苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响

目的：研究苦参碱对人瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响。方法：将苦参碱作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,分别测定其分泌胶原、Ⅲ型前胶原、细胞内胶原含量。结果：苦参碱可减少瘢痕成纤维细胞分泌胶原、细胞内胶原和Ⅲ型前胶原的含量。结论;苦参碱在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原的合成。     

病理性瘢痕中结缔组织生长因子基因的表达

目的　探讨结缔组织生长因子在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩发病机制中的作用。　方法　分别留取正常皮肤 5例、增生性瘢痕 15例和瘢痕疙瘩 7例组织标本 ,测定组织中羟脯氨酸含量 ,通过逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)和图像定量分析 ,检测组织中结缔组织生长因子基因表达水平。　结果　正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中羟脯氨酸含量分别为 (2 6 .5 2± 4 .10 )、(84 .10± 1.76 )和 (92 .38± 2 .0 4 )μg/ mg,后两者与前者比较差异有统计学意义 (P<0 .0 1) ;正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中结缔组织生长因子 m RNA指数分别为 0 .0 9± 0 .2 5、0 .78± 0 .6 3和0 .84± 0 .0 4 ,后两者与前者比较差异有统计学意义 (P<0 .0 1)。　结论　结缔组织生长因子在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩纤维化进程中可能起着促进作用。     

氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法:以体外培养的人瘢痕成纤维细胞为实验模型,将氨甲喋呤(10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)加入细胞培养液中进行干预并与空白对照组比较,用乳酸脱氢酶实验检测药物的细胞毒性,并通过MTT实验和羟脯氨酸测定实验分别检测药物对成纤维细胞增殖活性和胶原合成的影响。结果:10-6mol/L、10-5mol/L的氨甲喋呤对成纤维细胞的生长有抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),10-9mol/L～10-5mol/L的氨甲喋呤对瘢痕成纤维细胞胶原合成具有抑制作用(P<0.01)。结论:氨甲喋呤在体外对瘢痕成纤维细胞细胞增殖和胶原合成具有抑制作用。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响

目的　研究苦参碱对人瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响。方法　将苦参碱作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞 ,分别测定其分泌胶原、Ⅲ型前胶原、细胞内胶原含量。结果　苦参碱可减少瘢痕成纤维细胞分泌胶原、细胞内胶原和Ⅲ型前胶原的含量。结论　苦参碱在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原的合成     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响

目的研究苦参碱对人瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响.方法将苦参碱作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,分别测定其分泌胶原、Ⅲ型前胶原、细胞内胶原含量.结果苦参碱可减少瘢痕成纤维细胞分泌胶原、细胞内胶原和Ⅲ型前胶原的含量.结论苦参碱在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原的合成.     

阻抑结缔组织生长因子表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响

目的 观察结缔组织生长因子(CTGF)RNA干扰对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)增殖以及I型胶原合成的影响.方法 设计合成3条CTGF小干扰RNA(siRNA)序列并克隆到pRNAT-6.1/Neo载体中;实时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测KF中CTGF和I型胶原的表达,计算KF细胞数目.结果 合成的3个CTGF siRNA载体中CTGF siRNA3的干扰效果最强,将CTGF mRNA的相对表达量从3.13±0.17降至0.71±0.02,并能将KF中的I型胶原的mRNA水平从2.04±0.10降至0.60±0.04(P<0.01).KF对照组5 d的细胞数目为(10.50±0.25)×10~4,而CTGF siRNA3组5d的细胞数目为(6.83±0.29)×10~4(P<0.01).结论 CTGF RNA干扰能抑制KF的CTGF表达,产生抑制I型胶原合成和细胞增殖的生物学作用.     

柑皮提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原代谢的作用

目的观察柑皮提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及胶原代谢的影响。方法人增生性瘢痕皮肤标本取自笔者单位行整形术的2例烧伤患者。采用组织块法培养成纤维细胞后分为:实验组,细胞加入成纤维细胞培养基与柑皮提取物,并根据提取物的浓度分为2．5、5．0、10．0、25．0 mg／L4个部分;空白对照组,细胞仅加入成纤维细胞培养基;对照组,细胞加入体积分数5％乙醇与成纤维细胞培养基。采用噻唑蓝比色分析法、原位缺口末端标记法及放射免疫法观察各组成纤维细胞增殖情况,计算增殖抑制率;计算凋亡指数(AI)以及检测Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ICTP)、Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)含量的变化。结果实验组2．5-25．0 mg／L柑皮提取物的细胞增殖抑制率分别为(7．100±0．038)％、(8．100±0．048)％、(10．900±0．055)％、(15．900±0．097)％; AI分别为69．7％、71．7％、86．4％、95．2％;ICTP分别为(17．2±0．6)、(18．3±0．6)、(19．8±0．5)、(23．2±0．6)μg／L;PINP分另0为(101．7±1．4)、(107．8±1．1)、(111．6±1．2)、(124．6±1．3)μg／L,均明显高于对照组(P<0．05)。空白对照组上述指标与对照组相近(P>0．05)。结论柑皮提取物能抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖,促进其凋亡及Ⅰ型胶原分解,具有治疗和预防增生性瘢痕的作用。     

反义寡核苷酸对人瘢痕疙瘩成纤维细胞结缔组织生长因子基因表达和胶原合成的作用

目的　研究结缔组织生长因子 (CTGF)在人瘢痕疙瘩发病机制中的作用。　方法　体外分离、培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞 (HKF)。在脂质体介导下 ,将异硫氰酸荧光素标记的硫代磷酸化CTGF反义寡核苷酸 (ASODN)转染至HKF中 ,设为CTGFASODN治疗组 (AT组 ) ,同时设脂质体对照组 (LC组 ,仅加入脂质体 )和空白对照组 (C组 ,不加脂质体和ASODN)。于荧光显微镜下观察CT GFASODN在各组细胞中的分布 ;通过逆转录聚合酶链式反应检测细胞中CTGFmRNA指数 (RI);采用3 H 脯氨酸掺入法检测细胞的胶原合成量。　结果　转染后 12h,AT组细胞胞浆内可见大量荧光 ,LC、C组HKF内无此现象。AT组转染后 4 8hRI值为 0 .12± 0 .6 2 ,明显低于LC组值 0 .5 1± 0 .18及C组值 0 .5 4± 0 .35 (P <0.0 1)。AT组的3 H 脯氨酸掺入率为 10 8.96± 79.0 5 ,较LC组值 171.2 4± 14 .99及C组值 16 5 .38± 4 3.6 1低 (P <0.0 1)。　 结论　CTGFASODN能够抑制体外培养的HKF中CTGF基因表达和胶原合成 ,表明CTGF在人瘢痕疙瘩纤维化进程中发挥了一定作用。     

肝细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的：研究苦参碱（Matrine,Mat)对人增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响。方法：将Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,利用透视电镜、扫描电镜观察细胞的形态变化。结果：Mat可使增生性瘢痕成纤维细胞的超微结构的发生变化;细胞内粗面质网减少,核糖体有部分脱粒,解聚现象,溶解体酶,核染色质浓缩集聚至核膜周边,出现凋亡早期的改变,细胞外表面较用药前光滑,合成分泌的基质明显减少,结论：Mat在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的功能并引起其超微结构发生改变。     

CTGF反义寡核苷酸对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用

目的探讨结缔组织生长因子在人瘢痕疙瘩发病机制中的作用。方法在脂质体介导下,将异硫氰酸荧光素标记的结缔组织生长因子反义寡核苷酸转染至体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,通过MTT比色实验检测细胞增殖活力,通过流式细胞仪检测细胞凋亡,通过H3脯氨酸掺入法检测细胞胶原合成。结果转染后和对照组相比,反义寡核苷酸能够抑制细胞增殖及胶原合成,并促进细胞凋亡(P<001)。结论在体外,结缔组织生长因子反义寡核苷酸具有抗人瘢痕疙瘩纤维化的作用;结缔组织生长因子在人瘢痕疙瘩纤维化进程中具有促进作用。     

成纤维细胞生长因子结合蛋白在烧伤后肉芽组织和增生性瘢痕中微血管形成的作用

目的探讨成纤维细胞生长因子结合蛋白（FGF—BP）mRNA在烧伤后肉芽组织和增生性瘢痕组织中的表达及其与微血管形成之间的关系。方法设计地高辛标记的FGF-BP寡核苷酸探针，对10例烧伤后肉芽组织，33例增生性瘢痕和9例正常皮肤进行原位杂交实验，检测各组织中FGF-BPmRNA的表达差异；采用免疫组织化学方法检测各组织中微血管数目差异。结果烧伤后肉芽组织组和增生性瘢痕（〈6个月）FGF-BPmRNA表达明显升高，FGF-BPmRNA在增生性瘢痕6个月后逐渐下降至正常水平。肉芽组织组和增生性瘢痕（〈6个月）微血管数目明显高于其他各组。FGF-BPmRNA表达与微血管数目成正相关（Spearman R=0．463，P〈0．01）。结论FGF．BP可能是影响烧伤后创面愈合和早期瘢痕增生过程中微血管形成的重要因子。     

培养的正常和瘢痕角质形成细胞上清液对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 研究培养的正常角质形成细胞、瘢痕角质形成的细胞的上清液对增生性瘢痕成纤维细胞生物活性和胶原合成的影响。方法 采用MTT、^3H-脯氨酸掺入法、Ⅲ型前胶原放免试剂盒测定不同来源、不同浓茺培养的角度形成细胞上清液，对增生性瘢痕成纤细胞增殖和胶原合成的影响。结果 正常角质形成细胞上清液，可抑制瘢痕成纤维细胞增殖，对细胞内胶原合成有一定的促进作用，但却抑制细胞内胶原向细胞外分泌。瘢痕角质形成细胞上清液，对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用不明显，甚至还有促进的趋势，对细胞内外胶原合成、分泌皆有明显的促进作用。结论 正常角质形成细胞与瘢痕角质形成细胞分泌的物质对瘢痕成纤维细胞具有不同作用。     

结缔组织生长因子影响体外培养瘢痕成纤维细胞ERK／MAPK信号通路活化及增殖的研究

目的探讨结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）诱导增生性瘢痕（hypertrophic scar,HS）成纤维细胞增殖的信号转导通路。方法采用。H-胸腺嘧啶核苷（^3H—TdR）掺入法观察不同浓度CTGF促HS成纤维细胞增殖的效应,以Western印迹法检测CTGF刺激HS成纤维细胞0、5、10、15、30、60min后,磷酸化及非磷酸化细胞外信号调节激酶1／2（extracellular-signal regulated kinase,ERK1／2）的表达,以两者的比值AI衡量信号通路活化程度;应用特异性阻断剂PD98059阻断ERK通路,MTT法检测CTGF诱导细胞增殖的变化。结果CTGF在一定浓度范围内呈浓度依赖性促HS成纤维细胞增殖,ERK1／2在无CTGF刺激时AI为0．0131±0．0036,CTGF刺激HS成纤维细胞5、10、15、30、60min后,AI值分别为0．0221±0．0033,0．1310±0．0361,0．2090±0．0201,0．1710±0．0379,0．0413±0．0036,在15min达高峰;采用PD98059选择性阻断ERK1／2通路后（A=0．420±0．046）与CTGF刺激组比较（A=0．660±0．035）,细胞增殖显著受到抑制（P〈0．01）。结论ERK1／2是CTGF诱导HS成纤维细胞增殖的主要活化的信号通路。     

增生性瘢痕增生过程中转化生长因子β表达的动态研究

通过对３４例不同时期增生性瘢痕组织标本进行ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ斑点杂交和原位杂交检测，结果发现：随着增生性瘢痕的发生、发展成熟，ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ的总表达量明显呈由强至弱的变化，在１至６个月瘢痕组织内表达丰富，９个月时明显减弱，１２个月以后的瘢痕组织及正常皮肤对照标本中含量很少；ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ表达的定位检测显示：除真皮层组织细胞有部分表达外，许多瘢痕表皮基底细胞内有较强表达。由此可见：①ＴＧＦβ表达与瘢痕增生发展有着密切联系；②ＴＧＦβ在瘢痕表皮组织中的表达对其自身增殖起抑制作用，导致表皮萎缩。     

褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控

目的 探讨褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控.方法 分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,采用四氮唑复合物/硫酸酚嗪甲酯(XTT/PMS)法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中β1转化生长因子(TGF-β1)含量和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰ和胶原ⅢmRNA表达,评价褪黑素和褪黑素受体拮抗剂(luzindole)对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响.结果 褪黑素抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,抑制效果呈浓度依赖性(P＜0.05);高浓度褪黑素(10-3 mmol/L)可降低增生性瘢痕成纤维细胞产生TGF-β1 (P＜0.05)和α-SMA mRNA、胶原Ⅰ mRNA的表达(P＜0.05);褪黑素受体拮抗剂能阻断褪黑素对细胞产生TGF-β1和α-SMA、胶原Ⅰ mRNA表达的抑制作用(P＜0.05);但褪黑素对该细胞胶原ⅢmRNA表达无影响(P＞0.05).结论 褪黑素可通过与受体结合调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物学活性.     

反义结缔组织生长因子抑制兔耳增生性瘢痕的作用

目的探讨反义结缔组织生长因子（connective tissue grouth factro,CTGF）对兔耳增生性瘢痕的抑制作用。方法选择20只大耳白兔建立增生性瘢痕动物模型,随机分成5组,对照组为A组,注射转化生长因子β1（TGF-β1）为B组,注射CTGF为C组,先后注射TGF-β1和CTGF为D组,注射反义CTGF为E组,每个治疗组又分为治疗7、14、20d3组;通过逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测增生性瘢痕中CTGF mRNA的表达,免疫组织化学检测CTGF蛋白表达,HE、Masson染色观察切片内成纤维细胞数密度,计算机辅助图像分析测算切片内胶原纤维面密度。结果E组中CTGF mRNA、蛋白表达、成纤维细胞数密度和胶原纤维面密度均降低,与A、B组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论反义CTGF可以抑制兔耳增生性瘢痕的增殖过程,使瘢痕组织纤维化程度明显减轻。