牛奶及水样中泰乐菌素酶联免疫检测方法研究

针对环境及食品中泰乐菌素残留问题,本研究将泰乐菌素分子结构侧链醛基一步直接氧化为羧基,并将其作为新的半抗原,通过免疫新西兰大白兔制备了特异性的抗泰勒菌素多克隆抗体,优化的反应条件为:包被原稀释6000倍,抗体稀释2000倍,反应缓冲液为pH 7.4、吐温含量0.1%、离子浓度0.01 mol/L的PBST,二抗稀释倍数为4000倍,二抗反应时间30 min。在此优化条件下,建立了检测泰乐菌素的间接竞争酶联免疫分析法(icELISA),半数抑制浓度(IC_(50))为1.39 ng/mL,线性范围(IC_(20)~IC_(80))为0.17~11.0 ng/mL,检出限(IC_(10))为0.07 ng/mL,与结构功能类似物交叉反应率均小于0.1%。对纯牛奶、自来水、鱼塘水中泰乐菌素的添加回收率在78.4%~105.6%之间,RSD15%,检测结果与HPLC-MS/MS方法具有良好的相关性(R~2=0.97)。本研究建立的icELISA方法适用于牛奶及水样中泰乐菌素残留的特异性快速筛查。     

金属有机骨架材料构建氯霉素电化学传感器的研究

本文通过水热合成法合成了镍-均苯三酸金属有机骨架材料(Ni_3(BTC)_2),并将其与聚丙烯酸钠(PAAS)混合后修饰到玻碳电极(GCE)表面,制得电化学传感器(Ni_3(BTC)_2-PAAS/GCE),用循环伏安法和差分脉冲法研究了传感器的响应性能,并用于水产品中氯霉素(CAP)检测。结果表明,Ni_(3 )(BTC)_2对CAP的还原具有较好的电催化作用。差分脉冲峰电流增加量与CAP浓度在3.1×10~(-9)～1.55×10~(-7)mol·L~(-1)范围内呈线性关系,线性方程为ΔI(μA)=139.72 C_(CAP)+9.9616(R~2=0.9988);在1.55×10~(-7)～9.3×10~(-7) mol·L~(-1)范围内呈线性关系,线性方程ΔI(μA)=33.109 C_(CAP)+26.596(R~2=0.9993),检出限为2.0×10~(-9) mol·L~(-1)。使用该传感器检测实际样品鲤鱼和虾肉中CAP的加标回收率在84.3%～96.6%之间。该传感器制作简单,稳定性、选择性和重复性好,可满足水产品中CAP的快速检测需要。     

酶联免疫法检测动物组织及尿液中氟苯尼考与甲砜霉素的残留

针对食品中氟苯尼考及甲砜霉素多残留污染问题,基于新设计的半抗原制备了系列人工抗原,通过免疫动物获得了可同时特异性识别氟苯尼考与甲砜霉素的多克隆抗体,并在抗体-包被原组合的筛选及反应条件优化基础上,建立了动物组织及尿液中氟苯尼考和甲砜霉素残留同时检测的酶联免疫分析方法。本方法对于氟苯尼考的半数抑制浓度(IC_(50))为1.32 ng/mL,线性检测范围为0.31~5.61 ng/mL,检出限为0.12 ng/mL;对于甲砜霉素的IC_(50)为2.13 ng/mL,线性检测范围为0.41~11.20 ng/mL,检出限为0.15 ng/mL,与氯霉素等多种类似物均无交叉反应,动物组织及尿样中氟苯尼考和甲砜霉素的添加回收率均在77.2%~116.0%之间,相对标准偏差15%,适用于实际样品中氟苯尼考和甲砜霉素的快速筛查检测。     

流动注射-化学发光法测定硝酸士的宁

在碱性条件下,KM_nO_4能氧化鲁米诺产生化学发光,硝酸士的宁能抑制该化学发光,且抑制强度与硝酸士的宁的浓度在一定范围内有良好的线性关系。在此基础上,建立了流动注射测定硝酸士的宁的化学发光分析方法。在最优实验条件下,硝酸士的宁的线性范围为0.05～1.0μg/mL和1.0～10μg/mL,检出限为10 ng/mL,线性方程分别为y=70c+891,相关系数R~2=0.995(c为硝酸士的宁的浓度,10~(-8)g/mL);y=448c+9160,相关系数R~2=0.993(c为硝酸士的宁的浓度,10~(-6)g/mL)。对0.5μg/mL的硝酸士的宁连续进行11次平行测定,其相对标准偏差为2.9%。     

化妆品中氯霉素的气相色谱-质谱快速分析

研究了用气相色谱-质谱分析化妆品中氯霉素(CAP)的方法.以乙酸乙酯作为提取溶剂,BSTFA TMCS(99 1)作为衍生化试剂,在70℃衍生化60min,用GC-MS(NCI)进行测定.方法的检出限为10 μg/kg,线性范围在0.5～500 ng/mL之间,在10、100、500 μg/kg 3个添加水平,方法回收率为94.4%～95.7%,相对标准偏差为0.23%～1.3%.方法操作快速简单,3 h可以完成整个样品分析.方法已用于化妆品中氯霉素的测定.     

基于新型量子点荧光微球的氯霉素免疫层析试纸条的制备和应用

以羧基化CdTe/ZnSe量子点荧光微球为标记物,通过1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)活化法将氯霉素(CAP)单克隆抗体与量子点荧光微球偶联制备荧光探针.氯霉素全抗原(CAP-HS-BSA)及羊抗鼠二抗分别喷涂硝酸纤维素膜,形成检测线(T线)和质控线(C线),组装成新型氯霉素量子点荧光微球免疫层析试纸条,建立了快速、定量检测牛奶中CAP的方法.本研究开发的量子点荧光微球试纸条可在15 min内完成牛奶样品中CAP的定量检测,线性范围为0.1~100.0μg/L,检出限为0.1μg/L.牛奶样品CAP的加标回收率为93.3%~97.9%,相对标准偏差在4.9%~6.9%之间.     

分子印迹固相萃取-电化学发光检测牛奶中氯霉素

基于氯霉素(CAP)能强烈抑制Ru(bpy)32+/TPA体系的电化学发光(ECL)信号,结合分子印迹固相萃取(MISPE)样品前处理技术,建立了一种高灵敏度检测牛奶中CAP残留量的方法。在最优实验条件下,体系的ECL猝灭值ΔI与CAP浓度呈良好线性关系,线性范围为1.0×10-13～1.0×10-11g/mL,检测限为3×10-12g/mL,精密度和准确度好,可用于牛奶中CAP残留量的测定。     

罗丹明B-过氧乙酸-氢氧化钠化学发光法测定痕量硫

基于硫离子对罗丹明B 过氧乙酸 NaOH化学发光有较强的增敏作用,建立了流动注射化学发光增强法测定痕量硫的新方法。该法的线性范围为3.0×10-8～8.0×10-7g/mL,检出限为3.5ng/mL,相对标准偏差为2.2%(1.0×10-7g/mLS2-,n=11)。此法已用于环境水样中痕量硫的测定。     

噻呋酰胺人工抗原的合成及酶联免疫吸附分析方法的建立

以化合物2-甲基-4-三氟甲基-5-噻唑甲酸(MTCA)为噻呋酰胺的半抗原合成人工抗原,采用活泼酯法合成免疫原MTCA-BSA,分别采用活泼酯法、混合酸酐法和N,N'-羰基二咪唑/4-二甲氨基吡啶(CDI/DMAP)法合成3种包被原MTCA-OVA-1、MTCA-OVA-2和MTCA-OVA-3。免疫动物后,最终以包被原MTCAOVA-3筛选并获得了具有高特异性的噻呋酰胺多克隆抗体,建立了检测噻呋酰胺的间接竞争酶联免疫吸附(ic-ELISA)分析方法。本方法线性检测范围为0.08~10.00 mg/L,半数抑制浓度(IC_(50))为1.39 mg/L,检出限为0.08 mg/L,对自来水、湖水和小麦中的噻呋酰胺添加回收率在72.0%~128.3%之间,检测结果与HPLC法具有良好的相关性(R~2=0.9994)。本研究建立的ic-ELISA方法可用于环境水样与小麦等农产品中噻呋酰胺残留的快速检测。     

毛细管电泳电致化学发光法测定牛奶样中的土霉素残留量

以铕离子(Ⅲ)掺杂类普鲁士蓝(Eu-PB)化学修饰铂电极为工作电极,基于铜(Ⅱ)-土霉素配合物对三联吡啶钌(Ⅱ)电致化学发光强度的增敏作用,建立了用毛细管电泳电致化学发光法测定土霉素的新方法。实验对毛细管电泳分离条件和电化学发光检测条件进行了优化。在最佳实验条件下,电致化学发光峰面积与铜(Ⅱ)-土霉素配合物的浓度在0.138～46.1μg/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为57.0ng/mL(3σ)。本法用于牛奶样中土霉素残留量的测定,加标回收率为95.5%(n=5)。     

QuEChERS结合超高效液相色谱-串联质谱法检验腐败血中4-甲基甲卡西酮和甲卡西酮

建立了腐败血中4-甲基甲卡西酮和甲卡西酮的超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法。腐败血样品经乙腈水混合溶液(乙腈:水=4:1,V/V)提取,无水MgSO_4脱水和C_(18)吸附剂净化。选用Waters BEH C_(18)色谱柱分离,0.1%甲酸-水(5 mmol/L乙酸铵)和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾电离,正离子(ESI~+)模式扫描,多反应监测(MRM)模式检测。4-甲基甲卡西酮和甲卡西酮在0.5～100 ng/mL范围内线性关系良好(R~2≧0.9993),检出限(S/N=3)分别为0.01 ng/mL(4-甲基甲卡西酮)和0.03 ng/mL(甲卡西酮),定量限(S/N=10)分别为0.1 ng/mL(4-甲基甲卡西酮)和0.5 ng/mL(甲卡西酮)。     

流动注射化学发光法测定痕量钯

在NaOH介质中,H_2O_2能氧化鲁米诺(Luminol)产生化学发光,在OP乳化剂存在下,金属钯能催化该反应,据此建立了Luminol-NaOH-H_2O_2-OP-Pd(Ⅱ)化学发光体系,用流动注射化学发光法测定钯,检出限为4.1ng/mL,Pd(Ⅱ)浓度在1.0×10~(-8)～1.0×10~(-6)g/mL范围内与发光强度呈良好的线性关系,相对标准偏差(n=10)为3.8％。     

酚酞啉在辣根过氧化酶发光检测中的应用

探讨酚酞啉对HRP(辣根过氧化酶)–Luminol–H2O2化学发光体系的增强作用。将酚酞啉加入辣根过氧化酶(HRP)–Luminol–H2O2化学发光体系,发光强度显著增强,发光持续时间达30 min以上。HRP–Luminol–H2O2化学发光体系的HRP质量浓度在5~800 pg/m L范围内与相对发光强度呈良好的线性关系,线性回归方程为lg I=1.07lgc+0.98,线性相关系数r=0.96,检出限为1.25 pg/m L。测定结果的相对标准偏差为2.8%~5.1%(n=10),加标回收率为93.5%~96.2%。酚酞啉可用于HRP及其相关标记物的定量分析。     

细交链格孢菌酮酸化学发光酶联免疫吸附分析方法

采用自制的抗细交链格孢菌酮酸(TA)多克隆抗体,建立了以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢为发光体系的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法定量检测谷物中TA毒素。通过研究选择最佳工作参数:反应缓冲液pH 6.4~7.4、包被浓度2.0μg/mL、封闭液1.0%OVA、抗血清稀释80000倍、竞争反应时间30 min、二抗稀释度为8000倍、发光底物125μL/孔。其线性回归曲线方程为y=49.82-20.14x,R~2=0.9966,半抑制浓度IC_(50)为0.973 ng/mL,最低检出限为0.010 ng/mL,线性范围0.032~30.244 ng/mL,在面粉和燕麦中的平均加标回收率为82.4%~96.1%和81.5%~93.4%,批内变异系数与批间变异系数均小于12%,与液质方法比较准确度无显著差异;与其他几种食品中的常见真菌毒素无交叉反应。可快速、准确、灵敏地测定谷物中TA检测。     

磁固相萃取与胶体金免疫层析试纸条联用检测食品中氯霉素

本文建立了磁固相萃取前处理与胶体金免疫层析试纸条联用检测食品中氯霉素(CAP)的分析方法。蜂蜜和鸡蛋样品经磁固相萃取后,再用检测牛奶样品中CAP的胶体金免疫层析试纸条检测。结果表明:两者联用后使得只能用于检测牛奶样品中CAP的试纸条也能应用于蜂蜜和鸡蛋等样品,而且方法的检出限在蜂蜜和鸡蛋样品中低至0.2ng/g。该联用方法扩大了CAP试纸条的应用范围,同时降低了检测成本。     

同位素稀释超高液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中生物素含量

建立了同位素稀释超高液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中生物素含量的分析方法。样品采用0.1 mol/L H_2SO_4 121℃水解30 min提取后,QASIS PRiME HLB固相萃取柱净化,经C_(18)色谱柱分离,三重四极杆电喷雾质谱检测,内标法定量。生物素在0.5～25 ng/mL范围内线性关系良好(R~2=0.998);高、中、低3个加标水平的回收率在95.8%～110.8%之间,相对标准偏差范围小于4.6%。方法检出限(S/N=3)为0.75μg/100 g,定量限(S/N=10)为2.5μg/100 g。方法可为鸡蛋中生物素的含量水平测定和研究提供技术支持。     

基于上转换荧光标记的氯噻啉免疫层析方法研究

利用氯噻啉单克隆抗体标记的Na YF4:Yb,Er上转换荧光纳米材料(Upconversion nanoparticles,UCNPs)建立了一种简单、快速、灵敏的氯噻啉上转换荧光免疫层析(Upconversion immunochromatographic assay,UICA)方法。将氨基功能化的UCNPs与氯噻啉单克隆抗体偶联制备UICA试纸条,使用外接980 nm激光光源的荧光分光光度计实现对氯噻啉的定量检测。在优化的UICA工作条件下,通过交叉反应(Crossreactivity,CR)、添加回收和高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)实验评价了UICA的敏感性、特异性、精确性和准确性。在最优条件(p H 8.0、0.3 mol/L Na Cl、2.5%甲醇、0.2%PEG2000)下,UICA可在25 min内完成对氯噻啉的检测,其抑制中浓度(Half-maximal inhibition concentration,IC_(50))为97.37 ng/m L,检出限(IC_(10))为26.30 ng/m L,线性范围(IC_(10)~IC_(90))为26.30~363.08 ng/m L。除吡虫啉外,UICA对其它氯噻啉结构类似物无交叉反应。在田水、土壤、梨、桃、小麦、黄瓜、番茄、大米等基质中的平均添加回收率为71.8%~97.2%,相对标准偏差为0.7%~10.7%。UICA对田水和梨实际样品的检测结果与HPLC的检测结果相符。     

分子印迹基质固相分散-液相色谱法测定牛奶中的氯霉素残留

以对模板分子具有较强识别特性的分子印迹聚合物为基质固相分散吸附剂, 提取牛奶中痕量氯霉素, 最后用HPLC法测定. 研究了氯霉素分子印迹聚合物对样品中氯霉素的提取和净化效果, 在优化条件下, 方法的检出限为0.15 ng/mL, 定量限为0.50 ng/mL. 不同氯霉素添加量的回收率大于93.2%, RSD＜5.9%. 方法适用于牛奶中氯霉素残留的测定.     

酶联免疫法检测海洋贝类中的荧蒽

分别以BSA和OVA为载体蛋白,利用活化酯法和混合酸酐法合成了荧蒽的免疫原和包被原,对新西兰大白兔进行免疫,制备出效价较高、特异性较好的荧蒽多克隆抗体。建立出一种检测贝类中荧蒽的间接竞争酶联免疫吸附方法(ic-ELISA),优化了包被原、一抗、二抗工作浓度,包被时间、抗原抗体反应时间及封闭液等实验检测条件。该方法特异性强,稳定性和灵敏度高,线性回归方程为y=19. 97x+15. 495 (R2=0. 99),线性范围为1～500 ng/mL,IC50为53 ng/mL,检出限为0. 94 ng/mL,回收率为81. 3%～102. 5%,RSD为2. 5%～8. 9%。将该法应用于实际贝类样品的检测,检测结果和HPLC相比,具有较好的相关性,该方法可用于实际样品中荧蒽的快速分析检测。     

纳米金催化鲁米诺化学发光体系测定甲巯咪唑

在碱性介质中,甲巯咪唑能强烈增敏纳米金-鲁米诺-硝酸银化学发光体系产生较强的化学发光信号,据此建立了一种流动注射化学发光测定甲巯咪唑的新方法。在优化实验条件下,该方法对甲巯咪唑的检测线性范围为1.0×10-9~1.0×10-8、1.0×10-8~1.0×10-7、1.0×10-7~1.0×10-6g/mL,检出限(S/N=3)为3.0×10-10g/mL,相对标准偏差为1.2%(n=11,ρ=1.0×10-8g/mL)。将该法用于药物中甲巯咪唑含量的测定,结果满意。同时,采用化学发光光谱表征技术对该体系的化学发光反应机理进行了初步探讨。