龟板促MSCs肝脏归巢在大鼠肝损伤后修复中的作用研究

目的探讨龟板促MSCs肝脏归巢在大鼠肝损伤后修复中的作用。方法原代培养大鼠MSCs,腺病毒(携带绿色荧光蛋白)转染标记MSCs,激光共聚焦检测归巢至肝脏组织的MSCs含量,Western blot检测肝脏肝细胞生长因子(HGF)水平,天狼星红染色法检测肝脏Ⅰ型胶原面积,胃酶酸解法检测肝组织羟脯氨酸(Hyp),全自动生化分析仪检测血清白蛋白、谷丙转氨酶(ALT)水平。结果肝损伤后肝脏HGF含量增加,向肝脏定植的MSCs增加,同时龟板饲养可进一步促进损伤肝组织表达HFG,促进移植的MSCs向肝脏定植。另外,龟板饲养可降低肝损伤模型大鼠肝脏Ⅰ型胶原面积和Hyp及血清ALT水平,增高血清白蛋白含量。结论龟板饲养可能通过促MSCs向肝脏组织归巢加速肝损伤修复。     

龟板对植入大鼠损伤脊髓内骨髓间充质干细胞分化为神经元的影响

应用密度梯度法分离大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)进行培养,经5溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记和CD44(celldifferentiation protein44)染色及BrdU/CD44双标染色鉴定,将标记有BrdU的MSCs分别植入脊髓损伤体内和龟板治疗脊髓损伤体内。于移植后1周、2周、3周、4周和6周取损伤脊髓组织,对BrdU、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)进行免疫组化染色及BrdU/NF和BrdU/GFAP双标染色检测移植后MSCs的存活和分化。结果发现:移植后1周,两组在移植区内都可见BrdU单位、BrdU/NF双标细胞,移植后2周达到高峰。龟板组可使BrdU单位和BrdU/NF双标细胞持续高表达至移植后6周,而脊髓损伤组BrdU单位和BrdU/NF双标细胞表达减少至移植后4周,组间比较差别有显著性。结果提示益肾龟板能促进脊髓损伤移植MSCs存活和分化为神经元。     

龟板含药血清促进骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白4的表达

目的 龟板有促大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖作用,本研究观察龟板含药血清对MSCs中骨形态发生蛋白4(BMP4)表达的影响.方法 使用密度梯度法分离大鼠骨髓间充质干细胞进行培养,传代纯化,在基础培养液中添加不同浓度龟板含药血清和对照血清,用荧光定量PCR和原位杂交方法检测BMP4 mRNA表达,用ELISA、免疫组织化学和免疫荧光组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测BMP4蛋白表达的变化.结果 BMP4蛋白和mRNA表达相一致,龟板含药血清以浓度依赖方式促进MSC的BMP4 mRNA及其蛋白表达.结论 龟板含药血清以时效和量效依赖性促进BMP4在MSCs的表达,可能与龟板促MSCs增殖作用有关.     

内源骨髓间充质干细胞在心肌梗死后的迁移、归巢与分化

背景：目前的大多数研究主要集中在移植外源干细胞来源的心肌细胞对受损心肌进行修复与再生,而有关内源干细胞迁移、归巢及分化的研究比较少。 目的：观察内源骨髓间充质干细胞在心肌梗死后迁移、归巢以及分化情况。 方法：成年雌性C57BL/6小鼠随机分为2组：心肌梗死组(n=4)小鼠建立骨髓重建模型,于骨髓重建4周后行冠状动脉左前降支结扎术建立急性心肌梗死模型,1周后处死;对照组(n=3)小鼠进行单纯骨髓重建,于骨髓重建4周后处死。取心脏组织,采用免疫荧光染色检测心肌特异性蛋白Troponin Ⅰ的表达,观察心肌梗死后表达绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞在心肌组织中的分布、分化情况。 结果与结论：骨髓重建小鼠心肌梗死组与对照组均可见到发绿色荧光的骨髓间充质干细胞,心肌梗死组骨髓间充质干细胞数量比对照组明显增多。两组切片均可见部分骨髓间充质干细胞呈GFP、Troponin Ⅰ和PI三阳性,心肌梗死组三阳性的细胞比对照组明显增多,表明心肌梗死后内源骨髓间充质干细胞能迁移、归巢到受损的心肌组织并获得心肌分化表型。     

间充质干细胞归巢效应的研究进展

间充质干细胞(MSCs)是一种非造血祖细胞,具有低免疫原性及多向分化潜能,是细胞治疗的首选来源。目前已被科研工作者广泛应用于组织工程、免疫治疗、干细胞移植等多个相关领域。但目前科研工作者们仍然面临着一个难题,那就是低归巢率直接负面影响了其治疗效果。因此,提高MSCs归巢率是目前临床研究,同时也是使用MSCs治疗疾病的关键。本文就MSCs归巢机制的阐述及促进MSCs归巢的相关研究进展作一综述。     

成年大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离

目的应用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法以不同培养条件,探讨体外获得高质量、高活性的成年大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的方法。方法取成年雄性SD大鼠双侧股骨,应用全骨髓贴壁法,分为10%国产TBD胎牛血清+DMEM组、10%国产TBD胎牛血清+DMEM/F12组、12.5%国产TBD胎牛血清+DMEM/F12组、10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12组4组,3只/组;应用密度梯度离心培养法,以10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12作为培养基,取3只大鼠作为一组。比较不同培养方法及培养条件对BMSCs生长增殖的影响。结果全骨髓贴壁法中10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12组原代细胞即可7～9 d达融合,传代到第4代细胞活力仍很好。其余3组原代细胞达融合的时间均超过10 d,且传代后细胞活力差,容易出现老化。密度梯度离心培养法原代贴壁细胞太少,无法达融合。结论本实验采用的培养方法中,10%进口以色列胎牛血清+DMEM/F12培养基的全骨髓贴壁分离法,是体外获取成年大鼠BMSCs最佳方法。     

龟板活性成分对骨髓问充质干细胞中Id1表达的影响

地观察龟板活性成分对骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1（inhibitorofdifferentiation1,Id1）的作用。方法将构建成功的PGL3．Id1启动子用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,龟板9种活性成分（s1-s9：十六酸甲酯（s1）、十六酸（s2）、十六酸乙酯（s3）、十八酸甲酯（s4）、十八酸（s5）、十八酸乙酯（s6）、甾醇（s7）、十四酸甾醇酯（S8）、4-甾酮（s9））30μg／mL分别作用于转染后的BMSCs36h,萤光素酶报告基因检测各活性成分对Id1表达的影响。选取对Id1作用明显的s2、S3、s6、s8、S9,RT．PCR检测对Id1表达的影响。将各活性成分按不同的方式配伍,30μg／mL的终浓度作用于转染后的BMSCs36h,萤光素酶报告基因检测各配伍对Id1表达的影响。结果s6、s8、s9促进了BMSCs中Id1的表达;S2、S3抑制了BMSCs中Id1的表达;S6、s8、s9之间的配伍可以促进Id1的表达;S2、S3及其与其他成分之间的配伍降低了Id1的表达。结论S6、S8、s9为龟板中促进BMSCs增殖的活性成分：s2、S3为抑制BMSCs增殖的活性成分。龟板对MSCs的作用是各成分相互作用的结果,既促进了BMSCs增殖,又避免了细胞的过度增殖。     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离和体外培养

骨髓中的间充质干细胞 (ＭＳＣｓ ,ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ)是一种具有多向分化潜能的细胞 ,它的分化程度低 ,在特定的条件下 ,能诱导分化形成多种非造血组织细胞 (如 :成骨细胞、软骨细胞、肌细胞等 )。本实验对成体大鼠骨髓间充质干细胞进行了分离、培养和初步的组织化学检测 ,并对其生长方式进行了观察。1　材料与方法1.1　材料　实验动物为成年ＳＤ大鼠 ,由广西医科大学实验动物中心提供 ,饲养观察一周后使用。主要试剂为ＤＭＥＭ培养液 ,胎牛血清 ,胰蛋白酶和Ｐｅｒｃｏｌｌ分离液。1.2　方法1.2 .1　骨髓中间充质干…     

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法的实验研究

目的：建立一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs)的方法，为MSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。方法：用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs，筛选合适培养基及适应血清含量，传代扩增，测定生长曲线和贴壁率，形态学观察，免疫细胞化学法鉴定细胞膜抗原和细胞基质蛋白属性。结果：MSCs属骨髓中的单个核细胞，密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs,MSCs在含10％小牛血清L-DMEM培养液中生长性状相对稳定，1、3、5代细胞生长曲线、贴壁率基本相同，增殖速度快，群体倍增时间约为34小时，贴壁存活率高，适应性强，传代后12小时贴壁率达89％。细胞呈均一的成纤维细胞样，表达CD44、CD54、纤维粘连蛋白（Fibronectin,FN)、I型胶原（Collagen I)。结论：密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs，在含10％小牛血清的L－DMEM培养液中，细胞稳定扩增。     

骨髓和脂肪来源的间充质干细胞免疫调节作用的比较

目的比较脂肪源间充质干细胞(AMSCs)和骨髓来源间充质干细胞(BMSCs)的免疫调节能力的差异。方法用流式细胞仪分析AMSCs和BMSCs的表型。通过MSCs和淋巴细胞共培养体系,检测MSCs对T细胞增殖、周期、活化、凋亡以及Th细胞分化的影响。结果表型分析结果显示AMSCs和BMSCs的表型基本一致。AMSCs和BMSCs都能抑制T细胞的增殖和早期活化,并在调节辅助性T细胞亚群的分化上作用类似。但在MSC对活化后T细胞的凋亡影响方面,BMSCs能够抑制活化T细胞的凋亡,而AMSC没有这种作用。结论 AMSCs和BMSCs对T淋巴细胞的影响基本类似,其对活化T细胞凋亡影响的差异还有待进一步的机制研究。     

骨髓间充质干细胞移植后在胸腺内的定居

BACKGROUND: Bone marrow mesenchymal stem cells have low immunogenicity and can induce immune tolerance. At present, the mechanism of immune regulation of bone marrow mesenchymal stem cells is not completely understood. It has been rarely reported whether the bone marrow mesenchymal stem cells can migrate to the thymus after transplantation.OBJECTIVE: To observe the distribution and survival of bone marrow mesenchymal stem cells in the thymus of aging rats after transplantation.METHODS:Bone marrow mesenchymal stem cells cultured in vitro were transfected by adenovirus vectors expressing green fluorescent protein. Transfected bone marrow mesenchymal stem cells were injected into the portal vein of aging rats. At days 3, 7, 14, 21 after transplantation, the survival of bone marrow mesenchymal stem cells homing to the thymus was observed under fluorescence microscope. At day 3 after transplantation, thymus tissues were taken and stained with hematoxylin-eosin for pathological observation. RESULTS AND CONCLUSION:Green fluorescent protein-labeled bone marrow mesenchymal stem cells had a strong green fluorescence at days 3 and 7 after transplantation, and the cell contour was clear. There was no significant difference in the mean absorbance values at days 3 and 7 (P > 0.05). Expression of green fluorescent protein was weakened significantly at days 14 and 21 compared with that at day 3 (P < 0.05). At 3 days after transplantation, the transplanted bone marrow mesenchymal stem cells were clearly visible in the thymus, and acute rejection was not observed. The results show that bone marrow mesenchymal stem cells can migrate to the damaged thymus tissue through the blood circulation, and can survive at least 1 week.  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

中药龟板对Parkinson病大鼠模型BMP4表达的影响

为研究益肾中药龟板对Parkinson病(PD)模型大鼠骨形成蛋白4(BMP4)表达的影响,本研究将6-羟基多巴胺注入大鼠黑质建立PD大鼠模型,对模型大鼠行高、低剂量龟板水煎液口服治疗45d后,采用ELISA和RT-PCR方法进行血清中BMP4酶联免疫试验和脑黑质、纹状体中BMP4mRNA的检测。结果显示:PD模型组的BMP4表达明显降低,用龟板治疗后可以显著阻碍此趋势,而且高剂量组比低剂量组效果更为明显(P<0.05)。本研究结果提示,龟板有明显的促进BMP4及BMP4mRNA表达的作用。     

骨髓间充质干细胞在节段性神经损伤局部微环境中的迁移和转归

背景：面对周围神经损伤修复这一难题,大量研究已证实组织工程干细胞修复方法的可行性,但干细胞的修复作用机制尚不明确。目的：探索骨髓间充质干细胞在损伤神经局部的迁移过程及对损伤神经的修复效果,并着重观察骨髓间充质干细胞在神经局部微环境中的分化及转归。 方法：选取8周龄雄性SD大鼠,使用液氮冰冻坐骨神经,制造节段性神经损伤模型。将36只成功造模的大鼠随机分成3组(n=12),每组按添加细胞的方式不同具体分组如下：单纯冰冻损伤神经组,损伤神经内部注射细胞组,损伤神经周围添加细胞组。造模前及植入细胞后4,8,12周测量坐骨神经功能指数;植入细胞后12周,分别对小腿三头肌进行电生理学、湿重恢复率、收缩力恢复率检测以及Masson染色,损伤段神经组织进行免疫荧光染色,损伤远端神经进行甲苯胺蓝染色。结果与结论：植入细胞后4,8,12周各组坐骨神经功能指数差异无显著性意义,但损伤神经内部注射细胞组和损伤神经周围添加细胞组均高于单纯损伤神经组,并且损伤神经内部注射细胞组略高于损伤神经周围添加细胞组;各组电生理检测结果显示,2个细胞治疗组复合肌肉动作电位的潜伏期和波幅差异无显著性意义,两组的潜伏期均值较单纯损伤神经组缩短、波幅均值较单纯损伤神经组显著升高(P < 0.05);2个细胞治疗组肌纤维横截面积均高于单纯损伤神经组;免疫荧光染色结果显示,在植入细胞12周后,2个细胞治疗组均能观察到Nestin、S100、P0蛋白的表达。结果表明在节段性损伤的神经周围添加骨髓间充质干细胞不仅可以迁移到损伤神经内部参与神经修复,而且能够向许旺细胞和神经干细胞方向分化,达到与直接向神经内部注射干细胞类似的修复效果。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

不同预处理策略促进间充质干细胞的归巢

BACKGROUND:Homing is the initial and key procedure of stem cells-based tissue restoration. Current studies have shown that the inability to recruit bone marrow mesenchymal stem cells to target tissue with high efficiency remains a significant barrier to tissue restoration. Preconditioning strategy provides a new insight to promote stem cell homing. OBJECTIVE:To review preconditioning strategies for promoting the homing of stem cells. METHODS:In PubMed database, different combinations of terms from “stem cell, mesenchymal stem cells, preconditioning, homing, migration” served as search terms to retrieve articles referring preconditioning strategies for promoting mesenchymal stem cell homing published from January 2000 to September 2015. According to the inclusion criteria, 72 articles were selected for final review. RESULTS AND CONCLUSION:Pretreating target tissue or mesenchymal stem cells ahead of cell transplantation, known as tissue preconditioning or cell preconditioning, prominently promotes the homing of mesenchymal stem cells, therefore enhancing tissue restoration effect. Tissue preconditioning is designed to up-regulate expression of chemokines by varying the local microenvironment, thereby increasing homing ability of mesechymal stem cells. Mesenchymal stem cell preconditioning strategies, for example, gene modification and cytokine induction, are mainly to up-regulate expression of chemokine receptors on the surface of mesenchymal stem cells as effectors, and thus promote targeted cell homing. Overall, preconditioning strategy will bring great hope to apply stem cell therapy into the clinic.     

低氧影响干细胞成骨分化的研究进展

氧稳态是机体或细胞正常功能所必需的, 低氧是人正常发育的一个重要的生理因素,并参与许多疾病的发生、发展.在骨发育过程中, 组织和细胞缺氧是经常存在的.体内生长板软骨增殖区氧浓度仅为 2%-5%, 肥大区氧浓度为 0.15%-1%[1].机体损伤后,由于损伤部位血流中断或血肿形成,造成局部氧分压降低.在骨折血流中断处,中央部位氧分压甚至降低到0%-2%[2,3].骨折修复需要机体在骨折部位重建血运,以便吸收损伤组织和转运营养物质.     

抑制组蛋白乙酰化酶活性对心肌微环境中间充质干细胞向心肌细胞分化的影响

目的 通过检测移植经干扰乙酰化作用基因Gen5表达重组质粒ZJ3转染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的Wistar大鼠心肌组织内乙酰化酶活性及乙酰化作用基因Gen5、心肌发育基因GATA4的表达量,探讨体内心肌微环境下乙酰化修饰在干细胞特化心肌样细胞转录调控中的作用.方法 提取干扰组蛋白乙酰化酶Gcn5表达重组质粒ZJ3,经脂质体包载转染MSCs24h后移植至Wistar大鼠心肌组织内,2w后检测移植区域心肌组织内乙酰化酶活性及乙酰化作用基因Gcn5、心肌发育基因GATA4的表达量.结果 实验组心肌组织乙酰化酶活性较正常对照组、阴性对照组及试剂对照组均有显著性降低;实验组心肌组织内Gen5及GATA4表达量较正常对照组、阴性对照组及试剂对照组均有明显减弱.结论 相关特异性基因的检测结果显示封阻干细胞染色质组蛋白乙酰化修饰后,在体内心肌微环境诱导下亦可以抑制干细胞特化心肌细胞转录过程,这为进一步研究组蛋白末端乙酰化修饰与干细胞分化调节机制奠定了实验室基础.     

经气管移植骨髓间充质干细胞在染矽尘大鼠体内的归巢

背景：骨髓间充质干细胞经气管途径注入大鼠体内能减轻染矽尘大鼠的肺部损伤,但其在大鼠体内的分布、迁移情况尚不清楚。 目的：观察经气管途径移植的骨髓间充质干细胞在染矽尘大鼠体内的分布和归巢情况。 方法：用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒(Lv-eGFP)转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,锥虫蓝染色和CCK-8法检测转染前后细胞的活力及增殖情况。将SPF级SD大鼠随机分为染矽尘组和对照组,染矽尘组大鼠经气管内注入40 g/L无菌矽尘混悬液1 mL,对照组大鼠注入生理盐水1 mL。造模后第2天每只大鼠经气管注入2.5×106个Lv-eGFP转染的骨髓间充质干细胞,分别于移植后的1,2,3,4周处死大鼠,取心、肝、脾、肺、肾、脑组织冰冻切片,荧光显微镜观察各组织荧光表达,图文分析软件计算组织荧光强度。   结果与结论：感染复数为50时,转染与未转染Lv-eGFP的骨髓间充质干细胞在活细胞率及增殖力上差异无显著性意义(P > 0.05)。注入细胞后两组肺组织切片均可见广泛、强烈的绿色荧光,以支气管、血管周围明显,各时间点染矽尘组的荧光强度均高于对照组(P < 0.05),到第4周荧光仍较强。两组其余各脏器在第1周均可见荧光,肝、脾、心脏荧光强、分布广,肾、脑组织荧光相对较弱、分布较少;随时间推移,荧光均逐渐减弱,分布逐渐减少。结果提示骨髓间充质干细胞经气管途径进入染矽尘大鼠体内后可归巢至受损肺部。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

PD98059对人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的影响

目的:探讨胞外信号调节激酶(ERK)信号传导途径对骨髓间质干细胞(MSC)分化为成骨细胞的影响。方法:采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC,体外扩增,应用地塞米松、β-甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞。在成骨诱导液中加入不同剂量的PD98059,观察其对成骨细胞形成的影响。结果:MSC体外扩增15代可获得(3-4)×10¹²个细胞。在成骨诱导液作用下,MSC可在体外定向分化为成骨细胞。不同剂量的PD98059均可抑制MSC分化为成骨细胞,并有剂量依赖关系;同时促使部分细胞转化为脂肪细胞。结论:ERK信号传导途径可能在MSC分化为成骨细胞和脂肪细胞过程中起关键作用。