SDF-1/CXCR4信号轴调控骨髓间充质干细胞向哮喘小鼠肺组织的迁移

目的：探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）/CXCR4轴在外源性骨髓间充质干细胞（MSC）向哮喘模型小鼠肺组织迁移的作用.方法：无菌条件下取GFP转基因小鼠骨髓MSC,体外扩增,鉴定.采用Transwell培养系统,观察0、50、100、150和200 ng/ml SDF-1和CXCR4阻断剂AMD3100对MSC体外定向迁移的影响.取60只雌性BALB/c小鼠,随机分为6组（n=10）：PBS非哮喘组、MSC非哮喘组、PBS哮喘组、MSC哮喘组、SDF-1处理哮喘组、AMD3100处理哮喘组.哮喘组采用哮喘致敏液0.2 ml（含100 μg卵白蛋白）致敏,并使用卵白蛋白雾化吸入激发哮喘.非哮喘组在致敏和激发时均予以PBS处理.MSC处理组于哮喘激发前移植外源性MSC.SDF-1处理哮喘组在MSC移植前气管内注入SDF-1,AMD3100处理哮喘组注入AMD3100预先孵育的MSC.PBS哮喘组注射等量的PBS液.采用Westernablot和RT-PCR方法检测肺组织中SDF-1的表达水平,通过荧光显微镜观察表达GFP的外源性MSC在哮喘小鼠肺组织中的分布情况,比较SDF-1和CXCR4阻断剂AMD3100干预对MSC向肺组织迁移的影响.结果：Transwell实验显示MSC的迁移水平与SDF-1（0~150军ng/ml）成浓度依赖性.与正常小鼠比较,哮喘小鼠肺组织SDF-1表达增强.与MSC非哮喘组比较,MSC哮喘组小鼠肺部有更多MSC聚集.在哮喘肺组织中增加外源性SDF-1能够促进MSC向肺组织迁移.通过AMD3100阻断MSC的CXCR4可以明显减少MSC向肺组织的迁移水平.结论：SDF-1/CXCR4轴参与了MSC迁移到哮喘小鼠肺组织的过程.     

异丙酚对哮喘小鼠气道高反应性和气道炎症的调节作用

目的 评价腹腔注射不同剂量异丙酚对哮喘小鼠气道高反应性、肺部炎症以及Th1/Th2平衡的调节作用.方法 健康雌性BALB/c小鼠100只,6～8周龄,体重18 ～ 20 g,采用随机数字表法,将小鼠分为5组(n=20)∶对照组(C组)、哮喘组(A组)、低剂量异丙酚组(50 mg/kg i.p.,LP组)、中等剂量异丙酚组(100 mg/kg i.p.,MP组)和高剂量异丙酚组(150 mg/kg i.p.,HP组).使用卵清蛋白(OVA)构建过敏性哮喘模型小鼠,腹腔注射-诱导过敏性哮喘模型.各组随机取10只于模型构建成功后24 h即高剂量麻醉处死,行心脏取血及支气管肺泡灌洗,以ELISA法检测血清OVA特异性IgE和支气管肺泡灌洗液中特征性细胞因子IL-4、IL-5、IFN-γ浓度,并行细胞计数/分类计数.各组剩余的10只于模型构建成功后24h行肺功能检测和取肺进行HE染色,比较各组小鼠气道反应性和肺组织的病理组织学评分.结果 腹腔注射异丙酚(LP组和MP组)可明显地抑制哮喘小鼠的气道高反应性.不同剂量异丙酚干预组(LP组、MP组和HP组)均可明显抑制哮喘小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞浸润,降低IL-4、IL-5和血清OVA特异性IgE水平,上调IFN-γ/IL-4比值.结论 异丙酚能够有效抑制哮喘小鼠肺部炎症,上调Th1/Th2比值,改善肺功能,发挥气道保护作用.     

诱导痰嗜酸粒细胞检查在支气管哮喘患者管理中的应用价值

目的探讨诱导痰嗜酸粒细胞（EOS）检查在支气管哮喘患者管理中的应用价值。方法选择我院2012～2013年呼吸科收治的90例支气管哮喘患者的资料,患者经治疗,根据哮喘控制测试及肺功能按全球哮喘防治倡议,均达到停药标准,同时患者行诱导痰嗜酸性粒细胞检查,根据患者嗜酸性粒细胞含量分为观察组（嗜酸性粒细胞〉1％,50例）及对照组（嗜酸性粒细胞〈1％,40例）,随访4周,比较两组患者控制哮喘测试及肺功能指标。结果观察组患者ACT测试达标率低、肺功能指标差,与对照组患者比较差异有统计学意义。结论EOS是导致哮喘的主要炎性细胞,诱导痰EOS可作为支气管哮喘患者病情监测的重要指标。     

雾化吸入氯胺酮及地塞米松对哮喘大鼠白细胞介素-13的影响

支气管哮喘是一种由肥大细胞、嗜酸粒细胞、巨噬细胞、Th2型细胞等多种细胞介导的慢性变态反应性气道炎性疾病。哮喘的发病机制复杂，其中气道炎症导致气道反应性增高及气道通气受限是其主要发病机制。有研究表明，氯胺酮可以防止重症哮喘的恶化，改善哮喘患者的肺功能。白细胞介素-13（IL-13）由活化的肥大细胞、Th2型细胞和自杀伤细胞分泌，在哮喘气道炎症和气道高反应发病机制中起着重要作用。钙离子是重要的细胞信号转导分子，细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）升高可激活T淋巴细胞。吸入糖皮质激素是治疗哮喘的主要方法。本研究拟通过比较哮喘大鼠雾化吸入氯胺酮、地塞米松后IL-13及淋巴细胞[Ca^2＋]i的变化，探讨氯胺酮及地塞米松抗炎效应是否与IL-13有关。     

骨髓间充质干细胞移植对过度运动所致急性肾损伤的研究

目的：探讨外源性骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对过度运动导致急性肾损伤的保护作用.方法：建立过度运动致大鼠急性肾损伤模型,随机分为对照组和移植组,于细胞移植后测定血尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）水平,免疫组化观察肾组织切片.结果：移植组大鼠BUN和Scr明显低于对照组（P＜0.05）,免疫组化显示移植组肾损伤病理损伤明显减轻.结论：MSCs移植可促进过度运动所致急性肾损伤的修复,改善肾功能.     

间充质干细胞联合输注促进造血干细胞移植后的造血重建

目的探讨间充质干细胞(MSCs)与造血干细胞(HSCs)共同移植对造血重建的影响。方法将扩增的Balb/c小鼠骨髓MSCs与骨髓共同经尾静脉输入经致死剂量照射的同系小鼠体内(联合输注组),并设单输骨髓细胞的HSCs组、单输间充质干细胞的MSCs组以及输培养基的对照组,每隔5d计数白细胞,计算动物死亡率。将乙酰乙酸碳氧荧光素标记的人间充质干细胞输入SCID小鼠尾静脉,24h后取肺、心、肝、脾、肾和小肠组织做冰冻切片;取骨髓、肝脏及脾脏,制成单细胞悬液,涂片,在荧光显微镜下观察计数;用逆转录聚合酶链反应测定鼠骨髓中人特异性β2-微球蛋白。结果细胞输注后,联合移植组的白细胞恢复快,12d左右恢复正常,死亡率(3/11)低于HSCs组(5/10)、MSCs组(4/4)、输培养基的对照组(11/11)。人MSCs输入SCID小鼠后24h,其在体内的分布依次为肺、肾、脾、肝,小肠及心脏组织中几乎无阳性细胞,骨髓中有极少MSCs。结论MSCs与造血干细胞共输能促进造血恢复。     

大剂量维生素C对哮喘小鼠肺部感染的影响

目的 观察维生素C对小鼠哮喘模型中肺部感染的作用.方法 用100 μg卵白蛋白诱导小鼠哮喘,每组小鼠腹腔内注射3 mg或5mg[溶于100μl磷酸盐缓冲液(PBS)]维生素C,或同体积的PBS,每组8只小鼠.第24天用气道阻力描计法测定气道阻力.小鼠第25天在深度麻醉下处死得到支气管肺泡灌洗液和肺组织,对肺部炎性细胞总数以及血管和支气管周围炎性细胞浸润层数进行计数.用酶联免疫吸附试验(ELISA)评估其对Th1/Th2平衡的影响.结果 在哮喘模型中,只注射PBS组中的气道阻力均明显高于正常对照组(P＜0.05).6.25、12.50、25.00 g/L维生素C治疗乙酰胆碱激发哮喘组与正常对照组气道阻力相似.而50g/L乙酰胆碱激发哮喘组中使用维生素C治疗明显高于正常对照组,但低于PBS处理组,维生素C可以降低呼吸道对乙酰胆碱的敏感性(P＜0.05).在实验组支气管肺泡灌洗液细胞中巨噬细胞和嗜酸细胞在PBS组及维生素C治疗组细胞中分别占33.6％和63.1％、20.2％和63.1％.维生素C可减少支气管肺泡灌洗液中炎性细胞的数量(P＜0.05),并可减少血管周围炎性细胞(5.0±2.9比6.4±1.5,P＜0.05)及细支气管周围炎性细胞(1.2±0.9比2.6±1.8,P＞0.05)浸润厚度.维生素C不能调节Th1/Th2之间的平衡(P＞0.05).结论 维生素C虽不能转换Th1/Th2的之间的平衡,但有明显抗炎作用.     

胶原凝胶复合骨髓间充质干细胞对小鼠 急性肝衰竭的疗效与机制研究

目的 探讨移植胶原凝胶复合骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs） 对小鼠急性肝功能衰竭（acute liver failure,ALF）的治疗效果与机制。方法 105只雄性C57BL/6 小鼠随机 分为5组：对照组、ALF组、ALF+胶原凝胶组、MSCs组和胶原凝胶-MSCs组,每组21只。ALF组、ALF+ 胶原凝胶组、MSCs组和胶原凝胶-MSCs组采用腹腔注射D-氨基半乳糖苷（D-Gal）12 h后,分别于肝脏多 点注射200 μL PBS、200 μL胶原凝胶、1×106 MSCs和1×106胶原凝胶-MSCs。记录各组小鼠7 d存活率, 全自动生化仪检测肝功能水平,HE染色检测肝脏组织病理学改变,免疫组化检测肝细胞凋亡和增殖情况, 利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测肝脏炎症因子水平,Western blotting检测PI3K-AKT信号通路表达。 结果 扫描电镜示胶原凝胶与MSCs具有较好的相容性,动物活体成像检测显示胶原凝胶-MSCs移植的 信号强于单独MSCs移植的ALF小鼠。D-Gal处理后,胶原凝胶-MSCs组和MSCs组的小鼠生存率明显提高 （P＜0.05）,小鼠血清AST、ALT在胶原凝胶-MSCs组和MSCs组的小鼠明显优于ALF组和ALF+胶原凝胶 组（P＜0.05）,且肝功能指标明显改善,胶原凝胶-MSCs组要更优于MSCs组（P＜0.05）。 HE染色提示胶原 凝胶-MSCs组肝脏的病理改变（肝细胞坏死部位和范围）轻于MSCs组,Western blotting、Ki-67和cleavedCaspase3免疫组化结果显示,胶原凝胶-MSCs组肝细胞增殖能力强于MSCs组,同时肝细胞凋亡程度要低 于MSCs组,相应的胶原凝胶-MSCs组肝脏内IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS和CCL2等炎性因子水平也低于 MSCs组。且胶原凝胶-MSCs移植能明显激活肝脏内的PI3K-AKT通路。结论 胶原凝胶复合MSCs移植能 增强MSCs的肝脏定植能力,通过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖减轻肝损伤,并调控AKT信号通路改善肝 细胞功能,因此胶原凝胶复合MSCs移植优于单纯MSCs移植治疗ALF。     

白介素-33在支气管哮喘发病中作用的研究进展

白介素-33（IL-33）是最近研究发现的IL-1家族中的一个新成员.作为一种前炎症细胞因子,它能够诱导Th2、肥大细胞、嗜酸粒细胞等多种细胞活化,促进机体炎症反应.IL-33在许多炎症性疾病中均大量表达,特别是参与了哮喘等气道炎症的病理过程,被认为是这些气道炎症性疾病的炎性致病因子;同时它作为核因子具有转录抑制的特性.现就IL-33的结构、功能及其在哮喘发病过程中的作用及机制的研究进展综述如下.     

肝细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞对脂肪颗粒移植存活率的影响

目的研究携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒（Ad—HGF）修饰骨髓间充质干细胞（MSCs）对大鼠脂肪颗粒移植存活率的影响。方法用携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒（Ad-GFP）、Ad—HGF转染雄性Wistar大鼠MSCs,测定转染效率与感染上清中肝细胞生长因子（HGF）的表达。用雌性Wistar大鼠150只,随机分为5组：空白对照组（A组）、Ad—HGF组（B组）、MSCs组（C组）、Ad—GFP感染MSCs组（D组）和Ad—HGF感染MSCs组（E组）,每组30只。各组均匀振动5分钟,将颗粒脂肪移植于自体背部皮下;移植后3、5、7、14、28、60d,每组各取5只大鼠脱颈处死,取出移植物;测体积、HE、Masson染色观察病理改变,免疫组织化学法测定组织中HGF表达和血管生成。结果积分吸光度＝100时,Ad—GFP转染MSCs效率可达89．6％;移植后3、5、7、14d,E组移植物中HGF的表达高于其他各组（P〈0．05）;移植后5、7、14、28、60d,E组血管数量也多于其他各组（P〈0．05）;28d和60d时,E组脂肪颗粒体积保持率明显好于其他4组（P〈0．05）。结论携带HGF基因的MSCs在移植物中能够持续表达HGF,有效地减少脂肪颗粒移植后的吸收,从而提高移植颗粒脂肪的存活率。     

支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰中血管内皮生长因子水平的变化及意义

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）在支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病（COPD）发病中的作用。方法分别选择缓解期支气管哮喘患者（哮喘组）30例、稳定期COPD患者（COPD组）28例和健康志愿者（健康对照组）24例进行肺功能测定和用诱导痰检查方法对痰进行炎性细胞分类计数,并用EMSA法测定诱导痰上清液中VEGF水平。结果哮喘组诱导痰中嗜酸粒细胞数为0．9（0．4—1．4）×10^9/L,明显高于COPD组和健康对照组的0．1（0—0．2）×10^9/L、0．0（0～0．1）×10^9/L（P值均＜0．05）;COPD组诱导痰中中性粒细胞数为2．3（1．8～2．8）×10^9/L,明显高于哮喘组和健康对照组的1．1（0．2～1．9）×10^9/L、1．0（0．8～1．2）×10^9/L（P值均＜0．05）。哮喘组、COPD组和健康对照组诱导痰上清液中VEGF水平分别为（2．3±0．5）、（0．3±0．1）、（0．9±0．2）μg／L,三组间比较差异有统计学意义（P值均＜0．05）。哮喘组诱导痰上清液中VEGF水平与诱导痰中嗜酸粒细胞数呈正相关（r=0．62,P＜0．05）,与第1秒用力呼气容积（FEV。）占预计值百分比呈负相关（r=-0．56,P＜0．05）;COPD组诱导痰上清液中VEGF水平与FEV,占预计值百分比呈正相关（r=0．43,P＜0．05）,与诱导痰中中性粒细胞数无相关性（r=0．21,P＞0．05）。结论支气管哮喘患者诱导痰上清液中VEGF表达上调,VEGF可能参与了支气管哮喘的气道炎性反应过程;COPD患者诱导痰上清液中VEGF表达下降,VEGF可能参与了COPD的发病过程。     

静脉注射利多卡因对哮喘患者气道张力和肺功能的影响

背景为防止哮喘患者发生反射性支气管痉挛，通常以局部麻醉药喷雾或静脉注射作为辅助用药。利多卡因可减轻气道对可增加气道张力的神经性刺激的反应性，但仍缺乏有关利多卡因对气道基础张力影响的相关报道。因此，本研究检验了静脉注射利多卡因对哮喘患者气道基础张力的影响。方法用计算机X线断层扫描技术对15例哮喘志愿者基础状态下和输注利多卡因时的小气道（2～5mm）、中气道（5—8mm）和大气道（〉8mm）进行扫描，以分析在基础状态和输注利多卡因时气道管腔直径和气道壁厚度的变化，以及利多卡因引起的肺功能的改变。结果利多卡因显著降低1秒钟用力呼气量（forced expiratory volume in 1s，FEV1）（7±2％，P=0．006）。与基础状态相比，输注利多卡因期间气道管腔直径缩小并具有统计学意义（-3±0．5％，P〈0．001）。而且，FEV1的变化与气道管腔直径变化之间呈明显相关（r^2=0．47，P=0．01）。结论尽管利多卡因能减低气道对刺激感觉神经致气道痉挛药物的反应性，却并不降低基础气道张力。相反，即便是静注利多卡因亦会导致气道张力增高和气道狭窄。因此，当使用利多卡因预防气管插管所致支气管痉挛时，应用听诊法保持对气道的监测，即使是静注利多卡因期间亦应如此。     

聚左旋丙交酯纳米纤维支架与大鼠脊髓组织相容性的研究

目的探讨聚左旋丙交酯[Poly(l-lactic acid),PLLA]纳米纤维支架与大鼠脊髓组织的相容性。方法以PLLA为原料,采用液-液相分离技术构建纳米纤维支架(Nanofibrous scaffolds)。在体外构建骨髓间充质干细胞(MSCs)-PLLA纳米纤维支架复合体;将12只SD大鼠随机分为两组,即损伤对照组和MSCs移植组。暴露大鼠胸10脊髓段做半横断损伤,其中在损伤对照组脊髓损伤处移植PLLA纳米纤维支架,在MSCs移植组脊髓损伤处移植MSCs-PLLA纳米纤维支架复合体。术后两组动物观察60d。HE染色观察结构改变,免疫组织化学方法观察炎症细胞及MSCs的存活情况。结果体外成功构建MSCs-PLLA纳米纤维支架复合体。扫描电镜显示,PLLA纳米纤维支架由相互贯穿的微孔组成。荧光显微镜和扫描电镜下均可见MSCs能够很好地黏附在支架上,分布较均匀。移植术后60d,HE染色显示,PLLA纳米纤维支架与脊髓组织融合较好,无明显空洞和瘢痕。CD68免疫组织化学显示,在移植物与宿主脊髓交界处有少量阳性细胞,表明有轻微炎症反应。GFP免疫组织化学显示,移植在脊髓损伤处的PLLA纳米纤维支架内有大量阳性M...     

Airway inflammation, basement membrane thickening and bronchial hyperresponsiveness in asthma

BACKGROUND: There are few data in asthma relating airway physiology, inflammation and remodelling and the relative effects of inhaled corticosteroid (ICS) treatment on these parameters. A study of the relationships between spirometric indices, airway inflammation, airway remodelling, and bronchial hyperreactivity (BHR) before and after treatment with high dose inhaled fluticasone propionate (FP 750 microg bd) was performed in a group of patients with relatively mild but symptomatic asthma. METHODS: A double blind, randomised, placebo controlled, parallel group study of inhaled FP was performed in 35 asthmatic patients. Bronchoalveolar lavage (BAL) and airway biopsy studies were carried out at baseline and after 3 and 12 months of treatment. Twenty two normal healthy non-asthmatic subjects acted as controls. RESULTS: BAL fluid eosinophils, mast cells, and epithelial cells were significantly higher in asthmatic patients than in controls at baseline (p<0.01). Subepithelial reticular basement membrane (rbm) thickness was variable, but overall was increased in asthmatic patients compared with controls (p<0.01). Multiple regression analysis explained 40% of the variability in BHR, 21% related to rbm thickness, 11% to BAL epithelial cells, and 8% to BAL eosinophils. The longitudinal data corroborated the cross sectional model. Forced expiratory volume in 1 second improved after 3 months of treatment with FP with no further improvement at 12 months. PD(20) improved throughout the study. BAL inflammatory cells decreased following 3 months of treatment with no further improvement at 12 months (p<0.05 v placebo). Rbm thickness decreased in the FP group, but only after 12 months of treatment (mean change -1.9, 95% CI -3 to -0.7 microm; p<0.01 v. baseline, p<0.05 v. placebo). A third of the improvement in BHR with FP was associated with early changes in inflammation, but the more progressive and larger improvement was associated with the later improvement in airway remodelling. CONCLUSION: Physiology, airway inflammation and remodelling in asthma are interrelated and improve with ICS. Changes are not temporally concordant, with prolonged treatment necessary for maximal benefit in remodelling and PD(20). Determining the appropriate dose of inhaled steroids only by reference to symptoms and lung function, as specified in current international guidelines, and even against indices of inflammation may be over simplistic. The results of this study support the need for early and long term intervention with ICS, even in patients with relatively mild asthma.     

Role of sputum differential cell count in detecting airway inflammation in patients with chronic bronchial asthma or COPD.

BACKGROUND: Sputum may provide an alternative source of bronchial cells to investigate characteristics of airway inflammation and its functional correlates in patients with asthma or chronic obstructive pulmonary disease (COPD). METHODS: Two groups of clinically stable patients were studied: a group of 43 patients with mild or moderate asthma and a group of 18 patients with COPD. Twenty normal subjects formed a control group. Sputum production was either spontaneous or induced with inhaled hypertonic saline for five minute periods for up to 20 minutes. The concentration of saline was increased at intervals of 10 minutes from 3% to 4%. Plugs from the lower respiratory tract were selected for differential counting in cytocentrifugation preparations. Bronchial provocation tests were performed by inhaling progressive concentrations of histamine from a DeVilbiss 646 nebuliser and the concentration of histamine which caused a 20% fall in the forced expiratory volume in one second (FEV1) was calculated (PC20FEV1). RESULTS: Neutrophils predominated in the sputum of subjects with COPD while eosinophils predominated in the sputum of those with chronic asthma. However, in 28% of asthmatic subjects an increased percentage of neutrophils was found. In asthmatic patients the differential count of eosinophils was inversely related to the FEV1, FEV1/VC, and bronchial hyperresponsiveness, and directly related to clinical scores. CONCLUSIONS: The cellular profile of sputum in normal subjects and in patients with asthma and COPD is different. The concentration of eosinophils in the sputum correlates with the severity of asthma.     

卵清蛋白致敏SD大鼠上下呼吸道炎症反应动物模型的构建

目的：以卵清蛋白为致敏原,建立具有变应性鼻炎和变应性哮喘为主要特征的大鼠模型,观察大鼠模型上下呼吸道炎症反应及病理改变。方法：采用6-8周雄性SD大鼠,随机分为变应性鼻炎组10只,变应性鼻炎对照组10只,变应性哮喘组10只,变应性哮喘对照组10只,以卵清蛋白致敏并激发制成变应性鼻炎和变应性哮喘模型。HE染色和甲苯胺蓝染色分别检测变应性鼻炎模型和变应性哮喘模型鼻黏膜及肺组织中EOS、MC的表达。结果：变应性鼻炎组、变应性哮喘组大鼠卵清蛋白激发后出现了典型的变应性鼻炎、变应性哮喘症状（评分〉5分）,鼻黏膜和肺组织可见较多的嗜酸粒细胞和肥大细胞浸润,且两组鼻黏膜和肺组织中EOS、MC数明显多于相应对照组（P〈0．05）。结论：卵清蛋白致敏SD大鼠能够成功建立变应性鼻炎和变应性哮喘动物模型,有望为上、下呼吸道炎症反应的诊断、治疗及研究工作提供有效方法及组织形态学依据。     

Activated memory T helper cells in bronchoalveolar lavage fluid from patients with atopic asthma: relation to asthma symptoms, lung function, and bronchial responsiveness.

BACKGROUND: Bronchial mucosal inflammation and epithelial damage are characteristic features of asthma. Activation of T helper lymphocytes may contribute to this process by mechanisms including the release of cytokines promoting eosinophil infiltration and activation. METHODS: Bronchial washings and bronchoalveolar lavage fluid were obtained from 29 atopic asthmatic patients (19 with current symptoms and 10 symptom free) and 13 normal volunteers. Flow cytometry was used to assess T cell phenotype and activation status in bronchoalveolar lavage fluid and peripheral blood, and differential cell counts were made on bronchial washings and bronchoalveolar lavage fluid. Findings were related to severity of disease as reflected by symptom scores, baseline lung function, and airway responsiveness. RESULTS: CD4 T lymphocytes in bronchoalveolar lavage fluid and blood from asthmatic patients were activated by comparison with controls (CD4 CD25, median 16.8% v 8.7% for bronchoalveolar lavage fluid, and 15.3% v 8.7% in blood). Bronchoalveolar lavage fluid CD4 T cells from both asthmatic patients and controls were of memory phenotype (95.8% and 96.8% CD45RO and 1.7% and 0.4% CD45RA respectively), whereas both CD45RO and CD45RA T cells were present in blood. Patients with asthma and current symptoms showed increased bronchoalveolar T cell activation compared with patients without symptoms (CD4 CD25 18.7% v 12.3%). Within the asthmatic group there was a significant association between CD4 CD25 lymphocytes and asthma symptom scores (rs = 0.75), airway methacholine responsiveness (log PC20, rs = -0.43) and baseline FEV1 (rs = -0.39). A correlation was also found between CD4 CD25 lymphocytes and eosinophils in bronchoalveolar lavage fluid (rs = 0.48). Eosinophils in bronchoalveolar lavage fluid were increased in asthmatic patients compared with controls and the percentage of eosinophils in bronchoalveolar lavage fluid correlated with asthma symptom score. A relation was found between percentage of epithelial cells in bronchoalveolar lavage fluid and FEV1 and methacholine PC20. CONCLUSION: These results support the hypothesis that selective activation of memory CD4 T cells contributes to eosinophil accumulation, bronchial hyperresponsiveness, and symptoms in asthma.     

脉冲振荡肺功能在儿童支气管哮喘中的应用及临床意义

目的探讨脉冲振荡肺功能在儿童支气管哮喘（简称哮喘）中的临床应用和诊断价值。方法选取哮喘患儿32例，其中急性发作期19例（急性发作组），临床缓解期13例（临床缓解组），健康体检儿童20例（对照组），采用MasterScreen脉冲振荡肺功能仪，分别检测三组的肺功能情况。结果急性发作组患儿5、20Hz时气道阻力（R5、R20）、R5-R20肺弹性阻力（X5）的负值及共振频率（Fres）[分别为（9．81±2．76）、（5．74±1．53）、（4．97±1．89）、（-4．34±1．65）cmH20／（L·s）（1cmH：0=0．098kPa）和（21．90±2．70）Hz]，均较临床缓解组[分别为（7．75±0．97）、（3．82±0．50）、（3．934-0．55）、（-3．70±0．78）cmIH2O／（L·s）和（18．81±0．91）Hz]、对照组[分别为（6．06±0．69）、（3．52±0．67）、（2．54±1．20）、（-2．98±1．29）cmH2O／（L·s）和（14．15±0．99）Hz]高（P〈0．05）。临床缓解组患儿R5、R5-R20、Fres较对照组仍高（p〈0．05或〈0．01），而R20、X5差异无统计学意义（P〉0．05）。结论脉冲振荡肺功能可提供哮喘发作及缓解的各项客观指标，并可作为哮喘患儿肺功能检测及治疗监测的方法。     

组织工程骨-80 ℃低温保存的初步研究

目的：了解不同冻存方法对组织工程骨生物活性的影响。方法：以骨髓基质干细胞（marrow stromal cells，MSCs）复合部分脱蛋白骨培养制备组织工程骨，实验分为：A组，组织工程骨用添加冻存保护荆的保存液保存；B组，组织工程骨用不添加冻存保护荆的保存液保存；C组，组织工程骨未行低温保存；D组。单纯MSCs培养。A组和B组的组织工程骨于-80℃深低温保存3个月，3个月后复温冻存的组织工程骨。扫描电镜观察MSCs的黏附和分布情况，MTT法检测细胞活力，对硝基苯磷酸法检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AIP）活性，流式细胞仪分析细胞周期。结果：MSCs在材料表面和孔隙内均可黏附和分布，黏附于材料的细胞活力大小依次为C组〉A组〉B组（P〈0．01，P〈0．05）。黏附于材料的细胞AIP活性大小依次为C组〉A组〉B组（P〈0．01）。各组细胞周期未见明显变化，未见异倍体细胞。结论：选择适宜的冻存保护荆对组织工程骨的生物活性有一定的保护作用。