外排机制在多重耐药肺炎链球菌耐药中的实验研究

目的探讨我院2005年1月至2007年12月临床分离的多重耐药肺炎链球菌（MDR-SP）的耐药情况及外排机制在部分药物中作用,为我院耐药性监测和临床用药提供依据。方法采用常规方法进行细菌的分离及鉴定;运用VITEK-2全自动细菌分析仪进行细菌的鉴定及药敏分析;M-H琼脂稀释法测定含或不含利血平的青霉素、四环素、红霉素、复方新诺明、氯霉素和加替沙星对MDR-SP的MIC值。结果MDR-SP耐药性较为严重,临床共分离出的178株肺炎链球菌中,MDR-SP为61株;除开青霉素外,外排作用参与了四环素、红霉素、复方新诺明、氯霉素和加替沙星的耐药。结论我院MDR-SP产生率较高（34．3％）,耐药性较为严重;外排作用在耐药中的作用不能忽视。     

转座子Tn917在短小芽孢杆菌中的转座作用

Transposition Tn917 was introduced into Bacillus pumilus 289 by protoplast transformation with plasmid pTV32. The temperature-sensitive replication property of pTV32 was maintained in B. pumilus. Tn917 was transposed efficiently in B. pumilus with 4.8 x 10(-4) transposition rate. The yield of auxotrophs was about 0.65% in all insertional mutants. It indicated a prospects for the use of Tn917 as a tool for insertional mutagenesis and genetic manipulation in B. pumilus.     

大肠杆菌转座因子在遗传分析中的应用

转座因子是一种不能独立完成自我复制,但是却能在细胞内,由一种复制子移动到另一种复制子的遗传因子。在原核生物中常见的转座因子有:插入顺序、转座子和噬菌体μ。     

肺炎链球菌相关毒力因子及其作用的研究进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)是导致黏膜疾病(如中耳炎、肺炎)和系统性疾病(包括败血症和脑膜炎)等严重疾病的主要病原体之一。肺炎链球菌毒力因子分为荚膜多糖、S.pn相关蛋白、细胞壁及细胞壁多糖三大类,其中荚膜多糖为最主要的毒力因子,也是疫苗中最有效的成分。毒力因子在S.pn入侵机体及引发疾病的过程中起着重要的作用。因此,毒力因子及作用的研究,不仅对预防和治疗肺炎链球菌的感染有着重要的意义,并为研发安全、有效的多糖疫苗提供一定的技术支持。现就肺炎链球菌毒力因子及其作用作一综述。     

葡萄球菌盒式染色体在耐药中的作用

金黄色葡萄球菌可通过获得携带mec基因的葡萄球菌盒式染色体（SCCmec）产生对甲氧西林和其他多种抗生素的耐药.SCCmec是一种不同于噬菌体和转座子的可移动元件.本文详细介绍了SCCmec的结构和分型,并对其发现、起源及其与耐药的关系等进行综述.     

通过替代失活的方法分析核酸片段在肺炎链球菌毒力中的作用

目的鉴定基因spd—ABC、spd-1672、sp-1673和长间隔序列spd—J在肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,S．pn）毒力中的作用。方法采用长臂同源聚合酶链反应（LFH—PCR）的方法分别构建这4个序列的红霉素抗性基因（erm）替代缺失突变体,通过PCR和测序鉴定是否构建成功;通过绘制生长曲线观察基因对细菌生长繁殖的影响,通过小鼠毒力实验观察基因对细菌致病性的影响。结果所构建缺陷菌目的基因由eFm基因完全替代;spd—ABC、spd-1673和长间隔序列spd—J3个片段缺陷菌的生长趋势与野生菌没有明显差异,生长大约5hA值均可达到峰值,而spd-1672缺陷菌出现明显的延迟现象,生长8h后其4值才达到最高值;野生菌与缺失spd—ABC、spd-1673和长间隔序列spd—J的缺陷菌感染小鼠各组半数死亡时间分别为19、22、24和24h,差异无统计学意义,而spd-1672缺陷菌感染小鼠的半数死亡时间在75h左右,显著长于野生菌感染小鼠组（P〈0．05）。结论在构建的4个单个基因缺失突变体中,spd-1672缺陷后．S．pn生长明显延迟,毒力显著下降,提示spd-1672是s-Pn的一个新的毒力因子。     

辅调节因子在核受体调节基因表达中的作用

核受体调节基因表达的过程中,有众多辅调节因子的参与,并扮演相当重要的角色,辅调节因子可分为辅激活因子和辅阻遏因子,它们以复合物形式与核受体结合,并可能通过以下机制作用,通过组蛋白乙酰或去乙酰化,令局部环境利于或是阻碍转录,或都可能对染色质进行重塑,以利于基因表达,同时,辅调节因子复合物还受到信号通路调节和翻译后修饰,以便特异性调节其靶基因。     

亚抑菌浓度头孢西丁对耐药质粒接合转移的影响

目的探讨亚抑菌浓度头孢西丁对耐药质粒接合转移的影响,研究病原菌耐药性播散的产生机制。方法采用聚合酶链反应（PCR）分析临床分离的63株产ESBLs肺炎克雷伯菌株SHV型β-内酰胺酶编码基因。质粒接合转移试验采用肉汤接合法。研究不同亚抑菌浓度头孢西丁（0、1、0.5、0.25、0.125μg/ml）和不同作用时间（2、4、6、8、10、12 h）下临床产ESBLs肺炎克雷伯菌株供体菌与受体菌E.coliC600接合转移频率的变化。结果63株临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌株有41株扩增出SHV型基因,阳性率为65.08%。随着亚抑菌浓度头孢西丁作用时间的增加,接合转移频率有随之增加的趋势。在相同作用时间下,头孢西丁浓度0.125μg/ml作用下的接合转移频率高于其他亚抑菌浓度的作用。结论应合理使用抗菌药物,减少抗菌药物的选择性压力,防止耐药细菌传播。     

肺炎嗜衣原体蛋白酶样活性因子免疫优势区基因 重组蛋白在早期诊断中的应用

[目的]克隆和表达肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)蛋白酶样活性因子(CPAF)免疫优势区基因,评价重组蛋白在早期感染诊断中的应用价值.[方法]挑选并克隆出Cpn CPAF免疫优势区基因,构建原核表达载体,诱导表达并纯化重组蛋白,分析其抗原特异性;间接ELISA法检测Cpn参考血清、临床血清标本中的特异性IgM抗体,以及呼吸道感染患者痰咽拭子中的Cpn抗原;检测沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)临床阳性血清和泌尿生殖道分泌物.[结果]高效表达和纯化出一相对分子量约51.3kDa的重组蛋白;Western blot证明其只与人抗Cpn抗血清发生特异性反应;间接ELISA法检测40份Cpn IgM参考血清,阴性和阳性结果的一致率均为100%(40/40);与"金标准"方法MIF对照,检测300例临床血清标本中的IgM抗体,符合率为98.3%;与PCR试剂对照,检测120份呼吸道感染患者痰咽拭子中的Cpn抗原,符合率为88.3%;检测Ct阳性血清和泌尿生殖道分泌物,与Ct没有交叉反应.[结论]制备的CPAF免疫优势区基因重组蛋白具有良好的抗原性,在Cpn感染早期诊断中具有较高的利用价值.