多重实时荧光定量PCR对9种常见呼吸道病原体检测

目的探讨多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)检测9种常见呼吸道病原体的临床应用价值。方法采用Primer Express3.0(ABI)和Primer3 Input 4.0设计引物和探针建立MRT-PCR法,通过构建质粒标准品分析该方法的最低检出限和特异性。并对204例临床标本中副流感病毒1、2、3型、肺炎支原体、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒进行回顾性检测。结果 MRT-PCR法检测病原体的最低检出限达103copies/m L,特异性达100%,无交叉反应。204例咽拭子标本中,MRT-PCR检出呼吸道合胞病毒23例,副流感病毒1、2、3型13例,腺病毒15例,肺炎支原体15例,肺炎衣原体3例,甲型流感病毒13例与乙型流感病毒6例。该结果与其他试剂报告结果完全一致。结论多重实时荧光定量PCR具有快速、准确、特异性强等特点,在呼吸道病原体检测方面有重要价值。     

多重PCR检测儿童呼吸道感染常见病毒

目的 对深圳、粤东地区儿童呼吸道病毒感染进行监测、分析,探讨其流行规律.方法 2006年6月-2008年6月,于汕头大学附属医院、深圳市第四人民医院、揭阳市人民医院采集毛细支气管炎、支气管肺炎、喘息支气管炎等的患儿咽拭子或鼻咽分泌物标本686份,多重PCR进行9种呼吸道病毒检测.结果 在686例标本中病毒阳性362例(52.77%),其中呼吸道感染患儿中呼吸道合胞病毒(RSV)感染占首位,达到31.22%(113/362),其次是鼻病毒(RHV)为16.85%(61/362),最低是流感病毒B型(IVB)占0.83%(3/362),流感病毒A型(IVA)占14.36%(52/362),副流感病毒1型(PIV1)和副流感病毒3型(PIV3)分别占7.73%(28/362)和8.29%(30/362),腺病毒(AdV)达到9.67%(35/362),而人博卡病毒(hBOV)和人偏肺病毒(hMPV)分别占6.08%(22/362)和4.97%(18/362).结论 RSV、RHV及IVA是华南地区儿童呼吸道感染的主要病毒病原,混合感染以RSV、IVA联合其他病毒感染为主,诊治时应根据所感染病原体制定有针对性的措施.     

自动巢式多重PCR系统在呼吸道感染病例中快速检测呼吸道病原体的应用

目的 探讨自动巢式多重PCR系统在呼吸道感染病原体快速诊断中的应用价值.方法 2016年11月至2017年3月收集120例呼吸道感染患者的呼吸道标本和临床流行病学资料,利用自动巢式多重PCR系统对120份鼻咽拭子标本进行病原检测,对检测结果和临床资料进行统计学分析.结果 120份标本中单一病原检出68份,2种及2种以上病原混合检出22份,总检出率为75.0％(90/120),检出结果中以甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒、百日咳杆菌为主.结论 自动巢式多重PCR系统敏感度高、特异性强,对呼吸道感染患者的病原学快速诊断具有重要价值.     

多重实时PCR检测三种呼吸道病毒

目的建立多重实时PCR检测体系可同时快速检测引起人呼吸道感染的甲型流感病毒（IAV）、呼吸道合胞病毒（RSV）和SARS冠状病毒（SARS-CoV）。方法通过对PCR反应条件的优化，建立了同时检测IAV、RSV和SARS-CoV的多重实时PCR方法。结果经熔解曲线分析，证实了该法可同时或分别检测3种重要呼吸道病毒。检测灵敏度分别为10^0.7 TCID50／ml、1 TCID50／ml和10^-0.5 TCID50／ml。采用相同的反应体系和条件，分别对其他7种呼吸道病毒（包括乙型流感病毒，副流感病毒2型，柯萨奇病毒B3和B5血清型及腺病毒2、3和7血清型）进行扩增，均未检测出扩增产物。此种方法可在4h内完成。结论建立的多重实时PCR检测方法适用于3种重要呼吸道病毒的快速检测。     

多重PCR技术检测小儿咽拭子呼吸道病毒的临床分析

目的 研究多重荧光聚合酶链式反应（PCR）技术对小儿咽拭子呼吸道病毒、病原菌检测的应用价值。方法 筛选2018年1月~12月到乌鲁木齐市社区服务门诊就诊的社区获得性肺炎（CAP）患儿524例,采用多重PCR技术检测患儿咽拭子病原菌,分析CAP病原菌的分布情况及其与年龄、季节等的关系。结果 CAP病原检测结果大部分属于病毒性,以乙型流感病毒、肺炎衣原体、肺炎支原体等为主,细菌类以肺炎克雷伯菌等为主;与患儿年龄、季节有关,3岁以下患儿仍是CAP的主要发病年龄段,尤其是婴幼儿最多,发病多集中在秋季和冬季;2种以上病原混合感染形式严峻。结论 多重PCR技术对小儿咽拭子病原菌检测的应用效果良好,快捷方便。     

基于多重RT-PCR检测法的儿童呼吸道病原体流行特征

目的:了解宁波市儿童呼吸道感染病原体的流行特征,为临床防控和诊治提供参考依据。方法:收集2019年7～10月份间宁波市妇女儿童医院就诊急性呼吸道感染患儿的标本共3 103例,通过基于毛细电泳的多重RT-PCR法检测常见的13种呼吸道病原体,并对结果进行统计分析。结果:3 103例患儿中2 053例呼吸道病原体检测阳性,...     

3820例呼吸道感染患儿病原体的检测结果及流行病学特点分析

目的:了解垫江地区儿童呼吸道病原体流行情况,为疾病的预防和诊治提供实验室依据.方法:回顾性分析2018年1月至2020年10月本院收治的3820例呼吸道感染患儿入院时检测的血常规、血清淀粉样蛋白A(Serum amyloid A,SAA)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)结果及采用间接免疫荧光...     

应用PCR技术检测小儿呼吸道病原体的研究

本文应用PCR技术检测了1370例患者的肺炎支原体（MP）阳性检出率为12．92％，EB病毒（EBV）阳性检出率为14．52％，腺病毒（AV）阳性检出率为12．35％。这些病原体在小儿呼吸道中感染十分常见，可引起上呼吸道感染、咽炎、肺炎及其他系统炎症。因此早期诊断具有较高的临床意义和流行病学意义。     

多重PCR技术和呼吸道病原体微流体芯片在诊断儿童急性呼吸道病毒感染中的应用

目的 了解多重PCR技术(RespiFinder?SMART 22检测试剂盒)和呼吸道病原体微流体芯片技术(TaqMan array cards, TAC)在诊断儿童急性呼吸道感染(acute respiratory infection, ARI)中的应用价值。方法 从2018年8月份至2019年8月份采集的成都市儿童专科医院275例有ARI症状的患儿咽拭子样本中随机选择120份样本,分别使用RespiFinder?SMART 22和TAC进行呼吸道病毒核酸检测,比较2种检测方法的优缺点。结果 120份儿童ARI标本经RespiFinder?SMART 22和TAC检测,阳性率分别为88.33%和93.33%,混合感染率分别为26.67%和35%。在120份样本中,2种方法检测结果一致率为88.33%,其中阳性一致性106例,阴性一致性7例。结果不一致的有7例。结论 多重PCR技术和TAC技术在此次实验检测中检出阳性样本一致性较高,两者对于呼吸道病毒检测均具有良好的临床应用价值。     

基于纳米金的比色分析法在核酸检测中的应用

随着纳米技术的发展,运用纳米粒子检测核酸成为研究的热点.在众多检测方法中,基于纳米金的比色分析法操作较为简便,只需普通光学仪器甚至肉眼即可观察结果,从而表现出广阔的市场及临床应用前景.基于纳米金的比色分析法有多种,不同检测原理的方法在灵敏度和实用性上存在差异.根据纳米金是否经寡核苷酸探针修饰可将其分为基于功能化纳米金的...     

908例呼吸道感染患者病原体的IgM抗体检测结果分析

目的 检测本院908例呼吸道感染患者九项呼吸道病原体的IgM抗体,从而了解九种病原体的流行特征.方法 采用间接免疫荧光法对908例呼吸道感染患者血液中九项病原体的IgM抗体进行检测分析.结果 本研究呼吸道感染患者血清IgM抗体检测总阳性率为36.1％ (328/908),合并感染率为13.4％ (122/908),在阳性病例中占37.2％(122/328).INFB+ PIVS合并感染最为常见.春夏季以INFB流行为主,秋冬季以PIVS流行为主.不同季节病原体检测阳性率差异有统计学意义(P＜0.05).秋冬季的阳性率高于春夏季.≤25岁年龄组和≥65岁年龄组人群最易感染INFB,26～64岁年龄组人群最易感染LP1.3个年龄组的阳性率差异有统计学意义(P＜0.05).不同性别病原体检测阳性率之间差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 重点季节预防相应病原体的流行和传播,持续监测病原体的IgM抗体有利于更好防控.     

Detection of respiratory viruses in adults with respiratory tract infection using a multiplex PCR assay at a tertiary center

BackgroundRespiratory viruses (RVs) are among the most common pathogens for both upper and lower respiratory tract infections (RTIs). However, the viral epidemiology of RV-associated RTIs in adults has long been under-recognized. Through a sensitive molecular assay, it would be possible to have a better understanding of the epidemiology of RV-associated RTIs.Material and methodsRespiratory tract (RT) specimens from adults hospitalized due to RTIs were tested for RVs, using the multiplex PCR-based Luminex xTAG® Respiratory Viral Panel assay. A total of nineteen RVs, including influenza viruses and non-influenza respiratory viruses (NIRVs) were detected. Positive rates were compared using a chi-square test.ResultsA total of 2292 samples from adult patients hospitalized with RTIs were screened for RVs. The overall positive rate was 22%, with 17.8% samples positive for at least one NIRV. NIRVs had a higher positive rate in non-winter seasons. As many as 12.7% (46/363) of the samples collected through broncho-alveolar lavage and 20.5% (176/859) of the samples collected in ICUs were positive for RVs. Distribution of corona virus (CoV), human metapneumovirus (hMPV) and parainfluenza virus (PIV) demonstrated seasonal variation. Also, temperature was associated with the positive rates of specific viruses, including CoV, respiratory syncytial virus (RSV), hMPV and PIV.ConclusionRespiratory viruses, notably NIRVs, were frequently detected in adults hospitalized with RTIs. Several RVs were detected with distinctive seasonal variations. A substantial number of RVs were identified in lower RT specimens or from patients admitted to ICU, highlighting their important role in causing severe respiratory infection.     

套式/多重PCR检测疟疾感染的应用研究

目的了解标签引物-套式/多重PCR技术在检测疟疾感染中的现场应用价值。方法随机采取我省疟疾流行区有发热症状的居民及家庭成员的耳垂血79份,同时制作厚血片和滤纸血样本各1份,用标签引物-套式/多重PCR检测所采集滤纸血样本中的疟原虫,并与镜检法进行比较。结果79份样本中,用标签引物-套式/多重PCR技术检出间日疟原虫阳性6例,镜检初检出10例间日疟原虫阳性,经复查血片后有4例排除了疟疾感染。镜检复核阳性的6例样本PCR均为阳性。以镜检复核为标准,两法阳性和阴性符合率为100%。结论标签引物-套式/多重PCR检测疟疾感染具高度敏感性和特异性,对疟疾鉴别诊断和明确诊断具有重要价值。     

Multiplex PCR and multiplex RT-PCR for inclusive detection of major swine DNA and RNA viruses in pigs with multiple infections

Multiplex PCR and multiplex RT-PCR were developed to identify nine viruses in pigs with multiple infections. These viruses are: porcine circovirus type 2 (PCV2), suid herpesvirus 1, porcine parvovirus (PPV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), Japanese encephalitis virus, porcine rotavirus A (PoRV-A), porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), transmissible gastroenteritis virus (TGEV), and Getah virus. These methods were shown to be high specificity and sensitivity. In the clinical application, a total of 75 field samples were examined by our methods and previously reported methods for PCV2, PRRSV, TGEV, and PEDV. As a result, the detection rates of our multiplex PCR and multiplex RT-PCR were higher than those of the previously reported methods. Furthermore, it was confirmed that 24 PCV2 positive samples were co-infected with other viruses, 11 with PRRSV, 10 with PPV, 2 with PoRV-A, and 1 with TGEV by a combination of multiplex PCR and multiplex RT-PCR. PPV and PoRV-A were newly detected by multiplex PCR and multiplex RT-PCR. These results suggest that the combination of our multiplex PCR and multiplex RT-PCR is useful for rapid and accurate identification of nine major pathogenic viruses in pigs with multiple infections.     

PCT和CRP联合检测对儿童呼吸道感染的临床意义

目的 分析PCT和CRP联合检测对儿童呼吸道感染的临床意义。方法 回顾性分析2016年6月~2017年3月我院呼吸科300例呼吸道感染疾病患儿,根据临床诊断分为病毒感染组（126例）和细菌感染组（174例）,分析两组检测的PCT和CRP结果并计算其阳性率。结果 细菌感染组PCT阳性率为85.63%,CRP阳性率为67.82%;病毒感染组PCT的阳性率为29.37%,CRP阳性率为63.49%。细菌感染组PCT阳性率明显高于病毒感染组;细菌感染组CRP阳性率与病毒感染组无明显差异。结论 PCT在细菌感染阳性率优于CRP,二者联合检测鉴别诊断儿童细菌、病毒感染性疾病具有更高临床价值。     

PCT及炎症因子联合病原体抗体检测在成人呼吸道感染的诊断价值

目的 研究细菌性及非细菌性下呼吸道感染患者血清降钙素原(procalcitonin,PCT)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)变化及病原体组成,探讨联合检测在成人呼吸道感染的诊断价值.方法 选取70例下呼吸道感染患者,并依据其临床及病理表现分为细菌感染组及非细菌感染组.同期,选择30例健康人群作为对照组.收集患者治疗前及抗感染治疗2周后血清.分别采用全自动电化学发光免疫法、酶联免疫吸附法及间接免疫荧光法对血清PCT水平、IL-6水平及9种病原体进行检测.统计学方法对各组间及治疗前后指标的变化进行分析.结果 治疗前,三组患者血清PCT及IL-6均存在显著性差异,两指标阳性检出率在细菌感染组最高(P＜0.05).治疗后,细菌感染组及非细菌感染组两指标水平均降低,但PCT在非细菌感染组下降不明显(P＞0.05).从疾病预测诊断角度,PCT灵敏度及阴性预期值均高于IL-6,但特异性及阳性预期值略低于IL-6.两指标并联检测,灵敏度及阴性预期值均可提高到90％以上.本研究中细菌感染组及非细菌感染组9种病原体检出率分别为7.89％(3例)和46.88％(15例).结论 PCT、IL-6联合病原体检测,可以检测分辨患者感染的病原体类型,并提高细菌检测的灵敏度及特异性.     

儿童呼吸道感染者肺炎支原体及肺炎衣原体特异性抗体检测临床意义

目的 探究儿童呼吸道感染者肺炎支原体及肺炎衣原体特异性抗体检测临床意义。方法 选择我院2018年1月~8月收治的85例呼吸道感染患儿设为研究组,另选择同期在我院进行健康体检的85例儿童设为对照组,对照组采用ELISA法检测肺炎支原体及衣原体,研究组在此基础上行咽拭子培养法检测,比较两组肺炎支原体、衣原体抗体检出率,ELISA法与咽拭子培养法对肺炎支原体、衣原体抗体的阳性检出率,分析研究组呼吸道感染性疾病中肺炎支原体、衣原体抗体阳性分布情况。结果 研究组患儿肺炎支原体抗体MP-IgM抗体、MP-IgA抗体、MP-IgG抗体及肺炎衣原体特异性抗体CP-IgM抗体、CP-IgG抗体的检出率均高于对照组儿童,差异有统计学意义（P＜0.05）;ELISA法对肺炎支原体特异性抗体阳性的检出率为54.12%高于咽拭子培养法的36.47%,组间对比具有统计学意义（P＜0.05）;ELISA法对肺炎衣原体特异性抗体阳性的检出率为58.82%高于咽拭子培养法的37.65%,差异有统计学意义（P＜0.05）;肺炎支原体、肺炎衣原体抗体阳性在各种儿童呼吸道感染性疾病中均有表现,其中,肺炎和支气管肺炎的阳性检出率较咽炎、扁桃体炎均较高。结论 肺炎支原体、肺炎衣原体是引发肺炎和支气管肺炎感染的主要病原菌。