肝癌患者GSTM1、GSTT1基因多态性分析

目的：探讨谷胱甘肽硫转移酶GSTM1、GSTT1基因多态性与广西肝癌的关系。方法：应用多重PCR技术对广西地区105例肝癌患者151例健康对照者的GSTM1、GSTT1基因多态性进行分析。结果：GSTM1空白基因型频率在病例组和对照组分别为64．76％和50．99％,二者差异有统计学意义（P=0．0287）,OR值为1．77。病例组GSTT1窄白基因型频率为40．95％,高于对照组的33．11％,但二者差异无统计学意义（P=0．199）,OR值为1．4。联合多态分析屁示,同时携带GSTM1、GSTT1空白基因型的个体患肝癌的危险性增加了1．22倍。结论：GSTM1、GSTT1同时为空白基因型的个体是肝癌的易感人群,应注重个人防护。     

贲门癌组织GSTM1,GSTT1和GSTP1基因多态变化

目的：探讨河南林州地区贲门癌组织中3种Ⅱ期代谢酶基因GSTMl，GSTTl及GSTPl基因多态性变化，进一步深入了解该地区贲门癌高易感性分子基础。方法：利用multlplex—PCR、PCR—RFLP检测19例手术切除贲门腺癌组织及72例正常对照组织(颊粘膜细胞和血细胞)中代谢酶基因GSTMl、GSTT1、GSTPl多态性改变。结果：贲门腺癌与正常对照组织中GSTMl纯合缺失基因型分别占37％和39％，该基因型未明显增加对贲门癌的易感性(0R＝0．69)；GSTT1纯合缺失基因型分别占53％和39％，该基因型可能与贲门癌易感性增高有关(0R＝2．38)；GSTPl的IIe／Val和Val／Val基因型合并在一起分别占26％和42％，Val等位基因能降低个体贲门癌的易感性(0R＝0．41)。结论：GSTMl基因多态对贲门癌易感性无明显影响，而GSTTl和GSTPl基因多态与贲门癌易感性有关。     

套式PCR检测新疆地区不同人群HCV基因型

对采自新疆地区不同人群１１２２份血清分别进行抗－ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ和ＨＣＸＶ ＲＮＡ基因型检测，结果显示：该地区自然人群，职业献血员，肝硬变和肝细胞癌患者抗－ＨＣＶ阳性率分别为２．０％，３５．７％，４２．５％及２０．８％，该人群ＨＣＶ基因型以混合型感染为主，单一基因型感染以Ⅱ型为主。     

巢氏PCR—RFLP和多重PCR检测HBV基因型、基因亚型方法的比较

目的:建立HBV基因型和亚型的分型方法,并分析相关的两种方法特异性和敏感性。方法:采用型特异性引物的巢氏PCR-RFLP和六种主要的HBV型特异性引物和亚型特异性引物的多重PCR方法,分别检测了100例患者标本。结果:两法不一致率为50%(27/54)。型特异性引物巢氏PCR-RFLP法检测出B基因型41例(41%),C基因型25例(25%),B C基因型34例(34%),B j亚型3例(7.3%),Ba亚型为38例(92.7%),Cs亚型为21例(84%),Ce亚型为3例(12%),1例C型未分出亚型(4%)。多重PCR法检出B型18例(33.3%),C型7例(13%),B C混和型5例(9.3%),B2亚型2例(11%),C1亚型2例(28.5%)。巢氏PCR-RFLP法型检出率100%亚型检出率98.5%,多重PCR法型检出率55.6%,亚型检出率仅为16%,前者高于后者(P<0.05)。结论:巢氏PCR-RFLP鉴定HBV基因型、基因亚型较多重PCR敏感性高,重复性好,但耗时长,费用高。     

应用多重PCR法对广东地区HBV进行基因型（A—F）分型

目的：建立乙型肝炎病毒（HBV）基因型（A－F）多重PCR分型方法，并利用该方法对广东地区HBV PCR阳性血清进行分型。方法：将GenBank中114例HBV全序列进行比较分析，找出每种基因型相对于其他五种基因型的独特序列，并根据这些独特序列设计出六对分别针对A－F基因型的特异引物，利用这六对引物建立HBV的多重PCR分型法，结果：多重PCR与以前用PCR－限制温度长度多态型分析法的分型结果一致。对广州周边地区HBV携带者的初步分型结果显示，主要为B型和C型，分别占45．00％和38．75％，另外还有16．25％的D型，结论：用多重PCR分别法准确易行，灵敏性高，便于推广应用。     

多重PCR技术检测女性尖锐湿疣的HPV基因

对３９例女性生殖道尖锐湿疣及假性湿疣进行ＨＰＶ基因的多重ＰＣＲ技术检测及组织切片的病理学观察。结果表明，病理诊断尖锐湿疣１８例，均检出ＨＰＶ１１／６，其中有１例合并ＨＰＶ１６的感染。不典型尖锐湿疣（不具备典型挖空细胞）１４例，均检出ＨＰＶ１１／６。假性湿疣１７例，２例检出ＨＰＶ１１／６。ＨＰＶ１８均未检出。因此，临床中对于不典型尖锐湿疣及假性湿疣需用ＰＣＲ技术来确诊。     

应用多重PCR法对广东地区HBV进行基因型(A-F)分型

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)基因型(A-F)多重PCR分型方法,并利用该方法对广东地区HBV PCR阳性血清进行分型。方法将GenBank中114例HBV 全序列进行比较分析,找出每种基因型相对于其他五种基因型的独特序列,并根据这些独特序列设计出六对分别针对A-F基因型的特异引物。利用这六对引物建立HBV的多重PCR分型法。结果多重PCR与以前用PCR-限制温度长度多态型分析法的分型结果一致。对广州周边地区HBV携带者的初步分型结果显示,主要为B型和C型,分别占45.00%和38.75%,另外还有16.25%的D型。结论用多重PCR分型法准确易行,灵敏性高,便于推广应用。     

两步多重PCR技术快速检测杜氏肌营养不良基因缺失

杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是男性最常见的X连锁致死性遗传病之一,临床上较轻型的BMD(Becker muscular dystrophy)是其等位基因型。DMD和BMD的发病率分别为30/10万和3/10万。三分之一的新生男婴患者由新生突变所引起。DMD基因定位于Xp~(23),是已知的最大基因,约有2300kb。由于该基因太大,用传统的限制性内切酶片段长度多态性(RFLPs)进行家系连锁分析,或应用cDNA探针进行Southern印迹杂交检测基因缺失均较繁琐费时,在临床上不易推广。PCR技术自1985年问世以来,已广泛应用于遗传病的基因诊断。Chamberlain等在DMD基因的两个缺失热点内,以9个易缺失外显子的旁侧顺序为引物进行多重PCR扩增,快速检测出DMD基因的绝大部分缺失型。本实验参照其多重PCR合成9对引物,并选用缺失率较高的5对引物和另外4对引物进行两步多重PCR,对中国人群中的DMD患者进行筛查,获得满意结果。     

PCR—SSP快速HLA—DR基因分型法的建立及临床初步应用

采用序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对２２份国际标准细胞株ＤＮＡ及２３例临床血标本ＤＮＡ进行了ＨＬＡ－ＤＲ基因分型，扩增条件为９４℃，３０ｓ，５８℃３０ｓ共３０个循环，对各个标准ＤＮＡ的分型结果显示，符合率为１００％，无假阳性及假阴性，提示本方法快速，准确，适合于临床应用。     

谷胱苷肽转硫酶GSTM1、GSTT1和GSTP1基因多态性与江苏人群直肠癌易感性的关系

目的:探讨谷胱苷肽转硫酶M1、T1、P1(GSTM1、GSTT1和GSTP1)基因多态性和吸烟饮酒习惯与直肠癌易感性的关系.方法:以直肠癌患者210例,人群对照439例为研究对象,调查研究对象的生活习惯,以多重PCR技术检测GSTM1和GSTT1基因缺失,PCR-RFLP技术检测GSTP1基因单核苷酸多态(第105密码子A→G).结果:GSTM1和GSTT1基因缺失频率在病例组和对照组差异无显著性;GSTP1 A/A、A/G和G/G基因型频率分布在病例组和对照组差异无显著性;与GSTP1 A/A基因型携带者相比,G/G基因型者发生直肠癌的危险性无显著升高,调整OR值为1.11(95%CI:0.77～1.60).结论:GSTM1、GSTT1和GSTP1基因多态性与直肠癌易感性无关.     

产肠毒素霍乱弧菌的快速鉴定及基因分型

目的：为适应临床诊断和食品检测的需要,探讨快速检测霍乱弧菌及其分型的方法。方法：用聚合酶链反应（PCR）检测霍乱弧菌肠毒素（CTX）A2-B亚单位靶序列基因,结合随机扩增多态性DNA（PAPD）,对霍乱弧菌进行基因分型。结果：检测的3株O139群霍乱弧菌、3株E1 Tor生物型和4株古典生物型均含有(CTX）A2-B亚单位基因,核苷酸序列分析证实其同源(97.1%～98.9%）。RAPD中用普通引物将不同弧菌分成2种基因谱;即①O139群和El Tor型;②古典型。用重复序列引物进一步将霍乱弧菌分成3型,即①O139群;②El Tor型;③古典型。重复实验结果稳定。结论：用PCR结合PAPD检测霍乱弧菌并对其进行分型,操作简便、快速、敏感而且准确,对临床诊断、食品检测和流行病学调查具有一定的实用性。     

谷胱甘肽S转移酶系基因多态性与非小细胞肺癌患者生存率的关系

目的　研究谷胱甘肽S转移酶系 (GSTs)基因多态性对非小细胞肺癌生存率的影响。方法　检测 5 70名非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞DNA上GSTs基因多态性。以回顾性队列研究的方法获得不同GSTs基因多态性对象肺癌治疗的生存结果 ,并用Kaplan Meier法和Cox回归分析探讨GSTs基因多态性对肺癌患者预后的影响。结果　接受化疗的肺癌患者GSTT1空白型基因与死亡的RR为 1.73,GSTT1和GSTM1均呈空白型基因的肺癌患者死亡的RR为 1.77,其中接受化疗的肺癌患者的RR为 2 .4 7。结论　GSTT1、GSTT1合并GSTM 1空白型基因与肺癌化疗后较低的生存率有关     

定量PCR检测缺失型DMD/BMD携带者的研究

研究DMD/BMD携带者临床诊断的有效手段。方法 :运用双重定量PCR及剂量系数分析 ,检测 2 6例正常对照 ,7例肯定携带者和 2 1例可疑携带者 ,部分结果与短片段重复顺序多态性方法及CK值作了比较。结果 :确定了判定参考标准 ,可疑携带者中 ,患儿母亲检测阳性率为 5 7.9% ,8例经短串联重复顺序多态性分析 ,得到了完全验证。结论 :定量PCR检测DMD/BMD携带者快速、敏感、准确 ,可在临床诊断中应用。     

用两种PCR方法对HIV-1测定的敏感度对比分析

目的:探讨用Roche公司生产的Combas Amplicor HIV-1病毒载量检测试剂与巢式RT-PCR法检测HIV-1这两种检测方法之间的相关性。方法:将81份HIV-1阳性患者血浆样本首先用Combas Amplicor病毒载量检测试剂盒检测出病毒拷贝数/ml,根据病毒拷贝数对数/ml的多少分为5组。再用巢式RT-PCR法对以上样本进行重复测定,观察以上2种检测方法的相关性。结果:用巢式RT-PCR法对用Combas Ampli-cor病毒载量检测的病毒拷贝数/ml分为2.000~2.999组;3.000~3.999组;4.000~4.999组;5.000~5.999组和>6.000组病毒拷贝数/ml的检测阳性率分别为87.5%(7/8),93.75%(30/32),95.83%(23/24),100%(14/14)和100%(3/3)。结果表明,随着病毒拷贝数/ml的增高巢式法检测的阳性率也相应增高。结论:巢式RT-PCR由于具有操作简单,价格便宜等优点可作为AIDS的初步筛查,指导抗AIDS药物治疗等使用,对于基层而言是一种简便易行的方法。     

多重聚合酶链反应检测食品中致病性小肠结肠炎耶尔森菌和伤寒沙门氏菌

[目的 ]快速准确地检测致病性小肠结肠炎耶尔森菌和伤寒沙门氏菌 .[方法 ]根据小肠结肠炎耶尔森菌的ail基因和ST的H1 d基因顺序设计二对引物 ,通过聚合酶链反应检测食品中的小肠结肠炎耶尔森菌和伤寒沙门氏菌 ,扩增产物经电泳 ,分别出现与已知阳性对照细菌条带大小一致的 170和 4 5 8bp的ail和H1 d基因片断的条带时即判定该样品为阳性 .[结果和结论 ]本法特异性强、灵敏度高 ,能在60h内出结果 ,适用于食品中小肠结肠炎耶尔森菌和伤寒沙门氏菌的快速检验 .     

多重PCR技术检测病毒性肝炎相关病毒的研究

目的建立一种快速、特异的可同时检测血中多种病毒性肝炎相关病毒的多重PCR方法。方法参照各病毒特异性核酸序列,按多重PCR引物设计的特殊要求设计引物,以核酸测序确证扩增产物,用标准病毒株及临床阳性血清样本DNA、RNA为模板优化PCR反应体系和反应条件,建立病毒性肝炎相关病毒多重PCR检测方法。应用建立的多重检测方法对120例ALT升高的血清标本进行多重检测,并将检测结果与单一PCR检测结果进行比较。结果采用多重PCR技术可同时对EBV、TTV、HBV、HSV 4种DNA病毒进行扩增;采用多重RT-PCR技术可同时对Cox-V、HEV、HCV 3种RNA病毒进行扩增。各病原体单一及多重扩增条带均清晰、均一,无非特异性扩增条带,片段长度与理论值一致;核酸测序证实各扩增产物属各病原体特异性基因片段。临床标本检测多重感染率为19.2%,与单一检测结果一致。结论建立的多重PCR检测方法稳定可靠,敏感度、特异度好,适用于病毒性肝炎相关病毒的实验室诊断与临床筛查。     

重复序列PCR与多位点分型技术在白假丝酵母菌基因分型中的比较

目的应用多位点序列分型技术（MLST）和重复序列聚合酶链反应（REP—PCR）对临床分离出的白假丝酵母菌进行分型,并对两种方法作出应用评价。方弦收集上海地区医院中真菌性阴道炎分离出的40株白假丝酵母菌,选择合适引物进行扩增,通过电泳比较分析获得REP—PCR分型。选择7对管家基因进行PCR反应并测序,将测序结果与标准序列进行比对,获得由7对管家基因组成的等位基因谱,最终得到相应的序列分型。结果REP-PCR中Ca22-Ca22引物对得到电泳条带最优,40株白假丝酵母菌共分成7种REP—PCR型;MLST分型得出29种,且均为新型。结论MLST分辨率较REP—PCR高,但由于REP—PCR分型方法更为快捷、经济,更适用于实验室大量菌株分型和临床分型。MLST则更客观,更适合用于进化学的研究及全球性流行病学的调查研究。