米诺环素对体外培养的人牙周韧带细胞生物活性的影响

目的 研究米诺环素对体外培养的人牙周韧带细胞(HPDLCs)增殖及生物合成的影响。方法 将不同浓度的米诺环素(1、5、20、100、500、2500 mg/L)加入体外培养的HPDLCs,共孵育2d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并分别检测其对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果 在5-100mg/L的浓度范围内,米诺环素可显著促进HPDLCs的增殖及生物合成(P<0.01)。但高浓度(2500 mg/L)的米诺环素则严重抑制细胞的生物学活性。结论 一定浓度的米诺环素能提高HPDLCs的生物学活性,但过高浓度的米诺环素具有细胞毒性,不利于牙周组织的修复和再生。     

米诺环素对成年大鼠下颌骨成骨细胞内外金黄色葡萄球菌的作用

目的:探讨米诺环素对金黄色葡萄球菌感染的成年大鼠下颌骨成骨细胞的抗菌作用。方法:采用金黄色葡萄球菌ATCC 25923感染体外培养的成年大鼠下颌骨成骨细胞,被感染的成骨细胞部分经庆大霉素处理后加入米诺环素,另一部分直接加入米诺环素,溶解细胞后计算细胞内外的菌落数。结果:经庆大霉素杀灭细胞外细菌后,细胞内细菌在米诺环素的作用下,随着时间的延长细菌数量减少,24h后基本抑制细胞内菌;随着米诺环素直接作用感染细胞的时间延长细胞内外的细菌均减少,3h细胞外细菌基本抑制,24h后细胞内的细菌也基本完全抑制。结论:米诺环素能够抑制成骨细胞内外的金黄色葡萄球菌,具有时间依赖性,为种植体给药系统的临床应用奠定实验基础。     

抑菌浓度米诺环素对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的 研究抑菌浓度的米诺环素对成骨细胞增殖、分化和矿化及Runt相关转录因子2（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）mRNA表达的影响。方法 将米诺环素溶液（0、0.1、0.5、1、10 μg·mL^-1）与原代成骨细胞共培养,CCK-8检测增殖活性,通过ALP活性检测、茜素红染色、荧光定量聚合酶链反应检测探讨米诺环素对成骨细胞分化、矿化的影响。结果 0.1、0.5、1 μg·mL^-1的米诺环素可以促进细胞的增殖,上调ALP、Runx2 mRNA的表达水平,增加钙含量及钙化结节的形成,其中1 μg·mL^-1具有最大促进作用（P<0.05）;当浓度为10 μg·mL^-1时这种促进作用开始下降,并对ALP活性和OPN表达有显著抑制作用（P<0.01）。结论 适宜抑菌浓度的米诺环素能促进成骨细胞增殖,上调Runx2、ALP、OPN的表达水平,促进成骨细胞分化和矿化。     

亚抗菌剂量的米诺环素对大鼠实验性牙周炎治疗作用的初步观察

目的:初步观察亚抗菌剂量的米诺环素在大鼠实验性牙周炎中的治疗作用。方法:由24只成年雄性SD大鼠组成3个实验组:1组是模型组:仅诱导牙周炎;2组是治疗组:诱导牙周炎且用亚抗菌剂量的米诺环素治疗;3组是阴性对照组:假手术(仅腹腔麻醉)。牙周炎的诱导采用丝线结扎法并辅以100g/L蔗糖水为饮料。动物于实验的28d和58d处死,观察指标为:(1)视觉指标:牙松动度(MT),牙龈指数(GI)和牙槽骨丧失(ABL);(2)组织学指标:牙周组织中单核细胞的渗出数、破骨细胞数和牙周组织胶原的含量。资料采用方差分析统计学处理。结果:与模型组相比,28d和56d指标均显示亚抗菌剂量的米诺环素能显著抑制GI,MT,ABL和破骨细胞的形成,56d指标表明亚抗菌剂量的米诺环素能显著抑制牙周组织中单核细胞的渗出和胶原组织的降解。结论:亚抗菌剂量的米诺环素能有效抑制牙槽骨的吸收和牙周胶原纤维的降解,减缓大鼠实验性牙周炎的发展进程。     

鼠下颌骨成骨细胞对米诺环素摄取的实验观察

目的 通过观察体外培养的成年大鼠下颌骨成骨细胞(mature rat mandibular osteoblasts,MRMOB)是否摄取米诺环素及其摄取量,为人工种植牙全身给药提供实验依据.方法 将100 mg/L的米诺环素与成骨细胞分别培养15、30、45、60 min,测定米诺环素在成骨细胞内的含量.结果 在含米诺环素的培养基中培养15、30、45、60 min后成骨细胞内米诺环素的含量分别为(17.29±1.49)、(16.87±1.57)、(16.96±1.67)和(17.94±1.63)mg/g,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外培养的成年大鼠下颌骨成骨细胞能摄取米诺环素,且培养15 min以后成骨细胞内米诺环素的含量无时间依赖性.     

改良大鼠下颌骨成骨细胞原代培养与鉴定

目的:探讨高效的原代成年大鼠下颌骨成骨细胞培养方法,为进一步的实验研究奠定基础。方法:将4-6周SD成年大鼠处死并取出下颌骨,剪碎,用改良的酶消组织块培养法培养细胞,通过相差显微镜观察,用碱性磷酸酶染色、骨钙素免疫荧光染色和钙结节染色等方法对所获得的细胞进行鉴定。结果:所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,碱性磷酸酶染色、骨钙素染色和钙结节染色均呈阳性。结论:改良的酶消组织块培养法,可获得大量高纯度的下颌骨成骨细胞,所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。     

2型糖尿病患者牙槽骨成骨细胞体外培养与生物学特性研究

目的:研究2型糖尿病患者牙槽骨成骨细胞生物学特异性。方法:采用组织块法进行体外培养2型糖尿病患者和正常人牙槽骨成骨细胞,倒置显微镜观察细胞的形态,用碱性磷酸酶(ALP)、茜素红(Alizarinred)染色法分别进行细胞成骨特性的检测,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖趋势,用酶动力学、放射免疫及酶联免疫分析(ELISA)方法分别进行碱性磷酸酶、骨钙素(BGP)和Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)浓度的检测,结果:在同等培养条件下,二者的形态无明显差异,但2型糖尿病患者成骨细胞较正常人成骨细胞生长慢、活性弱,矿化结节形成少;2型糖尿病成骨细胞上清液中ALP、BGP及COL-Ⅰ浓度均较正常人低(P<0.05)。结论:2型糖尿病患者牙槽骨成骨细胞增殖较缓慢,特征性分泌物含量较正常成骨细胞低。     

盐酸米诺环素对牙周袋内硫化物水平的影响

目的评价口臭的牙周炎患者局部应用盐酸米诺环素软膏对牙周袋内硫化物水平的影响。方法对15例以口臭为主诉的慢性牙周炎患者采用分口（split-mouth）设计,同一患者的一侧半口随机采用刮治和根面平整术（scaling and root planing,SRP）,另一侧采用SRP辅助用盐酸米诺环素软膏治疗。基线、治疗后6周、3个月时检查牙周袋内硫化物（sulfide in periodontal pockets,pS）水平、探诊深度（probing depth,PD）、临床附着水平（clinical attachment level,CAL）、出血指数（bleeding index,BI）、菌斑指数（plaque index,PLI）,在基线、治疗后6周刚果红涂片进行龈下微生物计数。结果在治疗后6周、3个月,SRP＋米诺环素组与单纯SRP组的各项临床指标均较治疗前明显改善（P〈0.05）;比较两组间pS值、PD、CAL、PLI、BI、龈下螺旋体比例,差异均无统计学意义。结论对于口臭的牙周炎的患者,盐酸米诺环素辅助SRP较单纯的SRP并未显示很大的优势;牙周治疗可持续3个月降低袋内硫化物水平。     

人牙槽成骨细胞的体外培养和生物学特性检测

目的:研究人牙槽成骨细胞体外培养及其生物学特性.方法:取人牙槽骨用组织块法进行体外细胞培养,用倒置显微镜观察细胞生长、细胞形态,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;在条件培养液中培养后用酶动力学方法作碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定、Alizarin red 染色和von Kossa染色作成骨特性检测,同位素 3H掺入结合细菌胶原酶消化法测定I型胶原的合成.结果:培养第5 天细胞从组织块中爬出,再培养14～16 d可以传代;在条件培养液中细胞ALP活性明显,Alizarin red 染色和von Kossa染色细胞呈阳性,体外培养人牙槽成骨细胞具有分泌I型胶原的功能. 结论:体外培养的人牙槽成骨细胞生长良好,并具有成骨细胞的形态和生物学特性.     

金黄色葡萄球菌对成年大鼠牙槽骨成骨细胞侵入的观察

目的了解金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,SA)能否侵入体外培养的成年大鼠牙槽骨成骨细胞及其侵入能力。方法采用SA菌株ATCC 25923与体外培养的成年大鼠牙槽骨成骨细胞,按感染复数(multiplicity of infection,MOI)为100∶1的比例即100个细菌比1个细胞侵入15~60 min,通过透射电镜观察细胞内的菌落计数(colony forming unit,CFU),了解细菌侵入情况。结果透射电镜观察显示,30、45、60 min组有侵入成骨细胞现象,以60 min侵入最多,其次分别为45、30 min,SA ATCC25923对成骨细胞的15、30、45、60 min侵入菌落数分别为(13±5)、(435±31)、(803±95)和(1 800±175)CFU/孔。结论SA能侵入成骨细胞内,其侵入数量随时间延长而增多。     

牛血浆纤维黏连蛋白抑制大鼠成骨细胞凋亡的实验研究

目的研究外源性牛血浆纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)对体外培养的大鼠成骨细胞凋亡的影响。方法采用体外培养技术原代培养大鼠成骨细胞,Western blotting法检测FN作用后成骨细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax的蛋白表达变化。结果体外培养的成骨细胞呈梭形、三角形或多角形,多角形细胞有多个矢状突起,核卵圆形常居一侧,Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。FN作用后细胞凋亡相关基因Bcl-2的蛋白表达增强;Bax基因的蛋白表达减弱。结论一定浓度的牛血浆FN能够抑制成骨细胞凋亡,其机制之一是增强大鼠成骨细胞胞浆内Bcl-2基因所表达的蛋白,同时减弱Bax基因的蛋白表达。     

流体剪切力对大鼠成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的：观察流体剪切力对大鼠成骨细胞增殖及细胞周期的影响。方法：大鼠成骨细胞受强度为13dyne／cm^2的流体剪切力刺激60min,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞仪检测细胞的增殖能力和细胞周期。结果：流体剪切力作用后,大鼠成骨细胞增殖能力提高,细胞活性增强。加力组S期细胞百分比（14．67±1．18）％,较对照组S期细胞百分比（8．05±1．08）％约增高82．2％（P〈0．01）。结论：流体剪切力具有提高大鼠成骨细胞增殖能力以及增强其细胞活性的作用。     

Lipopolysaccharide alters decorin and biglycan synthesis in rat alveolar bone osteoblasts: consequences for bone repair during periodontal disease

A prime pathogenic agent associated with periodontitis is lipopolysaccharide (LPS) derived from Porphyromonas gingivalis . This study investigated the effects of P. gingivalis LPS on osteoblasts, which are responsible for alveolar bone repair. Bone cells were obtained from explants of rat alveolar bone chips and cultured with 0–200 ng ml⁻¹ of P. gingivalis LPS. Porphyromonas gingivalis LPS significantly increased cell proliferation and inhibited osteoblast differentiation, as judged by reduced alkaline phosphatase activity. Analysis of biglycan mRNA and protein levels indicated that P. gingivalis LPS significantly delayed the normally high expression of biglycan during the early stages of culture, which are associated with cell proliferation and early differentiation of progenitor cells. In the presence of P. gingivalis LPS, decorin expression by the alveolar bone cells was reduced during periods of culture relating to collagen fibrillogenesis and mineral deposition. Analysis of glycosaminoglycan chains conjugated to these proteoglycans suggested that in the presence of P. gingivalis LPS, dermatan sulfate persisted within the matrix. This study suggests that P.  gingivalis LPS influences the expression and processing of decorin and biglycan in the matrix, altering alveolar bone cell activity and osteoblast phenotype development. The consequences of this altered expression in relation to hindering bone repair as part of the cycle of events during periodontal disease are discussed.     

苯妥英钠对人牙周膜成纤维细胞生物学活性影响的实验研究

目的研究苯妥英钠（PHT）对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）生物学功能的影响,并探讨其用于促进牙周组织再生的可能性。方法将不同质量浓度的PHT（1、5、20、100、500、2 500 mg/L）加入体外培养的第4代hPDLF,检测其对细胞增殖活性、蛋白合成、碱性磷酸酶（ALP）活性的影响;Von Kossa染色法检测PHT（20、100、500 mg/L）对第4代hPDLF矿化结节形成能力的影响;应用ELISA法测定PHT（20、100 mg/L）对第3代hPDLF中骨形态发生蛋白- 2（BMP- 2）表达的影响。结果在20、100 mg/L的质量浓度时,PHT可显著促进hPDLF的增殖及分化（P<0.01）;在质量浓度100 mg/L时,PHT可增强hPDLF的蛋白合成（P<0.05）;同时,PHT在质量浓度100 mg/L可显著促进hPDLF的矿化能力及BMP- 2的表达（P<0.01）。但高质量浓度（2 500 mg/L）的PHT则严重抑制细胞的生物学活性。结论适当质量浓度的PHT对hPDLF的增殖和分化有促进作用,但过高质量浓度的PHT具有细胞毒性,不利于牙周组织的修复和再生。     

不同压力刺激对大鼠牙槽骨成骨细胞环氧合酶-2表达的影响

目的：研究SD大鼠牙槽骨成骨细胞在不同压力刺激下环氧合酶-2（COX-2）蛋白的表达特点。方法：采用自行研制的可调压式细胞培育箱对原代培养的牙槽骨成骨细胞加载持续性静压力和间歇性静压力,用免疫细胞化学染色和Western blot检测COX-2蛋白的表达。结果：COX-2蛋白的表达强度随着压力刺激作用时间的延长逐渐增强,但两种不同压力刺激对其表达量无显著性差异。结论：一定范围内不同形式的压力刺激均可诱导大鼠牙槽骨成骨细胞COX-2蛋白表达,并继而影响牙槽骨成骨细胞的增殖、分化、成熟,继而影响牙槽骨的吸收及新生和重建。     

钛种植体表面微形态对成骨细胞生长影响的体外研究

目的:研究钛种植体表面微形态对成骨细胞生长的影响。方法:将原代培养的成骨细胞与三种不同表面处理的钛片(机械打磨组G、喷砂组SB、钛浆喷涂组TPS)共同培养,采用扫描电镜、MTT法、碱性磷酸酶活性(ALP)及骨钙素分泌(OC)的检测来观察不同表面微形态对成骨细胞粘附、增殖、分化的影响。结果:成骨细胞在不同钛片表面粘附生长,SB组、TPS组表面细胞呈分化表型。SB组、TPS组细胞增殖率高于G组(P <0 .0 5 )。第1d、5d、10d ,SB组、TPS组ALP的活性高于对照组(P <0 .0 5 ) ;G组第1d、3d、5dALP分泌与对照组比较,差异无显著性(P >0 .0 5 )。第3d、5d、10dSB组、TPS组OC分泌量与对照组相比有显著性差异(P <0 .0 5 )。结论:粗糙表面(SB组、TPS组)比光滑表面(G组)更有利于成骨细胞的粘附、增殖,能促进成骨细胞向成熟的表型分化。