白藜芦醇苷对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障的 保护作用研究

目的:观察白藜芦醇苷（PD）对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障的保护作用及对紧密连接蛋白的影响。方法:CD-1 小鼠 （102 只）应用线栓法制作短暂性大脑中动脉闭塞（tMCAO）模型。随机将实验动物分成4 组:假手术组（28 只）、缺血再灌注 组（28只）、白藜芦醇苷低剂量组（30 mg/kg,18只）,白藜芦醇苷高剂量组（60 mg/kg,28只）。于缺血再灌注后24 h 进行行为学评 分、TTC 染色、干湿重测定、伊文思蓝染色,应用Western 印迹、免疫荧光检测内皮细胞标志物血小板内皮细胞黏附分子-1（CD- 31）、紧密连接蛋白闭锁小带蛋白-1（ZO-1）、咬合蛋白（Occludin）、闭合蛋白-5（Claudin-5）的表达情况。结果:（1）与缺血再灌注 组相比,白藜芦醇苷高剂量组改善了缺血再灌注小鼠行为学评分、减少了脑梗死体积[（33.76%± 13.27%）vs.（57.47%±9.53%）, P<0.05]、减轻了缺血再灌注小鼠脑水肿程度[（75.62%±7.95%）vs.（85.72%±6.20%）,P<0.05]、降低了伊文思蓝渗出量[（1.49±0.47） vs.（2.13±0.44）,P<0.05]。（2）Western印迹结果显示白藜芦醇苷上调了ZO-1、Occludin、Claudin-5（均P<0.05）的表达水平。（3）免 疫荧光结果显示:白藜芦醇苷组上调了CD-31 在皮层缺血半暗带区的表达,且可见微血管形态相较缺血再灌注组更加光滑、完 整,同时白藜芦醇苷减少了ZO-1、Claudin-5 的破坏。结论:白藜芦醇苷的干预对缺血再灌注损伤小鼠起到了保护血脑屏障的作 用,上调了紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5 的表达水平。     

糖尿病对大鼠局部脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性的影响

目的研究糖尿病对大鼠局部脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性的影响。方法雄性SD大鼠120只,随机分为脑缺血组和糖尿病伴脑缺血组,每组60只大鼠。糖尿病模型用链脲佐菌素腹腔内注射制备,用线栓法制作局灶性脑缺血模型。观察各组大鼠神经行为学缺陷;分别用TTC染色法和伊文思蓝注射法检测大鼠脑梗死体积及BBB破坏的程度。结果糖尿病伴脑缺血组大鼠脑梗死体积及BBB开放程度均明显大于其他各组(P<0.05),神经功能损伤也较其他各组明显。结论糖尿病可引起血脑屏障通透性增加,可作为糖尿病对微血管损伤的一个敏感性指标。     

脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性研究进展

血-脑屏障(blood brain barrier,BBB)为中枢神经系统毛细血管腔与神经组织之间存在的所有结构,是脑与血液及脑脊液之间的一种屏障,与中枢神经的变性、损伤和炎     

氨基胍对大鼠脑缺血再灌注损伤及血脑屏障的影响

目的探讨氨基胍(AG)对大鼠脑缺血再灌注后的血脑屏障的影响及对再灌注损伤的保护作用.方法采用线栓法建立鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注模型.于缺血2h再灌注22h,测定脑梗死体积,并用伊文思蓝染色荧光显微镜观察血脑屏障破坏的程度,HE染色观察中性粒细胞浸润变化.结果再灌注22h后,AG治疗组脑梗死体积减小,脑缺血区血脑屏障破坏程度和中性粒细胞浸润程度明显减轻(P＜0.05).结论AG对脑缺血再灌注具有确切的脑保护作用,并能减轻脑缺血再灌注对血脑屏障的破坏程度和炎症细胞浸润程度.     

氨基胍对大鼠脑缺血再灌注损伤及血脑屏障的影响

目的探讨氨基胍(AG)对大鼠脑缺血再灌注后的血脑屏障的影响及对再灌注损伤的保护作用。方法采用线栓法建立鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注模型。于缺血2 h再灌注22 h,测定脑梗死体积,并用伊文思蓝染色荧光显微镜观察血脑屏障破坏的程度,HE染色观察中性粒细胞浸润变化。结果再灌注22 h后,AG治疗组脑梗死体积减小,脑缺血区血脑屏障破坏程度和中性粒细胞浸润程度明显减轻(P<0.05)。结论AG对脑缺血再灌注具有确切的脑保护作用,并能减轻脑缺血再灌注对血脑屏障的破坏程度和炎症细胞浸润程度。     

药物干预血脑屏障治疗脑缺血再灌注损伤的研究进展

血脑屏障对维持中枢神经系统(CNS)内环境的稳定起着重要的作用,在脑缺血再灌注损伤过程中血脑屏障发生改变影响CNS的稳定性,药物通过干预血脑屏障改变和改变其进入血脑屏障的方式来治疗脑缺血再灌注损伤,从而维持CNS内环境的稳定.     

缺血后处理对大鼠脑缺血/再灌注后血脑屏障通透性的影响

目的 研究缺血后处理对大鼠脑缺血/再灌注后血脑屏障通透性的影响及可能机制.方法 大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型.36只大鼠随机分为假手术组(Shame),单纯脑缺血/再灌注模型组(middle cerebral artery occlusion,MACO),缺血后处理模型组(MACO+postconditioning),每组12只大鼠.检测术后24 h各组大鼠脑组织含水量、伊文思蓝含量.结果 缺血后处理组在缺血/再灌注后24 h脑组织含水量、伊文思蓝含量均显著低于单纯缺血/再灌注组(P<0.01).结论 缺血后处理可以有效降低脑缺血/再灌注后血脑屏障破坏的程度,减轻血管源性脑水肿.     

氟比洛芬酯介导MAPK信号通路保护脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障功能的机制研究

目的:探讨氟比洛芬酯介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路保护脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障功能的机制.方法:选取72只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注损伤组(IR组)和氟比洛芬酯组(F组),每组各24只.建立大鼠脑缺血再灌注经典模型,缺血时间为2 h,再灌注24 h,称湿干重测量脑组织含水量,伊文思蓝(EB)染色法检测大鼠血脑屏障通透性,免疫组化法检测缺血区脑组织的磷酸化p38 MAPK蛋白表达,免疫印迹法检测磷酸化p38 MAPK蛋白相对表达量.结果:F组的脑组织含水量及EB含量高于Sham组,低于IR组(P＜0.05);p38 MAPK蛋白阳性表达的等级及相对表达量高于Sham组,低于IR组(P＜0.05).结论:氟比洛芬酯可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,保护血脑屏障功能,机制可能与抑制MAPK信号通路、下调p38 MAPK表达有关.     

周细胞在慢性脑血流低灌注血-脑脊液屏障损伤中的作用

目的 探讨慢性脑血流低灌注损伤对大脑皮质血-脑脊液屏障及周细胞的影响及可能机制。方法 采用大鼠双侧颈总动脉结扎（two-vessel occlusion,2-VO）模型,手术后3、14和30 d检测脑血流量变化。采用荧光免疫组织化学法染色检测周细胞以及纤维蛋白原表达,原代培养周细胞进行细胞增生实验,透射电镜观察血-脑脊液屏障超微结构。结果 各模型组均出现脑血流下降,30 d时脑血流仍显著低于对照组。各模型组均有不同程度的纤维蛋白原的血管外渗漏;电镜结果可见基底膜增厚、血管外周围间隙致密物质沉积、星形胶质细胞突起水肿和红细胞血管外渗漏。周细胞数量在术后3、14和30 d均增多;体外实验低浓度纤维蛋白原可促进周细胞增生,而高浓度（20 g/L）纤维蛋白原对周细胞有毒性作用。结论 慢性脑血流低灌注破坏大脑皮质血-脑脊液屏障,刺激周细胞增生,纤维蛋白原的渗出可能是引起周细胞增生的主要原因。     

增强MRI在大鼠急性脑缺血再灌注血脑屏障损伤中的研究

目的通过对大鼠局灶脑缺血再灌注的研究评价增强MRI在判定血脑屏障损伤中的作用。方法采用线栓法制备大鼠右大脑中动脉缺血（MCAO）再灌注模型，雄性SD大白鼠24只（体重280～350g）随机分为2大组：对照组（A组）和缺血组（B组），每组再分为缺血2h组（A1、B1）及缺血6h（A2、B2），再灌注后2h行增强磁共振检查，测得兴趣区信号强度，结合脑组织中伊文氏蓝（EB）的含量进行比较分析。结果A1、A2组再灌注后均无强化，未见伊文低蓝染色。缺血组与对照组增强MRI信号强度比有差异（P＜0.05），B1、B2组之间信号强度比有差异（P＜0.05），缺血组右侧大脑半球EB含量与对照组相比有差异（P＜0.05），B1、B2组之间右侧大脑半球EB含量相比有差异（P＜0.05）。结论早期增强MRI检查能灵敏反映血脑屏障的破坏情况，预测继发出血的可能性。     

灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障通透性的影响

目的：通过检测脑缺血再灌注小鼠明胶酶A（MMP-2）、明胶酶B（MMP-9）的活性及脑组织中伊文思蓝的含量，探讨灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障（BBB）通透性的影响。方法：复制脑缺血再灌注模型，并于术前15min腹腔注射灯盏花素注射液10mg／kg，采用明胶酶谱分析法检测脑组织海马区明胶酶的活性，同时经尾静脉注射2％伊文思蓝，检测脑组织伊文思蓝含量。结果：脑缺血再灌注后明胶酶（A、B）活性增加；灯盏花素组MMP-9活性明显低于脑缺血再灌注组，而灯盏花素对MMP-2作用不显著。脑缺血再灌注后4h起脑组织伊文思蓝渗出逐渐增多，48h达高峰，以后有下降趋势。灯盏花素组于术后伊文思蓝渗出明显低于相应时间的脑缺血再灌注组（P〈0．05）。结论：灯盏花素具有降低脑缺血再灌注小鼠明胶酶B的活性、降低血脑屏障通透性的作用。     

三七皂甙对局灶性脑缺血再灌注后MMP-9表达的影响

目的探讨三七皂甙对大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法采用半定量RT—PCR测定MMP-9的变化,测定脑梗死体积并观察血脑屏障的破坏程度。结果再灌注后22 h,三七皂甙治疗组脑梗死体积和脑缺血区血脑屏障的破坏程度均低于对照组(P<0.05);三七皂甙治疗组MMP-9的表达明显低于对照组。结论三七皂甙能减轻脑缺血再灌注后的损伤和血脑屏障的破坏程度,抑制MMP-9的表达可能是其作用机制之一。     

缺血再灌注损伤降低肠黏膜屏障功能的初步研究

[目的 ]观察缺血再灌注损伤对肠黏膜屏障功能的影响。 [方法 ]将 1 0只昆明种小鼠和 1 6只SD大鼠随机分为对照组和缺血再灌注组 ,小鼠每组 5只 ,大鼠每组 8只。取小鼠空肠和结肠肠壁组织 ,制备组织切片 ,观察光镜及电镜下肠黏膜形态学变化 ;取大鼠肠系膜前淋巴结 ,细菌培养 4 8h后观察细菌易位变化。 [结果 ]光镜下观察到缺血再灌组空肠肠壁变薄 ,绒毛短细 ,绒毛间距变宽 ,局部黏膜上皮坏死脱落 ,固有层充血淤血 ,结肠变化不明显 ;电镜下缺血再灌组与对照组相比未见明显改变 ;缺血再灌组细菌易位率为 5 / 8,对照组为 1 / 8(P <0 .0 5 )。 [结论 ]缺血再灌注对小鼠和大鼠肠黏膜机械和免疫屏障有一定程度的损伤。     

Temporary and permanent focal cerebral ischemia in the mouse: assessment of cerebral blood flow, brain damage and blood-brain barrier permeability

Ｒｅｃｅｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅｈａｓｐｒｏｖｉｄｅｄａｐｏｔｅｎｔｎｅｗｔｏｏｌｆｏｒｓｔｒｏｋｅｒｅｓｅａｒｃｈ1,2　Ｓｔｕｄｉｅｓｏｆｆｏｃａｌｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｔｈｅｍｏｕｓｅｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｖａｒｉｏｕｓｍｅｄｉａｔｏｒｓａｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｉｓｃｈｅｍｉｃｉｎｓｕｌｔｓ,ｓｕｃｈａｓｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ1β,2　ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα,3　ａｎｄｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅＴｈｅｐａｔｈｏｐ…     

膜粘连蛋白Ⅱ通过保护血脑屏障促进小鼠颅脑创伤后早期神经功能的恢复

目的 评估外源性重组膜粘连蛋白Ⅱ(annexin 2,A2)对创伤性颅脑损伤后血脑屏障以及早期神经功能预后的影响,探讨A2蛋白作为脑创伤治疗靶点的可能性.方法 在成年雄性小鼠上建立控制性皮质损伤模型(controlled cortical impact,CCI),检测伤前与伤后不同时间点伤侧半球脑组织中内源性A2蛋白的表达.随后,小鼠CCI伤后通过尾静脉注射重组人源性A2蛋白,并检测血脑屏障通透性、大脑半球组织含水量、紧密连接蛋白表达量、海马区神经元数量、伤灶体积及早期行为学改变.结果 从CCI后3d起,A2蛋白表达明显增高,并在7d时达到高峰(P＜0.05),此后蛋白表达逐渐下降,21 d恢复到基值;伤前内皮细胞几乎不表达A2蛋白,伤后在伤侧部分内皮细胞表达A2蛋白.在伤后2h给予重组A2蛋白能显著降低血脑屏障通透性从而降低脑组织中Evans蓝(Evans blue,EB)渗出量(P＜0.05),增加ZO-1蛋白表达(P＜0.05),减少伤后CA1和CA3区神经元丢失,CA1区和CA3区平均神经元存活数量分别为159.5和131,6,均显著高于对照组(P＜0.05),并促进伤后7d内运动功能康复(P＜0.05).能够减少致伤后脑组织含水量,但不具有统计学差异(P＞0.05),两组间伤灶体积也无统计学差异(P＞0.05).结论 在创伤性颅脑损伤早期,给予重组人A2蛋白能提高内皮细胞ZO-1合成,保护血脑屏障,减轻神经组织继发性损伤,促进伤后神经功能恢复.     

氟桂利嗪对脑缺血再灌后学习记忆行为的影响

目的 观察氟桂利嗪对脑缺血复灌后学习记忆行为的影响.方法 采用大、小鼠夹闭双侧颈总动脉,脑缺血后复灌模型,动物分组给药,人工常规饲养7 d后,检测小鼠跳台错误次数、大小鼠Y型迷宫试验来观察大、小鼠学习记忆行为的改变.结果 氟桂利嗪可以减少小鼠跳台试验次数,延长小鼠跳台试验的潜伏期,减少大、小鼠Y型迷宫试验中的错误反应次数.结论 脑缺血复灌损伤可以导致记忆障碍,氟桂利嗪对脑缺血后记忆障碍具有一定的改善作用.     

大鼠脑损伤后血脑屏障变化的定量研究

检测了156只雌性SD大鼠不同程度脑损伤后脑组织伊文氏兰含量，结果发现，脑损伤越重，血脑屏障破坏发生时间越早，且程度越重。此结果提示，脑损伤后脑组织伊文氏兰含量测定能定量评价血脑屏障损伤程度，为研究血脑屏障的通透性和药理保护性作用，提供了一种新的方法。