铁皮石斛类原球茎液体悬浮培养增殖体系构建

以铁皮石斛(Dendrobium officinale)类圆球茎为研究材料,系统地研究了影响其液体悬浮培养增殖的诸多因素,如不同质量浓度的MS基本培养基、NAA、蔗糖、椰乳以及培养基pH值和接种量,旨在构建铁皮石斛类圆球茎液体悬浮培养增殖体系。研究结果表明:在液体悬浮培养条件下,最有利于铁皮石斛类原球茎的生长增殖的培养基为1/2MS基本培养基中添加1.0 mg/L NAA,50 g/L椰乳,蔗糖30 g/L;接种量为40 g/L。     

海南粗榧细胞悬浮培养体系的建立

以海南粗榧愈伤组织进行悬浮培养,考察了培养基、维生素、蔗糖浓度、pH值、接种量对海南粗榧细胞悬浮培养体系建立的影响,并利用HPLC技术检测海南粗榧悬浮细胞和培养基中生物碱的含量.结果表明:海南粗榧悬浮细胞系培养的最适条件:MS为基本液体培养基、添加蔗糖35 g/L+VB1 10 mg/L、接种量6％、初始pH值5.5～7.0;发酵过程中每5d调节pH值至6.0,有利于细胞的生长和产物的合成;细胞的生长呈“S”型曲线,细胞生长周期为30 d,产物含量在培养25 d时达到最大;细胞活力呈先急剧上升后缓慢下降的趋势.     

几种理化因子对青钱柳悬浮细胞生长的影响

为了利用细胞悬浮培养技术生产青钱柳细胞及其代谢物质以解决青钱柳资源稀缺问题,采用单因素和正交试验优化青钱柳细胞悬浮培养条件。结果表明,在供试的WPM、MS、1/2MS、B5、N6、DKW、White7种培养基中,WPM、MS、B5均有利于悬浮细胞的生长;有利于悬浮细胞生长的碳源是果糖和蔗糖;2,4-D是影响青钱柳悬浮细胞生长的关键因子,对细胞生长影响极显著,最佳激素组合为0.4mg/L 2,4-D+0.4mg/LNAA+0.4mg/L KT+0.4mg/L 6-BA;通过L9(34)正交试验得出几种物理因子对悬浮细胞生长的影响效应排序为接种量>装液量>转速>pH,最佳条件组合为接种量80g/L、装液量40%、摇床转速115r/min、pH 5.0。     

主要营养成分对甘蔗叶悬浮细胞生长影响的研究

研究了MS培养基的主要营养成分，如不同初始磷酸盐浓度，不同氮源种类，不同氮源总量，不同糖种类及不同初始蔗糖质量浓度对甘蔗叶悬浮细胞生长的影响。结果表明：在MS基本培养其中，当初始磷酸盐浓度为1.25mmol/L，氮源为NH4NO3 KNO3，且总量为30mmol/L，碳源为蔗糖，初始蔗糖质量浓度为30g/L时，甘蔗叶悬浮细胞的生长最佳。     

白背三七悬浮细胞培养体系的建立

目的:建立稳定的白背三七悬浮细胞培养体系。方法:采用植物组织培养技术,探讨初始接种密度、装液量、初始pH值、激素种类及浓度4个因素对白背三七细胞悬浮培养的影响。结果:白背三七细胞悬浮培养的适宜条件为:B5基本培养基+0.5mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+30g/L蔗糖,pH 7.0,装液量为40%,初始接种密度为90g/L(鲜质量),弱光培养。在此优化条件下,细胞生长呈"S"形曲线;培养过程中,培养基的pH呈先下降后缓慢升高的变化趋势;细胞活力的变化稍滞后于生长曲线,逐渐降低。     

罗布麻悬浮细胞生长特性及产绿原酸的初探

[目的]探索罗布麻(Apocynum ventetum Linn.)悬浮细胞生长特性和产绿原酸量的最佳激素浓度,为进一步以罗布麻悬浮培养的细胞生产绿原酸奠定前期基础.[方法]以罗布麻悬浮细胞系为材,确定最佳接种量和细胞生长曲线,培养获得的材料经干燥、粉碎后经超声波法提取,以高效液相色谱法(HPIC)测定其中的绿原酸(CGA)量.以绿原酸量为指标,进行方差分析,确定最佳的植物生长调节剂的浓度.[结果]将罗布麻细胞悬液抽滤,以1.0 g(FW)/10 mL的接种量接种在MB(硝酸钾加倍,硝酸铵减半)+2.0 mg/L 2,4-D+0.05mg/L 6-BA+50g/L蔗糖(pH 5.9)培养基上,对数生长期为4～8 d.以上述接种量和5 d培养周期为条件,将获得的罗布麻细胞接种在不同NAA和KT浓度的培养基上培养,产绿原酸量最大的培养基为MB+0.3 mg/LNAA+0.3 mg/L KT+50g/L蔗糖(pH5.9),产量达0.183 mg/g(DW),与其它培养基相比在P=0.05水平上差异显著.[结论]通过罗布麻悬浮培养的细胞产绿原酸最佳培养基为MB+0.3 mg/L NAA+0.3 mg/L KT+50g/L蔗糖(pH5.9).     

曼地亚红豆杉细胞悬浮培养体系的建立

【目的】建立曼地亚红豆杉的愈伤组织细胞悬浮培养体系,为紫杉醇生产提供参考。【方法】以曼地亚红豆杉幼茎诱导的愈伤组织为材料,以B5培养基为基本培养基,利用单因素试验或正交试验,研究愈伤组织接种量、蔗糖质量浓度、激素类型及配比和防褐化试剂对曼地亚红豆杉细胞生长的影响。【结果】曼地亚红豆杉细胞悬浮培养的最佳培养基和培养条件为:B5+2,4-D 0.6mg/L+NAA 0.8mg/L+KT 1.0mg/L+柠檬酸220mg/L+PVP350mg/L+水解乳蛋白450mg/L+蔗糖30g/L(pH=5.8),接种量0.1g/mL,在培养箱中110r/min、25℃暗培养。【结论】曼地亚红豆杉愈伤组织细胞在所建立的培养体系中经过多次继代后,生长状况良好,表明该细胞悬浮体系比较稳定,可以用于大规模培养红豆杉细胞。     

斯达氏油脂酵母高产油发酵培养条件的优化

【目的】通过摇瓶发酵,对斯达氏油脂酵母的产油发酵条件进行优化。【方法】利用单因素试验,确定最佳碳源、氮源、初始pH值、无机盐的质量浓度;利用4因素3水平正交试验,优化碳源质量浓度、氮源质量浓度、接种量、培养温度等参数;同时考察发酵时间对斯达氏油脂酵母生长及油脂产量的影响。【结果】单因素试验结果表明,以葡萄糖为碳源时,斯达氏油脂酵母发酵生物量及油脂产量明显高于其他碳源;以(NH4)2SO4为氮源时,则生物量、油脂产量均最高;最佳初始pH值为6.0~6.5;无机盐离子的最适添加质量浓度为:MgSO4.7H2O 1.5 g/L,KH2PO43.0 g/L。碳源质量浓度、氮源质量浓度、接种量、培养温度4因素3水平正交试验的极差分析结果表明,培养温度对斯达氏油脂酵母的生物量和油脂产量的影响最大。斯达氏油脂酵母发酵培养基的最优组合为:葡萄糖90g/L,(NH4)2SO43.5 g/L,接种量10%,培养温度28℃。在摇瓶发酵过程中,发酵培养144 h时菌体生物量、油脂产量均最高,OD600值也较高。【结论】在优化条件下对斯达氏油脂酵母进行摇瓶发酵,获得的菌体生物量最高可达16.35g/L,较优化前提高了25.19%;油脂产量为4.94 g/L,较优化前提高了97.84%;菌体含油率最高可达302.1 g/kg。     

一株巨大芽孢杆菌J1的生胞培养及优化

以巨大芽孢杆菌J1为材料,利用溶磷圈法测定了菌株的解磷能力,优化了菌株的最佳发酵条件、最适培养基。结果表明,此菌株溶磷效果明显;此菌株生长的最适培养时间为28 h,最适接种量为6.7%,最适pH值为8.5;最佳碳源为玉米粉与葡萄糖的复合碳源,最佳氮源为大豆粉与硫酸铵的复合氮源。摇瓶培养的接种量为6.7%,pH值为8.5,250 mL三角瓶中最适装液体积为30 mL,培养温度为30℃,培养时间为28 h,最适宜转速为180 r/min的摇瓶培养条件下,巨大芽孢杆菌活菌数各影响因素最佳组合为:玉米粉20 g/L,葡萄糖5 g/L,大豆粉7.5 g/L,硫酸铵0.33 g/L,各因子对巨大芽孢杆菌活菌数的影响由大到小依次为:硫酸铵浓度玉米粉浓度葡萄糖浓度大豆粉浓度。     

葡萄悬浮细胞系的建立

【目的】建立适合葡萄悬浮细胞系快速稳定生长的培养体系。【方法】以鲜食葡萄巨峰的果皮为材料,以B5为基本培养基,通过选择合适的激素配比及浓度、pH、蔗糖浓度等建立并优化葡萄愈伤组织培养体系及细胞悬浮培养体系。【结果】在B5+0.5 mg/L 6-BA+NAA条件下,NAA最适质量浓度为1 mg/L;在B5+0.5 mg/L 6-BA+2,4-D条件下,2,4-D最适质量浓度为1.0~2.0 mg/L;在B5+1 mg/L NAA+6-BA条件下,6-BA最适质量浓度为0.5~1.0 mg/L;在B5+2 mg/L 2,4-D+KT条件下,KT的最适质量浓度0.2 mg/L。在最佳蔗糖质量浓度30g/L、最适pH 5.5~5.8培养基条件下,建立了能快速生长的均一、稳定的巨峰葡萄细胞悬浮体系,优化了培养条件。【结论】适合葡萄愈伤组织生长的培养体系为:B5+250 mg/L水解酪蛋白+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂;适合葡萄细胞悬浮培养的体系为:B5+1 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖和B5+250mg/L水解酪蛋白+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+30 g/L蔗糖。     

浅黄根须腹菌的分离及培养特性研究

研究以油松外生茵根真菌浅黄根须腹茵（Rhizopogonluteolus）的子实体作为分离材料,通过采用组织分离方法获得纯菌种。以菌丝体生长速度和生长状况为参照标准,将菌种接种于不同培养基,筛选出茵丝体生长最适基础培养基为PACH,在此基础上通过单因素试验对其pH值,碳源,氮源等培养条件进行研究,结果表明,菌丝体生长最佳pH值,碳源及氮源分别为6．0、葡萄糖和酒石酸铵。通过pH值、碳源及氮源3个较优水平的正交试验,确定在（pH5．0＋牛肉膏＋蔗糖）组合中茵丝体生长速度最快,而在（pH6．O＋牛肉膏＋葡萄糖）组合中茵丝体生长状况为最佳。     

产虾青素菌株CHU-R的鉴定及其培养条件优化

【目的】对产虾青素菌株CHU-R进行鉴定,并对其培养条件进行优化,为虾青素的规模化生产奠定基础。【方法】对产虾青素菌株CHU-R进行形态、生理生化及16S rDNA序列鉴定;以菌株CHU-R菌体生物量和虾青素产量为考察指标,对CHU-R菌株的碳源、氮源、微量元素等培养基成分及温度、初始pH值、接种量、装液量、蔗糖含量等培养条件进行优化,并对优化条件进行正交试验,确定最佳的培养基组分。【结果】CHU-R为乳杆菌。CHU-R菌株培养基中的适宜氮源为铵盐和尿素;碳源为蔗糖和葡萄糖;培养基中缺少Fe²⁺不利于菌体生长和虾青素积累。CHU-R的适宜培养条件为：接种量≤50 mL/L,装液量50 mL/L,初始pH值7.0～7.5,发酵温度26～30 ℃,发酵时间48～72 h,在此条件下,菌株CHU-R菌体生物量和虾青素产量均较高。【结论】乳杆菌CHUR在优化培养条件下能够得到产量较高的虾青素,具有较好的应用潜力和经济价值。     

文心兰茎尖诱导原球茎的影响因子研究

以文心兰无菌幼苗茎尖为试材,研究了基本培养基、植物生长调节剂、碳源、培养基pH值及茎尖放置方式对原球茎诱导的影响。结果表明:1/2MS为原球茎诱导的适宜培养基,0.1 mg/L TDZ最适合原球茎诱导且无不定芽分化、诱导率达80%,30 g/L蔗糖是原球茎诱导的适宜碳源,培养基pH值为5.2时原球茎诱导效果最佳,茎尖竖直放置比水平放置更有利于原球茎诱导。     

百蕊草愈伤组织培养影响因素研究

[目的]对影响百蕊草愈伤组织培养的因素进行研究。[方法]以百蕊草幼嫩枝条和叶片为外植体,研究不同浓度6-BA、NAA、2,4-D或其组合,碳源以及pH等因素对百蕊草愈伤组织生长的影响。[结果]3种植物生长调节剂和碳源对愈伤组织的生长都有促进作用,对愈伤组织诱导生长的培养基最佳组合为MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.15 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,碳源中蔗糖显著促进了百蕊草愈伤组织的增长,以30 g/L的蔗糖为最佳;pH 5.8~6.0有利于愈伤组织的诱导和生长。[结论]该研究为后续研究百蕊草细胞悬浮培养体系的建立提供材料。     

培养条件对甘薯黑斑病菌生长与产孢量的影响

在不同营养条件以及培养环境条件下,测试了甘薯黑斑病菌的生长速度以及产孢量。结果表明：甘薯黑斑病菌（Ceratocystis fimbriataEllis et Halsted）在13种供试培养基上均能生长,其中在番茄培养基上生长最好,在胡萝卜培养基上生长最差;分生孢子产孢量以在PDA培养基上最多,在玉米粉培养基上最少。菌丝适宜生长温度为25℃,在15℃下分生孢子产孢量最大。在全光照环境下生长最好,全黑暗下次之,光暗交替条件下较差,光照条件对黑斑病菌分生孢子产孢量没有明显差别。菌丝适宜生长的pH值范围为6~8,最适pH值为8,分生孢子最适产孢pH值为10。在真菌生理培养基上,以淀粉为最佳碳源,以酵母膏为最佳氮源。菌丝、分生孢子和子囊孢子的致死条件分别为52℃、5 min,47℃、5 min和50℃、5 min。     

兴仁金线莲丛生芽诱导增殖研究

[目的]筛选兴仁金线莲丛生芽的诱导和增殖的最佳培养基。[方法]用野生兴仁金线莲植株茎段作外植体,以MS为基本培养基,并添加不同浓度的6-BA和NAA,诱导丛生芽,筛选最佳培养基配方。[结果]MS是兴仁金线莲快繁最佳基本培养基;2.0～3.0 mg/L的6-BA有利于丛生芽的诱导;1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA有利于芽的生长;最佳蔗糖浓度为25 g/L。[结论]MS+2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+25 g/L蔗糖为丛生芽增殖的最佳培养基配方。     

无籽西瓜黑蜜2号组培条件研究

以无籽西瓜黑蜜 2号为材料 ,进行了组培条件的研究 ,结果表明 :子叶是无籽西瓜黑蜜 2号适宜组培的外植体 ;MS + 6-BA 3.0mg/L +NAA 0 .5mg/L是子叶芽诱导的最佳培养基 ;子叶的最佳诱导苗龄是 6d ;蔗糖是较好的碳源 ;1 /2MS +IBA 0 .2mg/L是适宜的生根培养基。     

影响刺五加茎尖培养的因素

为探讨用组织培养方法繁一加苗木，以刺五加茎尖为试样，在春、夏、秋和冬季取材，以ＭＳ和Ｗｎｉｔｅ为基本培养基，附加生长素（ＮＡＡ．ＩＡＡ）和细胞分裂素（ＢＡ．ＧＡ、ＫＴ）进行组织培养，结果表明，以春季萌芽前取材最好；Ｗｈｉｔｅ培养基适合于刺五加茎尖的无性系快速繁殖，其适合的激素组成成为为ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ；培养基附加葡萄糖比附加蔗糖生长快近２０％；较适宜的生根培养基为１／２ＭＳ     

不同碳源对虎眼万年青离体生长的影响

［目的］研究不同碳源对虎眼万年青离体生长的影响。［方法］以虎眼万年青子鳞茎为外植体,以MS培养基为基本培养基,附加6BA1.0mg/L、NAA0.2mg/L,在培养基中分别加入不同浓度的蔗糖（15、30、45g/L）、麦芽糖（15、30、45g/L）和葡萄糖（15、30、45g/L）。［结果］蔗糖为虎眼万年青离体生长的最佳碳源。当蔗糖浓度为30g/L时,虎眼万年青离体生长的繁殖系数最高,长势最好。［结论］为从根本上解决虎眼万年青生产过程中优化品种、周年供应、控制成本等问题提供理论依据。     

草莓原生质体的培养和植株再生

通过对已分离提纯的草莓原生质体的培养研究 ,比较得出以KM为培养基 ,以 0 .4mol L葡萄糖和 0 .1mol L蔗糖或仅以 0 .5mol L葡萄糖作碳源 ,采用低溶点琼脂糖包埋的培养方式 ,培养密度采用 1× 10 6个 mL ,原生质体出现分裂和小愈伤组织形成的时间都较早。以MS1 、MS2 、MS3 为培养基、采用分步诱导的方法 ,能顺利诱导产生新植株 ,并在MS培养基上生根良好