硒酸钠、Mn TMPy P以及两者联用处理;用DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧;Western blot方法检测细胞信号通路JNK和ATF-2的磷酸化,以及c-Myc、c-Jun、c-Fos、cyclin D1、cyclin A2、Bcl-2等相关蛋白表达;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率。结果亚硒酸钠可使SW480细胞产生活性氧;抑制JNK和ATF-2的磷酸化(P0.05),下调c-Myc、c-Jun、c-Fos、cyclin D1、cyclin A2、Bcl-2的表达诱导SW480细胞凋亡(P0.05);用活性氧抑制剂Mn TMPy P可减轻亚硒酸钠所致的上述变化(P0.05)。结论亚硒酸钠可通过产生活性氧,抑制JNK和ATF-2的磷酸化,下调c-Myc、c-Jun、c-Fos、cyclin D1、cyclin A2、Bcl-2的表达,促进SW480细胞的凋亡。     

Oct4B1 在结直肠癌干细胞中的表达及意义

目的：探讨胚胎干细胞转录因子Oct4的亚型Oct4B1在结直肠癌干细胞中的表达及其可能的作用。方法：以结直肠癌细胞株SW480细胞采用悬浮培养法培养出的3D微球体及其亲本细胞SW480为研究对象,采用细胞分化实验、细胞软琼脂克隆实验、流式细胞技术检测干细胞标记物CD133、CD44的表达以验证3D微球体是否富集肿瘤干细胞（CSCs）,实时荧光定量PCR（RT qPCR）检测两种细胞Oct4B1 mRNA表达水平。结果:3D微球体具有分化为普通肿瘤细胞的能力,相对于亲本细胞,3D微球体体外克隆形成能力明显增强（P <0.01）,干细胞标记物CD133、CD44明显高表达（ P <0.01）,Oct4B1 mRNA表达水平明显增（P<0.01）。结论：干细胞调控因子Oct4的亚型Oct4B1在富集结直肠癌CSCs的3D微球体中表达明显增高,其可能参与结直肠癌CSCs的调控。     

基因沉默PRDX1 表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭迁移的影响

目的:探讨RNA 干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA 干扰PRDX1 的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480 细胞,转染后的SW480 细胞可分为PRDX1 基因沉默组(si-PRDX1)和阴性对照组(Vector)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测两组细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白表达;采用Transwell 侵袭和迁移实验检测基因沉默PRDX1 表达对结直肠癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot 检测两组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)家族部分蛋白表达水平。结果:基因沉默PRDX1 表达可有效抑制结直肠癌SW480 细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白水平的表达,与阴性对照组相比(Vector),差异均具有统计学意义(P<0.01),说明基因沉默PRDX1 的SW480 细胞系构建成功;Transwell 侵袭和迁移实验显示si-PRDX1组细胞的侵袭及迁移能力较对照组均明显降低(P<0.01);Western blot 结果显示,与Vector 组相比,si-PRDX1 组细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达明显增加,而MMP-2 及MMP-9 的表达显著下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因沉默人结直肠癌SW480 细胞的PRDX1 表达可有效抑制细胞的侵袭、迁移及转移能力,其机制可能会通过调控TIMP-2、MMP-2 及MMP-9 的表达介导。     

间充质干细胞条件培养液促进肺癌细胞上皮间质转化

BACKGROUND: The complex relationship between bone marrow mesenchymal stem cells and cancers severely limit the clinical application of mesenchymal stem cells. So it is urgent to study the role of mesenchymal stem cells in tumor growth and metastasis. OBJECTIVE: To explore the effect of human bone marrow mesenchymal stem cells on epithelial mesenchymal transition in non-small cell lung cancer A549 and PAa cells. METHODS: The A549 and PAa cells were cultured with mesenchymal stem cell supernatant (mesenchymal stem cell conditioned medium, MSCs-CM). The cellular morphology was observed under a microscope. The mRNA and protein expression of E-cadherin, N-cadherin, Vimentin, Slug, Snail, and Twist were determined by RT-PCR and western blot. Transwell and wound healing assay were used to detect the change of migration and metastatic ability. RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the control group, the cellular morphology of experimental group showed mesenchymal-like changes. In response to MSCs-CM, there was decreased E-cadherin but increased N-cadherin, Vimentin and Slug, Snail, Twist at mRNA and protein levels compared with the control group (P < 0.05). The migration and metastatic abilities of the experimental group were also increased. So, human bone marrow mesenchymal stem cells can promote epithelial mesenchymal transition in A549 and PAa cells, and enhance the migration and metastatic abilities of A549 and PAa cells.       

miR-125靶向SMAD4抑制脂多糖诱导的人结肠上皮细胞向肿瘤细胞转化

目的 观察脂多糖(LPS)对正常结肠上皮细胞向肿瘤细胞转化的影响,探索miR-125和SMAD4在细胞转化过程中的作用和机制.方法 以人正常结肠上皮细胞系HCoEpiCs为研究对象,用CCK-8法探索LPS的最佳刺激浓度;用LPS连续刺激HCoEpiCs细胞40代并检测细胞周期相关基因cyclinD1、癌基因c-myc...     

失巢凋亡与上皮间充质转变和肿瘤干细胞

背景：上皮起源的肿瘤干细胞可能经历上皮到间充质的转变导致间充质特征的癌干细胞的产生,癌干细胞与失巢凋亡抵抗和肿瘤转移性疾病的起始相关。 目的：综述癌干细胞的生物学特点及其与上皮间充质的转变、失巢凋亡的关系。 方法：由第一作者采用电子检索的方式在PubMed数据及万方数据库中检索1990-01/2010-12有关肿瘤干细胞的研究,关键词为“上皮间充质转变,癌干细胞”。 结果与结论：上皮细胞到间充质状态转变的诱导作用已经牵涉到肿瘤细胞的迁移和广泛转移的增强,并且可能促成凋亡和失巢凋亡抵抗。癌干细胞与间充质细胞有关联,并且在肿瘤的开始,生长、转移和治疗抵抗方面起一个关键的作用。有效针对靶向癌干细胞的策略对于监测癌症治疗的进展和评估新的治疗因子是很关键的,间充质状态转变在肿瘤发生和转移方面产生和维持癌干细胞,提供治疗干扰这种新途径起到了调控作用,并且治疗干扰具有超越传统抗癌疗法的潜力。     

IncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 探讨IncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及可能机制.方法 qRT-PCR方法检测34例结直肠癌组织及相应的癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中IncRNA RAB11B-AS1的表达水平.构建稳定过表达RAB11B-AS1的S...