白念珠菌对正常人外周血树突状细胞表面分子的影响

目的研究白念珠菌对人外周血单核细胞源树突状细胞(dendritic cells,DCs)形态及表面分子的影响。方法用科玛嘉念珠菌显色培养基及芽管试验分离、鉴定白念珠菌;体外培养正常人外周血单核细胞源DCs,经不同剂量的白念珠菌、无菌生理盐水作用后,在倒置显微镜下观察细胞的形态变化,用流式细胞仪检测表面分子的表达。结果实验组与对照组DCs细胞形态无差异;实验组DCs表面分子CD80、CD86表达明显高于同等剂量对照组,差异有显著性意义(P<0.05),且表达量与白念珠菌剂量呈正相关(P均<0.01)。结论在一定剂量范围内,白念珠菌可促进DCs表面分子CD80和CD86表达,DCs进一步成熟。     

RVVC白念珠菌氟康唑敏感株和耐药株对外周血DC_s分化成熟的影响

目的 探讨复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)患者阴道白念珠菌对氟康唑敏感情况及其对人外周血单核细胞源树突状细胞(DCs)形态及表面分子的影响。方法 科玛嘉念珠菌显色培养基及芽管试验分离、鉴定白念珠菌;MIC法判断敏感菌及耐药菌;体外培养正常人外周血单核细胞源DCs,实验组以不同剂量氟康唑敏感菌悬液、耐药菌悬液刺激,对照组以同等剂量标准菌悬液刺激后,倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞表面分子的表达。结果 RVVC患者阴道分泌物共分离出白念珠菌108株,其中对氟康唑敏感67株(62.04%),耐药41株(37.96%);各实验组与对照组DCs细胞形态无明显差别。DCs表面分子CD80,CD86表达量均与白念珠菌悬液剂量呈正相关;加入标准菌株悬液的对照组DCs表面分子CD80,CD86表达明显高于同等剂量加入敏感菌悬液和耐药菌悬液的实验组,且加入敏感菌悬液的实验1组DCs表面分子CD80,CD86表达明显高于同等剂量加入耐药菌悬液的实验2组。结论 在一定剂量范围内,白念珠菌可促进DCs表面分子CD80,CD86表达,使DCs进一步成熟,氟康唑敏感菌株优于耐药菌株,但两者均不及标准菌株。     

念珠菌性阴道炎模型小鼠阴道黏膜中CD11c+树突状细胞的变化

目的:研究白念珠菌感染后,小鼠阴道黏膜树突状细胞(DC)的变化。方法:8~10周龄ICR系小鼠,建立激素依赖型小鼠念珠菌性阴道炎模型,于感染后第2、4、7、14、21d取材,进行阴道灌洗液真菌载量分析及组织病理观察并用免疫组化方法检测小鼠阴道黏膜DC的变化。结果:实验组小鼠阴道灌洗液真菌载量显示,自接种后第2天起即有高水平的CFU计数,并持续到观察期末;阴道组织病理学检查可见大量菌丝附着黏膜表面和黏膜组织内,并有炎性细胞浸润;白念珠菌感染后小鼠阴道黏膜内CD11c DC平均光密度值明显高于对照组(P<0.05)。结论:白念珠菌感染后小鼠阴道黏膜CD11c DC的表达增高,CD11c DC可能参与宿主抗念珠菌感染的免疫机制。     

银屑病患者角质形成细胞培养上清液对单核细胞形态、表型的影响

目的　探讨银屑病角质形成细胞 (keratinocytes ,KC)在单核细胞向郎格汉斯细胞 (langerhanscells ,LC)分化过程中的作用。方法　从健康志愿者外周血分离单核细胞 ,分别经银屑病患者及正常人KC培养上清单独培养 5天 ,然后通过Leica显微镜观察其形态 ,通过流式细胞仪分析其表型。结果　健康志愿者外周血单核细胞经银屑病患者KC上清培养后 ,细胞的聚集体明显较正常组减少 ,而与阴性对照组间无显著差异 ;CDla、CD80、CD86的表达均较正常人KC上清组减弱。结论　银屑病患者KC中缺乏某些因子而影响了单核细胞向LC的分化 ,或表达了某些因子而抑制了单核细胞向LC的分化。     

复发性外阴阴道念珠菌病患者树突细胞Dectin-1受体的功能研究

目的 对比复发性外阴阴道念珠菌病（RVVC）患者和健康女性树突细胞（DC）表面Dectin-1受体信号传导及功能的差异,分析患者病情反复发作的可能原因。 方法 提取1例RVVC患者和1例健康女性的单核细胞,诱导分化为DC。DC与白念珠菌共培养后,流式细胞仪测定DC表面CD83、CD86和CD80表达水平,分析细胞的成熟率;Western印迹法测定DC的Dectin-1、酪氨酸激酶（Syk）和CARD9蛋白的表达;ELISA法测定DC分泌白细胞介素23（IL-23）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-12水平。 结果 与健康人DC相比,与白念珠菌共培养24 h后,该RVVC患者DC表面CD83、CD86和CD80的表达活化不明显。与健康人DC相比,与白念珠菌共培养2 h后,RVVC患者DC表达的Dectin-1没有显著性差异,但是磷酸化Syk和CARD9活化障碍。与健康人DC相比,与白念珠菌共培养6 h后,RVVC患者DC分泌的IL-23、TNF-α和IL-12升高也不明显。抗人Dectin-1抗体对RVVC患者DC的Syk依赖的信号传导通路和上述细胞因子的分泌都没有进一步抑制作用。 结论 该RVVC患者DC的Dectin-1受体信号传导通路障碍,导致DC成熟率降低,分泌的IL-23、TNF-α和IL-12降低,使得宿主黏膜抗念珠菌感染的天然免疫功能缺陷。     

寻常性银屑病患者外周血CD14~+单核细胞中白细胞介素-17的表达及意义

目的:探讨寻常性银屑病患者外周血CD14~+单核细胞中白细胞介素(IL)-17的表达及意义,以期为该病的临床治疗提供新的理论依据。方法:应用密度-梯度离心法分别获取寻常性银屑病患者及健康献血者(正常对照)的外周血CD14~+单核细胞,应用酶联吸附免疫(ELISA)法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测两组人群外周血CD14~+单核细胞培养上清液中IL-17含量及其基因表达;扫描电镜观察与寻常性银屑病患者血清共培养后正常人外周血CD14~+单核细胞的形态变化。结果:寻常性银屑病患者组外周血CD14~+单核细胞培养上清液中IL-17含量及IL-17m RNA相对表达量分别为(28.79±5.96)ng/L和(4.48±2.64)ng/L,均高于健康献血者,差异有统计学意义(P0.05)。健康献血者的外周血CD14~+单核细胞与寻常性银屑病患者血清共培养后,随着共培养时间的延长,细胞膜发生明显改变,甚至破裂。结论:寻常性银屑病患者外周血CD14~+单核细胞过度表达IL-17,此细胞及其细胞因子在该疾病的发生、发展中起一定的促进作用。     

小鼠骨髓lin~-CD117~+造血干细胞定向分化成浆细胞样树突状细胞的研究

目的观察小鼠骨髓lin-CD117+造血干细胞大量增殖分化成浆细胞样树突状细胞(pDC)的方法。方法采用免疫磁珠法分离正常C57小鼠骨髓的lin-CD117+干细胞,加入干细胞因子(SCF)及白介素(IL)-3促进增殖。9天后,停用SCF和IL-3,加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和IL-10诱导发育成pDC,或加入肿瘤坏死因子(TNF)-α促进细胞成熟。光学显微镜和扫描电镜观察pDC形态,经流式细胞法检测免疫表型和吞噬功能。结果SCF和IL-3促进造血干细胞大量增殖;与成熟DC比较,pDC具有明显的未成熟DC形态特征,表型呈CD117和CD11c阳性,I-A/I-E低表达及CD40、CD80和CD86阴性,且吞噬功能较弱。结论小鼠骨髓lin-CD117+造血干细胞可经细胞因子诱导大量增殖,并向pDC转化。     

阿维A对寻常型银屑病树突状细胞活性的影响

目的:确定阿维A对银屑病患者外周血树突状细胞活性的影响。方法:抽取银屑病患者外周血,分离单个核细胞,体外诱导培养树突状细胞(DCs)。阿维A组加入阿维A(浓度为10 nmol/L)和培养液作用DCs 24 h,对照组仅加培养液。暗视野显微镜下观察阿维A作用前后DCs树突的数量及长度变化。结果:实验组阿维A作用后DCs树突与作用前比较其数量及长度没有明显变化,差异无显著性(P>0.05),对照组DCs的树突数量及长度明显增多变长,差异具有显著性(P<0.05)。结论:阿维A可以明显抑制银屑病患者DCs树突数量的增多及长度的增加,从而抑制DCs免疫学活性,达到治疗银屑病的目的。     

银屑病患者外周血单核细胞向树突状细胞分化能力的研究

目的 了解银屑病患者外周血单核细胞向树突状细胞(DC)分化的能力。方法 采用流式细胞仪检测细胞表面抗原表达,同种混合淋巴细胞反应评价细胞的抗原递呈能力。结果 银屑病患者外周血单核细胞能向DC分化,分化而成的DC表达CD40、CD80、CD86和HLA-DR的阳性率显着高于正常人(P<0.01),刺激淋巴细胞增殖的能力显着强于正常人(P<0.01)。结论 银屑病患者外周血单核细胞向DC分化的能力增强,分化而成的DC具有很强的抗原递呈能力。     

抗原致敏树突状细胞抗小鼠白念珠菌系统感染的实验研究

目的研究不同形态白念珠菌致敏的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)对免疫抑制小鼠白念珠菌系统感染的免疫保护作用及所对应的细胞因子改变。方法孢子相和菌丝相白念珠菌在体外分别致敏小鼠骨髓来源的DC(BM-DC),测定混合培养上清IL-12水平;尾静脉回输免疫抑制小鼠体内后,ELISA法测定各组小鼠脾IFN-γ及IL-4水平,并检测肾携菌量。结果DC孢子致敏组上清IL-12水平(380.2±104.13)pg/mL明显高于DC菌丝致敏组和对照组(P<0.05);而DC菌丝致敏组(74.79±23.47)pg/mL与单纯DC培养组上清IL-12水平(19.71±9.21)pg/mL差异无统计学意义(P>0.05)。孢子致敏DC、菌丝致敏DC分别过继免疫小鼠后,前者脾脏IFN-γ水平(269.43±17.34)pg/g明显高于其他组(P<0.05),IL-4水平(6.23±0.37)pg/g则明显低于其他对照组(P<0.05);荷菌一周后孢子致敏DC回输组小鼠肾携菌量(3.58±2.32)×102CFUs与健康小鼠荷菌组比较无统计学意义(P>0.05);其他各组间肾携菌量比较则有统计学意义(P<0.05)。结论尾静脉回输白念珠菌孢子体外致敏的小鼠骨髓来源DC可有效诱导免疫抑制小鼠抗白念珠菌保护性免疫。     

The maturation-dependent production of interleukin-16 is impaired in monocyte-derived dendritic cells from atopic dermatitis patients but is restored by inflammatory cytokines TNF-alpha and IL-1beta

BACKGROUND: Maturation of dendritic cells (DCs) influences important DC functions such as production of cytokines. Recently, DCs were identified as a source of interleukin-16 (IL-16), a chemotactic factor for DCs themselves, CD4+ T cells, and eosinophils. There is evidence that DC-derived IL-16 may contribute to the pathogenesis of atopic dermatitis (AD). OBJECTIVE: To investigate the production of IL-16 during differentiation of monocytes into DCs in healthy individuals and patients with AD. METHODS: IL-16 production was investigated by quantitative real-time RT-PCR, intracellular cytokine staining, immunoblotting, and ELISA. RESULTS: DCs generated from peripheral monocytes by 5-day culture in the presence of IL-4 and granulocyte/macrophage colony-stimulating factor acquired the capability to synthesize, store, and secrete IL-16. Storage and release of IL-16 was further enhanced during final DC maturation induced by additional 3-day culture with tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and monocyte-conditioned medium. Maturation, as determined by up-regulation of CD83 and CD86 surface expression, and production of IL-16, but not production of IL-10 and IL-12p40 was impaired in day 8 DCs derived from AD patients compared to those from healthy donors. Stimulation of day 8 DCs from AD patients with TNF-alpha and IL-1beta enhanced the expression of CD83 and CD86 and restored the production of IL-16. CONCLUSIONS: Signals involved in the activation and maturation of DCs enhance their capacity to produce IL-16. Functional abnormalities present in patients with AD at the monocyte level may account for impaired maturation and IL-16 production of monocyte-derived DCs.     

Protective effect of epigallocatechin gallate on the immune function of dendritic cells after ultraviolet B irradiation

Aim  To investigate the protective effect of epigallocatechin gallate (EGCG) on the immune function of dendritic cells (DCs) after ultraviolet B irradiation (UVB) and its underlying mechanisms.
Methods  The monocytes were isolated from peripheral blood and cultivated into DCs with cytokines, such as granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and interleukin (IL)-4. DCs were harvested after cultivation for 7 days and subjected to irradiation with different dosages of UVB. Then, 200 μg/mL of EGCG was added in certain groups 24 h before irradiation. DCs simply treated with UVB or treated with both UVB and EGCG were co-cultured with lymphocytes, and Mono-nuclear cell direct cytotoxicity (MTT) assay was used to detect the ability of DCs to stimulate proliferation of lymphocytes. Surface markers CD80, CD86, human leukocyte antigen(locus)-DR (HLA-DR), and CD40 were detected using flow cytometry, and the levels of IL-10 and IL-12 secreted from DCs 24 h after cultivation were measured using ELISA.
Results  UVB irradiation was able to inhibit the ability of DCs to stimulate the proliferation of lymphocytes and surface expressions of CD80, CD86, HLA-DR, and CD40 on DCs in a dose-dependent manner. The inhibition rate of DCs was improved to some extent after treatment with 200 μg/mL of EGCG. UVB showed no significant influence on the secretion of IL-10 and IL-12 from DCs, while EGCG was able to down-regulate the secretion level of IL-12 and up-regulate that of IL-10.
Conclusions  EGCG can antagonize the inhibitory effect on DCs induced by UVB irradiation. This function has some relationship with its protecting effect of the expression of the costimulating molecules on the surface of DCs and the secretion level of IL-10 and IL-12.     

中药组方对寻常型银屑病患者外周血树突状细胞干预作用的体外研究

目的探讨中药组方在体外对银屑病患者外周血树突状细胞(DC)的干预作用。方法采用体外培养细胞的方法培养患者DC,经中药组方作用后,流式细胞仪分析细胞表型的变化,MTT法观察DC诱导淋巴细胞增殖的变化及ELISA法观察分泌IL-12的影响。结果患者的DC经中药组方作用后,CD83的表达均明显上调,CD86的表达及刺激混合淋巴细胞增殖的能力均有一定的抑制;对IL-12的产生均显著性下降。结论复方中药对患者的DC的抗原递呈能力起到一定的抑制作用,对IL-12的分泌起强烈抑制作用。     

卡介菌多糖核酸对小鼠DC2.4细胞的影响

目的：研究卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）对小鼠DC2.4细胞的影响.方法：用5 μg/mL（BCG-PSN5组）、20 μg/mL（BCG-PSN20组）、50 μg/mL（BCG-PSN50组）BCG-PSN刺激小鼠DC2.4细胞,用倒置显微镜观察细胞生长状态,流式细胞仪检测主要组织相容性复合物（MHC-Ⅱ）类分子及协同刺激分子CD83、CD86的表达水平,用ELISA方法检测上清液中IL-12的含量.结果：BCG-PSN20组、BCG-PSN50组的CD83、CD86、MHC-Ⅱ分子表达水平高于空白对照组（P〈0.05）,IL-12的浓度亦高于空白对照组;BCG-PSN5组与空白对照组差异无统计学意义（P〉0.05）.结论：BCG-PSN可能通过促进DC2.4细胞成熟和分泌IL-12调节Th1/Th2平衡,发挥治疗AD的作用.     

梅毒患者外周血单一核细胞诱导的树突细胞的生物学特性

目的 探讨梅毒患者外周血单一核细胞（PBMC）诱导的树突细胞（DC）的生物学特性。方法 分离诱导产生单一核细胞来源的树突细胞（MoDC），比较梅毒患者与正常对照组MoDC表型的差异；用重组梅毒螺旋体脂蛋白TpN17体外刺激正常人MoDC后观察其表型的变化、免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化的情况。结果 与正常对照组相比，梅毒患者MoDC细胞表面CD80（51.90%）表达明显上升（P < 0.05）。CD83（16.53%）、CD86（66.13%）及HLA-DR（91.29%）的表达率与对照组差异无统计学意义（P > 0.05）。TpN17可以刺激MoDC表面CD80、CD83表达升高，细胞表达磷酸化ERK1/2（p-44/42）；未经TpN17刺激的DC，无磷酸化ERK蛋白表达。结论 梅毒患者MoDC表型的异常可能与梅毒螺旋体抗原刺激有关，TpN17可以刺激DC成熟，其信号转导途径与ERK有关。