肾上腺皮质癌13例分析

目的探讨肾上腺皮质癌的诊断与治疗.方法回顾性总结13例肾上腺皮质癌的诊治经过,结合文献进行分析.结果 13例中有4例术前通过MRI得到诊断,1例行肾上腺动脉造影得到诊断,11例进行手术切除,2例活检后进行了介入化疗.结论术前全面了解病情变化过程,结合生化检查和影像学材料仔细分析,可不断提高本病的术前诊断率.早期发现、及时手术切除是治疗的关键.     

氯硝柳胺对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究氯硝柳胺对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移力、侵袭力的影响.方法 通过体外培养SW-13细胞,采用CCK8法和iCELLigence实时无标记细胞增殖监测仪检测不同浓度氯硝柳胺对细胞增殖的影响;设对照组和氯硝柳胺组,流式细胞技术检测氯硝柳胺作用后SW-13细胞周期的变化,AO/EB染色法和Annexin V/PI染色流式细胞技术测定细胞凋亡率的变化,Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot(WB)法检测β-catenin/LRP6表达的变化.结果 不同浓度的氯硝柳胺分别作用SW-13细胞24、48、72、96、120 h后,呈时间和浓度依赖性抑制SW-13细胞增殖(F=157.93,P<0.001);流式细胞仪周期检测结果显示24、48、72 h后,与对照组相比氯硝柳胺组将SW-13细胞周期阻滞在G0/G1期(P=0.001、0.005、0.008);AO/EB染色法和Annexin V/PI染色法结果均显示氯硝柳胺组的凋亡率与对照组相比明显升高(P<0.001);Transwell实验结果示氯硝柳胺组SW-13细胞的侵袭力降低(P<0.001),细胞划痕实验结果显示氯硝柳胺组SW-13细胞的迁移能力下降(P=0.002),WB结果示氯硝柳胺组SW-13细胞β-catenin/LRP6的表达明显降低(P<0.001).结论 氯硝柳胺抑制人肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖,阻滞细胞周期,抑制侵袭及迁移能力,促进细胞凋亡;可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.     

羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞凋亡的影响

目的：研究羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长抑制和凋亡作用的影响.方法：采用CCK8检测不同浓度羟喜树碱对SW-13细胞增殖的影响;流式细胞仪测定药物作用前后的细胞凋亡情况.结果：不同浓度的羟喜树碱分别作用24,48,72 h后,SW-13细胞的生长增殖均受到明显抑制（P＜0.01）,并呈时间和浓度依赖性;流式细胞术显示SW-13细胞凋亡率随羟喜树碱浓度的增加而升高.结论：羟喜树碱可以显著抑制人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长,促进其凋亡.     

肾上腺皮质癌的诊断和治疗

目的探讨肾上腺皮质癌的临床特点和治疗方法,提高肾上腺皮质癌的诊断和治疗水平。方法回顾性分析15例原发性肾上腺皮质癌(Adrenocorti calcarcinoma,ACC),其中有功能性肿瘤6例,无功能性肿瘤9例。15例ACC均行B超检查,11例诊断为ACC;11例行CT检查,9例诊断为ACC;4例行MRI检查,1例发现左肾静脉瘤栓。肿瘤最大径为3~20cm。按Sullivan分期:Ⅰ期2例、Ⅱ期3例、Ⅲ期4例、Ⅳ期6例。结果15例原发性ACC中2例未手术者分别于确诊后3个月、8个月死亡。行手术治疗者13例,术后1年内死亡3例,分别于术后1个月、2个月、6个月死亡。术后1年以上5年以内死亡2例,分别于术后17个月、18个月死亡,期间1例随访存活2年后失访,术后5年以上死亡2例。随访至2006年4月仍存活5例,存活时间8个月~12年8个月,平均存活5年。结论早期诊断和治疗ACC是改善预后的关键,根治性手术是有效的治疗方法。     

成人肾上腺皮质癌的研究进展

成人肾上腺皮质癌是一种发生于肾上腺皮质的恶性肿瘤,临床罕见,恶性程度高。其发病率女性高于男性,该病侵袭性强,进展迅速,预后差,通常在确诊时已有远处转移,患者的平均生存率大多低于3年。现就成人肾上腺皮质癌的流行病学、病因及发病机制、临床分期、病理特点、临床表现、实验室及影像学检查、治疗和预后予以综述。     

肾上腺皮质癌的临床预后分析

目的探讨影响肾上腺皮质癌患者远期生存的因素,帮助临床医生判别导致患者死亡风险增高的因素,从而更好地指导临床治疗。方法经手术切除病理活检确诊为肾上腺皮质癌的患者35例,采用生存分析和Cox比例风险回归法分析影响肾上腺皮质癌患者的预后因素。结果本研究共纳入35例患者,男性20例,女性15例。其中Ⅰ期3例,Ⅱ期15例,Ⅲ期12例,Ⅳ期5例。到随访结束时死亡21例,存活14例。本组患者中位生存时间为33个月,1、2、5年生存率分别为77.1%、62.5%、38.3%。单因素分析显示:性别(男、女)、肿瘤分布(左、右)、肿瘤直径(<10cm、≥10cm)、是否有内分泌功能、是否吸烟、是否具有高血压低血钾,各组患者间生存率比较差异无统计学意义(P>0.05)。多因素分析显示:男性、年龄<50岁、早期肿瘤以及不吸烟是与生存预后相关的有益因素。晚期肿瘤患者死亡风险为早期患者的52倍,中期患者死亡风险为早期患者的3倍。结论影响肾上腺皮质癌患者远期预后的临床因素主要是临床分期和年龄。患者年龄<50岁,临床分期越早,患者的预后越好。     

肾上腺皮质癌的综合治疗

目的: 探讨肾上腺皮质癌临床及功能影像学和病理学特点,提高肾上腺皮质癌诊治水平。方法: 分析肾上腺皮质癌患者的临床资料,根据其临床表现、肾上腺内分泌功能测定、影像学特点和病理结果做出诊断,进行手术治疗和米托坦药物治疗并随访。结果: 93例患者年龄11~76岁,中位年龄48岁。男女比例1 ∶1.2。24 h尿游离皮质醇(urinary free cortisol,UFC)高者86例,促肾上腺皮质激素释放激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)下降88例,血浆皮质醇节律消失82例,醛固酮升高31例,性激素升高36例,术前神经烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)升高27例,胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)升高26例,76例大剂量和小剂量地塞米松抑制试验均不被抑制。高血压62例,典型Cushing综合征表现者81例。血糖升高54例,低血钾症21例,雄激素分泌者36例。肿瘤最大直径3~17 cm,伴肾上腺中央静脉、肾静脉及下腔静脉瘤栓者6例,手术至术后复发时间在1.2~5.0年。初发及随访中出现转移复发的56例,其中肺转移13例,肝转移17例,腹膜后淋巴结转移9例,腰椎转移7例,卵巢转移3例,腹壁及切口种植3例,其他部位转移4例,初发即远处转移者15例。行根治性切除术 77例,侵及同侧肾者做肾和肾上腺切除术11例,肾上腺肿瘤并腔静脉癌栓切除5例,腔静脉部分切除 3例。临床分期为Ⅰ期 39例,Ⅱ期 28例,Ⅲ期 16例,Ⅳ期 10例。随访8~69个月,手术5年以上的患者中有 43例仍存活。结论: 肾上腺皮质癌早期诊断非常关键,功能影像学检查结合临床特点及内分泌激素水平可确诊,根治性手术是唯一有效的治疗方法,米托坦可作为辅助治疗用于复发转移或无法手术治疗的患者,肿瘤恶性程度高,预后差。     

肾上腺皮质腺瘤和皮质癌的临床与病理研究

本文研究 32例肾上腺皮质腺瘤 ,8例皮质癌的临床及病理学特征 ,其中功能性肿瘤 34例 ,非功能性肿瘤 6例 ,肾上腺皮质肿块 ,瘤体较小 ,切片中泡沫细胞为主者 ,以腺瘤多见。肾上腺皮质癌病理特征表现为肿瘤体积大 ,包膜不完整 ,明显出血、坏死。肿瘤多由暗细胞构成、弥漫、小梁状排列 ,细胞和核的异形性常见。核分裂≥ 1/10HP。     

低剂量阿霉素富集肾上腺皮质癌干细胞的实验研究

目的:探讨肾上腺皮质癌干细胞的有效富集模式和其可能的表面标志物.方法:构建裸鼠皮下移植瘤反复传代联合化疗药物阿霉素干预的动物模型,富集人肾上腺皮质癌细胞系SW-13的干细胞,并进行富集效率检测("悬浮球"形成试验;平板克隆形成实验).流式细胞术检测肿瘤标志物组合CD184+CD338+,研究SW-13干细胞可能的表面标志物.结果:裸鼠皮下移植瘤成瘤率为100%.空白对照组及各代SW-13裸鼠皮下移植瘤细胞的"悬浮球"形成率、平板克隆形成率比较差异均有统计学意义(P<0.05),富集第2代细胞>第1代细胞>空白对照组.流式细胞术检测富集第2代细胞的CD184+CD338+表达率较第1代细胞与空白对照组增高(P<0.05).结论:裸鼠皮下移植瘤反复传代联合化疗药物阿霉素干预的富集模式,可有效富集肾上腺皮质癌SW-13干细胞样细胞.CD184+CD338+可作为肾上腺皮质癌SW-13干细胞的候选标志物组合.     

siRNA沉默PTTG表达对子宫内膜癌细胞生长及放疗敏感性的影响

目的:观察垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)干扰对子宫内膜癌细胞HEC-1A的生长及放疗敏感性的影响?方法:构建PTTG干扰载体(pSilencer3.0-Hl-PTTG-siRNA),利用脂质体将其转染至HEC-1A细胞,Western blot检测PTTG蛋白表达水平,筛选干扰效果最强的序列?另用2Gy X线作用于转染PTTGsiRNA的HEC-1A细胞,同时设不予任何处理的对照组?只转染PTTGsiRNA的处理组?只用X线处理的放疗组?MTT检测细胞生长状况,流式细胞仪检测细胞凋亡?结果:成功构建了靶向抑制PTTG基因的siRNA干扰载体?MTT实验结果显示,与对照组相比,放疗组?PTTGsiRNA转染组?PTTGsiRNA联合放疗组细胞增殖抑制率分别为(31.39 ± 5.62)%?(38.37 ± 5.48)%?(54.65 ± 6.27)%?流式细胞仪检测显示细胞凋亡率在对照组? 放疗组?PTTGsiRNA转染组?PTTGsiRNA转染联合放疗组中分别为(6.53 ± 0.80)%?(32.72 ± 4.56)%?(38.96 ± 4.37)%?(64.76 ± 6.53)%?PTTGsiRNA转染组或放疗组与对照组比较,细胞凋亡率及细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P < 0.01),而PTTGsiRNA转染联合放疗组的凋亡率及细胞增殖抑制率较PTTGsiRNA转染组或放疗组明显增高,组间比较差异均有统计学意义(P < 0.01)?结论:成功构建了靶向抑制PTTG基因的siRNA干扰载体,PTTG siRNA可抑制子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖,诱导其凋亡,增强其对放疗的敏感性?     

HDAC1基因小干扰RNA对人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞放射敏感性影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)抑制组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)表达对人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞放射治疗敏感性的作用及可能机制。方法体外合成针对HDAC1基因的siRNA,脂质体法转染人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞,应用蛋白印迹法检测细胞HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4的表达,应用实时定量聚合酶链反应方法检测HDAC1基因、核因子-κB(NF-κB)基因和p53蛋白调控的凋亡调控因子(PUMA)基因mRNA表达。应用6 MV直线加速器,以0、2、4、6、8 Gy不同剂量X线照射细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及克隆形成实验检测细胞放射敏感性。结果人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞经转染HDAC1基因siRNA后,正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组HDAC1基因mRNA表达分别为10.21±0.42、9.48±0.41和4.92±0.41;蛋白表达分别为0.81±0.14、0.79±0.16和0.42±0.18,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞HDAC1基因mRNA和蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05);正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组乙酰化组蛋白H4表达分别为0.76±0.21、0.75±0.20和0.30±0.19,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组乙酰化组蛋白H4表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组细胞NF-κB基因mRNA表达分别为6.24±0.52、6.31±0.61和4.22±0.56,PUMA基因mRNA表达分别为3.84±0.26、3.69±0.29和5.42±0.31,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞NF-κB基因mRNA降低,PUMA基因mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。经X线照射后,正常对照组、阴性对照组和siRNA干扰组凋亡率分别为(16.25±2.64)%、(15.41±2.97)%和(29.62±3.11)%,存活分数(SF2)值分别为0.576±0.149、0.564±0.142和0.226±0.151,与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组细胞凋亡率增加,SF2值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HDAC1基因siRNA能够增强人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞对放射线损伤的敏感性。抑制人宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞HDAC1基因表达,增加乙酰化组蛋白H4表达,下调NF-κB基因表达和上调PUMA基因表达可能是其作用机制。     

siRNA干扰对Eca-109食管癌细胞株Skp2表达的影响

目的：探讨siRNA干扰后食管癌Eca-109细胞株Skp2 mRNA表达及肿瘤细胞增殖活性的影响.方法：通过siRNA转染食管癌Eca-109细胞株后,分别用RT-PCR和CCK-8检测Skp2 mRNA的表达和细胞增殖的活性.结果：食管癌Eca-109细胞株增殖活性及Skp2 mRNA明显减少.结论：运用siRNA可以有效抑制Skp2 mRNA的表达及细胞增殖活性.siRNA有望成为治疗食管癌的重要手段.     

肾上腺皮质腺癌39例诊断与治疗体会

目的：探讨肾上腺皮质腺癌（ ACC）的诊断与治疗。方法回顾性分析39例ACC患者（ ACC组）诊断与治疗的临床资料,并随机调取同期39例肾上腺腺瘤（ ACA）患者（ ACA组）临床资料作对照。结果 ACC组肿瘤最大径（11.66±4.21）cm;Weiss评分：3～5分13例,＞5分26例。 ACA组肿瘤最大径（2.34±1.27）cm;Weiss评分：＜3分37例,3～5分2例,＞5分0例。 ACC组34例行肿瘤完整切除,5例仅行姑息性切除或活检术,术后1周内死亡2例;口服舒尼替尼治疗2例;随访32例,随访时间1～80个月,中位生存时间12个月,1年与5年生存率分别为45.7％和32.7％。 ACA组手术均顺利,术后随访33例,失访6例,随访时间2～176个月,均健在。结论 ACC分期晚,预后差,与ACA鉴别较困难,肿瘤大小应作为良恶性鉴别指标之一,根治性切除术后易复发转移,可尝试舒尼替尼分子靶向药物治疗。     

siRNA稳定靶向干扰HDGF肺腺癌细胞株的建立及干扰效率检测

目的 构建针对肝癌衍生生长因子(HDGF)基因的siRNA表达载体,建立稳定干扰HDGF基因表达的肺腺癌细胞株,检测干扰效率.方法 实时荧光定量PCR比较肺腺癌细胞株SPC-A-1、10例肺腺癌组织和其配对的癌旁肺组织HDGF基因表达差异.构建shRNA-HDGF慢病毒表达载体,测序鉴定序列的正确性.随后用脂质体的方法将载体转染入肺腺癌细胞株SPC-A-1中,经杀稻瘟菌素筛选后,稳定表达siRNA-HDGF的细胞株单克隆细胞株建立.实时荧光定量PCR检测干扰效率,筛选干扰效率最高的细胞株.结果 HDGF基因在腺癌细胞株SPC-A-1和肺腺癌组织明显高表达.测序证实,构人慢病毒载体中shRNA序列正确.一共筛选了5个siRNA-HDGF细胞株.与对照载体和单纯细胞株相比,最高干扰HDGF表达的效率为75%.结论 HDGF基因在肺腺癌细胞株及肺癌组织中高表达;针对HDGF的siRNA慢病毒表达载体成功构建;在其导人肺腺癌细胞株后能稳定干扰HDGF基因的表达.

Abstract：

Objective To construct a small interfering RNA (siRNA) expression vector targeting hepatoma-derived growth factor (HDGF) and establish a lung adenocarcinoma cell line stably expressing siRNA-HDGF. Mehtod RT-PCR was used to examine HDGF expression in lung adenocarcinoma samples and the matched adjacent lung tissues, and also in lung adenocarcinoma SPC-A-1 cell line. A recombinant lentivirus shRNA-HDGF vector was constructed and transfected into SPC-A-1 cells via Lipofectamine 2000, and the cells with stable expression of HDGF-siRNA was screened by blasticidin selection. The interference effect of siRNA-HDGF was assessed by real-time PCR. Results Compared to the adjacent lung tissues, lung adenocarcinoma and SPC-A-1 cells showed increased expression of HDGF. The recombinant lentivirus shRNA-HDGF vector was successfully constructed and verified by sequence analysis. siRNA-HDGF recombinants markedly inhibited the expression of HDGF in SPC-A-1 cells. Conclusion HDGF expression increases in lung adenocarcinoma and SPC-A-1 cell lines. The recombinant siRNA-HDGF lentivirus vector can inhibit the expression of HDGF in SPC-A-1 cells.     

Geminin基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Geminin基因的表达观测VSMCs增殖情况及表型标志物。方法分别利用RT-PCR,Western blot检测VSMCs中Geminin基因、蛋白表达的变化,筛选出干扰效果最为显著的序列用于构建慢病毒包裹的稳定干扰模型。应用[3H]-TdR、EdU掺入试验检测VSMCs增殖的情况;同时使用Western blot分别检测干扰前后相关标志性基因的表达。结果①siRNA转染后,以第1亚组干扰效果最为显著,与另外2个阳性亚组及对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。②[3H]-TdR、EdU掺入实验显示:阳性干扰组的掺入量较两对照组明显升高(P<0.05)。③siRNA转染使Geminin基因表达减弱后,阳性组VSMCs合成型标志物骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平显著升高,收缩型标志物平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,α-Actin)表达水平明显降低,与对照组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰介导的Geminin基因沉寂可显著增强VSMCs的增殖能力,并有助于VSMCs的表型由收缩型向合成型转化。     

DNA载体途径的RNA干扰技术对前列腺癌细胞系ALVA-41端粒酶活性的抑制作用

目的:探讨DNA载体途径的RNA干扰技术抑制肿瘤细胞的作用和机制。方法:设计和构建由U6启动子驱动产生hTERT的siRNA表达质粒,转染至ALVA-41前列腺肿瘤细胞,以TRAP-ELISA方法观察细胞端粒酶活性,W estern-b lot检测端粒酶蛋白的表达,细胞记数法检测对细胞生长的影响。结果:构建的针对hTERT基因的U6表达质粒具有明显的干扰效果,受到特异hTERT-siRNA干扰的ALVA-41肿瘤细胞端粒酶表达下调,细胞生长受抑。结论:应用RNA干扰技术可阻止hTERT基因的表达,抑制肿瘤细胞的增殖。     

重组腺相关病毒介导RNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白1对鼻咽癌细胞影响的动物试验

目的 探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)对于鼻咽癌细胞在体内增殖及转移能力的影响.方法 设计针对EBV-LMP-1的特异性发夹状RNA(shRNA)干扰序列,构建2种重组腺相关病毒(rAAV)载体:(增强型绿色荧光蛋白,EGFP)rAAV-EGFP和rAAV-shRNA-LMP-1,以不同滴度rAAv-EGFP转染鼻咽癌C666-1细胞确定最佳转染复数(MOI),rAAV-shRNA-LMP-1按MOI转染C666-1,RT-PCR鉴定抑制效率,将体外转染RNA干扰后的C666-1细胞注入裸鼠肝脏包膜下制作鼻咽癌异位肝种植的肝肺转移模型,观察肝脏成瘤及肝内、肺转移情况,分析LMP-1基因沉默在动物水平对鼻咽癌细胞成瘤及转移能力的影响.结果 rAAV-EGFP以5×104v.g(virus genome,病毒基因组数)/细胞转染C666-1细胞,转染效率大于95%,RT-PCR鉴定rAAV-shRNA-LMP-1以5×104v.g/细胞转染C666-1后目的 基因抑制效率大于90%,动物试验结果显示rAAV-shRNA-LMP-1组肝脏成瘤体积与对照组rAAV-EGFP无显著差异,但显著减少了种植肿瘤的肝内及肺转移率.结论 通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达,可在动物水平抑制鼻咽癌细胞转移,但对鼻咽癌细胞生长无显著影响.     

RNA干扰OPN对人卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的影响

目的观察骨桥蛋白(OPN)基因沉默对卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞的影响,为探索卵巢癌基因治疗提供理论依据。方法以脂质体法将已构建的骨桥蛋白特异性小干扰RNA真核表达载体(pSilencer3.1/OPN-shRNA)转染卵巢癌细胞HO-8910PM,48h后用Western blotting技术检测重组质粒组、空质粒组和空白对照组中卵巢癌细胞内骨桥蛋白的表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法连续5天测定转染后细胞的增殖情况并绘制曲线图。结果 pSilencer3.1/OPN-shRNA转染卵巢癌细胞株HO-8910PM后48h骨桥蛋白表达下降,差异有统计学意义(同空质粒组、空白对照组相比P<0.05);空质粒组与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。重组质粒组同空质粒组、空白对照组比较其增殖于第1天差异无统计学意义(P>0.05),第2～5天差异有统计学意义(P<0.05);空质粒组与空白对照组比较,第1～5天其增殖差异均无统计学意义(P>0.05)。结论构建的骨桥蛋白特异性小干扰RNA真核表达载体可以抑制卵巢癌细胞HO-8910PM中骨桥蛋白的表达。骨桥蛋白可能与卵巢癌细胞HO-8910P...