脱细胞异体神经材料复合雪旺细胞的体外三维构建的活性研究

目的探讨雪旺细胞在AECM支架材料上体外三维培养的生长活性。方法将培养的雪旺细胞悬液接种在支架材料上,用MTT法、倒置相差显微镜、流式细胞仪、扫描电镜、RT-PCR、测定雪旺细胞的活性。结果AECM上的雪旺细胞各项指标与正常培养的雪旺细胞活性比较,差异无显著意义(P>0.05),实验组雪旺细胞DNA无损伤,且能合成分泌GDNF。结论AECM适于构建具有雪旺细胞活性的组织工程化人工神经。     

许旺细胞在人工神经支架材料上三维培养的体外活性研究

目的　探讨许旺细胞在组织工程支架材料上体外三维培养的生长活性。　方法　对聚羟基乙酸和聚乳酸的共聚物细丝支架进行生物学修饰 ,把原代培养的许旺细胞悬液接种在支架材料上 ,用MTT法、单细胞凝胶电泳法及显微分光光度和显微图像联合法测定许旺细胞的生长活性。　结果　聚羟基乙酸和聚乳酸的共聚物细丝支架上的许旺细胞各项活性指标与正常培养的许旺细胞比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,实验组许旺细胞DNA无损伤。　结论　聚羟基乙酸和聚乳酸的共聚物细丝适于构建具有许旺细胞活性的组织工程化人工神经。     

雪旺细胞在大鼠脱细胞异体神经基膜管中迁移的研究

目的研究大鼠自体雪旺细胞在脱细胞异体神经基膜管中的迁移情况。方法取SD大鼠坐骨神经20mm,用化学萃取法制备脱细胞神经,行大体观察、HE、抗层黏蛋白（Anti-laminin）染色。另取32只雌性SD大鼠,体重250～300g,切取自体坐骨神经2mm,置于分别长10mm的两段大鼠异体脱细胞坐骨神经基膜管之间,形成22mm长的基膜管-自体神经嵌合体,与同样长度的单纯脱细胞神经基膜管埋入肌间隙中,于5、10、15和20d取材,行HE、S-100免疫组织化学染色。结果制备的脱细胞神经基膜管外观呈半透明;HE染色示基膜管内未见细胞核存在,基膜管部分不连续;Anti-laminin染色示基膜管深褐色。基膜管-自体神经嵌合体于术后各时间点HE染色均可见细胞存在,第15天开始可见S-100阳性雪旺细胞;单纯神经基膜管在各时间点HE染色中均可见细胞存在,未见S-100阳性雪旺细胞。结论大鼠坐骨神经的自体雪旺细胞可迁移至两侧异体脱细胞神经基膜管远端,为嵌合自体神经的异体脱细胞神经基膜管修复长段周围神经缺损提供了理论依据。     

成年鼠坐骨神经雪旺细胞体外培养的实验研究

目的探讨从成年鼠坐骨神经分离培养获得大量雪旺细胞的有效手段。方法取SD大鼠双侧预变性的坐骨神经．预变性后，剪碎至1mm^3。大小的组织块，单酶消化法进行分离培养，GenetiCin液抑制成纤维细胞生长，低浓度酶快速消化传代进一步纯化雪旺细胞，通过相差显微镜活细胞计数和S-100细胞化学标记相结合鉴定了雪旺细胞增值和纯化程度。结果通过上述方法分离培养获得了经S-100蛋白鉴定纯度为85％的第三代雪旺细胞，细胞数量为2．764×10^7／ml，细胞形态多数为梭形。结论本方法可从大鼠预变性的坐骨神经获得形态与活力良好的雪旺细胞。     

雪旺细胞和生物蛋白胶构建组织工程神经的初步研究

目的研究雪旺细胞-生物蛋白胶复合物构建组织工程神经,修复周围神经缺损的效果。方法取4周龄新西兰兔瓦勒变性坐骨神经,采用组织块反复种植培养法培养雪旺细胞,分离纯化,并用S-100蛋白免疫组织化学染色鉴定。收集已纯化的雪旺细胞,配制成1×10^6/ml的细胞悬液,加入生物蛋白胶制成雪旺细胞-生物蛋白胶复合物,倒置相差显微镜观察雪旺细胞生长情况。将雪旺细胞-生物蛋白胶复合物填充于硅胶管（A组）和生物膜（B组）内,构建组织工程神经,分别移植桥接修复2月龄新西兰大白兔左侧10mm胫神经缺损（n=8）;C组（n=8）作自体神经移植。术后10周,行实验动物大体观察、神经电生理检测、移植体大体解剖和组织学观察。结果所有动物均存活至实验完成。术后3～4周A组所有动物左侧足底均出现溃疡,B、C组小部分动物出现足底溃疡。10周,神经电生理检测发现A组所有神经移植体未能传导电刺激;B、C组所有移植体均能传导电刺激引起腓肠肌的动作电位,两组动作电位振幅和神经传导速度分别为4.21±0.82mV、33.40±5.40m/s和4.80±1.15mV、36.55±6.43m/s,差异均无统计学意义（P〉0.05）。A组所有神经移植体内未见神经纤维长入,两端均有神经瘤形成;B、C组无明显神经瘤形成,B组整段神经移植体内有神经纤维长入。组织学观察示B、C组再生神经的新生轴突形态无明显区别,均接近正常神经组织。结论用生物膜包裹雪旺细胞-生物蛋白胶复合物,构建组织工程神经,能够促进神经再生,其修复效果接近于自体神经移植,具有临床应用前景。     

雪旺细胞源神经营养因子的神经营养活性及其抗NO神经毒性 …

目的：研究雪旺细胞源神经营养因子对脊髓前角神经元的神经营养活性及对抗一氧化氮（ＮＯ）神经细胞毒性的作用。方法：分４组进行神经元培养：（１）营养因子组：加入不同浓度的雪旺细胞源神经营养因子；（２）ＮＯ组，加入ＮＯ体外供体硝普钠；（３）营养因子＋ＮＯ组；同时加入雪旺细胞源神经营养因子和硝普钠；（４）对照组：加Ｄ－Ｈａｎｋ，培养２天后，ＭＴＴ法观察各组细胞情况。结果：营养因子组ＯＤ值均明显高于对照组；Ｎ     

雪旺细胞种于医用组织引导再生胶原膜构建自体人工神经的实验研究

目的;设计并构建一种新型的神经引导导管。方法：将兔雪旺细胞种到用成粘蛋白多孔医用组织引导的再生胶原膜支架培养2周后,用倒置显微镜、扫描电镜观察雪旺细胞吸附、生长迁移情况;以雪旺细胞胶原膜管的形式植入体内,观察它诱导神经再生的能力。结果：成年兔雪旺细胞在医用组织引导再生胶原膜上生长良好,并均匀分布于支架表面,且基质分泌旺盛。体内模型发现神经已通过移植物长入远端,胶原膜已吸收。结论：雪旺细胞可以在多聚医用组织引导再生胶原膜上得到扩增,种有雪旺细胞的医用组织引导再生胶原膜导管可以形成一个诱导神经轴突再生的微环境,形成的三维立体结构具有人工神经的基本特性,为组织工程方法修复长段神经缺损提供了研究基础。     

雪旺细胞源神经营养蛋白的纯化及其体外生物活性的研究

目的：纯化和研究源于雪旺细胞质的运动神经营养因子。方法：２００条预损伤２周后的ＳＤ大白鼠坐骨神经，用酶消化结合差速粘附法纯化并收集其中的雪旺细胞；超声粉碎雪旺氏细胞，离心，收集上清液再经起滤，过高效液相分子柱，雪旺细胞上清液蛋白分为分子量分别为小于１０ＫＤ，２６ＫＤ，５０ＫＤ，７５ＫＤ，及大于２００ＫＤ五个组分，分别和胎鼠脊髓运动神经元联合培养２４小时，用ＭＴＴ法测定神经元活性。结果：２６ＫＤ，５０ＫＤ，和７５ＫＤ蛋白组分对脊髓运动神经元有维持成活的营养作用，结论：雪旺细胞可合成和分泌三种运动神经营养蛋白，分子量分别为２６ＫＤ，５０ＫＤ和７５ＫＤ。     

雪旺细胞和聚乳酸材料的体外相容性研究

目的：研究雪旺细胞在聚乳酸材料上的生长情况。方法：取新生SD大鼠坐骨神经及臂丛神经的雪旺细胞接种于聚乳酸膜片上,培养1、3、5、7、14d倒置显微镜、扫描电镜观察细胞与聚乳酸形态。结果：雪旺细胞能在聚乳酸膜片上存活、生长,随时间的延长,雪旺细胞逐渐向聚乳酸膜片的孔隙中生长。结论：雪旺细胞与聚乳酸组织相容性良好,可进一步用于周围神经组织工程研究中。     

脱细胞同种异体神经移植的进展

自1870年Philipeaux和Vulpain首次利用游离神经移植术修复舌下神经缺损以来,自体神经移植被认为是周围神经缺损修复的金标准,但自体神经材料存在来源有限,取材将给病人带来新的创伤．取材后可有供区麻木、瘢痕、神经瘤等并发症。异体神经移植及组织工程人工神经导管技术被认为是修复神经缺损新的发展方向,而单纯的异体神经移植也存在着受体免疫排异的问题。[第一段]     

Safe injection of cultured schwann cells into peripheral nerve allografts

The effects of cultured host Schwann cells on axonal regeneration in peripheral nerve allografts were studied. Fischer rats served as recipient animals and Buffalo rats provided nerve allografts. Animals were randomized into 9 groups. Rats receiving tibial nerve isografts were left untreated (group I), or injected with isogeneic Fischer Schwann cells (group II) or placebo suspension (group III). Allografts obtained from Buffalo rats were left untreated (group IV), or received isogeneic Fischer Schwann cells (group V), 2 mg/kg Cyclosporin A and Fischer Schwann cells (group VI), 5 mg/kg Cyclosporin A (group VII), or 5 mg/kg Cyclosporin A with Schwann cells (group VIII). No Schwann cell tumors were identified 4 or 8 weeks postoperatively. Group IX animals, harvested 3 days postoperatively, demonstrated no evidence of injection injury. Schwann cells modestly improved axonal regeneration in both isografts and allografts and may have a clinical role in the treatment of peripheral nerve allografts.     

微囊化人嗜铬细胞体外培养的研究

目的观察体外培养人嗜铬细胞(HCC)和微囊化人嗜铬细胞(ME-HCC)的儿茶酚胺(CA)及甲-脑啡肽(M-ENK)的释放功能,了解微囊技术对ME-HCC形态和活性的影响.方法取6例ABO同型健康成人脑死亡的双侧肾上腺进行HCC原代培养,对HCC进行HE染色并行免疫细胞化学检查,计数酪氨酸羟化酶阳性细胞;用2%海藻酸钠经微囊技术包裹HCC并进行培养,在光镜下观察;每48h更换和收集HCC和ME-HCC培养液,-20℃保存;采用放射免疫测定技术检测培养液及烟碱刺激试验后培养液中CA和M-ENK水平.结果(1)ME-HCC形态圆整,体外培养生长良好,与HCC相似;(2)HCC和ME-HCC培养液中CA及M-ENK水平无显著性差异(P＞0.05);(3)低水平烟碱刺激能提高培养液中HCC和ME-HCC释放CA及M-ENK量,且二者CA及M-ENK增加量无显著性差异(P＞0.05).结论本包膜材料和制囊技术对HCC无损伤,ME-HCC体外培养的活性和释放功能良好,适合移植.     

三磷酸腺苷对体外培养大鼠雪旺细胞的作用

目的观察三磷酸腺苷（ATP）对体外培养的大鼠雪旺细胞的影响，探讨ATP促进周围神经再生的作用机制。方法用SD乳鼠坐骨神经双酶消化后的剩余组织块培养雪旺细胞，G-418纯化后培养24h，分成5组继续培养10d：ATP组（按不同浓度分4组）和正常组。相差显微镜下观察计数，绘制各自的增殖曲线。在24和72h对各组细胞进行流式细胞分析。结果0．1mmol ATP组雪旺细胞的增殖不明显；1、10mmol组24h和72h后处于S期的雪旺细胞明显增多；100mmol组雪旺细胞数则明显减少；1、10、100mmol组和对照组的倍增时间分别为6．4、5．6、10．2、8．0d，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论ATP能显著地促进雪旺细胞的增殖从而促进外周神经再生，但其作用具有浓度依赖性，高浓度ATP反而抑制雪旺细胞的增殖。     

大鼠骨髓基质细胞体外培养诱导成骨能力的研究

目的：观察大鼠骨髓基质细胞在体外培养生长时的生物学特性，及诱导分化为成骨细胞的能力。方法：取成年大鼠2只，处死后分离、培养骨髓基质细胞，第8天时添加矿化液诱导培养，细胞经传代后绘制生长曲线。应用倒置相差显微镜、透射电镜观察其生长特性，并进行甲苯胺蓝染色，Won Kossa染色，碱性磷酸酶染色。结果：培养的大鼠骨髓基质细胞呈成纤维细胞样生长，增殖活跃。经诱导后，细胞碱性磷酸酶活性高，连续培养30天，Von-KaSSR染色显示有局灶状钙盐沉积。结论：MSCs易于分离培养，体外扩增速度快，在矿化条件下，骨髓基质细胞在体外即具有很强的成骨能力，为研究其作为骨组织工程种子细胞植入体内成骨奠定基础。     

Migration of schwann cells in peripheral-nerve regeneration

Schwann cells play a central role in peripheral-nerve regeneration, in which it has been shown that the addition of exogenous Schwann cells enhances the temporal and spatial sequence of events observed in regeneration. In this study, the authors investigated the fate of exogenous cells in this process by using fluorescently tagged autogenous Schwann cells in an established rat model of peripheral-nerve regeneration. Tracking labeled cells over a 4-week period revealed early migration of Schwann cells into the proximal nerve segment, followed by a concentration of migrating Schwann cells, leading the proximal growth cone throughout the regenerative process. The early proximal distribution of labeled cells suggests active migration in response to nerve damage, with spatial localization at the center of the proximal nerve segment and not the epineural surface. These observations demonstrate an interaction of exogenous Schwann cells with intact nerve tissue in vivo and affirm their role in the directional growth of regenerating axons.     

生物陶瓷对体外培养大鼠成骨细胞的影响

生物陶瓷是近20年来研究的热点之一,作为无机生物医学材料,其良好的生物相容性,在医学领域广阔的应用前景,越来越受到学者们的重视。而大鼠成骨细胞的体外复合培养,常被应用于评估材料与成骨细胞间的相互作用,特别是材料对细胞增殖、功能、黏附的影响,其结果往往成为材料体内植入实验的基地。随着相关文献的增多,结合近年来有关文献就生物陶瓷对大鼠成骨细胞增殖、功能、黏附的影响作一回顾和分析。     

骨髓间充质干细胞向雪旺细胞分化的体内外实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞在体内、外条件下向周围神经雪旺细胞分化的可行性。方法利用SD大鼠间充质干细胞(取自股骨和胫骨)贴壁生长的特性，培养纯化，传代扩增。用复合诱导因子(Beta-mercaptoethanol，retinoic acid，forskolin，basic—FGF，PDGF，heregulin-β)在体外诱导间充质干细胞分化。用免疫细胞化学(P75，S-100，GFAP)鉴定体外的诱导结果。将PKH67标记的间充质干细胞移植人损伤的周围神经动物模型内，术后2周行组织切片免疫荧光染色，激光共聚焦定位移植细胞的去向。结果诱导后的间充质干细胞形态类似雪旺细胞，免疫荧光鉴定骨髓间充质干细胞具有雪旺细胞性质，表达雪旺细胞的表面标志(GFAP，S-100和P75)。周围神经组织切片免疫荧光染色后共聚焦定位的间充质干细胞表达雪旺细胞的表面标志(GFAP，S-100和P75)。结论骨髓间充质干细胞在体内、外都可以分化为具有雪旺细胞性质的细胞，表达GFAP，S-100和P75。骨髓间充质干细胞有可能替代雪旺细胞促进周围神经的再生。     

Study of in vivo differentiation of rat bone marrow stromal cells into schwann cell-like cells

In order to raise an abundant and accessible reservoir for Schwann cells (SCs), which are used as seed cells for constructing tissue-engineered nerve grafts, we investigated the feasibilty of in vivo differentiation of bone marrow stromal cells (MSCs) into SC-like cells. In this study, MSCs were harvested from adult rats' bone marrow, culture-expanded, and characterized. Subcultured MSCs were then labeled with Hoechst 33342, followed by transplantation into the nerve regeneration chamber, which was made of a silicone tube bridging the sciatic nerve defect of the rats. Four weeks after surgery, some of the differentiated MSCs turned into SC-like cells immunopositive to S-100 protein, accompanied by myelination of the regenerated nerve fibers. Walking-track analyses provided evidence that transplantation of MSCs contributed to reconstruction of the sciatic nerve and reinnervation of target tissues. The experimental results suggest that MSCs are capable of differentiating into SC-like cells in vivo, making them a promising candidate for cell transplantation in peripheral nerve repair.