miR-106b对肝癌细胞放疗敏感性的影响及其作用机制

目的 探讨miR-106b对肝癌细胞放疗敏感性的影响及其可能的作用机制.方法 采用qRT-PCR检测人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、SK-HEP-1、Huh7及正常肝细胞株QSG7701 中miR-106b mRNA 的表达.用miR-106b siRNA转染HepG2细胞(miR-106b下调组),并设空...     

细胞角蛋白13通过PTEN抑制PI3K/AKT/mTOR通路增强鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性

目的:探讨细胞角蛋白13(cytokeratin13,CK13)对鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性的影响及其作用机制.方法:将HNE1细胞分为对照组、anti-CK13#a组及anti-CK13#b组(敲减CK13)、对照组+西罗莫司处理组(100nmol/L的西罗莫司处理1 h)、anti-CK13#a+西罗莫司处理组(...     

miRNA-1对胃癌细胞体外EGFR-TKI敏感性影响的实验研究

目的 探讨上调或沉默miRNA-1(miR-1)表达对胃癌细胞体外表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)敏感性影响的研究.方法 选择人胃癌细胞系MKN-45作为受试对象,慢病毒转染miR-1或miR-1 shRNA,分别作为miR-1组和miR-1 shRNA组,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测...     

硫酸右旋糖酐对卵巢癌细胞A2780增殖和迁移及侵袭机制研究

目的 观察硫酸右旋糖酐(DS)对人卵巢癌细胞A2780生物学行为的影响及可能的分子机制.方法 体外培养人浆液性卵巢癌细胞A2780,将其分为空白对照组、不同浓度(质量分数分别为0.1％、0.3％、0.6％和1％)DS处理组及1％DS+AKT激动剂组.通过细胞增殖实验、划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验检测A27...     

LY294002抑制PI3K/AKT信号通路对胃腺癌SGC-7901细胞的影响

目的：观察应用PI3K抑制剂2- （4-吗啉基） -8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮 （LY294002） 对胃腺癌细胞株SGC-7901中磷脂酰肌酸3-激酶 （PI3K） /丝氨酸苏氨酸激酶 （AKT） 信号通路的变化以及由此产生的细胞生长、 侵袭及凋亡等方面的影响。方法： 应用LY294002作用于胃腺癌细胞株SGC-7901, 通过Western blot检测PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质P-AKT、 基质金属蛋白酶-2 （MMP-2）、 基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）、 B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、 细胞周期素 （CyclinD1） 的表达情况。噻唑蓝比色法 （MTT） 和流式细胞法及Transwell等实验评价胃腺癌细胞增殖、 侵袭、 凋亡等变化。结果： 与空白对照组和DMSO组相比,LY294002组能有效抑制P-AKT、 MMP-2、 MMP-9、 Bcl-2及CyclinD1蛋白的表达。LY294002组自第2天起生存率明显下降 （P<0.05）。Transwell穿过细胞数结果分别为空白对照组 （81.0±2.65）、 DMSO组 （81.3±1.52）、 LY294002组 （44.6±2.52）, 3组相比较差异具有统计学意义 （F=255.1, P=0.000）。LY294002组细胞周期被阻滞在G0/G1期, S期减（P<0.05）, 早期凋亡的细胞数明显增多（F=149.66, P=0.000）。结论： LY294002是一种对PI3K/AKT信号传导通路具有抑制作用的抑制剂, 靶向PI3K的LY294002可以有效抑制胃腺癌SGC-7901细胞的PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质的表达, 在体外显著抑制细胞的增殖、 侵袭, 并促进细胞的凋亡, 因此为临床肿瘤防治提供了新思路, 针对信号传导通路的靶向治疗有望成为肿瘤治疗的新途径。     

miRNA-381表达及其与鼻咽癌放疗敏感性的关系

目的:观察人鼻咽癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系.方法:采用RT-PCR法测定正常鼻咽部上皮细胞株NP460,人鼻咽癌细胞株CNE-2,放疗抵抗细胞株CNE-2R及20例符合纳入标准的鼻咽癌组织中miRNA-381的表达.完成放疗后3个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效.所有病例都有2年或2年以上随访记录,根据随访记录制定放疗敏感性评估标准.采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性.结果:入组患者根据放疗敏感性评估标准,分为放疗抵抗组(7例)和放疗敏感组(13例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P＜0.01).克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为NP460＞ CNE-2＞CNE-2R,且有显著统计学差异(P＜0.01).RT-PCR结果显示正常鼻咽部上皮细胞株NP460中miRNA-381表达量高于鼻咽癌细胞株,放疗抵抗细胞株CNE-2R中miRNA-381表达量远低于其亲代细胞株CNE-2.近期疗效和鼻咽癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.77,P ＜0.000 1).结论:miRNA-381在放疗抵抗的鼻咽癌细胞及临床标本中的表达量显著低于放疗敏感的细胞及组织.miRNA-381相对表达量越高的鼻咽癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好.     

PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响研究

目的 探讨PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 选用PI3K/MTOR双重阻断剂NVP-BEZ235体外处理肾癌A498细胞,浓度分别为0、100、250、500 nmol/L.48 h后采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肾癌A498细胞中AKT和MTOR蛋白磷酸化情况;MTT法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western blot法检测细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达变化.结果 肾癌A498细胞中p-AKT、MTOR、p-MTOR、E-Cadherin、PTEN的表达及细胞增殖率、迁移率、穿膜细胞数量各自在不同NVP-BEZ235浓度下比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01).与0 nmol/L组比较,100、250、500 nmol/L的NVP-BEZ235处理肾癌A498细胞后,细胞中磷酸化蛋白p-AKT和p-MTOR的表达均下调,细胞增殖率下降,细胞迁移率下降,穿膜细胞数量减少,细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达均上调,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 通过阻断PI3K/AKT/MTOR信号通路可以抑制肾癌A498细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与上调细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达有关.     

七氟烷通过抑制PI3K磷酸化抑制结肠癌SW480 细胞的增殖和侵袭以及裸鼠移植瘤的生长

目的：探讨七氟烷（sevoflurane）通过调控PI3K磷酸化对结肠癌SW480 细胞增殖和侵袭以及裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法：采用七氟烷处理结肠癌SW480 细胞,将细胞随机分为对照组、0.5%七氟烷组、1.0%七氟烷组和2.0%七氟烷组进行后续实验。用克隆形成实验检测SW480 细胞的增殖能力,RT-PCR 检测细胞中MDM2、survivin mRNA表达水平,Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,Western blotting 检测细胞中MDM2、survivin、VEGF、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白的表达水平。并加入PI3K激活剂740 Y-P 进行验证。建立裸鼠SW480 细胞移植瘤模型,称取肿瘤质量,免疫组化检测移植瘤组织中MDM2 和VEGF阳性表达率。结果：与对照组和低剂量组比较,1.0%和2.0%七氟烷组SW480 细胞的克隆形成率显著降低（均P<0.01）;细胞中MDM2 mRNA和蛋白水平显著升高（均P<0.01）,survivin mRNA和蛋白水平显著降低（均P<0.01）;SW480 细胞侵袭数显著降低（P<0.01）,VEGF、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 蛋白水平显著降低（均P<0.01）。740Y-P 可逆转七氟烷对SW480 细胞增殖、侵袭及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。2.0%七氟烷组小鼠移植瘤质量显著降低（P<0.01）,瘤组织中MDM2 阳性表达率显著升高（P<0.01）、VEGF阳性表达率显著降低（P<0.01）。结论：七氟烷抑制结肠癌SW480 细胞的增殖和侵袭以及裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能是通过抑制PI3K磷酸化实现的。     

芋螺多肽AuIB对小鼠骨癌痛的影响及其作用机制

目的 探讨芋螺多肽AuIB在骨癌痛小鼠中的镇痛作用及其可能的作用机制。方法 将36只C57BL/6小鼠随机分成假手术组(SHAM组）、骨癌痛组(BCP组）、生理盐水对照组(NS组）、低剂量（0.6 mg/kg）AuIB给药组(AuIB1组）、中剂量（1.2 mg/kg）AuIB给药组（AuIB2组）和高剂量（2.4 mg/kg）AuIB给药组（AuIB3组）。术后第14天利用X影像和HE染色观察小鼠股骨病理学变化情况;分别于癌细胞接种前1 d以及接种后3 d、5 d、7 d、11 d和14 d时检测机械缩足阈值;Western blot法检测脊髓L4-L5段背根神经节和大脑皮层组织中PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达水平。结果 与SHAM组相比,术后14 d BCP组的X影像提示骨质破坏,HE染色提示癌细胞浸润;与SHAM组相比,术后第7天起BCP组的机械缩足阈值明显降低（P<0.05）;与BCP组相比,AuIB1组、AuIB2组和AuIB3组分别在术后第14 d、11 d和7 d出现机械缩足阈值明显升高（均P<0.05）;与BCP组相比,AuIB3组背根神经节和大脑皮...     

非小细胞肺癌放疗抵抗研究进展

放射治疗是非小细胞肺癌的重要治疗手段之一,而肿瘤放疗抵抗限制了放疗的疗效。提高放疗疗效仍是目前非小细胞肺癌患者治疗中亟待解决的重要难题之一。研究PI3K/AKT/mTOR信号通路、肿瘤干细胞、微小RNA、HGF/c-Met、常规分割放疗等在非小细胞肺癌放疗抵抗中的作用机制,对提高非小细胞肺癌患者的生存率及改善非小细胞肺癌患者的预后具有重要意义。     

木香烃内酯对人胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制

目的：探讨木香烃内酯（costunolide,Cos）对人肝内胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法：以不同质量浓度（0、2、4、6、8、12、16、20 μg/ml）Cos 作用RBE细胞,通过CCK-8 法、流式细胞术分别检测Cos 对细胞增殖能力和周期分布的影响,Annexin V-FITC/PI 双染法、Transwell 小室实验分别检测Cos 对细胞凋亡和迁移侵袭的影响,qRT-PCR检测与侵袭相关因子MMP2、MMP9 mRNA的表达,Western blotting 检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果：Cos 能够显著抑制RBE细胞的增殖活性（P<0.05 或P<0.01),阻滞细胞周期于S、G2/M期,同时诱导RBE细胞的凋亡(P<0.01)、且呈质量浓度依赖性,Transwell及qRT-PCR 结果显示Cos 能够显著抑制RBE 细胞的侵袭能力、降低侵袭相关转录因子MMP2 和MMP9 mRNA的表达,Western blotting 结果显示Cos 明显抑制p-AKT、Bcl-2、MMP2 及MMP9 的表达,但促进Bax 的表达。结论：Cos 通过抑制PI3K/AKT信号通路降低胆管癌RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

溶血磷脂酸通过调控PI3K/AKT信号通路对骨肉瘤细胞黏附和迁移的作用

摘 要：［目的］ 研究溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）在骨肉瘤细胞黏附和迁移中的作用及其相关分子机制。［方法］通过黏附和划痕实验观察细胞黏附和迁移能力;q-PCR和Western blot检测骨肉瘤细胞系(Mg-63,SaOS-2,HOS-8603)中溶血磷脂酸受体（lysophosphatidic acid receptor,LPAR）的表达,分析LPAR的表达与肿瘤细胞迁移侵袭之间的关系;黏附和划痕实验检测LPA处理后对骨肉瘤细胞黏附和迁移的影响;Western Blot检测LPA对骨肉瘤细胞黏附和迁移相关信号通路蛋白的影响。［结果］ 细胞黏附和迁移能力检测结果显示Mg-63细胞的黏附和迁移能力最强,SaOS-2细胞黏附和迁移能力最弱。细胞中LPAR检测结果显示Mg-63、SaOS-2、HOS-8603三株细胞中LPAR1、LPAR2、LPAR3均有不同程度的表达,其中Mg-63细胞中LPAR1、LPAR2、LPAR3表达均为最高。LPA处理SaOS-2细胞后,其黏附和迁移能力均明显下降;Western Blot结果显示LPA处理后,SaOS-2细胞中PI3K、p-AKT、CD44表达均明显上调。［结论］ LPA可能主要通过PI3K/AKT通路促进骨肉瘤细胞黏附和迁移。     

miRNA-93在膀胱癌中的表达及其对T24细胞生物学特性的影响

目的：探讨miRNA-93在膀胱癌中的表达及对人膀胱癌细胞株T24细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法：选取郑州大学附属南阳市中心医院泌尿外科2010年5月至2016年5月收治的79例膀胱癌患者病理组织标本及配对癌旁正常组织,通过qRT-PCR检测miRNA-93的表达水平。沉默miRNA-93后,采用CCK-8法、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞增殖和迁移能力的变化及细胞的凋亡情况;Western blotting检测AKT/p-AKT、GSK3β/p-GSK3β蛋白表达水平的变化。结果：miRNA-93在膀胱癌组织及癌细胞中高表达,且表达水平与癌灶大小、淋巴结转移、病理分级及T分期有关（均P<005）。沉默miRNA-93后,T24细胞的增殖能力显著降低（P<0.05）,沉默miRNA-93促进T24细胞的凋亡并抑制其迁移;同时,沉默miRNA-93后p-AKT和p-GSK3β的蛋白表达水平均显著下降（P<0.05）。结论： miRNA-93能够促进人膀胱癌细胞株T24细胞的增殖和迁移,并抑制凋亡,其作用机制可能与下调p-AKT、p-GSK3β蛋白表达有关,提示miRNA-93可以作为诊断和靶向治疗膀胱癌的潜在作用位点。     

吉西他滨对肺癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨吉西他滨对肺癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法选取对数生长期的肺癌NCI-H292细胞随机分为吉西他滨组、阿霉素组和对照组,分别采用7μmol/L的吉西他滨、阿霉素与生理盐水处理,采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移与侵袭,Annexin V-PI双标记法检测细胞凋亡,Western blot实验检测PI3K和AKT蛋白表达。结果细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞增殖指数均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞迁移与侵袭指数均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞凋亡指数均高于对照组,吉西他滨组高于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组PI3K和AKT蛋白表达水平均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论吉西他滨可促进肺癌...     

PI3K/AKT/mTOR信号通路介导乳腺癌内分泌治疗耐药的研究进展

内分泌治疗在激素受体阳性乳腺癌患者中的地位越来越受到重视,可以明显改善患者预后.内分泌治疗耐药严重制约着其临床应用,但耐药机制仍不明确,目前认为多信号通路激活参与耐药形成,其中PI3K/AKT/mTOR信号通路在耐药机制中发挥重要作用.临床试验提示,在内分泌治疗的基础上阻断信号通路可以逆转耐药,研究结果令人鼓舞.本文对PI3K/AKT/mTOR信号通路在内分泌耐药机制中的作用进行综述.     

XIAP基因对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨沉默X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因表达对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:参照LipofectamineTM2000说明将设计合成的XIAP特异性siRNA（si-XIAP）转染人食管癌EC9706细胞,将转染阴性对照siRNA(NC组）和仅加入脂质体的空白细胞作为两个对照组,siRNA转染48 h,通过Western blotting检测XIAP、AKT、p-AKT、E-cadherin和MMP-2蛋白表达;通过MTT法、Transwell法分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力;MTT法检测转染siRNA后24 h、48 h和72 h的细胞增殖。结果:XIAP特异性siRNA转染后,EC9706细胞XIAP表达明显降低,与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）。与空白组比较,si-XIAP组细胞增殖明显降低,黏附率明显升高,侵袭和迁移能力明显降低,p-AKT和MMP-2表达明显降低,E-cadherin表达明显升高（P<0.05）。结论:沉默XIAP基因可增强食管癌细胞黏附率,抑制侵袭和迁移能力,机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

PI3K/AKT信号通路与前列腺癌关系的研究进展

近年来针对前列腺癌靶向治疗的研究作为新的热点受到越来越多的关注,主要集中在非AR途径的通路及靶点的探索,其中较为成熟且具有明显研究价值的途径之一是磷脂酰肌3-羟激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路.研究表明,该信号通路的异常活化与疾病的发展和转归有显著相关性,在机体细胞的生长、增殖、凋亡以及炎症反...     

丹皮酚通过下调miR-21并抑制PI3K/AKT通路抑制Hela细胞侵袭、转移及增殖

目的:探讨丹皮酚对Hela细胞增殖、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法:使用不同浓度（50、100、200 和400 mg/L）丹皮酚处理Hela细胞株,分为正常对照组（NC组）、不同浓度丹皮酚组、miR-NC组、miR-21组、丹皮酚+miR-NC和丹皮酚+miR-21组。PI3K的激动剂740Y-P (25 μg/mL)加入丹皮酚组、 NC组,分别定义为丹皮酚+740Y-P组、740Y-P组。MTT检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力;实时荧光定量PCR检测细胞miR-21表达水平;Western blot检测细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、MMP9水平。结果:丹皮酚可抑制Hela细胞增殖能力（P＜0.05）,抑制作用与浓度呈正相关。选择200 mg/L的丹皮酚进行后续研究。与NC组比较,丹皮酚组侵袭及迁移细胞数量、MMP2蛋白、MMP9蛋白、miR-21表达水平明显降低（P＜0.01）。与NC组比较,丹皮酚组细胞凋亡率增加,G1期延长,S期、G2期缩短（P＜0.01）。与NC组、miR-NC组相比,48、72 h 时miR-21组细胞活力明显升高（P＜0.05）,克隆、侵袭及迁移细胞数量明显升高(P＜0.05)。与丹皮酚组、丹皮酚+miR-NC组比较,丹皮酚+miR-21组克隆、侵袭及迁移细胞数升高（P＜0.05）。与NC组比较,丹皮酚组细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显下降（P＜0.01）;与丹皮酚+miR-NC组比较,丹皮酚+miR-21组细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）。与丹皮酚组比较,丹皮酚+740Y-P组克隆、侵袭及迁移细胞数升高（P＜0.01）,与740Y-P组比较,丹皮酚+740Y-P组克隆、侵袭及迁移细胞数降低（P＜0.01）。结论:丹皮酚可下调miR-21,抑制PI3K/AKT通路,进而抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移。