细菌介导重金属转化过程及金属组学研究方法

重金属污染依然是我国严重的环境问题之一。在重金属胁迫下,微生物可通过复杂的过程,对重金属进行转化,降低重金属的毒性,其中转化涉及的分子机制广受关注。目前,在上述机制相关研究中,对转化过程中重金属的衡量多局限于总量的测定,而对其赋存形态的研究不足,导致难以取得有效进展。对细菌介导重金属的转化过程及金属在其中的赋存形态进行综述,探讨了金属组学研究方法在其中的应用,重点针对重金属的颗粒态与蛋白质结合态进行分析、表征和鉴定,为微生物介导重金属的转化研究提供新视角。     

根瘤农杆菌介导的枸杞转化及转化植物的获得

本文报道一种重要的中药——枸杞(Lycium barbarum L.)的转化、再生系统的建立。以根瘤农杆菌(Agrobaterium tumefaciens)C58cl(pGV3850::neo1103)感染枸杞的幼茎外植体,在含卡那霉素50μg/ml的诱培养基上选择转化的愈伤组织,在含卡那霉素25μg/ml分化培养基上得到再生小芽,再生小芽中有30％外观形态正常。形态正常的小芽转到生根培养基后可长出根从而得到完整的植株。胭脂碱检测。NPT-Ⅱ活性测定及分子杂交的结果均表明,外源基因已导入枸杞并得以表达。在实验过程中还发现:(1) 经过一定预处理后,形成愈伤组织较快的外植体易被转化。(2) 转化后愈伤组织再生正常植株的频率比未转化的愈伤组织高。     

用于肿瘤细胞三维培养的多孔玉米蛋白微载体制备

皮下荷瘤模型是常用的体内肿瘤模型,其构建需要高浓度的肿瘤细胞。使用了微载体的三维培养技术因能够提供更大的表面积,比传统的二维培养更容易富集大量细胞。本研究用多种方法制备了玉米蛋白多孔微载体,并选择孔结构符合要求的一种微载体用于肿瘤细胞的扩增富集,以提高皮下荷瘤模型的成瘤率。实验结果表明,细胞在微载体上有良好的贴壁能力,与用相同材料制备的无孔微载体相比,具有更高的细胞密度。该微载体有望应用于3D肿瘤模型的构建。     

用于生理研究的中性载体锂离子选择性液膜微电极的研制

本文报道一个以中性载体ETH1810为活性材料的锂离子选择性液膜微电极,对钠和钾离子的选择性系数分别为-2.0和-2.4(对数值),端径为1μm,内阻为1.2×10~(10)Ω,可用于细胞内外锂离子活度的测定。     

微小细胞融合介导基因转移诱导细胞恶性转化的研究

本文应用微小细胞融合介导基因转移技术,将人单个染色体从MNNG HOS细胞导入到小鼠细胞NIH 3T3中,并得到恶性转化细胞,进一步分析位于人第7号染色体上癌基因met的转化活性及其毗邻基因的关系,证明与met基因毗邻约3000kb的基因片段发生臂间易位可能是met活化的原因之一。     

热响应纳米金球作为非共价药物载体合成及性质研究

以聚N-异丙基丙烯酰胺接枝的聚酰胺作为稳定剂,以纯水作为溶剂,采用原位合成的方法合成了具有可调光热响应行为、智能响应释药行为的有机无机杂化金纳米粒,并以TEM、紫外-可见分光光度计测定其在不同温度下分别对金核的粒径和表面等离子吸收峰的影响,采用1H-NMR,IR对上述聚合物做了表征.通过紫外-可见光分光光度计测定了不同组样品的低临界溶胀/溶解温度(LCST)值,发现不同组样品LCST有一定差别,通过激光照射测定了样品的体外光热响应性能.选用难溶性吲哚美辛作为模型药物,考察了各组样品的载药释药行为.实验研究结果表明,聚N-异丙基丙烯酰胺接枝的聚酰胺修饰的金纳米粒较单独的聚合物N-聚异丙基丙烯酰胺更适宜作为多功能药物载体:具有更接近人体生理温度的LCST值,并且具有随温度变化而发生变化的光热响应性质及温度响应的药物释放行为.因此它在难溶性药物的控制释药、光热肿瘤消融领域具有较为广阔的应用前景.     

干胶转化法合成条件及磷酸处理对TS-1分子筛性能的影响

以正硅酸乙酯(TEOS)、钛酸丁酯(TBOT)、四丙基氢氧化铵(TPAOH)分别作硅源、钛源及模板剂,用干胶转化法合成TS-1分子筛.考察了TEOS水解时的水硅比、水解温度、除醇条件、晶化时间及磷酸处理对TS-1分子筛性能的影响.采用XRD、SEM、IR、ICP及N2吸附等手段对样品进行表征,同时以环己酮氨肟化反应考察样品的催化活性.结果表明,使用少量的TPAOH(n(TPAOH)/n(SiO2)=0.15)即可得到性能较好的TS-1,而用磷酸对所得TS-1分子筛处理则能进一步改善TS-1分子筛的性能.当n(SiO2):n(TPAOH):n(H2O)=1:0.15:16时在20℃下水解TEOS,钛硅溶液能自行胶凝,将所得凝胶在75℃下除醇至失重率达65%左右,晶化6d得到TS-1分子筛,产品经磷酸改性后,环己酮转化率达到99.5%,环己酮肟选择性达到98.7%,催化活性与高TPAOH用量合成的TS-1接近,而TPAOH的用量大大降低.     

明胶/PEG制备多孔块状SiO2载体及葡萄糖淀粉酶的固定

本文通过溶胶-凝胶法，以正硅酸乙酯、聚乙二醇和明胶为主要原料，制得了孔径约为20 nm的生物酶载体用多孔SiO₂块状材料，并着重研究了热处理温度对多孔SiO₂载体的结构和酶活力的影响。明胶的加入能有效地防止SiO₂表面羟基在烧结过程中的失活现象，提高了多孔材料的吸附能力。制备过程中未加入明胶样品(G0)的酶吸附量和初始酶活力回收率的最高值分别为90 mg·g^-1和11%；加入质量分数为15%明胶的样品(G15)的酶吸附量和初始酶活力回收率分别提高到115 mg·g^-1和38%以上。经过5次重复使用后，G15载酶块体所显示的酶活力还高于G0载酶块体的初始酶活力。600 ℃热处理后所制得的G15样品表现出较好的综合性能，此类多孔块体材料便于酶的回收、保存和再利用。     

酵母高稳定载体的构建及人-αA干扰素在酵母中的高表达和分泌

本文利用酿酒酵母天然2μm质粒的SnaBI位点与pEMBL Yi27质粒的SmaI位点经平末端连接,构建成酿酒酵母高稳定质粒载体pHC11,经测定表明,其酵母转化子在非选择培养条件下连续生长50世代后,仍有82％的细胞保留该质粒,此结果证实了2μm质粒中非功能区的存在,将人-αA干扰素基因表达分泌单元插入pHC11,构建成重组质粒转化酵母后,在完全培养基中发酵培养,经分析测定,培养上清液中表达产物占总蛋白量的36.8％,干扰素效价达2.6×10~(10)u/L,表明利用高稳定载体pHC11使人-αA干扰素在酵母中得到了高表达和分泌。     

电荷翻转型药物载体用于肿瘤细胞核靶向药物输送的研究

大多数的抗癌药物属于DNA毒化物,它们只有作用于细胞核中的DNA或与之相关的酶才能发挥药效。但是,癌细胞先天和后天获得的耐药机制能够有效地限制抗癌药物进入细胞核。目前研制的大多数药物载体只靶向细胞中的溶酶体、不能进入细胞核。最近,β-羧基酰胺化的阳离子聚合物如聚乙烯亚胺(PEI)和聚L-赖氨酸(PLL)被发展为从负电向正电翻转的新型细胞核靶向的药物载体,用于将药物直接输送到癌细胞的细胞核中,从而使药物避开肿瘤细胞膜及细胞浆中的多种耐药机制。在生理环境中,β-羧基酰胺化的阳离子聚合物带负电荷,抑制了阳离子聚合物与血液中蛋白质及细胞之间的非特异性相互作用。而当载体被癌细胞内吞并进入其酸性的溶酶体后,β-羧基酰胺键很快水解为胺基,载体又变为带正电荷,使载体能够逃离溶酶体并进入细胞核,将药物释放到细胞核中。实验结果表明,肿瘤靶向电荷翻转型药物载体能够有效地将药物输送到细胞核中,从而使药物避开癌细胞的耐药机制,提高药物疗效。本文就电荷翻转药物载体的进展做了简述。     

载体及改性方法对硫化型催化剂加氢性能的影响

通过在硅铝氧化物载体上添加第三组分Zr、B、P对载体进行改性,考察第三组分的种类及加入方式对载体性质的影响,结果表明,第三组分ZrO2的添加方式以络合添加最优,添加氧化锆的载体制备的催化剂活性金属分散最好,金属和载体间的作用力最适宜,用此载体制备的硫化型催化剂的加氢活性也最高.     

转化乳剂的晶形及颗粒分布研究

AgCl乳剂转化为AgClBr乳剂的过程中,颗粒外形逐渐变圆,颗粒体积可能增大几倍;同时,颗粒分布变差系数缩小。颗粒体积的这种增大表明,转化过程伴有颗粒之间的非奥氏成熟过程引起的物质传递。这种传递可能是由于有大量颗粒在转化过程中迅速碎裂,并将其物质转移到生长中的颗粒上去了。     

奶粉功能化石墨烯的制备及其用于药物载体研究

本研究以奶粉为稳定剂和还原剂,绿色合成了新型的奶粉功能化石墨烯纳米片(mp-GNS),并且mp-GNS在水中和生理缓冲溶液中均表现出良好的分散性和稳定性.细胞毒性实验表明mp-GNS具有良好的生物相容性,药物吸附实验结果显示其对模型抗癌药物罗丹明6G(R6G)有较高的吸附容量.同时mp-GNS/R6G对R6G的释放具有...     

原子转移自由基聚合(ATRP)阳离子化菊粉作为非病毒基因载体的研究

利用原子转移自由基聚合(ATRP)将聚甲基丙烯酸N,N-二甲氨基乙酯[P(DMAEMA)]偶联到菊粉多糖(Inulin)上,合成了新型基因载体PDIN.利用核磁共振仪、动态光散射分析仪、透射电子显微镜和凝胶电泳对PDIN及其与质粒pDNA的复合物进行了表征.凝胶阻滞实验结果表明,PDIN可以通过静电相互作用稳定结合pDNA.噻唑蓝(MTT)细胞毒性测试、溶血实验、绿色荧光蛋白表达质粒(pGFP)及β半乳糖苷酶表达质粒(pβgal)转染实验结果表明,PDIN对MCF-7,Hela,COS7和HepG2细胞的毒性较小;其溶血率低,具有良好的血液相容性;载体PDIN能有效将pGFP和pβgal带入COS7细胞并表达,在N/P为1时转染效率最高,其β半乳糖苷酶的酶活为(3.36±0.74)U/mg蛋白,比Lipo2000转染效率[(4.33±0.77)U/mg蛋白]略低.因此,所合成的载体PDIN是一种有潜在应用价值的非病毒基因载体.     

琼脂微载体的制备及肝细胞附着生长情况的研究

以琼脂为原料,通过悬浮方法成球制备琼脂微载体,直径100～800μm.利用氨基化修饰琼脂微载体,比较大鼠肝细胞在其上的生长情况,并对培养的肝细胞的形态及葡萄糖、白蛋白的代谢情况进行了测定.     

复合载体及其制备方法对非晶态Ni-B合金催化剂性能的影响

采用浸渍法及溶胶-凝胶法制备了TiO2-Al2O3复合载体,采用浸渍还原法制备了负载型非晶态Ni-B合金,以糠醛液相加氢制糠醇为探针反应考察了不同载体及复合载体的不同制备方法对非晶态Ni-B合金催化性能的影响.采用等离子发射光谱(ICP)、差示扫描量热法(DSC)、透射电镜(TEM)、H2化学吸附法、程序升温还原(TPR)和程序升温脱附(TPD)等技术研究了负载型非晶态Ni-B合金的负载量、合金组成、热稳定性、粒子大小和形态、活性表面积、还原性能以及吸附性能等.用N2吸附法测定了催化剂及载体的比表面和孔径.研究结果表明,与单一氧化铝载体相比,复合载体负载的Ni-B合金催化活性和选择性明显提高,浸渍法制备的TiO2-Al2O3复合载体负载Ni-B合金的催化性能优于溶胶-凝胶法.主要的原因为复合载体负载的催化剂中Ni含量更高,Ni-B粒子细化导致活性表面积更大,以及催化剂的还原及吸附性能发生改变.     

功能化石墨烯的制备及抗癌药物递送载体的研究

以聚苯乙烯磺酸钠(PSS)为保护剂,利用水合肼还原氧化石墨烯制备了一种新型的聚苯乙烯磺酸钠功能化石墨烯(PSS-GNS).结果表明制备的PSS-GNS是水溶分散性的纳米片层材料.考察了PSS-GNS对模型抗癌药物罗丹明6G(R6G)的吸附行为,结果表明PSS-GNS对R6G吸附量较大(2.77 mg/mg).体外释放研究结果表明PSS-GNS/R6G对R6G的释放具有p H响应性和缓释作用.PSS-GNS的细胞毒性较低,能顺利进入癌细胞内并持续缓慢地释放R6G.因此,PSS-GNS有望成为一种新型的抗癌药物递送载体.     

ZrO_2载体上Pd、Ag、Co催化剂用于甲烷完全氧化反应的研究

用浸渍法制备了Pd/ZrO2 、Ag/ZrO2 和Co/ZrO2 等催化剂用于甲烷完全氧化反应。实验表明 ,对Pd/ZrO2 催化剂 ,焙烧温度对其催化活性影响很大 ,最佳焙烧温度为 2 80℃。对Pd/ZrO2 催化剂 ,最佳Pd负载量为 1 0w %。随总流量增大 ,甲烷转化率下降 ,随O2 /CH4进料比减小 ,甲烷转化率下降。其它负载型金属催化剂如Ag ,Co等用于甲烷氧化反应中具有一定的活性 ,但活性低于Pd。Pd -Co双金属催化剂可望是理想的Pd催化剂的替代品     

角膜内皮细胞载体膜片的性质研究及移植试验

利用溶剂浇铸/颗粒沥滤技术制备出壳聚糖和硫酸软骨素共混膜, 研究了共混膜的透光性、 表面结构、 红外图谱、 X-射线衍射图谱以及生物相容性和生物降解性. 结果表明, 共混膜透明度高, 结构均匀, 孔隙大小合适, 壳聚糖分子与硫酸软骨素达到分子水平分散, 且分子间存在较强的相互作用, 共混膜具有良好的生物相容性和生物降解性. 以共混膜为载体培养兔角膜内皮细胞, 结果表明, 共混膜非常适合角膜细胞贴附生长, 10 d内长成良好单层细胞. 将载有角膜内皮细胞的膜片植入内皮缺损兔眼中, 在56 d内术眼基本保持透明, 之后角膜水肿, 逐渐模糊并出现新生血管, 在230 d时术眼新生血管基本消失, 角膜恢复透明.