川芎、黄芪有效成分配伍对缺氧脑微血管内皮细胞的影响

目的观察黄芪、川芎中的有效成分黄芪甲苷、川芎嗪、阿魏酸、毛蕊异黄酮、藁本内酯的正交组合配伍对SD乳鼠脑微血管内皮细胞(rBMVECs)缺氧损伤的保护作用,并找出较优组合。方法 rBMVECs原代传代培养,并建立缺氧模型,4h后观察细胞形态,MTT法测定各成分的最大耐药质量浓度,以L_(18)(3~5)正交表设计安排成分配伍给药,采用黄嘌呤氧化酶显色法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期,RT-PCR法测定caspase-3与caspase-8基因在细胞中的表达。采用极差分析法分析正交试验结果。结果药物正交配伍组合可显著改善缺氧rBMVECs的形态,有效增强SOD活性,有效抑制缺氧诱导的rBMVECs发生Gl/S期阻滞,明显减少了细胞的凋亡,减弱细胞中caspase-3和caspase-8基因表达。正交试验结果分析显示其较优组合为藁本内酯5μg/mL、川芎嗪10μg/mL、阿魏酸20μg/mL、毛蕊异黄酮10μg/mL、黄芪甲苷10μg/mL。结论黄芪、川芎有效成分组合配伍对内皮细胞缺氧损伤有明显的保护作用。     

银杏叶提取物对H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响

目的:探讨银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,EGb761)对过氧化氢(Hydrogen peroxide,H2O2)诱导的胰岛RIN-mβ细胞株凋亡的影响。方法:以500μmol/L H2O2作用于胰岛RIN-mβ细胞6 h建立凋亡模型;分别设空白对照组(Control)、阴性对照组(H2O2)、阳性对照组(槲皮素Que 100μmol/L)、EGb 761单用对照组(EGb 761100μmol/L),EGb 761给药组(EGb 761 10、30、100μg/ml);采用MTT检测细胞存活率,Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞形态变化,PI单染色法和Annexin V-PI双染色法流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果:与空白对照组比较,阴性对照组500μmol/L H2O2作用6 h后,细胞存活率明显降低、细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。与阴性对照组相比,EGb 761显著降低H2O2诱导的细胞凋亡(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论:过氧化氢可诱导胰岛RIN-mβ细胞凋亡,EGb 761对H2O2诱导的RIN-mβ细胞损伤和凋亡具有明显的保护作用。     

木棉花提取物对H_2O_2诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨木棉花提取物对过氧化氢(H_2O_2)所诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECS)氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养HUVECS,采用MTT法检测木棉花提取物对正常HUVECS细胞毒性作用;给予不同浓度木棉花提取物(15,30,60 mg/L)预处理保护HUVECS 24 h后,采用0.5 mmol/L H_2O_2诱导损伤3 h建立氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞增殖活力,ELISA法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)含量和谷胱甘肽-S转移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性;同时检测细胞中丙二醛(MDA)的含量及过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;采用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞内钙离子含量。结果:木棉花提取物对HUVECs细胞无毒性作用;与H_2O_2损伤模型组比较,15、30、60 mg/L剂量组的木棉花提取物能明显提高H_2O_2诱导损伤HUVECs的增殖活力,提高细胞上清液NO含量和SOD、GST活性,降低LDH漏出量;能增强细胞内CAT、GSH-Px的活性,降低MDA水平;同时能减少细胞内ROS表达,下调细胞内钙离子浓度。结论:木棉花提取物对H_2O_2诱导的内皮细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能与通过抑制氧化应激、抗过氧化损伤以及清除细胞内ROS,抑制细胞内钙离子介导的细胞凋亡有关。     

中药对脑微血管内皮细胞影响的研究进展

脑微血管内皮细胞不仅仅具有屏障特性,而且还具有多种分泌功能,因此微血管内皮细胞的损伤与脑血管疾病的发生、发展有着密切的关系,也为研究中药防治脑血管疾病的机制提供了基础。近年来,围绕中药减轻脑血管疾病过程中微血管内皮细胞损伤,展开了很多研究。仅从细胞的屏障特性、细胞氧化损伤、细胞的分泌功能等几个方面综述了中药对体外培养脑微血管内皮细胞影响的研究进展。     

中药对微血管内皮细胞影响研究概况

中药可改善微血管内皮细胞通透性、合成分泌多种细胞因子、抑制细胞凋亡(氧化损伤、损伤保护)、增强细胞活性等,成分复杂,具体有效成分、作用靶点还有待进一步研究,未来期待研究中药对微血管内皮细胞作用机制及剂量与作用时间,可为全面了解中药生物活性、治疗微血管内皮细胞疾病提供新思路。     

葛根素对缺氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞凋亡和功能的影响

目的:研究葛根素对缺氧损伤的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)凋亡和功能的影响及其机制。方法:建立缺氧损伤的rCMEC模型,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT),流式细胞术,酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印记法(Westernblot),观察葛根素对rCMEC分泌组织型纤溶酶原激活物(t-PA),组织纤溶酶原激活物抑制剂(PAI),一氧化氮(NO),内皮素(ET),表达血管内皮生长因子(VEGF)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的影响。结果:葛根素可以减轻缺氧损伤对rCMEC的影响,降低其凋亡率,可降低rCMEC胞内钙离子的浓度,提高VEGF和eNOS的表达,并显著提高t-PA/PAI和NO/ET的比值。结论:葛根素对缺氧损伤的脑微血管内皮细胞有保护作用,其机制可能与促进VEGF的表达,激活VEGF受体介导的下游通道有关。     

麝香酮对氧化应激损伤人血管内皮细胞凋亡的影响

目的:观察麝香酮对过氧化氢(H2O2)诱导人血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的保护效应,并探讨其作用机制。方法:运用H2O2建立血管内皮细胞凋亡模型,继而用低、中、高不同剂量的麝香酮进行干预,并用MTT法检测细胞增殖,Hoechst 33258荧光染色及流式细胞技术检测细胞凋亡,激光共聚焦显微镜测定Ca2+浓度和线粒体膜电位(ΔΨm)的变化。结果:H2O2诱导HUVEC细胞凋亡,中、高剂量的麝香酮对HUVEC细胞增殖均有明显促进作用;H2O2组与正常组相比ΔΨm显著下降,Ca2+浓度明显升高(P<0.01);中、高剂量组与H2O2组相比ΔΨm则显著升高,Ca2+浓度明显降低(P<0.01)。结论:麝香酮可通过稳定线粒体ΔΨm,减轻细胞通透性,减少Ca2+内流,从而抑制H2O2所致的HUVEC细胞凋亡。     

葱白提取物对心梗后心衰大鼠心室重构及细胞凋亡的影响

目的:探讨葱白提取物对心梗后心衰大鼠心室重构及细胞凋亡的影响.方法:参照心衰动物模型建模,将大鼠随机分成假手术组、模型组、对照组、葱白提取物高、中、低剂量组6组各9只,各组以相应剂量药物给药,12周后观察大鼠左心室组织梗死区病理切片,测定血清B型钠尿肽(BNP)含量,检测caspase-3 mRNA表达、Caspase...     

通心络干预的脑微血管内皮细胞条件液对大鼠脑皮层神经元的影响

目的：观察通心络干预的脑微血管内皮细胞条件培养液对大鼠脑皮层神经元氧化应激反应的影响,探讨通心络在脑微血管内皮细胞缺血损伤状态下保护神经元的机制。方法：首先制备4种大鼠脑微血管内皮细胞（BMEC）条件培养液：①正常BMEC条件液（N-CM）;②正常BMEC加通心络药物血清条件液（NT-CM）;③拟缺血损伤BMEC条件液（I-CM）;④损伤BMEC加通心络药物血清条件液（IT-CM）。将它们分别作用于正常和糖氧剥夺损伤（拟缺血）的大鼠皮层神经元后,测定神经元活性、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。结果：①I-CM可使正常神经元的活性和SOD活力下降,MDA含量增加;与I-CM相比,IT-CM可提高神经元活性和SOD活力,降低MDA的含量。②与正常神经元比较,拟缺血神经元活性和SOD活力明显下降,MDA含量增加;I-CM进一步使拟缺血损伤神经元的活力下降;NT-CM和IT-CM在一定程度上可阻抑损伤神经元活性和SOD活力的下降,并降低MDA含量。结论：大鼠脑微血管内皮细胞损伤后可能造成其旁分泌功能紊乱,进一步导致神经元的损伤。通心络可能通过调节内皮细胞的旁分泌功能保护神经元,该保护作用与减少神经元的氧化应激有关。     

桂皮醛对IL-1刺激下脑微血管内皮细胞COX-1、COX-2活性及释放PGE2的影响

目的:观察从桂枝汤中分离出的单体桂皮醛对白细胞介素1(IL-1)刺激大鼠脑微血管内皮细胞(rCMECs)与发热有关的信号转导通路上关键信号元件环氧酶(COX)和前列腺素E2(PGE2)的影响.方法:建立rCMECs培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定.待细胞生长至融合状态后加入不同浓度的桂皮醛(12.5、25、50、100及200 mg/L)孵育3h,随后以30ng/ml的IL-1刺激12h.ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1、COX-2的活性.结果:Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见95%以上为阳性细胞,证实为rCMECs.暴露于浓度为30ng/ml IL-1后,rCMECs内COX-2活性及释放的PGE2量显著增加(P<0.01),COX-1活性无明显变化(P>0.05).加入不同浓度的桂皮醛后,随浓度增加而下调IL-1升高的COX-1、COX-2活性及PGE2量,且呈一定的浓度依赖关系;至浓度为100 mg/L时,COX-2活性及释放的PGE2与IL-1单独作用组比较差异均有显著性差异(P<0.05),COX-1活性无明显变化(P>0.05).结论:桂皮醛能下调IL-1刺激下rCMECs释放的PGE2,作用机制可能与抑制COX-2活性有关.     

清开灵、复方丹参、黄芪3种注射液对大鼠脑微血管内皮细胞凋亡影响的比较研究

清开灵注射液(以下简称清开灵)、复方丹参注射液(以下简称丹参)、黄芪注射液(以下简称黄芪)均能抗大鼠局灶性脑缺血损伤,并能抑制体外血小板的聚集[1]。脑微血管内皮的损伤是急性脑血管病的重要环节,在脑缺血的发生发展中起着重要作用。本研究通过3种方剂对大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)缺氧-再给氧所导致细胞凋亡影响的研究,探讨它们抗脑缺血的机制。1材料1.1动物W istar雄性大鼠,体重100 g,北京维通利华实验动物技术有限公司,     

甘草甜素调控miR-205/PINK1对H2O2所致的脑微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨甘草甜素对过氧化氢(H2O2)作用的脑微血管内皮细胞脑损伤的影响及其分子机制.方法:使用不同浓度的甘草甜素处理大鼠脑微血管内皮细胞(RCMECs),噻唑蓝(MTT)检测细胞活性.利用H2O2损伤RCMECs,使用不同浓度的甘草甜素进行干预,MTT和流式细胞术检测细胞活性与凋亡,蛋白质印迹法(Western b...     

丹红有效成分配伍对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用

为研究丹红有效成分配伍对缺氧致原代培养的乳鼠脑微血管内皮细胞(r BMECs)损伤的保护作用。原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并对细胞进行缺氧4 h损伤模型的同时,丹红有效成分(原儿茶醛、丹酚酸B、羟基红花黄色素A、丹参素)配伍作用于r BMECs,MTT确定细胞非毒性剂量,采用比色法测定LDH,SOD活性和MDA水平,RT-PCR法检测ICAM-1,MMP-9,P53 mRNA表达,流式细胞术检测r BMECs细胞周期及早期凋亡的变化。丹红有效成分配伍1,2,3,7,8,9组方显著抑制缺氧细胞上清液中LDH的增加;1,2,4,6,7组方显著增强缺氧细胞内SOD活性;1,2,3,8,9组方显著降低MDA水平;1,2,6,7,9组方显著抑制缺氧诱导的r BMECs早期凋亡,缺氧后细胞P53 mRNA表达明显上调的后果是能引起G1期阻滞和促进细胞凋亡,证实P53基因的调节功能体现在G1期校正点的监测;1,2,5,6,7,8,9组方显著下调P53 mRNA表达;1,4,7,8,9组方显著下调ICAM-1 mRNA表达;1,3,6,9组方显著下调MMP-9 mRNA表达。丹红有效成分配伍对缺氧所致原代培养的r BMECs损伤具有明显的保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,抑制炎症反应和细胞凋亡有关。为研究方剂配伍规律提供思路,指导临床用药。     

丹红注射液对乳鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用

目的 研究丹红注射液对缺氧致原代培养的乳鼠脑微血管内皮细胞（rBMECs）损伤的保护作用。方法 原代培养rBMECs,并对其进行兔抗鼠VIII因子鉴定。实验设对照组,缺氧模型组,丹红注射液低、中、高剂量（25、50、100 μL/mL）组,给药后,rBMECs缺氧4 h。显微镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率及DNA的量,按试剂盒方法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）水平、细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 丹红注射液50、100 μL/mL可显著对抗缺氧造成的损伤,明显改善rBMECs形态,使缺氧所致细胞凋亡数明显减少,有效抑制缺氧诱导的rBMECs发生G₁/S期阻滞,抑制LDH释放,增强SOD活性。结论 丹红注射液对缺氧所致原代培养的rBMECs损伤具有明显的保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力、抑制细胞凋亡有关。     

桂皮醇对IL-1刺激脑微血管内皮细胞COX活性及PGE2释放的影响

 目的观察桂枝汤中分离获得的单体成分桂皮醇对发热相关的环氧酶(COX)和前列腺素E₂(PGE₂)的影响。方法建立大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞生长至融合状态后加入不同终浓度的桂皮醇(0.093,0.186,0.372,0.744,1.488 mmol·L^-1)孵育3 h,之后以30μg·L^-1的IL-1刺激12 h。ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1,COX-2的活性。结果Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见95%的培养细胞呈阳性,确认为rCMEC。暴露于质量浓度为30μg·L^-1IL-1后,rCMEC内COX-2活性及释放的PGE2量显著增加(P<0.01),COX-1活性变化无统计学差异(P>0.05)。加入不同浓度的桂皮醇后,随浓度增加可下调COX-1、COX-2活性及PGE2量,且呈浓度依赖关系;至浓度为0.744mmol·L^-1时,COX-2活性及释放的PGE2与IL-1单独作用组相比均有显著性差异(P<0.05),COX-1活性虽有所降低,但无统计学上的显著差异(P>0.05)。结论桂皮醇能下调IL-1刺激rCMEC释放升高的PGE₂,作用机制可能与抑制COX-2活性有关。     

036黄芩提取物对高糖诱导血管内皮细胞凋亡的作用

普遍认为，内皮细胞凋亡触发糖尿病微血管病变进展。而研究结果提示，黄芩对内皮细胞有调整作用，本次探讨了其对高糖诱导体外培养的血管内皮细胞凋亡的作用。     

丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护机制

为研究丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞(rBMECs)的保护机制。该实验采用原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并进行Ⅷ因子鉴定, 建立缺氧4 h损伤模型的同时, 丹红注射液(25, 50, 100 mL·L)作用于rBMECs, 生化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平, RT-PCR法检测细胞MMP-9, ICAM-1, P53 mRNA表达水平, 透射电镜观察细胞超显微结构变化。结果表明缺氧使原代培养的rBMECs受到明显损伤, 与模型组比较, 丹红注射液(50, 100 mL·L)可显著对抗缺氧造成的损伤, 增强SOD活性, 降低MDA水平, 明显下调MMP-9, ICAM-1, P53 mRNA的表达, 丹红注射液100 mL·L能够保护细胞正常的形态、显微结构、维持细胞间紧密连接, 抑制缺氧诱导的细胞凋亡。从结果中可以得出丹红注射液对缺氧损伤rBMECs具有明显的保护作用, 其机制与增强细胞抗氧化能力, 抑制炎症反应及细胞凋亡有关。     

羟乙葛根素对过氧化氢致牛脑微血管内皮细胞损伤的保护作用

 目的研究过氧化氢损伤牛脑微血管内皮细胞(BCMEC_s)的机制及羟乙葛根素的保护作用。方法比色法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸法测定细胞内和培养液中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内和培养液中超氧化物歧化酶(SOD)的活性,放射性免疫法检测细胞培养液中血栓素A₂的最终代谢产物血栓素B₂(TXB₂)的水平和前列环素最终代谢产物6-酮基前列腺素1α(6-keto-PGF1α)的含量。结果H₂O₂(200μmol·L^-1)损伤后,BCMEC_sLDH释放水平、MDA含量呈时间依赖性增加,SOD活性呈时间依赖性降低,羟乙葛根素能够呈浓度依赖性降低LDH水平和MDA含量,提高SOD活性;H₂O₂(200μmol·L^-1)损伤BCMEC_s后,细胞培养液中TXB₂含量显著升高、6-keto-PGF1α含量显著降低,羟乙葛根素能够呈浓度依赖性降低TXB₂含量、升高6-keto-PGF1α水平。结论羟乙葛根素对过氧化氢损伤BCMEC_s后的脑血管内皮细胞功能具有保护作用,其机制与抗氧化作用有关。     

大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液对皮层神经元活性的影响以及通络救脑注射液的干预作用

目的:探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对神经元活性的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法:制备正常、正常用药、拟缺血损伤、拟缺血损伤用药4种脑微血管内皮细胞条件培养液(N-CM、NT-CM、I-CM、IT-CM),分别作用于培养的皮层正常神经元和拟缺血损伤神经元,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率检测分析各个条件培养液对神经元活性的影响特征。结果:①N-CM对正常神经元无明显影响,但对拟缺血损伤的神经元表现出一定的保护作用,尤其是NT-CM可明显提高受损的神经元活性;②I-CM可降低正常神经元活性,对已受损的神经元则进一步加重损伤,IT-CM可明显改善这种损伤状态。结论:脑微血管内皮细胞的旁分泌作用可能在中枢系统缺血性损伤中起重要作用,有可能是不能透过血脑屏障的中药成分发挥治疗作用的靶点。