PLA-MSCs复合培养物植入修复兔关节软骨缺损的实验研究

目的探讨利用组织工程学方法以体外培养的PLA—MSCs复合物修复兔膝关节软骨缺损的可行性。方法取兔骨髓体外与多孔PLA进行复合培养，12d后左膝关节作为实验侧植入PLA—MSCs复合物，右膝关节单纯植入PLA作为对照术后4、8、12、16周分别取材观察软骨修复情况。改良Pineda法对组织切片评分，原位分子杂交检测修复组织Ⅱ型胶原mRNA的表达。结果实验侧负重区术后4周即形成透明软骨，有Ⅱ型胶原阳性表达的细胞8周、12周，组织学评分接近正常关节软骨，16周时修复软骨未退变。非负重区有不规则的透明软骨团形成对照侧形成纤维组织及纤维软骨，无Ⅱ型胶原阳性表达。结论体外培养的骨髓基质细胞可用于关节软骨缺损的修复，多孔PLA是良好的细胞载体，应力有助于软骨的形成。     

关节软骨缺损修复的研究进展

高能量暴力外伤、关节内感染以及其他疾病能引起严重骨缺损,同时也导致关节软骨损伤。现在,关节软骨损伤已成为临床骨科医生面临的一大难题。由于体内关节软骨的自身修复能力极其有限,一旦损伤,很难自愈,常可致畸致残。对此,国内外学者做了大量研究,本文就关节软骨缺损的修复方法做一综述。     

辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀（SIM）对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法：用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐（MTY）测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测survivin和BaxmRNA表达的变化。结果：①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93．12％,IC50为（11．33±0．16）μg／ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,BaxmRNA表达逐渐升高。结论：SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀(SIM)对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin和Bax mRNA表达的变化。结果①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93.12%,IC_(50)为(11.33±0.16)μg/ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G_1-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,Bax mRNA表达逐渐升高。结论SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

关节软骨磁共振成像的研究进展

Articular cartilage injury is one of the main reasons affecting the function of joint movement. Early diagnosis and correct assessment of the extent of damage are critical. Magnetic resonance imaging （ MRI ） is recognized as the best noninvasive imaging method of checking the articular cartilage. Especially in recent years, with the rapid development of quantitative magnetic resonance imaging （ QMRI ）, the articular cartilage noninvasive technology has progressed from the morphological level to the molecular and biochemical level. More and more effective techniques have been proposed for the early detection and evaluation of articular cartilage injuries. Based on the previous literatures, the research status and progress of current and emerging MRI imaging rechniques of the articular cartilage are reviewed in this paper.     

α-双炔失碳酯对 Swarm大鼠软骨肉瘤的分化诱导作用

目的：研究α -双炔失碳酯（ alpha-anordrin,α -anordrin）对 Swarm大鼠软骨肉瘤（ swarm rat chondrosarcoma,SRCS）生长的影响及其作用机制。方法：观察α -anordrin和全反式维甲酸（ all-trans retinoic acid, ATRA）对 SRCS在大鼠体内生长的影响;用 MTT法研究药物对细胞增殖的影响;用 von Kossa 法显示钙盐在组织中的沉积;用免疫组织化学法研究 S-100蛋白的表达水平;用硝基苯酚磷酸酯显色法检测碱性磷酸酯酶活性;用 Fura-2/AM荧光法测定细胞内自由钙离子浓度。结果：α -anordrin对 SRCS在大鼠体内生长有剂量依赖性的抑制作用,在 16 mg· kg-1时的抑制率为 41.2％ (P<0.05), ATRA在 10 mg· kg－ 1剂量下抑制率为 70.6％ (P< 0.01)。同时,经α-anordrin和 ATRA治疗后, SRCS中出现明显钙盐沉积; S-100蛋白表达水平升高。α-anordrin对 SRCS细胞体外生长的抑制作用明显弱于 ATRA,作用 48 h后对 SRCS细胞生长的 IC50分别为 161.7 μ mol/L和 1.47 μ mol/L。α-anordrin和 ATRA在体外可使 SRCS细胞中碱性磷酸酯酶活性和自由钙离子浓度显著性升高。结论：α-anordrin对 SRCS的生长有明显的抑制作用,这种抑制作用可能与其能够诱导 SRCS向成骨化方向分化有关。     

利多卡因对关节软骨培养模型中软骨细胞活性的影响

目的 本研究通过类似于体内生理环境的关节软骨器官培养模型,评估利多卡因对关节软骨细胞活性的影响。方法 实验材料取自女性骨性关节炎患者行膝关节置换术中切除的残余正常股骨髁,用环钻获取直径 4 mm 的圆形新鲜全层厚度正常软骨,将其放置在培养液中１周,检测关节软骨器官培养模型的完整性。然后,通过不同临床相关浓度 （0%、1%、2%） 以及作用时间 （30、60、120 min） 的生理盐水和利多卡因溶液处理关节软骨,通过组织学 HE 染色和 MTT 方法定量测定关节软骨的组织学和细胞活性的变化,评估利多卡因对关节软骨的细胞毒性作用。结果 新鲜关节软骨在培养液中经体外器官培养１周,软骨细胞的组织结构及细胞活性仅发生轻微的改变。相比较生理盐水组的软骨细胞活性改变为 90% 而言,时间效应组中 1% 利多卡因作用 30、60、120 min 后软骨细胞活性分别下降为 79%、70%、56%。浓度效应组中当药物作用时间固定为 1 h,0.9% 生理盐水、1% 和 2% 利多卡因作用下的软骨细胞活性分别为 92%、78% 和 70%。结论 人关节软骨经体外器官培养１周,可维持组织学和细胞活性的完整性。仿生理状态下生物学特性和结构均完整的关节软骨经利多卡因作用后,随着作用时间延长和浓度增加,软骨细胞的活性明显降低,因此,临床相关浓度的利多卡因对人关节软骨有毒样作用。     

四种药物对兔骨关节炎模型关节液中IL-1β、TNFα水平的影响

目的观察目前临床常用的治疗骨关节炎（OA）药物对骨关节炎动物模型关节液中细胞因子IL-1β、TNFα水平的影响。方法按照ACLT法建立兔膝关节骨关节炎模型，30只实验动物随机等分成6组：（1）透明质酸钠组，（2）硫酸氨基葡萄糖组，（3）塞来昔布组，（4）独活寄生汤组，（5）盐水组，（6）空白组。各治疗组分别给予药物治疗4周，然后抽取关节液，ELISA法检测关节液中IL-1β、TNFα的含量。结果透明质酸钠、硫酸氨基葡萄糖和塞来昔布组关节液中IL-1β、TNFα水平均显著低于对照组（P〈0．01）；独活寄生汤组关节液中IL-1β、TNFα水平均与对照组无显著性差异（P〉0．05）；透明质酸钠组模型关节液中IL-1β、TNFα水平均显著低于硫酸氨基葡萄糖和塞来昔布组（P〈0．05）。结论四种药物中透明质酸钠、硫酸氨基葡萄糖和塞来昔布均能够抑制OA模型关节滑液中IL-1β、TNFα的水平，其中透明质酸钠更加显著。     

骨关节病关节软骨中Cbfal含量的测定及其意义

目的 通过定量检测骨关节病标本中核心结合因子al(Cbfal)含量的变化,探讨Cbfal在骨关节病中可能的作用机制。方法 采用实时荧光定量PCR的方法,定量检测15例髋关节骨关节病及4例膝关节骨关节病标本中损伤软骨与正常软骨Cbfal mRNA的含量。结果 损伤软骨Cbfal mRNA的转录水平较正常软骨升高约38倍。结论 Cbfal在受损软骨部位表达,与骨关节病的发生过程有关,并可能是关节软骨部位钙化的重要原因之一。     

骨肉瘤侵犯骨骺软骨板和关节软骨的病理学与MVD、VEGF、SMA、Desmin的表达关系研究

 目的　探讨骨骺软骨板和关节软骨有无抵抗骨肉瘤 (OS)侵犯的作用。方法　将 38例截肢的OS标本 ,纵向锯成 1cm左右的骨片 ,作多骨片X 线照片 ,在不同层面骨骺软骨板和关节软骨处多处取材 ,光学显微镜观察OS对骨骺软骨板和关节软骨侵犯情况。用免疫组织化学观察血管形成与浸润的关系。结果　免疫组化显示 :在浸润区F 8抗原阳性细胞和毛细血管密度与非浸润区之间差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。结论　骨骺软骨板对OS的侵犯没有明显抵抗作用 ,即使有抵抗也仅是暂时的屏障作用。浸润与血管形成呈正相关。     

辛伐他汀对肝癌细胞间缝隙连接功能的影响研究

背景与目的：肝癌的发生、发展过程中伴随着细胞间缝隙连接(gap junction,GJ)功能的下降,恢复或增强肿瘤细胞间的GJ可以抑制肿瘤细胞的恶性转化和生长增殖。本研究拟通过观察辛伐他汀对肝癌细胞间GJ功能的影响,寻找能够增强GJ功能的药物,从而为肝癌的治疗提供新策略和新手段。方法：采用磺酰罗丹明B法观察辛伐他汀对大鼠肝癌细胞Hep3b的抑制作用;细胞接种荧光法和划痕标记/染料示踪技术观察辛伐他汀对GJ功能的影响。结果：1、5和10 μmol/L辛伐他汀在24 h作用时间内均对细胞生长无抑制作用,将不影响GJ的数量;取5、10 μmol/L辛伐他汀作用细胞4 h后,与对照组相比,GJ的荧光传递功能明显增强;与对照组相比,5、10 μmol/L辛伐他汀作用细胞4 h后,荧光黄染料(lucifer yellow,Ly,Sigma)传输范围随着辛伐他汀浓度的升高逐渐增大。结论：辛伐他汀可以增强肝癌细胞GJ功能。     

低温保护冻存的异体骨软骨移植修复关节软骨缺损的研究

目的 观察经低温冻存的异体骨软骨移植物中软骨细胞的存活情况，并对比两个不同处理组移植物修复关节软骨缺损的效果。方法 将一组移植物的关节软骨造孔，另一组不造孔，二者均经低温冻存后，用于修复关节软骨缺损，通过大体观察、组织学观察、移植物退变评分及氨基酸分析等多种方法对修复效果进行评估。结果 经冻存后两处理组的移植物中仍有一定数量的软骨细胞存活；造孔处理组在存活软骨细胞数目、移植物退变程度等方面较对照组显示出优势。结论 低温冻存异体骨软骨移植是修复关节软骨缺损行之有效的措施，造孔处理可以改进移植修复的效果。     

miR-130a对IL-1β诱导骨关节炎细胞模型的保护作用及机制研究

目的 研究miR-130a对白介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β)诱导骨关节炎细胞模型的保护作用及机制.方法 培养大鼠骨关节软骨细胞ATDC5,用不同浓度IL-1β(0、1、5、10 ng/ml)刺激后检测miR-130a表达的变化;另外将ATDC5细胞分为对照组、miR-NC组、IL-1β+miR...     

ERK参与裸鼠体内辛伐他汀诱导K 562细胞凋亡的调控作用

目的：探讨辛伐他汀（simvastatin）作用于裸鼠体内K562细胞后Ras-MAPK信号转导通路胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated protein kinase，ERK）分子水平的变化，以说明ERK参与裸鼠体内辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的调控作用。方法：体外培养慢性髓细胞白血病（CML）细胞株K562细胞，构建BALB／c-nu／nu裸鼠的K562细胞移植瘤模型。流式细胞术（FCM）检测对照组和两个辛伐他汀处理组的K562细胞周期变化，TUNEL法检测K562细胞晚期凋亡情况。采用RT-PCR检测K562细胞中Ras-MAPK信号通路N-Ras、ERK1mRNA的差异表达。免疫组织化学标记葡聚糖聚合物（labbled dextran polymer，LDP）法检测P-ERK蛋白水平变化。结果：辛伐他汀能够明显抑制裸鼠K562移植瘤组织的增长，随着辛伐他汀剂量的增加，K562细胞移植瘤体积和质量明显减小（P〈0．05，P〈0．01）。每次注射0．05mg的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的G0／G1期停滞，不同剂量的辛伐他汀能够诱导K562细胞发生明显的凋亡，并随剂量的增加，凋亡率逐渐增高（P〈0．01）；不同剂量的辛伐他汀能够引起N-Ras、ERK1mRNA的表达下调（P〈0．01）。与对照组相比，两个处理组的p-ERK蛋白分别出现表达下调（P=0．01，P〈0．01）。结论：辛伐他汀在体内可能依赖Ras—MAPK信号转导通路ERK基因和蛋白水平的表达下调诱导K562细胞凋亡发生。     

雌激素缺乏对兔关节软骨甲状旁腺激素相关肽表达的影响

目的：研究双侧卵巢切除后雌激素缺乏对兔关节软骨甲状旁腺激素相关肽（PTHrP）表达有何影响。方法：手术切除双侧卵巢造成兔体内雌激素水平下降，8周后取实验组和对照组右股骨髁关节标本。经免疫组化方法检测PTHrP的表达。用光镜和图像分析仪测定软骨中PTHrP阳性细胞百分率和表达强度。结果：卵巢切除组关节软骨PTHrP阳性细胞百分率和表达强度均高于正常关节软骨，两间的差异有统计学意义。结论：雌激素水平对关节软骨PTHrP表达具有调节作用。     

辛伐他汀联合吡喃阿霉素对肝癌SMMC-7721细胞的协同抑制作用

目的:研究辛伐他汀联合吡喃阿霉素对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用。方法:辛伐他汀、吡喃阿霉素分别及联合处理细胞48小时,MTT法测量细胞的增殖抑制,按公式计算相互作用指数。结果:按照文献报道计算相互作用指数,相互作用指数小于1。结论:辛伐他汀和吡喃阿霉素对于SMMC-7721有协同抗瘤作用。     

IL-1诱导血管内皮细胞表达HLA-DR抗原对癌细胞粘附作用的研究

目的　探讨白细胞介素１（ Ｉ Ｌ１）作用于人脐带血管内皮细胞（ Ｈ Ｅ Ｃ）表达 Ｈ Ｌ Ａ Ｄ Ｒ 抗原,以及对人肝癌细胞（ Ｈ７４０１）的粘附作用。方法　应用微量细胞毒试验和中性红染色法检测肝癌细胞对 Ｈ Ｅ Ｃ的粘附作用。结果　研究发现, Ｉ Ｌ１ １００ Ｕ ／ｍ ｌ作用于 Ｈ Ｅ Ｃ ２４ ｈ 后,与对照组比较, Ｉ Ｌ１ 能诱导 Ｈ Ｅ Ｃ 表达 Ｈ Ｌ Ａ Ｄ Ｒ 抗原,同时发现,还能显著增加对肝癌细胞的粘附,与对照组比较,粘附百分率增加 ３６％ ,（ Ｐ＜ ００５）。当 Ｉ Ｌ１ １０００ Ｕ ／ｍ ｌ 时,对癌细胞粘附则表现为抑制。肝癌细胞与 Ｉ Ｌ１ １００ Ｕ ／ｍ ｌ预处理 ６ ｈ 后,对 Ｈ Ｅ Ｃ 的粘附作用比对照组显著增加 ２４６％ ,（ Ｐ＜ ００５）。结论　 Ｉ Ｌ１能增加 Ｈ Ｌ Ａ Ｄ Ｒ 抗原的表达,但 Ｉ Ｌ１ 对肝癌细胞粘附 Ｈ Ｅ Ｃ具有浓度选择作用。     

格列卫联合辛伐他汀对间质瘤 GIST - T1 细胞的抑制作用简

目的：胃肠道间质瘤是消化系统常见恶性肿瘤,对放疗和常规化疗不敏感,格列卫是唯一能够对间质瘤有抑制作用的药物,寻求能和格列卫起到协同抑制作用的药物对治疗间质瘤意义重大。方法：本实验采用辛伐他汀联合格列卫对人胃肠道间质瘤细胞GIST-T1进行体外抑制实验,使用MTT和凋亡检测药物的作用效果,并使用Western blot检测其可能的机制。结果：辛伐他汀联合格列卫对GIST-T1的增殖抑制作用较单药更为明显,该作用是通过caspase-3介导的凋亡途径完成的。使用JNK抑制剂SP600125可以逆转辛伐他汀造成的凋亡,进而减少辛伐他汀造成的细胞杀伤。结论：辛伐他汀可以通过磷酸化JNK-MAPK信号通路诱导凋亡的途径,促进格列卫对间质瘤细胞系GIST-T1的杀伤作用,可能会对临床格列卫的治疗提供增效作用。     

恶性肿瘤关节置换中人工补片的作用

目的探讨恶性肿瘤假体置换患者术中应用人工补片修复关节囊及软组织的效果及价值。方法回顾总结2003年1月-2008年6月肩、髋和膝关节周围恶性肿瘤非病理骨折患者行关节置换且获随访者35例,男19例,女16例,年龄23—82岁,平均50岁。肩关节置换10例,髋关节置换18例,膝关节置换7例。骨转移瘤21例,分别为肱骨近端及股骨近端;原发恶性骨肿瘤14例。将患者术前、术后关节功能按MSTS关节功能评价系统进行评定。所有患者均实施肿瘤广泛切除加人工假体置换,术中以人工补片修复关节囊。术后早期开始评价关节功能并积极功能锻炼、随访观察。对患者术后的临床结果进行分析评价。结果全部患者平均随访22个月（6个月～68个月）,平均于术后5d拔除引流管,伤口均Ⅰ期愈合,无术后感染,未发生假体脱位。术前关节功能按MSTS关节功能评价系统测定20例为良、15例为可;而术后28为良、7例为可。所有患者最后随访时对治疗结果满意。结论应用人工补片修复肿瘤关节假体置换后的关节囊及软组织,对软组织缺损后的关节稳定性和动力重建有重要作用,临床效果满意。     

辛伐他汀通过调控Chk1基因的表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡以及放疗敏感性的影响

目的:探讨辛伐他汀（simvastatin,SVA）通过调控细胞周期检测点激酶1（checkpoint kinase 1,Chk1）基因表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,采用不同浓度（3.25 μmol/L、6.25 μmol/L、12.5 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L)SVA处理细胞,以0 μmol/L SVA为空白组（Con组）。采用MTT法检测SVA对细胞的增殖抑制率,筛选SVA最适浓度（SVA组）用于后续研究。流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用2、4、6、8 Gy剂量X射线照射细胞。将Chk1阴性对照质粒、Chk1 siRNA分别转染至Hela细胞,分别命名为si-NC、si-Chk1组;重组pcDNA 3.1/Chk1基因过表达质粒及空载体对照质粒分转染至SVA组细胞中,分别命名为SVA+pcDNA-Chk1组、SVA+pcDNA组。采用qRT-PCR与Western blot法检测各组细胞中Chk1 mRNA及蛋白表达水平;MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;克隆形成实验检测细胞放疗敏感性。结果:随着SVA浓度的增加Hela细胞增殖抑制率明显升高且呈剂量依赖性,SVA浓度为12.5 μmol/L时Hela细胞增殖抑制率约为50%,以此用作后续实验研究。SVA组Hela细胞凋亡率显著高于Con组,且不同剂量X射线照射后Hela细胞存活分数明显降低（P＜0.05）;SVA处理Hela细胞后可显著降低Chk1 mRNA及蛋白表达水平（P＜0.05）;si-Chk1组Hela细胞中Chk1蛋白表达水平及细胞存活分数均显著低于si-NC组（P＜0.05）,细胞增殖抑制率及凋亡率均显著升高（P＜0.05）;SVA+pcDNA-Chk1组Hela细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均显著低于SVA+pcDNA组（P＜0.05）,细胞存活分数显著升高（P＜0.05）。结论:SVA可通过下调Chk1基因表达进而抑制宫颈癌细胞增殖并促使细胞凋亡,同时能够增强宫颈癌细胞放疗敏感性。