电针曲池穴及足三里穴对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞线粒体凋亡途径的影响

目的观察电针干预对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞线粒体凋亡途径的影响。 方法选取SD大鼠60只,按照随机数字表法将其分为假手术组、模型组和电针组,每组20只。模型组、电针组大鼠采用Zea Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,缺血2h后,再灌注3d。模型组与电针组各有18只大鼠造模成功。术后2h,在电针组大鼠“曲池”、“足三里”穴进行电针治疗,假手术组及模型组不作特殊干预。采用Zea Longa 5分评价法观察大鼠神经功能缺损的恢复程度;用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色,计算脑梗死体积;应用TUNEL试剂盒检测皮质区缺血周围神经细胞的凋亡情况;采用Western blot法、免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测脑组织中B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bax蛋白、胱天蛋白酶（caspase）的表达水平。 结果与组内术后2h、1d及2d比较,模型组［（1.67±0.58）分］、电针组［（1.14±0.37）分］术后3d时的神经功能缺损评分较低（P<0.05）。与假手术组同时间点比较,模型组、电针组大鼠术后2h、1d、2d及3d的神经功能缺损评分均较高,电针组术后2d及3d神经功能缺损评分低于模型组（P<0.05）。术后3d,电针组大鼠脑梗死体积百分比明显减小（P<0.05）。假手术组、模型组、电针组大鼠大脑皮质缺血半暗带区神经细胞的凋亡百分比分别为（1.07±0.02）%、（39.4±10.1）%、（15.1±4.2）%。与模型组比较,电针组凋亡细胞数量百分比明显较低（P<0.05）。术后3d,模型组大鼠大脑皮质Bcl-2蛋白（0.11±0.02）、mRNA的相对含量（0.13±0.04）较假手术组明显下降（P<0.05）,与模型组比较,电针组Bcl-2蛋白（0.36±0.11）、mRNA的相对含量（0.41±0.15）较高（P<0.05）。术后3d,模型组、电针组大鼠大脑皮质Bax蛋白、mRNA的相对含量均高于假手术组（P<0.05）,与模型组比较,电针组大鼠大脑皮质Bax蛋白（0.51±0.14）、mRNA的相对含量（0.37±0.13）较高（P<0.05）。术后3d,电针组活化型胱天蛋白酶-3（cleaved caspase-3）免疫阳性细胞明显少于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论电针刺激“曲池”及“足三里”穴对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经细胞具有保护作用,其机制可能与调控线粒体凋亡途径蛋白的表达水平有关。     

Caspase-3特异性抑制剂对缺血再灌注损伤诱导的大鼠心肌细胞凋亡的作用

目的：探讨caspase-3特异性抑制剂在大鼠缺血再灌注损伤诱导心肌细胞凋亡中的作用。方法：SD大鼠36只,随机分为3组：对照组、I／R3b组和抑制剂组。应用TUNEI,法及流式细胞仪分析心肌细胞凋亡的变化,借助caspase-3荧光分析试剂盒,荧光比色法,检测心肌细胞凋亡过程中caspase-3活性的变化。结果：TUNEL及流式细胞仪分析显示caspase-3抑制剂组的AI值和细胞凋亡百分率分别为（4．48±0．98）％,（6．42±1．00）％;与I／R3h组[（18．33％±1．71）％,（29．88±3．74％）]相比明显降低并有显著差异（P〈0．01）。caspase-3活性检测显示caspase-3抑制剂组的caspase-3活性明显降低,比I／R3h组降低了45．67％（P〈0．01）。结论：caspase-3抑制剂能明显抑制心肌缺血再灌注后的心肌细胞凋亡。caspase-3抑制剂能明显抑制心肌缺血再灌注后的心肌caspase-3蛋白酶活性。     

电针预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体介导的细胞凋亡的影响

目的:探讨电针预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠的线粒体膜电位(△Ψm)及其介导的细胞凋亡的影响。方法:将60只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注组(MIRI)和电针预处理组(EA),每组20只。Sham组、MIRI组均采用自制鼠衣捆绑,固定于自制鼠台7天,1次/天,20min/次,第8天,Sham组开胸暴露心脏50min后、MIRI组开胸缺血20min再灌注30min后取材。EA组,电针预处理"内关"(双侧)、"足三里"(双侧)、"关元"7天,1次/天,20min/次,第8天开胸缺血20min,再灌注30min后取材。采用TTC染色法测定缺血再灌注损伤后心肌梗死的面积和重量,采用JC-1染色法检测△Ψm的水平,采用实时荧光定量PCR法检测第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂(Smac/Diablo)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-7(Caspase-7)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)基因表达水平。结果:(1)心肌梗死面积和重量:与Sham组相比,MIRI组和EA组的梗死面积和重量均增加(均P0.05),且EA组的梗死面积和重量低于MIRI组(均P0.01)。(2)线粒体膜电位:与Sham组相比,MIRI组和EA组的红/绿荧光比值均明显下降(均P0.01);与MIRI组比较,EA组红/绿荧光比值明显升高(P0.01)。(3)Smac/Diablo基因表达水平:与Sham组相比,MIRI组和EA组的Smac/Diablo、Caspase-7、Caspase-9的基因表达水平显著升高(均P0.01);与MIRI组相比,EA组的Smac/Diablo、Caspase-7、Caspase-9基因表达明显下降(均P0.01)。结论:电针预处理可有效缩小心肌梗死范围,提高线粒体膜电位水平,下调促凋亡基因Smac/Diablo、Caspase-7、Caspase-9的表达,电针预处理的保护作用可能是基于改善线粒体膜电位水平、抑制Smac/Diablo介导的线粒体Caspase凋亡通路产生的。     

电针曲池、足三里穴对缺血性卒中大鼠脑功能的影响

摘要 目的：建立缺血性卒中（MCAO）大鼠模型,观察电针曲池、足三里穴对MCAO模型大鼠脑功能的影响。 方法：将24只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组（S组）、模型组（M组）和电针组（EA组）,记录体重、神经缺损评分（NDS）、脑血流及造模前（B）、造模后（1d）、造模后（10d）的静息态功能磁共振（rs-fMRI）,对比观察电针干预对脑缺血大鼠脑功能康复的影响。 结果：NDS评分：M组、EA组2h、1d、3d、5d、7d均显著高于S组（P＜0.05）;M组1d、3d、5d、7d均显著高于EA组（P＜0.05）。体重：S组、EA组3d、5d、7d与B、1d相比显著上升（P＜0.05）;M组7d与1d相比显著上升（P＜0.05）;M组与S组相比1d时显著下降（P＜0.05）;M组与S组、EA组相比5d、7d时均显著下降（P＜0.05）。血流量、红细胞浓度：S组、EA组2h与B相比显著下降（P＜0.05）;S组1d与2h相比显著上升（P＜0.05）;EA组3d与2h相比显著上升（P＜0.05）;M组1d、3d、5d、7d时与其S组、EA组相比均显著下降（P＜0.05）。脑成像中,10d时EA组在健侧小脑、脑干的基于体素的形态学分析（voxel-based morphometry,VBM）显著高于S组（P＜0.05）。 结论：电针早期干预对脑缺血大鼠的脑功能有影响,可能与建立有效的侧支循环及增强神经元活动有关,从而影响运动相关的脑区,具有促进运动功能康复的潜力。     

电针曲池、足三里对缺血再灌注大鼠缺血侧运动皮层小胶质细胞与外泌体蛋白的影响及机制

目的：探究缺血再灌注损伤大鼠缺血侧运动皮层中 M2型小胶质细胞衍生的外泌体表达,观察电针曲池、足三里穴对缺血再灌注损伤大鼠运动功能的影响及其可能机制。方法：36只雄性SD（Sprague Dawley）大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组各12只,采用Zea Longa神经行为学评分进行神经功能缺损评定;Catwalk跑台实验评估运动功能;免疫组化法标记缺血侧运动皮层M2型小胶质细胞阳性细胞数量,免疫荧光双标法标记其外泌体蛋白CD81的表达。结果：干预7 d后,电针组与模型组大鼠相比,Zea Longa 评分显著降低（P＜0.05）;步行速度增快（P＜0.01）,持续时间减少（P＜0.05）,大鼠爪印面积显著性增加(P<0.01);缺血侧运动皮层M2型小胶质细胞及其分泌的外泌体蛋白 CD81增多,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论：电针曲池、足三里穴可促进缺血侧运动皮层M2型小胶质细胞外泌体的分泌,发挥神经保护作用,有效改善缺血再灌注损伤大鼠的运动功能。     

肝移植后缺血再灌注损伤大鼠诱导细胞凋亡中的一氧化氮

背景:由诱生型一氧化氮合酶产生的一氧化氮,是肝脏缺血再灌注损伤中病理生理学改变的一个重要因素.目的:探讨一氧化氮在肝移植缺血再灌注诱导的肝细胞早期凋亡的影响以及相关基因caspase-3的表达情况.方法:受体鼠72只随机数字表法均分成移植组、精氨酸组及L-硝基精氨酸甲酯组,均建立原位肝移植模型,后2组大鼠在开放血流前5 min于股静脉注射可升高血清一氧化氮水平的精氨酸或一氧化氮抑制剂L-硝基精氨酸甲酯.移植造模后剩余的24只大鼠设为假手术组.结果与结论:血清谷草转氨酶活件比较,精氨酸组<移植组移植组>L-硝基精氨酸甲酯组;早期凋亡的高峰期为再灌注后3h,肝细胞的活细胞数比例及肝组织中caspase-3的表达,精氨酸组<移植组相似文献   

肝移植后缺血再灌注损伤大鼠诱导细胞凋亡中的一氧化氮

背景：由诱生型一氧化氮合酶产生的一氧化氮,是肝脏缺血再灌注损伤中病理生理学改变的一个重要因素。目的：探讨一氧化氮在肝移植缺血再灌注诱导的肝细胞早期凋亡的影响以及相关基因caspase-3的表达情况。方法：受体鼠72只随机数字表法均分成移植组、精氨酸组及L-硝基精氨酸甲酯组,均建立原位肝移植模型,后2组大鼠在开放血流前5min于股静脉注射可升高血清一氧化氮水平的精氨酸或一氧化氮抑制剂L-硝基精氨酸甲酯。移植造模后剩余的24只大鼠设为假手术组。结果与结论：血清谷草转氨酶活性比较,精氨酸组〈移植组〈L-硝基精氨酸甲酯组,组间比较差异有显著性意义（P〈0.01）;血清一氧化氮浓度,精氨酸组〉移植组〉L-硝基精氨酸甲酯组;早期凋亡的高峰期为再灌注后3h,肝细胞的活细胞数比例及肝组织中caspase-3的表达,精氨酸组〈移植组〈L-硝基精氨酸甲酯组。说明,一氧化氮对大鼠对肝移植缺血再灌注后肝细胞早期凋亡具有保护作用,且该作用可能主要通过下调caspase-3基因的表达。     

缺血预适应对大鼠肺缺血/再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的 观察缺血预适应(IP)对在体大鼠肺缺血/再灌注(I/R)损伤细胞凋亡及其凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响,探讨其作用的可能机制.方法 雄性大鼠36只,随机分为三组:假手术(SO)组,缺血/再灌注(I/R)组,缺血预适应(IP)组.I/R组开胸后,建立在体肺脏I/R损伤模型.IP组于缺血开始前,应用3个循环的5 min缺血+5 min灌注进行处理,用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数,免疫组化法测定Bcl-2和Bax表达.同时在光镜与电镜下观察肺脏的病理形态学和超微结构的改变.结果 与SO组比较,I/R组凋亡指数增加,Bax、 Bcl-2表达均增强,Bcl-2/Bax比值明显降低.与I/R组比较,IP组凋亡指数明显下降,Bcl-2达增强,Bax表达减弱,Bcl-2/Bax比值增高,肺脏超微结构损害和肺水肿程度明显减轻.结论 缺血预适应对肺缺血/再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能是通过调控Bcl-2/Bax介导而减少肺缺血/再灌注细胞凋亡实现的.     

缺血再灌注损伤诱导大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨大鼠心肌缺血再灌注后不同时相心肌细胞凋亡情况及其与缺血再灌注的关系，并进一步探讨心肌细胞凋亡在心肌缺血再灌注损伤中的可能作用。方法：64只SD大鼠随机分为5组：对照组（假手术45min、105min、165min、225min，各时间点n=8），心肌缺血45min组（I15min,n=8），心肌缺血45min后再灌注1h、2h、3h组（I／R1h、I／R2h、I／R3h，各时间点n=8），分别在各时点处死大鼠取材。应用DNA琼脂糖凝胶电泳分析与透射电镜的检测心肌细胞凋亡的改变。结果：DNA琼脂糖电泳分析显示，I／R2h组、I／R3h组出现凋亡特征性“梯状电泳带”而对照组、L45min组及I／R1h组均未见凋亡带谱。透射电镜检测显示，对照组、L45min组、I／R1h组均未见到凋亡的心肌细胞，I／R2h组、I／R3h组心肌细胞染色质凝聚、边集、核膜完整，显示出典型的凋亡特征。结论：心肌缺血再灌注可导致心肌细胞凋亡，心肌细胞凋亡因缺血再灌注不同时相而变化；心肌细胞凋亡在大鼠心肌缺血再灌注损伤的病理生理过程中起重要作用；大鼠心肌缺血后再灌注可促发或加速心肌细胞凋亡。     

电针曲池、足三里穴对大脑中动脉阻塞大鼠缺血周围纹状体区神经细胞自噬的影响

目的:观察电针曲池、足三里穴对大脑中动脉阻塞(MCAO)缺血再灌注损伤大鼠缺血周围纹状体区神经细胞自噬的影响。方法:将36只SD大鼠按照随机数字表分为假手术组、模型组和电针组各12只。参考Koizumi线栓法构建MCAO大鼠模型后,电针组采用电针曲池、足三里穴干预3 d,假手术组和模型组不予以电针刺激。TTC染色观察梗死体积,电镜观察自噬体和线粒体结构,并检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3B(1ight chain 3B,LC3B)的表达水平。结果:TTC染色显示,电针组MCAO大鼠脑梗死体积较模型组减少(P0.05);电镜观察发现,模型组溶酶体和自噬泡数量增加,而电针组该现象减弱;电针组LC3BⅡ/LC3BⅠ水平较模型组升高(P0.05)。结论:在脑缺血再灌注损伤亚急性期,电针曲池、足三里穴可抑制缺血周围纹状体区因溶酶体和自噬溶酶体过度释放引起的神经细胞自噬性死亡,其机制还有待进一步研究。     

丙泊酚对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡信号通路的影响

背景:肾移植中肾缺血再灌注损伤能引发凋亡程序的执行,丙泊酚可能的肾保护作用及其与细胞凋亡通路间的关系,有助于探讨丙泊酚的作用机制.目的:探讨丙泊酚对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡通路的影响及可能的作用机制.设计,时间及地点:动物实验,细胞形态学观察,于2004/2005在北京友谊医院泌尿外科研究所实验室共同设计和完成.材料:选取封闭群SD成年雄性大鼠99只.兔抗鼠Bcl-2、Bax、caspase3、cytochrome C均为武汉博士德生物工程有限公司产品.方法:将动物随机分为对照组26只、缺血再灌注组35只、缺血再灌注+丙泊酚组38只.建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,术前单次静脉缓慢输注乳酸林格液5 mL/kg,逐层正中切口开骏,切除右肾,用无创血管夹夹闭左侧肾蒂,缺血时间45 min,松夹再灌注后全层缝合腹壁,取再灌注0,3,12,24,72 h左侧肾脏,取肾同时采血处死动物.缺血再灌注+丙泊酚组在缺血前15 min用药,丙泊酚1 mg/(kg·min)直至再灌注后30 min,共用药75 min.对照组和缺血再灌注组以乳酸林格液等量输注.主要观察指标:观察损伤肾的形态学改变,用免疫组织化学观察细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase 3和细胞色素C的表达情况.结果:光镜可观察到肾缺血再灌注引起的肾损害,程度依次为近曲小管、远曲小管、集合管、肾小球;免疫组化图像分析观察到缺血再灌注组与对照组相比,Bax、caspase 3,细胞色素C表达增加,Bcl-2表达未见明显变化;缺血再灌注+丙泊酚组与对照组比较,前者Bax、caspase 3和细胞色素C表达下降,Bcl-2表达增高(P＜0.05).结论:丙泊酚对肾缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡可能具有保护作用,可能机制是抑制促凋亡蛋白Bax、caspase 3和细胞色素C的表达,对Bcl-2的表达无影响,与细胞凋亡的线粒体通路途径有关.     

高压氧对大鼠肠缺血-再灌注损伤致细胞凋亡的影响

目的 观察大鼠在小肠缺血-再灌注(I/R)不同时期应用高压氧(HBO)治疗对小肠黏膜细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 采取大鼠肠系膜上动脉(SMA)钳夹缺血60 min,松钳夹再灌注60 min,建立S-D大鼠小肠I/R损伤模型,并随机(随机数字法)分成4组:I/R组、缺血前HBO治疗组或HBO预处理组(HBO-P)、缺血期HBO治疗组(HBO-I)和再灌注期HBO治疗组(HBO-R).再灌注60 min后,取回肠末端小肠标本.采用酶连免疫吸附试验法(Elisa)检测肠道组织TNF-α,用比色法检测肠道组织匀浆含量ATP,用免疫组化法检测小肠组织中半胱氨酸天门冬氨酸特异蛋白酶(Caspase-3)的表达.数据以均数±标准差(-x±s)表示,采用单因素方差分析检验,独立样本间比较采用SNK-q检验.结果 肠道组织TNF-α含量在HBO-I组最低,其次为HBO-P组(每两组比较P＜0.05),但前两组明显低于HBO-R组和I/R组(P＜0.05),HBO-R组略低于I/R组,但差异无统计学意义(P＞0.05);Caspase-3表达在HBO-I组最低,HBO-P组次之(两组比较P＜0.05);HBO-R和I/R组最高(与前两组比较P＜0.05),尽管HBO-R组略低于I/R组,但差异无统计学意义(P＞0.05);ATP含量在HBO-I组最低,HBO-P组次之(两组比较P＜0.05),HBO-R和I/R组最高(与前两组比较P＜0.05),尽管HBO-R组略低于I/R组,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HBO、小肠I/R损伤和小肠黏膜上皮凋亡之间存在联系;HBO治疗可以维持黏膜上皮细胞能量代谢,减少ATP耗竭,降低肠道组织TNF-α含量,减轻I/R损伤小肠黏膜上皮凋亡;在缺血期和缺血前应用HBO治疗显示有益结果,特别是在缺血期应用HBO效果最好,再灌注期应用HBO无效.     

亚低温缺血预处理对大鼠肠缺血再灌注诱导细胞凋亡的保护

背景细胞凋亡在肠缺血再灌注损伤中起关键性作用,细胞凋亡的发生与凋亡抑制基因Bcl-2和凋亡促进基因Bax蛋白表达程度密切相关.目的探讨亚低温缺血预处理对大鼠肠组织缺血再灌注后凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.设计随机对照实验.单位湖北省咸宁学院医学院外科学教研室与生物化学教研室.材料实验于2002-04/12在咸宁学院医学院中心实验室完成.选用Wistar健康雄性大鼠32只,术前禁食24 h,自由饮水.随机分为假手术对照组、缺血再灌注组、缺血预处理组、亚低温预处理组,8只/组.方法除假手术对照组外,其余3组建立缺血再灌注模型.①假手术对照组仅暴露肠系膜上动脉而不夹闭,共2 h,结束实验后取材;缺血再灌注组夹闭肠系膜上动脉60min后松夹60 min再取材;缺血预处理组夹闭肠系膜上动脉5 min和松夹5 min作为预处理,余同缺血再灌注组;亚低温预处理组实施缺血预处理前在小肠周围充填碎冰造成小肠亚低温(33～35℃),余同缺血预处理组.②各组大鼠取中段小肠4 cm,分为两段,分别置于甲醛和戊二醛中固定,制作电镜标本.免疫组化后显微镜下用图像分析系统检测各组吸光度值,每组选10个视野进行测量,计算平均值,肠黏膜损伤按Chiu标准进行分级.0级正常黏膜绒毛;Ⅰ级上皮下间隙增大,通常在绒毛的尖端,常伴有毛细血管淤血;Ⅱ级上皮下间隙扩张伴随上皮层同固有层中度分离;Ⅲ级绒毛两侧上皮层大量的同固有层分离,部分绒毛顶端破损;Ⅳ级绒毛破损伴随固有层毛细血管暴露,可能观察到固有层的细胞成分增多;Ⅴ级固有层破坏和不完整、出血和溃疡.主要观察指标①各组肠缺血再灌注后Bcl-2与Bax蛋白吸光度值的变化.②各组肠黏膜损伤分级.③各组肠黏膜组织学变化.结果32只大鼠全部进入结果分析,中途无脱落.①各组肠缺血再灌注后Bcl-2与Bax蛋白吸光度值的变化与假手术对照组比较,缺血再灌注组均明显升高(4.03±1.02,9.56±1.32,P＜0.01;5.67±1.34,19.07±1.63,P＜0.01);与缺血再灌注组比较,缺血预处理组Bcl-2表达升高(9.56±1.32,15.03±1.44,P＜0.01),Bax表达降低(19.07±1.63,14.11±1.21,P＜0.01);与缺血预处理组比较,亚低温预处理组Bcl-2表达仍有所升高(15.03±1.44,18.17±2.03,P＜0.05),Bax表达仍降低(14.11±1.21,11.58±1.04,P＜0.05).②各组肠黏膜损伤分级情况假手术对照组肠黏膜基本正常,损伤均为0级;缺血再灌注组肠黏膜损伤Ⅱ级2只,Ⅲ级3只,Ⅳ级3只,明显高于假手术对照组(P＜0.01);缺血预处理组肠黏膜损伤Ⅰ级2只,Ⅱ级4只,Ⅲ级2只,明显低于缺血再灌注组(P＜0.01);亚低温预处理组肠黏膜损伤0级1只,Ⅰ级3只,Ⅱ级4只,低于缺血预处理组(P＜0.05).③各组肠黏膜组织学形态电镜观察结果假手术对照组肠黏膜上皮微绒毛排列整齐,各细胞器形态正常;缺血再灌注组肠黏膜上皮微绒毛稀疏、变短、脱落,线粒体明显肿胀,空泡变性,内质网排列紊乱、肿胀;缺血预处理组肠黏膜上皮微绒毛排列基本整齐,线粒体内质网轻度肿胀;而亚低温预处理组肠黏膜上皮微绒毛排列整齐,线粒体内质网肿胀不明显.结论肠缺血再灌注前进行缺血预处理可以上调Bcl-2蛋白的表达,并下调Bax蛋白的表达,从而抑制肠缺血再灌注诱导的细胞凋亡以保护缺血再灌注肠损伤.亚低温状态能增强缺血预处理的保护作用.     

亚低温缺血预处理对大鼠肠缺血再灌注诱导细胞凋亡的保护

背景：细胞凋亡在肠缺血再灌注损伤中起关键性作用。细胞凋亡的发生与凋亡抑制基因Bcl-2和凋亡促进基因Bax蛋白表达程度密切相关。目的：探讨亚低温缺血预处理对大鼠肠组织缺血再灌注后凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。设计：随机对照实验。单位：湖北省咸宁学院医学院外科学教研室与生物化学教研室。材料：实验于2002-04／12在咸宁学院医学院中心实验室完成。选用Wistar健康雄性大鼠32只，术前禁食24h，自由饮水。随机分为假手术对照组、缺血再灌注组、缺血预处理组、亚低温预处理组，8只／组。方法：除假手术对照组外，其余3组建立缺血再灌注模型。①假手术对照组仅暴露肠系膜上动脉而不夹闭，共2h，结束实验后取材；缺血再灌注组夹闭肠系膜上动脉60min后松夹60min再取材；缺血预处理组夹闭肠系膜上动脉5min和松夹5min作为预处理，余同缺血再灌注组；亚低温预处理组实施缺血预处理前在小肠周围充填碎冰造成小肠亚低温（33-35℃），余同缺血预处理组。②各组大鼠取中段小肠4cm，分为两段，分别置于甲醛和戊二醛中固定，制作电镜标本。免疫组化后显微镜下用图像分析系统检测各组吸光度值，每组选10个视野进行测量，计算平均值，肠黏膜损伤按Chiu标准进行分级。0级：正常黏膜绒毛；Ⅰ级：上皮下间隙增大，通常在绒毛的尖端，常伴有毛细血管淤血：Ⅱ级：上皮下间隙扩张伴随上皮层同固有层中度分离；Ⅲ级：绒毛两侧上皮层大量的同固有层分离，部分绒毛顶端破损；Ⅳ级绒毛破损伴随固有层毛细血管暴露，可能观察到固有层的细胞成分增多；Ⅴ级：固有层破坏和不完整、出血和溃疡。主要观察指标：①各组肠缺血再灌注后Bcl-2与Bax蛋白吸光度值的变化。②各组肠黏膜损伤分级。③各组肠黏膜组织学变化。结果：32只大鼠全部进入结果分析，中途无脱落。①各组肠缺血再灌注后Bcl-2与Bax蛋白吸光度值的变化：与假手术对照组比较，缺血再灌注组均明显升高（4．03&;#177;1．02，9．56&;#177;1．32，P〈0．01；5．67&;#177;1．34．19．07&;#177;1．63，P〈0．01）；与缺血再灌注组比较，缺血预处理组Bcl-2表达升高（9．56&;#177;1．32，15．03&;#177;1．44，P〈0．01），Bax表达降低（19．07&;#177;1．63，14．11&;#177;1．21，P〈0．01）；与缺血预处理组比较，亚低温预处理组Bcl-2表达仍有所升高（15．03&;#177;1．44，18．17&;#177;2．03，P〈0．05），Bax表达仍降低（14．11&;#177;1．21，11．58&;#177;1．04，P〈0．05）。②各组肠黏膜损伤分级情况：假手术对照组肠黏膜基本正常，损伤均为0级；缺血再灌注组肠黏膜损伤Ⅱ级2只，Ⅲ级3只，Ⅳ级3只，明显高于假手术对照组（P〈0．01）；缺血预处理组肠黏膜损伤Ⅰ级2只，Ⅱ级4只，Ⅲ级2只，明显低于缺血再灌注组（P〈0．01）；亚低温预处理组肠黏膜损伤0级1只，Ⅰ级3只，Ⅱ级4只，低于缺血预处理组（P〈0．05）。③各组肠黏膜组织学形态电镜观察结果：假手术对照组肠黏膜上皮微绒毛排列整齐，各细胞器形态正常；缺血再灌注组肠黏膜上皮微绒毛稀疏、变短、脱落，线粒体明显肿胀，空泡变性，内质网排列紊乱、肿胀；缺血预处理组肠黏膜上皮微绒毛排列基本整齐，线粒体内质网轻度肿胀；而亚低温预处理组肠黏膜上皮微绒毛排列整齐，线粒体内质网肿胀不明显。结论：肠缺血再灌注前进行缺血预处理可以上调Bcl-2蛋白的表达，并下调Bax蛋白的表达，从而抑制肠缺血再灌注诱导的细胞凋亡以保护缺血再灌注肠损伤。亚低温状态能增强缺血预处理的保护作用。     

电刺激足三里穴对肠缺血再灌注损伤的治疗作用

肠道的缺血再灌注损伤普遍存在于创伤、休克、肠梗阻以及器官移植手术中，目前认为其损伤机理与超氧自由基的大量产生有重要关系。早期采用有效措施对减轻肠损伤有重要意义。在临床上，电针对肠缺血再灌注损伤的恢复的确有疗效。但对其治疗作用机制的报道较少。为此，本实验应用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase，NADPH-d）组织化学方法和生化检测技术，     

细胞凋亡与肝移植缺血再灌注损伤

背景：肝脏缺血再灌注损伤是影响肝脏移植效果的重要因素,细胞凋亡是移植肝缺血再灌注损伤的重要机制之一。目的：就近年来细胞凋亡与移植肝缺血再灌注损伤的研究做一综述,为抗细胞凋亡在减轻器官缺血再灌注损伤的临床应用提供参考依据。方法：由第一作者检索1990/2010PubMed数据库及中国期刊全文数据库有关细胞凋亡及器官移植缺血再灌注损伤的关系的文献,检索词为＂apoptosis,organ transplantation,ischemia-reperfusion injury＂。排除重复性研究。计算机初检得到339篇文献,最终纳入39篇文献进行下一步分析。结果与结论：文章从肝脏移植缺血再灌注损伤中的细胞凋亡,移植肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡发生的机制,移植肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡的基因表达变化,抗凋亡治疗与防治肝移植缺血再灌注损伤几方面进行了叙述。细胞凋亡与移植肝缺血再灌注损伤有着密切的关系。而抑制细胞凋亡可以有效的减轻移植肝的缺血再灌注损伤,对提高移植物的存活率有着重要的意义。     

细胞凋亡与肝移植缺血再灌注损伤

背景:肝脏缺血再灌注损伤是影响肝脏移植效果的重要因素,细胞凋亡是移植肝缺血再灌注损伤的重要机制之一.目的:就近年来细胞凋亡与移植肝缺血再灌注损伤的研究做一综述,为抗细胞凋亡在减轻器官缺血再灌注损伤的临床应用提供参考依据.方法:由第一作者检索1990/2010 PubMed 数据库及中国期刊全文数据库有关细胞凋亡及器官移植缺血再灌注损伤的关系的文献,检索词为"apoptosis,organ transplantation,ischemia-reperfusion injury".排除重复性研究.计算机初检得到339篇文献,最终纳入39 篇文献进行下一步分析.结果与结论:文章从肝脏移植缺血再灌注损伤中的细胞凋亡,移植肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡发生的机制,移植肝缺血再灌注损伤中细胞凋亡的基因表达变化,抗凋亡治疗与防治肝移植缺血再灌注损伤几方面进行了叙述.细胞凋亡与移植肝缺血再灌注损伤有着密切的关系.而抑制细胞凋亡可以有效的减轻移植肝的缺血再灌注损伤,对提高移植物的存活率有着重要的意义.     

纳洛酮对肺再灌注损伤诱导细胞凋亡的影响

目的 研究纳洛酮对大鼠肺缺血-再灌注(ischemia/reperfusion injury,I/R)损伤中细胞凋亡及血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的影响.方法 实验于南京医科大学附属南京第一医院动物实验中心进行,雄性SD大鼠42只,随机(随机数字法)均分为对照组(Sh组)、缺血-再灌注组(IR组)、纳洛酮组(Na组).I/R组钳夹肺门远心端,阻断肺门(以肺无舒缩为阻断标准),建立在体肺I/R损伤模型.Na组在该基础上予纳洛酮1 mg·kg-1腹腔注射,各组分别于3,6 h点取标本,用Annex-in-V-PI双染法检测肺组织凋亡细胞并计算凋亡率,测算肺湿于比(W/D),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HO-1的mRNA表达,电镜观察肺超微结构改变.采用Stata 9.0统计软件行统计学分析.结果 IR组与Sh组相比,3,6 h点肺组织凋亡率明显增加,W/D显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01);IR组3,6 h点,HO-1的mRNA表达与肺组织凋亡率、W/D呈显著负相关(P<0.01).与IR组相比,Na组3,6 h点肺组织凋亡率明显减少,W/D显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01).肺组织HO-1表达显著增加(P<0.01),肺组织超微结构损害明显减轻.结论 在肺1/R损伤早期,纳洛酮可以诱导HO-1的mRNA表达大量表达从而抑制细胞凋亡的发生,起到保护作用.