炎症微环境下芦丁对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 研究芦丁（rutin）对炎症微环境下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法 采用有限稀释法分离纯化获得牙周膜干细胞,采用流式细胞术鉴定牙周膜干细胞。以脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激牙周膜干细胞,建立体外炎症模型。实验分为4组,第1组使用α-MEM培养基培养牙周膜干细胞,第2组使用含有脂多糖的α-MEM培养基培养牙周膜干细胞,第3组在含有脂多糖的α-MEM培养基加入芦丁培养牙周膜干细胞,第4组使用含有芦丁的α-MEM培养基培养牙周膜干细胞。通过碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性测试、茜素红染色、RT-PCR以及蛋白免疫印迹等方法检测成骨分化能力的改变。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计分析。结果 CCK-8和碱性磷酸酶活性测试结果显示,10 μmol/L芦丁对炎症状态下牙周干细胞增殖和成骨分化作用最明显。碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果显示,10 μmol/L芦丁可以改善炎症微环境下牙周膜干细胞的成骨分化能力。RT-PCR、蛋白免疫印迹结果显示,芦丁可以增强炎症状态下COL1、ALP、RUNX2等成骨基因和成骨蛋白的表达。结论 芦丁可以增强炎症微环境下牙周膜干细胞的成骨分化能力。     

釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的研究釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响并探究其可能的机制。方法原代培养人牙周膜干细胞,经过流式鉴定后选取第3代细胞进行实验。采用CCK-8试剂盒检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)的釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响;通过Trichrome染色和Von Kosa’s染色检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞胶原合成和矿化结节形成的影响;不同浓度釉基质衍生物和DDK1作用人牙周膜干细胞之后,通过Western blot和qRT-PCR检测β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ及NLK表达情况。结果釉基质衍生物对人牙周膜干细胞的增殖具有明显的促进作用,并呈现剂量和时间依赖性;釉基质衍生物处理人牙周膜干细胞之后,矿化结节形成和胶原合成显著增多,骨钙素、Ⅰ型胶原、RunX2的表达明显增多;另外,釉基质衍生物处理能显著增加β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ和NLK的表达,且该作用可被DDK1抑制。结论釉基质衍生物对体外培养的人牙周膜干细胞有促进增殖和成骨分化的作用,其作用可能是通过Wnt/β-连环蛋白实现的。     

低强度高频振动对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 研究低强度高频振动（low-magnitude high frequency vibration,LMHFV）对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）增殖、迁移、成骨分化能力的影响。方法 体外分离培养hPDLSCs;流式细胞术检测间充质干细胞表面标志物;加载LMHFV（加速度=0.3 g,频率=40 Hz,时间=15 min/24 h）刺激后,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验检测细胞迁移能力;通过qRT-PCR、Western免疫印迹检测成骨相关基因、蛋白表达水平,通过茜素红染色检测细胞成骨分化能力。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果 加载振动刺激后,hPDLSCs的增殖能力增强,迁移能力上升;RUNX2、ALP、Col-1、OCN的mRNA表达量和蛋白表达量均上升,茜素红染色结果与qRT-PCR、Western免疫印迹结果一致。结论 LMHFV可提高hPDLSCs的增殖、迁移能力和成骨分化能力。     

烟碱抑制人牙周膜干细胞成骨能力的研究

目的：研究烟碱对人牙周膜干细胞（periodontalligamentstemcell,PDLSC）成骨能力的影响。方法运用流式细胞仪检测有限稀释法培养的 PDLSC 的表面抗原标志物,采用细胞增殖检测试剂盒检测分别经10－3 mol／L、10－5 mol／L、10－7 mol／L浓度烟碱刺激后PDLSC增殖能力变化。运用碱性磷酸酶定性染色和实时定量PCR检测不同浓度烟碱刺激及烟碱联合拮抗剂α－银环蛇毒素（α-bungarotoxin,α-BTX）刺激后,PDLSC成骨能力的改变。结果经过有限稀释法所得的细胞阳性表达间充质干细胞的标志物,不同浓度的烟碱可抑制PDLSC的增殖及成骨能力,加入拮抗剂α-BTX后,烟碱抑制PDLSC成骨的作用降低。结论烟碱能够抑制PDLSC的成骨能力。     

miR-20a 对人炎症牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的：研究 miR-20a 对人炎症牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法：分离培养人牙周膜干细胞后用 qRT-PCR检测 miR-20a 的表达,并且在瞬时转染 miR-20a mimics 和 inhibitor 后成骨诱导,用茜素红染色,Western Blot 和 PCR 的方法检测成骨能力的改变。结果：人炎症牙周膜干细胞中 miR-20a 表达降低,转染 mimics 后成骨能力升高,转染 inhibitor 后成骨能力降低。结论：miR-20a 可以促进人炎症牙周膜干细胞成骨分化。     

姜黄素通过调控Wnt通路改善牙周膜干细胞成骨分化能力

目的:探讨姜黄素对人牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的影响。方法:取第4~6代的PDLCs进行实验,用CCK-8实验检测姜黄素对PDLCs增殖活性影响,通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节染色以及ALP、OCN和Runx2等成骨相关基因的表达水平来探讨姜黄素对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响,同时检测姜黄素对经典Wnt通路及其配体的影响。结果:姜黄素对PDLSCs的增殖能力无影响。与对照组相比较,姜黄素能增加PDLSCs的ALP活性、上调ALP、OCN和Runx2等成骨相关基因的表达、增加矿化结节数量(P<0.05)。姜黄素能阻断Wnt信号通路,但加入Wnt信号通路激动剂(氯化锂)后,PDLSCs的成骨分化能力显著下降。结论:姜黄素能通过抑制Wnt信号通路,增强牙周膜干细胞成骨分化能力。     

大气压常温等离子体对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探究大气压常温等离子体(atmospheric room temperature plasma, ARTP)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells, hPDLSCs)成骨分化的影响。方法:原代培养人牙周膜细胞,采用免疫磁珠法从中分选出hPDLSCs,通过成骨和成脂诱导培养检测其分化潜能;利用不同时长ARTP处理hPDLSCs,行成骨诱导培养,测定细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,茜素红染色(alizarin red staining, ARS)及半定量分析法观察细胞矿化结节形成状况,RT-qPCR测定细胞成骨相关基因的表达状况,测定细胞内活性氧粒子(reactive oxygen species, ROS)含量变化。结果:采用免疫磁珠法分选出的hPDLSCs呈长梭形、多角形,表现出良好的成骨和成脂分化潜能;ARTP处理时长1 min可提高hPDLSCs的ALP活性,增加细胞内矿化结节形成量;能够提升hPDLSCs成骨相关基因ALP、COL-I、RUNX2的表达水平;ARTP提高了hPDL...     

炎症微环境影响牙周膜干细胞成骨分化的信号通路

牙周膜干细胞(PDLSC)应用于组织工程学是目前治疗牙周炎骨缺失最有前景的方法之一,然而目前体内应用PDLSC再生牙周组织的效果并不理想,这可能是PDLSC所处的炎症微环境影响其命运所致.因此,本文从信号通路方面,探讨炎症微环境对PDLSC成骨分化潜能的影响,为其应用于牙槽骨的再生修复提供理论依据.     

三维条件下高糖对牙周膜干细胞成骨成脂分化潜能的影响

目的:探索三维培养条件下高糖环境对牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨成脂分化潜能的影响.方法:利用明胶材料和谷氨酰胺转移酶构建三维培养条件,通过鬼笔环肽染色观察细胞形态特点;细胞在不同葡萄糖浓度(5.5 mmol/L和25 mmol/L)的培养基中孵育后,通过碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色和实时定量PCR检测细胞成...     

Epigenetic regulation of osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells in periodontitis

Periodontitis is an inflammatory disease characterized by alveolar bone loss. Periodontal ligament stem cells (PDLSCs) have osteogenic differentiation potential, which can be influenced by epigenetics regulation in periodontitis. Therefore, this review aimed to shed light on the role of different epigenetic mechanisms in the osteogenic differentiation of PDLSCs and to consider the prospects of their possible therapeutic applications in periodontitis. Databases MEDLINE (through PubMed) and Web of Science were searched for the current knowledge of epigenetics in osteogenic differentiation of PDLSCs using the keywords “periodontal ligament stem cells”, “epigenetic regulation”, “epigenetics”, “osteogenic differentiation”, and “osteogenesis”. All studies introducing epigenetic regulation and PDLSCs were retrieved. This review shows that epigenetic factors like DNMT, KDM6A, HDACi, some miRNAs, and lncRNAs can induce the osteogenic differentiation of PDLSCs in the noninflammatory microenvironment. However, the osteogenic differentiation of PDLSCs is inhibited in the inflammatory microenvironment through the upregulated DNA methylation of osteogenesis-related genes and specific changes in histone modification and noncoding RNA. Epigenetics of osteogenic differentiation of PDLSCs in inflammation exhibits the contrary effect compared with a noninflammatory environment. The application of epigenetic drugs to regulate the abnormal epigenetic status in periodontitis and focus on alveolar bone regeneration is promising.     

经典Wnt信号通路与牙周膜干细胞成骨分化

牙周炎是口腔最常见的疾病之一,累及牙周支持组织,随着疾病的进展将引起附着丧失、牙周袋形成、牙槽骨吸收,最终导致牙齿松动脱落。因被牙周炎破坏吸收的牙槽骨自愈能力十分有限,所以牙周炎的治疗目标是在彻底清除菌斑生物膜的基础上,争取获得较多的牙周组织再生。牙周膜干细胞作为最适宜进行牙周组织再生的细胞,被广泛研究。Wnt信号通路分为经典Wnt通路和非经典Wnt信号通路,为十分复杂而高度保守的通路传导途径。该通路与牙周膜干细胞成骨分化的关系十分密切,牙周膜干细胞的成骨分化又对牙周组织再生有重要意义。该文对经典Wnt信号通路与牙周膜干细胞成骨分化的研究概况作一综述。     

������Ĥ��ϸ���ɹǷֻ�ǰ��miRNA����ײ������

目的探讨人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）成骨分化过程中miRNA表达谱的变化,以期为揭示PDLSCs成骨分化的分子机制提供基础。方法本研究于2012年1—12月在同济大学口腔医学院口腔生物医学及转化医学实验室、复旦大学公共实验平台完成。原代培养人PDLSCs,经流式细胞仪检测鉴定其干细胞特性（表达干细胞表面标志物STRO-1）;体外诱导其往成骨方向分化,经茜素红S及碱性磷酸酶显色试剂盒染色检测其成骨特性。再采用表达谱基因芯片,分析成骨诱导前后PDLSCs的miRNA表达,筛选出分化前后差异表达的miRNA。结果与未经成骨诱导的细胞相比,PDLSCs在成骨分化14d后,有11个miRNA的表达上调,13个miRNA的表达下调。结论PDLSCs具有成骨潜能,其成骨分化的机制可能与miRNA表达的改变有关。     

乏氧微环境下机械应力对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

人牙周膜干细胞是牙周组织中具有自我更新和多向分化潜能的一类成体干细胞,在特定诱导条件下可以成骨分化。牙周膜处于一个相对乏氧的环境,人牙周膜干细胞在牙周膜中承载着多种机械应力。探讨乏氧环境下机械应力对人牙周膜干细胞成骨分化的影响更接近于体内环境,更有助于获得真实的牙周组织改建的实验室资料。该文对乏氧微环境下机械应力对人牙周膜干细胞成骨分化的影响做一系统性回顾。     

糖基化终末产物对人牙周膜干细胞骨向分化能力影响的研究

目的:探讨糖基化终末产物(AGEs-HSA)对人牙周膜干细胞(HPDLSC)骨向分化能力的影响。方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,流式细胞仪检测牙周膜细胞表型分子CD44、CD146、stor-1、CD90,对其进行干细胞鉴定,将培养出的牙周膜干细胞与不同浓度的AGE-HSA共同培养,并矿化诱导后茜素红染色观察钙结节形成情况、碱性磷酸酶染色观察ALP活性、实时定量聚合酶链反应(real timePCR)检测成骨基因表达情况。结果:流式细胞仪细胞表型分析CD44、CD146、stor-1、CD90表达呈阳性。成骨诱导21 d后茜素红染色,对照组和实验组均出现不同程度的矿化结节,定量分析显示1、10、100、200μg/mLAGEs组矿化能力均比对照组低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度的实验组之间矿化能力均有统计学差异(P<0.05),且随着AGEs浓度的升高,矿化能力逐渐降低。成骨诱导7 d ALP染色比较发现各实验组均比对照组减弱。成骨诱导1周后RT-PCR检测各实验组的成骨基因ALP、Runx-2、Col-1、Runx-2 mRNA表达水平均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度的实验组之间各成骨基因的表达也有统计学差异(P<0.05)。结论:AGEs能抑制HPDLSC的骨向分化,并在一定范围内呈浓度依赖性。     

非编码RNA调控人牙周膜干细胞成骨向分化的研究进展

牙周炎是一种常见的炎症性疾病,以牙齿支持结构的进行性损伤为特点,是我国成人牙齿丧失的主要原因。治疗牙周炎的目的不仅是通过控制炎症来阻止疾病发展,更重要的是获得牙周再生。人牙周膜干细胞具有成骨向分化潜能,有望在牙周组织修复再生的临床应用上发挥重要作用。非编码RNA(ncRNA)一般是指不编码蛋白质的RNA。伴随高通量检测技术的不断发展,发现了大量的种类丰富的ncRNA,其生物学功能也被不断揭示。越来越多证据显示,ncRNA在分子机制及细胞组织层面对疾病的发生、发展起重要调控作用,因此探索ncRNA调控机制可为牙周再生的研究提供新思路。本综述主要阐述了目前研究较多的几种ncRNA在人牙周膜干细胞成骨向分化中的调控机制。     

Up-regulation of estrogen receptor-beta expression during osteogenic differentiation of human periodontal ligament cells

Background and Objective: Estrogen has been shown to up‐regulate the expression of osteoblastic phenotypes of human periodontal ligament cells via binding to estrogen receptors and may also help periodontal tissue regeneration. However, which subtype of estrogen receptor (α or β) is predominately expressed in human periodontal ligament cells, and how estrogen receptor expression is regulated during the osteogenic differentiation of human periodontal ligament cells, is still unclear. This study aimed to explore the expression and regulation of estrogen receptor subtypes in human periodontal ligament cells and during their osteogenic differentiation. Material and Methods: Human periodontal ligament cells derived from 10 individual age‐matched donors (five male and five female donors) were cultured. Human periodontal ligament cells under osteogenic induction (group M) and the corresponding controls (group C) were harvested on days 7, 14 and 21 for estrogen receptor detection. Results: Both estrogen receptor‐α and estrogen receptor‐β mRNAs were expressed in human periodontal ligament cells from all of the 10 donors. Protein only of estrogen receptor‐β (not of estrogen receptor‐α) was detected and was shown to be located in the nuclei of human periodontal ligament cells. The expression levels of estrogen receptor‐β mRNA and protein from both male and female donors in group M were significantly higher compared with group C during the 21‐d study period. In comparison, the expression level of estrogen receptor‐α mRNA of the donors was not significantly different from that of the controls during osteogenic differentiation and no estrogen receptor‐α protein was detected. Conclusion: The results suggest that estrogen receptor‐β may be the predominant subtype expressed in human periodontal ligament cells and may actively participate in the osteogenic differentiation process of human periodontal ligament cells, both in male and in female subjects.     

组蛋白乙酰化在慢性牙周炎来源牙周膜干细胞成骨分化中的作用

表观遗传是指基因序列不发生改变的前提下,基因表达却发生改变,且这种改变能够遗传至后代。其中,组蛋白乙酰化属于表观遗传范畴中重要的一种类型。现有的研究表明慢性牙周炎的发生与表观遗传修饰具有一定的关系。结合已有研究,本文对组蛋白乙酰化在慢性牙周炎来源牙周膜干细胞成骨分化中的作用作一综述。