HSP90α和HSP90β蛋白在人骨肉瘤组织中的表达及临床意义

目的:探讨热休克蛋白HSP90α和HSP90β在骨肉瘤中的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测90例骨肉瘤组织和21例癌旁组织中HSP90α和HSP90β的表达,并分析其与骨肉瘤临床病理特征的关系。结果:在骨肉瘤组织中,HSP90α和HSP90β的阳性表达率分别为57.78%和77.78%,均显著高于癌旁组织(P＜0.05)。HSP90α高表达与骨肉瘤Enneking外科分期相关(P＜0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤位置无关(P＞0.05)。HSP90β高表达与骨肉瘤Enneking外科分期相关(P＜0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤位置无关(P＞0.05)。Spearman相关性分析显示,HSP90α和HSP90β在骨肉瘤中协同表达(r=0.247,P＜0.05)。结论:HSP90α和HSP90β在骨肉瘤组织中共同表达上调,可能作为骨肿瘤潜在的诊断和治疗靶点。     

HSP90α和HSP90β在肝癌中共同上调表达

[目的]探讨热休克蛋白90α(HSP90α)和HSP90β在肝癌中的表达及意义.[方法]采用免疫组化法检测103例肝癌组织和79例非肝癌相关组织(正常肝组织,肝炎,肝硬化)中HSP90α和HSP90β的表达,并分析其与肝癌临床病理特征的关系.[结果]肝癌组织中,HSP90α和HSP90β的阳性表达率分别为82.52％和85.44％,均显著高于非癌组织(P＜0.05).HSP90α高表达与肝癌分化程度相关(P＜0.05),而与患者性别、病理类型、病理分期无关(P＞0.05).HSP90β高表达与肝癌分化程度和TNM分期相关(P＜0.05),而与患者性别、病理类型无关(P＞0.05).Spearman相关性分析显示,HSP90α和HSP90β在肝癌组织中协同表达(r=0.535,P＜0.001).[结论]HSP90α和HSP90β在肝癌组织中共同表达上调,可能可作为肝癌潜在的诊断和治疗靶点.     

ERβ表达载体的构建及其在肿瘤细胞中的功能研究

目的 构建ERβ表达载体,探讨其在肿瘤细胞株中的表达及功能。方法 利用常规PCR技术扩增人全长ERβ编码序列,并将其克隆到真核表达载体pCDNA3中,得到重组质粒pCDNA3-ERβ。用Western blot和体外翻译方法检测ERβ的表达情况。将pCDNA3-ERβ分别转染SV4O病毒转化的胚胎肾细胞293T、乳腺癌细胞MDA-MB-435、MDA-MB-436、SKBR3和前列腺癌细胞PC-3,用含雌激素应答元件的报告基因系统检测ERβ在这些不同细胞中的功能。结果 经酶切鉴定,证实重组质粒pCDNA3-ERβ含有目的基因ERβ。Western blot检测表明,转染pCDNA3-ERβ的细胞表达了相对分子量为63000的ERβ蛋白。体外翻译进一步证实该表达载体翻译了ERβ蛋白。报告基因系统检测表明,ERβ在不同肿瘤细胞中的表达均激活了雌激素应答的ERE和C3报告基因的表达。结论pCDNA3-ERβ在肿瘤细胞中既可表达,又具有功能活性,为进一步研究ERβ在肿瘤细胞中的作用奠定了基础。     

HSP90基因在前列腺癌细胞凋亡中的相关研究

目的：克隆全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系DU-145细胞产生凋亡的相关基因。探讨前列腺癌细胞产生凋亡的分子机制。方法：应用全反式维甲酸诱导前列腺癌DU-145细胞凋亡，建立细胞凋亡模型，采用基于PCR的改良消减杂交技术克隆与凋亡相关的基因。结果：在前列腺癌DU-145细胞凋亡过程中，克隆出包括HSP90基因在内的多个基因序列。结论：全反式维甲酸诱导的前列腺癌细胞DU-145凋亡有多基因参与其中．其中HSP90基因可能与前列腺痛细胞凋亡关系密切。     

HSP90β在细胞中的表达水平及化疗敏感性的相关研究

目的：了解胃癌细胞ＳＧＣ７９０１及其耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ中ＨＳＰ９０β蛋白的表达,与化疗药物敏感性的关系及降低细胞ＨＳＰ９０β蛋白的表达是否影响化疗药物的敏感性。方法：用免疫组化法检测胃癌细胞ＳＧＣ７９０１及其耐药细胞ＳＧＣ７９１０／ＶＣＲ中ＨＳＰ９０β蛋白的表达,ＭＴＴ法测定ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞及其相的ＨＳＰ９０β蛋白低表达细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１和ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ对     

HSP90β在细胞中的表达水平与化疗敏感性的相关研究

目的:了解胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞SGC7901/VCR中HSP90β蛋白的表达,与化疗药物敏感性的关系及降低细胞HSP90β蛋白的表达是否影响化疗药物的敏感性.方法:用免疫组化法检测胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞SGC7901/VCR中HSP90β蛋白的表达.MTT法测定SGC7901、SGC7901/VCR细胞及其相应的HSP90β蛋白低表达细胞AH-SGC7901和AH-SGC7901/VCR对化疗药物的敏感性,流式细胞仪测定细胞内药物含量.结果:SGC7901/VCR细胞HSP90β蛋白的表达高于SGC7901细胞.SGC7901/VCR细胞对ADM、VCR、MMC和CTX的IC50分别为0.398、1.25、0.199和3 981.07μg/ml.SGC7901对ADM、VCR、MMC及CTX的IC50分别为1.58×10-6、1.99×10-3、3.1×10-2及630μg/ml.SGC7901/VCR相对于SGC7901细胞对ADM、VCR、MMC和CTX的耐药指数分别为2.52×105、6.28×102、6.42和6.32 AH-SGC7901和AH-SGC7901/VCR对化疗药物的敏感性显著提高.与相应的亲本细胞相比,AH-SGC7901对ADM、VCR和MMC的敏感性分别提高了10、10 000和24.8倍,对CTX无显著变化AH-SGC7901/VCR对ADM、VCR、MMC和CTX的敏感性分别提高了3.98、6.28、3.15和5.01倍.AH-SGC7901和AH-SGC7901/VCR的阿霉素荧光强度较其相应的亲本细胞显著增强(P＜0.05).结论:降低胃癌细胞HSP90β蛋白的表达可提高它们对化疗药物的敏感性.     

HSP90β干扰和过表达慢病毒载体的构建及其在骨肉瘤细胞Saos-2中的表达

目的:获得热休克蛋白90β(HSP90β)基因干扰和过表达慢病毒表达系统,并检测其在人骨肉瘤细胞株Saos-2中的表达水平。方法:设计合成shRNA,以慢病毒表达质粒构建HSP90β干扰和过表达载体,酶切电泳、测序技术鉴定载体构建是否成功。重组病毒转染H1299细胞,以嘌呤霉素筛选稳定转染的Saos-2细胞,通过荧光显微镜观察计数获得转染效率。将感染好的细胞分为干扰NC组（NEG-shRNA）、干扰组（shRNA-HSP90β）、过表达NC对照组（NEG-pEZ）及过表达组（pEZ-HSP90β）。通过qRT-PCR 与Western blotting 分别从mRNA 和蛋白表达水平验证目的基因的干扰和过表达水平。结果:插入慢病毒表达载体的基因片段与目的基因的碱基序列完全一致。病毒包装成功后,嘌呤霉素最小致死浓度1 μg/ml,感染复数200,感染人Saos-2的感染效率达80%,其中shRNA-HSP90β组干扰效率为86.35%,pEZ-HSP90β组的mRNA相对表达量增加2.8倍。进一步研究发现,shRNA-HSP90β组较NEG-shRNA组中HSP90β蛋白表达明显降低,pEZ-HSP90β组较NEG-pEZ组HSP90β蛋白表达增加。结论:HSP90β基因干扰和过表达慢病毒载体构建成功,并能够在Saos-2中稳定表达。     

胃肠道间质瘤中HSP90α的表达及意义

目的：探讨胃肠道间质瘤（gastrointestinal stromal tumor,GIST）中HSP90α的表达与其发生及恶性转化的关系.方法：采用免疫组化二步法检测41例GIST各分级组织中HSP90α的表达.结果：随着GIST分极的升高,HSP90α表达及强度逐渐增高,阳性表达水平差异有统计学意义（P〈0.05）,且HSP90α表达与GIST大小相关（P〈0.05）.结论：HSP90α参与了胃肠间质瘤的发生、发展,HSP90α检测有助于判断GIST的性质及指导治疗.     

胃肠道间质瘤中HSP90α的表达及意义

目的:探讨胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)中HSP90α的表达与其发生及恶性转化的关系.方法:采用免疫组化二步法检测41例GIST各分级组织中HSP90α的表达.结果:随着GIST分极的升高,HSP90α表达及强度逐渐增高,阳性表达水平差异有统计学意义(P<0.05),且HSP90α表达与GIST大小相关(P<0.05).结论:HSP90α参与了胃肠间质瘤的发生、发展,HSP90α检测有助于判断GIST的性质及指导治疗.     

白细胞介素2基因转染肿瘤细胞体外生物学特性的研究

将人IL-13基因导入肿瘤细胞观察其对小鼠体内肿瘤生长的抑制作用.P815是强致癌性的DBA/2小鼠肥大细胞瘤,将含人IL-13cDNA的质粒载体以磷酸钙共沉淀法导入P815K系,择出一分泌IL-13能力为40ng(每10~6细胞/每24小时)的亚克隆,同法制备分泌鼠IL-2能力为2.2ng的p815 IL-2细胞,及人IL-13分泌量为700ng的CHO IL-13细胞.p815 IL-13细胞一侧肋腹皮下接种同系DBA/2小鼠(每鼠5×10~5细胞),观察到肿瘤的短暂生长,其后出现完全性肿瘤排斥,第25～32天时,绝大多数小鼠肿瘤完全消失;p815 IL-2细胞接种小鼠出现相似过程,而亲本p815细胞接种后肿瘤持续生长至巨大肿瘤.60～70天后给     

HSP90生物学特征及其在泌尿系统肿瘤中作用机制的研究进展北大核心

HSP90作为热休克蛋白家族中最重要的成员,HSP90不仅可以作为癌基因的分子伴侣发挥其重要作用,而且在肿瘤的生长,进展阶段中扮演着重要角色,HSP90在多种癌蛋白的信号通路及信号转导中起着至关重要的作用。HSP90的高表达与泌尿系统肿瘤的发生,发展也密切相关。在肾癌、膀胱癌和前列腺癌中,HSP90均高表达,并且促进这三大肿瘤的发展。抑制HSP90的水平在泌尿系统肿瘤的治疗中也具有重要的研究意义。现对HSP90的生理学特征及其在泌尿系统肿瘤中的作用机制作一综述。     

肿瘤相关基因SNC90 cDNA真核细胞表达型重组质粒的构建及其转染研究 *

目的:构建肿瘤相关基因SNC90哺乳动物细胞表达型载体并进行转染研究.方法:肿瘤相关基因SNC90cDNA片断亚克隆至哺乳动物细胞表达型质粒pREP9中,并运用脂质体和电穿孔法将重组质粒pREP9-SN90转入3株人大肠癌细胞中,用G418筛选抗性细胞克隆.结果:重组体pREP9-SN90对SW1116,COLO205和SW620肠癌细胞株克隆形成均有一定的抑制作用,抑制率分别为72.2%,74.2%和59.7%.结论:这提示肿瘤相关基因SNC90对肠癌细胞生长起负性调节作用.     

宫颈癌组织中MHC-Ⅰ类抗原呈递相关蛋白CNX HSP90 GRP94的表达及意义

目的：探讨宫颈炎和宫颈癌组织中CNX、HSP90、GRP94蛋白和HPV16感染在维吾尔族和汉族妇女中的表达及相关关系。方法：采用免疫组化SP法和PCR技术检测宫颈炎组织66例（汉族39例，维吾尔族27例）以及宫颈癌组织92例（汉族30例，维吾尔族62例）中CNX、HSP90、GRP94蛋白的表达和HPV16的感染情况。结果：CNX蛋白在维、汉宫颈癌组织中的阳性率低于维、汉宫颈炎组织中阳性率表达（67．39％，86．36％）（P〈0．05）。并且，CNX蛋白的阳性率在宫颈炎组织中维吾尔族高于汉族（100％，76．92％）（P〈0．05）。HSP90和CRP94蛋白在维、汉宫颈癌组织中的阳性率表达高于维、汉宫颈炎组织（77．17％，56．06％；77．17％，60．60％）（P〈0．05）。宫颈癌组织中HSP90蛋白阳性率表达维吾尔族低于汉族（74．19％，83．33％）（P〈0．05）。HPV16感染在宫颈炎及宫颈癌中的阳性率均为维吾尔族高于汉族（P〈0．05）。通过相关性研究发现，在维吾尔族妇女宫颈癌组织中HSP90与GRP94呈正相关性（r=0．249．P〈0．05）。HSP90蛋白的阳性表达率与HPV16型感染在宫颈癌组织中呈显著正相关（r=0．361，P〈0．05）。结论：通过对CNX、HSP90、GRP94蛋白和HPV16联合检测能提高宫颈癌的检出率。     

TNFα基因转染的肿瘤细胞抗肿瘤转移作用的探讨

肿瘤瘤苗进行的主动性免疫治疗是一条较为理想的治疗途径，近几年发展起来的细胞因子基因转染的肿瘤细胞瘤苗，开创了肿瘤主动免疫治疗的新时代。肿瘤细胞靶向的TNFα基因治疗开展得较早，TNFα基因转染的肿瘤细胞的体内致瘤性显著下降，但是对于此肿瘤细胞制备成瘤苗对已发生的肿瘤能否具有抗肿瘤转移作用尚未见报道。     

维吾尔族妇女宫颈癌组织中HSP90的表达及其与HPV16的相关性

目的探讨维吾尔族和汉族妇女中宫颈炎和宫颈癌组织中HSP90蛋白的表达和HPV16型感染的情况。方法采用免疫组织化学SP法和聚合酶链反应（PCR）技术检测66例宫颈炎组织和92例宫颈癌组织中HSP90蛋白的表达和HPV16的感染情况。结果HSP90蛋白在维、汉宫颈癌组织中的阳性率高于维、汉宫颈炎组织（77.17%,56.06%）（P<0.05）;HSP90蛋白的阳性率表达在维、汉宫颈癌组织间差异有统计学意义（P<0.05）,并且汉族高于维吾尔族（83.33%,74.19%）。在HPV16型感染的宫颈癌组织中维吾尔族阳性率（58.06%）高于汉族（16.67%）（P<0.05）。HPV16型感染在宫颈癌组织中的阳性率高于宫颈炎组织（44.56%,12.12%）(P<0.05）。维、汉宫颈癌组织中HSP90的表达与HPV16型感染呈正相关性（r=0.361, P<0.05）。结论通过对HSP90蛋白和HPV16联合检测,可能作为检查宫颈癌的标志物,提高宫颈癌的检出率     

NSCLC患者血清中HSP90α的表达及其临床意义

目的:探讨热休克蛋白90α（HSP90α）在非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清中的表达水平及其临床意义。方法:选取2015年10月至2016年10月期间,在第四军医大学唐都医院胸外科确诊为NSCLC的患者100例为肺癌组。选取同期在我院进行体检的健康成年人40例为对照组。检测并比较两组血清HSP90α表达水平差异;比较不同肿瘤分期(TNM分期)患者的血清HSP90α水平差异;探讨不同TNM分期与血清HSP90α表达水平之间的关系。培养NSCLC A549细胞,检测其分泌至胞外的HSP90α蛋白;使用HSP90α抑制剂处理A549细胞,MTT法检测细胞增殖能力的变化。结果:肺癌组与对照组患者血清HSP90α表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.001）;不同TNM分期患者血清HSP90α表达水平比较,差异有统计学意义（P<0.001）;Spearman秩相关分析显示,TNM分期与血清HSP90α水平呈正相关(r=0.95,P＜0.05)。体外细胞实验证实A549细胞能分泌HSP90α至细胞外,使用HSP90α抑制剂处理后细胞增殖能力明显下降。结论:NSCLC患者血清中HSP90α表达水平较正常人升高,并且与TNM分期呈正相关。血清HSP90α由肺癌细胞分泌入血,检测其水平对肺癌的诊断与治疗有一定的临床参考价值。     

survivin蛋白在人非小细胞肺癌中的表达及其与bcl-2、HSP90蛋白表达和细胞凋亡的关系

目的探讨survivin蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,以及与bcl-2、HSP90蛋白表达及细胞凋亡的相互关系。方法应用Western blot法检测80例NSCLC肿瘤组织、20例肺良性病变组织中survivin、HSP90、bcl-2蛋白表达情况,用TUNEL法检测细胞凋亡的情况,并将结果进行相关分析。结果survivin蛋白在肺良性病变组织中不表达,在71.25％ (57/80)的NSCLC组织中有表达;survivin表达水平与细胞凋亡指数呈负相关。肺癌组织bcl-2蛋白阳性表达率56.25％(45/80)明显高于肺良性病变组织的10.00％(2/20),且癌组织中表达水平较肺良性病变组织高,两者比较差异有统计学意义;肺癌组织中HSP90蛋白表达水平明显高于肺良性病变组织。肺癌组织中HSP90、bcl-2蛋白与survivin蛋白表达显著相关(P<0.05)。结论survivin蛋白在肺癌组织中表达上调,提示该基因对NSCLC的发生发展起重要作用。survivin蛋白表达增高与细胞凋亡减少密切相关,survivin有望成为肺癌基因治疗的新靶点;survivin蛋白的表达与HSP90、bcl-2蛋白的表达均呈正相关,三者在肺癌的发生中可能起协同作用。     

口腔鳞癌组织中HSP70基因mRNA的表达及其意义

目的检测HSP70基因的信使RNA在不同分化口腔鳞癌中的表达,以探讨其在口腔鳞状细胞癌组织中表达的意义。方法用半定量RT-PCR方法检测30例口腔鳞状细胞癌和20例正常口腔黏膜中HSP70基因mRNA的表达,并分析HSP70基因mRNA表达量与临床病理特征的关系。结果 HSP70基因mRNA在高、中、低分化口腔鳞状细胞癌及正常组织中的灰度平均值为1.07±0.04,1.21±0.05,1.36±0.03;正常口腔黏膜上皮HSP70 mRNA的灰度平均值为0.95±0.15,表达低于口腔鳞状细胞癌组织,两者之间的差异具有显著性,高中低分化的口腔鳞状细胞癌两两比较,均有统计学差异。结论 HSP70基因表达与口腔鳞状细胞癌发生发展呈正相关关系,这对诊断口腔鳞状细胞癌有重要意义。但是HSP70的mRNA低表达则不能完全当作是口腔鳞状细胞癌中的早期事件。