选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398依赖和不依赖环氧合酶-2途径抑制胰腺癌细胞作用机制的研究

目的 从依赖和不依赖COX-2途径探讨选择性COX-2抑制剂NS-398抗胰腺癌细胞作用的机制.方法 采用COX-2 RNA干扰 (RNAi)技术处理胰腺癌细胞系PC-3,沉默其mRNA表达;根据处理方式不同,可以分为:含有沉默COX-2基因片段载体的稳定转染的PC-3细胞株(SPC),含有空白对照载体的稳定转染的PC-3细胞株(NC).应用MTT法检测选择性NS-398对不同PC-3细胞株的生长的影响;采用RT-PCR和Western blotting方法检测COX-2、bcl-2、p21Waf1和p27Kip1的基因表达情况.结果 NS-398对PC-3、SPC和 NC均能发挥明显的生长抑制作用;NS-398干预后,PC-3、SPC和NC细胞bcl-2基因表达均明显降低,p27Kip1和p21Waf1基因表达均明显增加;不含有NS-398的培养液干预后,SPC的bcl-2基因表达低于NC和PC-3,p27Kip1和p21Waf1基因表达与NC和PC-3相比变化不明显.结论 NS-398对胰腺癌细胞具有生长抑制作用,其作用机制可能与通过依赖COX-2途径抑制bcl-2基因表达,通过不依赖COX-2途径诱导p27Kip1和p21Waf1基因表达有关.     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人肝癌HepG2细胞株的生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2表达的影响。方法采用MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白bcl-2的表达。结果NS-398抑制HepG2的增殖活性，经20、40、80和160μmol／L的NS-398处理细胞48h后，其抑制率分别为6．72％、16．21％、20．86％和25．34％，呈剂量依赖效应关系；细胞经160bLmol／L的NS-398处理24h、48h和72h后，G。／G1期细胞由76．07±0．75％分别减少至62．27±0．74％、59．17±1．47％和53．03±1．60％（P〈0．05），S期细胞由11．40±0．79％分别增加至13．23±0．81％、16．20±1．95％和16．60±1．25％（P〈0．05），G2／M期细胞无明显变化；凋亡细胞增多，凋亡率分别为8．47％、16．3％和23．9％；细胞经160μmol／L的NS-398处理48h后bcl-2蛋白与对照组比，表达下调（P〈0．01）。结论NS-398对人肝癌细胞株HepG2有抑制增殖、诱导凋亡作用，细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调有关。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398抑制胃癌细胞P-糖蛋白表达

目的 探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398对胃癌细胞株SGC-7901 P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法 胃癌细胞株SGC-7901经浓度分别为0、10、100μmol／L的NS-398处理后，酶联免疫吸附试验检测NS-398对胃癌细胞前列腺素E2（PGF2）分泌的影响，24、48h后用RT-PCR检测多药耐药（mdr）1 mRNA表达，48h后用免疫细胞化学染色法检测P-gp表达。结果 NS-398可显著抑制胃癌细胞株SGC-7901 PGE2分泌，并呈浓度依赖性（P〈0．05）。不同浓度NS-398作用于细胞后，胃癌细胞株SGC-7901的mdr1／P-gp表达受不同程度抑制，100μmol／L的NS-398对mdr1 mRNA表达抑制作用强于10μmol／L（P〈0．01）。不同浓度药物与测量时间为交互作用．作用48h与24h相比，NS-398对mdr1 mRNA表达的抑制作用更强（P〈0．01）。结论 NS-398可抑制SGC-7901的mdr1／Pgp表达，且呈剂量效应关系。NS-398可能通过抑制COX-2活性，抑制COX-2下游产物PGE2表达，从而抑制P-gp表达。选择性COX-2抑制削可能有助于减轻肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。     

选择性环氧合酶-2抑制剂塞莱希布对大鼠肝纤维化的作用

目的:探讨选择性COX-2抑制剂塞莱昔布对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用.方法:5-6周龄的♂SD大鼠50只,随机分为6组.A组(肝纤维化模型组):10只,50%CCl4橄榄油溶液1mL/kg,每周2次皮下注射,同时给予生理盐水灌胃;B组(早期治疗组):10只,造模同时给予塞莱昔布15mg/kg溶于生理盐水中灌胃,每天1次;C组(中期治疗组):10只,造模同时给予生理盐水灌胃,第3周起改为塞莱昔布灌胃;D组(晚期治疗组):10只,造模同时给予生理盐水灌胃,第5周起改为塞莱昔布灌胃;E组:5只,给予相同体积的橄榄油皮下注射,同时给予相同剂量的塞莱昔布灌胃;F组:5只,给予相同体积的橄榄油皮下注射和生理盐水中灌胃.上述处置共8wk.实验结束后腹主动脉取血,取肝组织,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平;病理组织学HE染色及Masson染色观察肝纤维化严重程度并评分,免疫组织化学方法检测肝组织Ⅰ胶原、α-SMA、COX-1、COX-2的表达.结果:A组与F组相比,可见显著的肝纤维化改变(P<0.01);与A组相比,B组病理染色可见肝纤维化程度明显减轻(P<0.01),血清ALT、...     

环氧合酶2及其抑制剂与动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化(AS)所致的心、脑、肾血管疾病是严重危害人类健康的重大疾病.目前认为AS是一种炎症性疾病[1].其病理变化具有炎症的基本特征,各种炎症细胞和炎性介质参与了其发病.     

环氧合酶-2及其抑制剂与肝癌关系的研究进展

环氧合酶-2与肿瘤发生和发展关系的研究日益增多,它与肝癌的关系同样受到关注.本文就环氧合酶-2的结构、功能、与肿瘤(尤其是肝癌)发生的关系及其抑制剂干预的相关研究进展予以综述.     

环氧合酶-2及其选择性抑制剂在心血管疾病中的研究现状

人体内有一种名为环氧合酶(COX)的成份，是一种膜连接酶，可将花生四烯酸氧化成前列腺素G2(PGG2)，随后还原PGG2成为前列腺素H2(PGH2)，这是前列腺素合成中的重要步骤。此种成份90年代初由Needleman等发现，常见于各类细胞活动及反应。人体有两种不同的环氧合酶(COX)异构体，即COX-1和COX-2。1999年第一种特异性COX-2抑制剂被投入使用。现将COX-2及其特异性抑制剂在心血管疾病中的研究现状综述如下。     

选择性环氧合酶-2抑制剂对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的 了解环氧合酶-2(COX-2)在大鼠酒精性肝损伤中的作用机理,探讨选择性COX-2抑制剂对大鼠酒精性肝损伤的作用。 方法 58只Wistar大鼠,随机分为3组,对照组(n=10)用玉米油+葡萄糖;模型组(n=24)用酒精+玉米油;处理组(n=24)在模型组基础上给予选择性COX-2抑制剂塞莱昔布。23 d后处死大鼠,测定大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血浆和肝组织匀浆谷胱甘肽-S转移酶(GST)活性以及肝组织匀浆6-酮-前列腺素F1α(6-k-PGF1 α)和血栓素B2(TXB2)含量。光镜和电镜观察肝组织细胞及亚细胞结构的改变;免疫印迹法检测各组大鼠肝组织中COX-2蛋白的表达。 结果 模型组肝细胞损伤明显,处理组较轻。模型组大鼠血清AST、ALT、肝组织TXB 2和血浆GST比对照组明显升高,t=4.552～2.294,P<0.01～0.05,肝组织GST则模型组较对照组明显降低,t=8.856,P<0.01。与模型组相比,处理组大鼠血清AST、肝组织TXB2明显降低,t=4.305和2.799,P<0.01,肝组织GST明显升高,t=10.1 34,P<0.001,而血清ALT降低和血浆GST升高则不明显(P>0.05)。肝组织6-k-PGF1α的变化模型组较对照组降低,t=2.284,P<0.05,处理组较模型组降低,但P>0.05。Western blot显示,肝组织中COX-2表达模型组较对照组明显升高(t=4.067,P<0.01),处理组较模型     

3种选择性环氧合酶-2抑制剂对肝细胞癌生长的影响

背景肝细胞癌(HCC)中有环氧合酶(COX)-2表达,非甾体抗炎药阿司匹林可能通过抑制COX-2的表达而抑制HCC生长.目的比较3种选择性COX-2抑制剂美洛昔康、赛来昔布和罗非昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721 生长的影响,观察高选择性COX-2抑制剂罗非昔布对裸鼠HCC原位移植瘤生长的影响.方法采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入检测SMMC-7721细胞的DNA合成情况;采用免疫细胞化学染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;采用DNA原位末端标记(TUNEL)染色检测细胞凋亡.给予HCC原位移植瘤裸鼠罗非昔布每日30 mg/kg 8周,测量肿瘤体积和重量.结果美洛昔康、赛来昔布和罗非昔布均能显著抑制SMMC-7721细胞的3H-TdR掺入,其抑制作用呈剂量依赖性,50%抑制浓度(IC50)分别为8.55×10-8mol/L、1.22×10-8mol/L和6.27×10-9 mol/L.3种选择性OX-2抑制剂(1×10-5 mol/L)作用24 h均可明显降低SMMC-772I细胞的PCNA表达,使细胞凋亡指数较对照组显著增高(14.6%±2.8%、21.6%±3.6%和27.1%±3.5%对1.0%±0.7%,P＜0.01),COX-2抑制剂的选择性越高,凋亡指数也越高(P＜0.01).罗非昔布组裸鼠的HCC原位移植瘤显著小于对照组,体积抑瘤率和重量抑瘤率分别为73.2%和78.1%.结论3种选择性COX-2抑制剂均能在体外有效抑制SMMC-7721细胞的生长,选择性越高,抑制作用越强.罗非昔布在体内能抑制HCC的生长,可能成为治疗HCC的有效药物.     

孕烷X受体抗食管癌EC9706细胞凋亡的作用机制

目的 研究孕烷X受体(PXR)抗食管癌EC9706细胞凋亡的作用机制.方法 使用利福平活化食管鳞癌EC9706细胞中的PXR,阿霉素(ADM)诱导高表达PXR的EC9706细胞凋亡,采用流式细胞仪观察细胞的增殖周期,MTT法观察细胞凋亡率,Western印迹和免疫组化法检测Caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白表达情况.结果 ADM处理可以明显抑制细胞生长;使细胞呈明显凋亡改变;利福平诱导PXR高表达的EC9706细胞凋亡减少,抑制Caspase-3的蛋白水平,上调蛋白Bcl-2的表达,表明PXR在抗食管鳞癌细胞凋亡中发挥重要的作用.结论 PXR可能是通过降低Caspase-3和升高Bcl-2蛋白的表达抑制食管癌细胞EC9706的凋亡.     

Effect of miR-451 on the Biological Behavior of the Esophageal Carcinoma Cell Line EC9706

Background

MicroRNAs play important roles in coordinating a variety of cellular processes. Abnormal expression of miRNAs has been linked to several cancers. However, the functional role of miR-451 in esophageal squamous cell carcinoma remains unclear.

Aims

The present study explored the effects of miR-451 on the biological behavior of the esophageal carcinoma cell line EC9706.

Methods

Synthetic miR-451 mimics were transfected into EC9706 cells using Lipofectamine? 2000. The expression of miR-451 was analyzed by RT–PCR and the expressions of Bcl-2, AKT and phosphorylated AKT were analyzed by Western blotting. The MTT assay, soft agar colony formation assay, transwell assay and FACS were used to assess the effect of miR-451 on EC9706 cell proliferation, invasion, metastasis and apoptosis. Tumor growth was assessed by subcutaneous inoculation of cells into BALB/c nude mice.

Results

In comparison to the controls, a significant increase in the expression of miR-451 was associated with significantly decreased expressions of Bcl-2, AKT and p-AKT, and a significant increase in the apoptosis rate. The number of cell clones was significantly decreased by miR-451 expression, which also caused the inhibition of cell proliferation. The average number of cells penetrating the matrigel was significantly lower than the controls. Injection of miR-451 inhibited tumor growth in a xenograft model.

Conclusions

Upregulated expression of miR-451 induced apoptosis and suppressed cell proliferation, invasion and metastasis in the esophageal carcinoma cell line EC9706. In addition, injection of miR-451 inhibited tumor growth in a xenograft model of esophageal cancer.     

Survivin,Caspase-3蛋白在原发性肝癌中的表达及意义

目的:研究原发性肝癌组织及癌旁组织中survivin、caspase-3的表达及其与细胞凋亡的关系.方法:收集原发性肝癌组织及相应癌旁组织标本40例,免疫组织化学方法检测其survivin、caspase-3蛋白表达,原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测凋亡指数.结果:85%(34/40)的肝癌组织表达survivin蛋白,而癌旁非肝癌组织内无1例呈阳性表达.survivin蛋白表达的阳性率在肝内转移者为93.5%,显著高于无肝内转移者(55.6%,P＜0.05);在门静脉癌栓浸润者为92.8%,显著高于无门静脉癌栓浸润者(66.7%,P＜0.05).37.5%(15/40)的肝癌组织内可见到caspase-3阳性表达,77.5%(31/40)癌旁组织可见不同程度caspase-3阳性表达,两者比较差异有显著性意义(P＜0.05).所有肝癌组织标本中均可检测到凋亡细胞,但survivin表达阳性者的凋亡指数(1.152%±0.326%)显著低于survivin表达阴性者(4.502%±0.830%,P＜0.05);而caspase-3表达阴性者的凋亡指数(5.016%±0.370%)显著高于caspase-3表达阴性者(1.927%±0.237%,P＜0.05).34例survivin表达阳性组织中有10例见caspase-3表达阳性(29.4%),而6例survivin表达阴性组织中有5例见caspase-3阳性表达(83.3%),两者比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论:survivin在肝癌组织中选择性表达,与肿瘤转移、血管浸润等恶性生物学行为有关,survivin对凋亡的抑制可能是其参与肝癌发生的重要机制,其作用机制可能涉及到caspase-3蛋白的抑制.     

熊去氧胆酸诱导肝癌细胞株HepG2凋亡及对Survivin、Caspase-3表达的影响

目的探讨熊去氧胆酸（UDCA）对肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及Survivin、Caspase-3表达的影响。方法UDCA孵育细胞后，分别采用MTT法、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、半定量RT-PCR法等观测相关指标。结果UDCA能抑制HepG2增殖，诱导其凋亡，并具有浓度、时间依赖性。随着Survivin表达下调，Caspase-3表达上调（r=-0．9959，P〈0．01）、细胞增殖抑制（r=0．9883，P〈0．05）、凋亡指数增加（r=-0．9521，P〈0．05）。结论UDCA可能通过干预Survivin的表达，减弱后者对Caspase-3的负调控作用，而影响肝癌细胞的增殖、凋亡。     

Effect of NS-398 on colon cancer cells

AIM: To study the effect of NS-398, a selective cydooxygenase 2 (COX-2) inhibitor, on invasion of colon cancer cell line HT-29 in vitro and to explore its mechanisms. METHODS: Invasive behaviors of the malignant colon cancer cell line HT-29 were investigated in this study. Expressions of COX-2 and CD44v6 in HT-29 cells were detected by flow cytometry. Cellular survival rate was determined by MTT assay. The invasive capacity was quantified by a modified Boyden chamber model. Alterations of cytoskeleton component F-actin were observed by confocal laser scanning microscope. RESULTS: Flow cytometry analysis showed that COX-2 was highly expressed in HT-29 cells. The invasive capability of HT-29 cells could be greatly inhibited by NS-398 at the experimental concentrations of 0.1,1.0 and 10 μmol/L with an inhibitory rate of 22.74%, 42.35% and 58.61% (P<0.01), respectively. MTT assay showed that NS-398 at the experimental concentrations had no significant influence on cellular viability, indicating that such anti-invasive effects had no relationship with cytotoxicity. F-actin was mainly distributed around nuclei forming annular structure in HT-29 cells. After exposure to NS-398 of 10 μmol/L, the annular structure around nuclei disappeared and the fluorescence intensity of F-actin decreased obviously. Treatment with NS-398 could down-regulate the expression of CD44v6 as well. CONCLUSION: NS-398 has anti-invasive effects on colon cancer HT-29 cells in vitro, which may be mediated by a novel mechanism of disruption of cytoskeleton. Down-regulation of CD44v6 expression may be related to alterations of cytoskeleton.     

YM155对人胃癌细胞株MKN28的作用及其机制研究

背景:研究发现生存素(survivin)在胃癌组织中高表达,YM155是survivin的特异性抑制剂。目的:探讨YM155对人胃癌细胞株MKN28的作用及其机制。方法:以不同浓度YM155作用于人胃癌细胞株MKN28。采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖抑制率;以原位末端标记(TUNEL法)检测细胞凋亡率;以逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、蛋白质印迹法分别检测survivin mRNA和survivin、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、caspase-3蛋白表达。结果:YM155作用后,MKN28细胞增殖抑制,凋亡增加。随着YM155浓度升高,survivin mRNA和蛋白表达水平明显降低,并伴随PARP、caspase-3蛋白裂解。结论:YM155可抑制人胃癌细胞株MKN28增殖,并诱导其凋亡,此机制可能与抑制survivin表达,继而激活caspase凋亡信号通路有关。     

脑血灵颗粒对实验性脑出血大鼠脑细胞凋亡及Bcl-2、CasPase-3表达的影响

目的观察脑血灵颗粒对脑出血大鼠脑细胞凋亡及Bcl-2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Cas-pase-3)表达的影响。方法以自体血制作大鼠脑出血模型,实验组给予大剂量脑血灵颗粒,华佗再造丸为阳性对照组,模型对照组和假手术组给予生理盐水,通过TUNEL法检测原位凋亡细胞,免疫组化、原位杂交、Western-blot检测Bcl-2、Caspase-3等凋亡相关基因的表达。结果在脑出血造模后7d,TUNEL阳性细胞数明显增多,Bcl-2表达明显下降,Cas-pase-3表达明显上升;脑血灵颗粒剂及华佗再造丸均能使细胞凋亡的数量减少,同时增加Bcl-2的表达,降低Caspase-3的表达;脑血灵颗粒剂组与华佗再造丸组比较,TUNEL阳性细胞数、Bcl-2表达的降低幅度及Caspase-3表达的上升水平,均有统计学意义(P<0.05)。结论脑血灵颗粒具有显著的抗凋亡活性,从而对脑出血后的继发性神经元损伤具有保护作用。     

罗格列酮对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及机制探讨

目的 观察罗格列酮对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞凋亡及磷酸化Smad2/3表达的影响.方法 高脂饮食复制SD大鼠高脂血症模型,酶消化法原代提取SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外培养,取5～8代细胞进行实验.无血清培养24 h后:实验一分为4组:①对照组,②罗格列酮组(本实验所用罗格列酮均为100 μmol/L),③罗格列酮+过氧化物酶体增生激活受体γ(PPAR-γ)阻断剂GW9662组,④罗格列酮+抗转化生长因子β1(anti-TGF-β1)组,分别用Western blot于1 h检测磷酸化Smad2/3水平,24 h后流式细胞学检测细胞凋亡;实验二分2组:①对照组,②100 μmol/L罗格列酮组,分别于0、0.5、1、2,6、12和24 h,用Western-blot检测磷酸化Smad2/3水平.结果 24 h后罗格列酮组细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05),罗格列酮+GW9662组和罗格列酮+抗转化生长因子β1组细胞凋亡率较罗格列酮组明显降低(P<0.05);罗格列酮处理后0.5 hVSMC p-Smad2/3表达水平明显高于对照组(P<0.05),且1 h迭高峰(P<0.05),p-Smad2/3水平达到高峰后又较快下降(P<0.05);罗格列酮+GW9662组和罗格列酮+anti-TGF-β1组p-Smad2/3表达水平较罗格列酮组低(P<0.05).结论 罗格列酮可能通过激活过氧化物酶体增生激活受体γ,诱导血管平滑肌细胞磷酸化Smad2/3表达水平上调从而诱导血管平滑肌细胞凋亡.     

NS-398对HepG2细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目的探讨氮-2,环己氧-4,硝基苯—甲基磺胺（NS-398）对肝癌细胞株HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法分别用100、200、300、400μmol/L的NS-398处理HepG2细胞,用MTT法测算肿瘤细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,用免疫组化和Westernblot检测细胞的血管生长因子（VEGF）。结果NS-398呈剂量依赖性的方式抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,随着NS-398浓度增大,S期细胞明显减少,有G1期细胞累积现象,其24h半数有效剂量（IC50）为300μmol/L。NS-398浓度为200μmol/L以上时HepG2细胞VEGF的表达与对照组相比,P〈0.01。结论NS-398对肝癌细胞增殖有抑制作用,并诱导其凋亡,可能与G1阻滞以及VEGF的表达受抑制有关。     

NS-398对HepG2细胞的放射增敏作用及其机制

有研究显示环氧合酶-2(COX-2)在许多肿瘤中高表达,推测与肿瘤的发生、发展、转移密切相关.研究还发现抑制COX-2的表达和(或)对抗COX-2的活性可以阻滞COX-2的促癌作用[1],提示COX-2可能成为肿瘤诊治的一个新靶点.本研究采用COX-2选择性抑制剂NS-398处理人肝癌细胞株HepG2细胞,旨在探讨其对肝癌放射敏感性的影响及其可能作用机制.