细胞粘附肽Arg-Gly-Asp的合成与生物活性检测

采用固相多肽合成法合成Ag-Gly-Asp(RGD)三肽,以天门冬氨酸计RGD三肽收率为75%,采用MTT法进行合成肽RGD抑制人纤维肉瘤细胞HT1080转移机理方面的研究,证实了人工合成的RGD肽能抑制人纤维肉瘤细胞HT1080与纤维连接蛋白(FN)的粘附.     

RGD对人纤维肉瘤细胞HT1080增殖、黏附及转移影响的研究

利用合成的RGD(Arg-Gly-Asp)三肽研究了其抑制人纤维肉瘤细胞HT1080的增殖、黏附及转移作用.采用MTT法检测了不同浓度的RGD对HT1080细胞增殖及黏附纤维粘连蛋白(fibronectin)能力的影响;采用细胞划痕法研究了RGD对HT1080细胞在纤维粘连蛋白中迁移能力的影响.结果表明,合成的RGD能抑制HT1080细胞的增殖,并具有抗肿瘤细胞黏附、抗转移的活性.     

掺Mg与接枝RGD的HAnps载体系统对MG63细胞胞吞功能的影响

采用水热合成法制备HAnps和掺镁HAnps(Mg-HAnps),通过硅烷化联合碳二亚胺法处理HAnps和Mg-HAnps后接枝黏附肽(RGD),以香豆素6(coumarin-6)为荧光探针标记HAnps,Mg-HAnps,RGD-HAnps和RGD-Mg-HAnps,并将其与人成骨肉瘤MG63细胞株(MG63)细胞共培养,研究掺Mg与接枝RGD的HAnps对MG63细胞胞吞作用的影响。研究结果表明:RGD-Mg-HAnps无细胞毒性,掺Mg与接枝RGD有利于MG63细胞胞吞HAnps颗粒,并有协同作用,RGD-Mg-HAnps具有介导胞吞的作用。     

化学-酶法合成RGD三肽

采用化学法和酶法相结合的合成策略,合成具有高生物活性肽RGD.先采用DCC合成GD二肽(HCl*Gly-Asp(oBzl)2),然后利用胰蛋白酶(trypsin)催化合成 RGD三肽(Z-Arg-Gly Asp(oBzl)2).实验结果表明,其中GD二肽在反应10 h,两底物G与D的摩尔比为1.5∶1时,得率为77.7%;RGD三肽在微水-1,4-丁二醇反应体系中得率为41.9%.     

姜黄素与阿霉素联合应用抗肿瘤的协同作用

研究姜黄素与阿霉素联合应用对人纤维肉瘤HT1080、人乳腺癌MCF-7、人肺癌A549细胞的增殖抑制作用及诱导肿瘤细胞凋亡的协同作用,探讨其抗肿瘤协同作用的机制,为临床寻找有效的化疗增敏剂提供实验依据和理论基础.MTT法测定细胞增殖抑制率,结果表明5μmol/L姜黄素与阿霉素联合用药对HT1080、MCF-7、A549细胞均表现出协同抗肿瘤作用;Hoechst 33258荧光染色观察A549细胞凋亡的形态学变化;Westernblot法检测A549细胞bcl-2蛋白的表达,结果表明姜黄素与阿霉素联合应用可显著诱导A549细胞发生凋亡,其协同抗肿瘤的机制可能与下调抑凋亡蛋白bcl-2表达有关.     

4种含RGD的短肽对细胞粘附作用的影响

从两方面对比研究了4种含Arg-Gly-Asp(RGD)的细胞粘附肽RGD,RGDS,RGD-(NH₂)₂即RGE-NH_{2和RGDS-NH2对细胞粘附的影响. 一方面研究了固定在聚乙交酯丙交酯共聚物（PLGA）膜上的4种细胞粘附肽通过其细胞定向作用对大肠癌细胞（HCT-8）和人成骨肉瘤细胞（OS732）细胞粘附性 的促进作用; 另一方面研究了外源性细胞粘附肽对HCT-8和OS732在纤维连接蛋白（FN）上粘附的竞争性抑制作用. 结果发现,除了RGD-(NH2)2,其他3种肽都具有明显抑制细胞粘附的作用且具有一定的浓度依赖关系,其中以RGDS和RGDS-NH2的能力最强,RGD稍弱. 对于HCT-8细胞,3种肽的最大抑制率分别为53.3%, 56.3%,37.5%;而对OS732细胞,3种肽的最大抑制率分别为50.9%,49.8%,34%.}     

精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸三肽的合成与生物活性检测

在生物材料表面上先接枝精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸三肽（Arg-Gly-Asp,RGD)，然后再在其上种植和培养内皮细胞，这是目前改善心血管材料血液相容性最好的方法之一。作者采用液相合成法合成了RGD三肽并对其进行了生物活性检测，证实用人工合成的RGD短肽接枝后具有促进材料与内皮细胞粘附的生物活性。     

RGD三肽的合成与生物活性检测

在生物材料表面上先接枝RGD,然后再在其上种植和培养内皮细胞,这是目前改善心血管材料血液相容性最好的方法之一。采用液相合成法合成了RGD 三肽并对其进行了生物活性检测,证实用液相合成的 RGD 短肽具有促进材料与内皮细胞粘附的生物活性。     

日本七鳃鳗Lj-RGD3毒素肽的3种单RGD模体突变体的克隆表达及其抑制Lewis细胞活性研究

为了评价Lj-RGD3 3个不同位点RGD模体的存在是否对该蛋白功能具有必要性及影响程度,采用全序列合成的方法合成了3种基于Lj-RGD3的RGD缺失突变体基因,并成功对其进行了pET23b载体的构建及重组蛋白的表达和纯化.将这3种分别保留第1位、第2位、第3位RGD模体的重组蛋白各命名为rLj-113、rLj-114和rLj-115.比较了这3种重组蛋白对Lewis小鼠肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并对其是否能引起Lewis肺癌细胞凋亡进行了测定.结果显示,rLj-113、rLj-114和rLj-115对Lewis的增殖半抑制浓度IC_(50)值分别为2.73,2.75,2.53μmol/L,并且以剂量依赖的方式抑制Lewis小鼠肺癌细胞的增殖;突变体蛋白还能抑制以bFGF(basic fibroblast growth factor)为趋化剂的Lewis小鼠肺癌细胞的迁移及侵袭.综上可知,rLj-RGD3蛋白的RGD模体的位置并不影响其在抗Lewis小鼠肺癌细胞的生物活性,而保留单RGD模体的突变体rLj-113、rLj-114、rLj-115仍然具有抑制Lewis小鼠肺癌细胞增殖、迁移、侵袭以及诱导Lewis细胞凋亡的生物学活性.     

三尖杉酯碱诱导HeLa细胞凋亡的研究

报道了三尖杉酯碱 (harringtonine ,HT)可以诱导HeLa细胞凋亡 .采用Heochst33342荧光染色、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术 (FCM)的方法 ,研究了HT对HeLa细胞凋亡的影响 .利用细胞同步化技术和斑点杂交法研究发现 ,HT影响了HeLa细胞c myc和bcl 2基因的表达并且与细胞周期密切相关 .初步探讨其凋亡诱导的机制 ,认为HT通过在G1和G2 期下调细胞凋亡抑制基因bcl 2的诱导凋亡 ,以及下调c myc癌基因阻滞细胞增殖 ,并延迟凋亡发生 .这些结果对于了解HT的药物作用机制和提高临床化疗疗效具有重要意义 .     

20(S)-原人参二醇衍生物对HT1080细胞侵袭转移的影响

检测了所合成的20(S)-原人参二醇衍生物GY1和GY2的抗肿瘤活性. GY1对HT1080、SMMC7721、A549的增殖有显著的抑制作用，呈明显的剂量依赖关系，IC₅₀分别为：35.2±0.9mg/L,29.6±1.1mg/L,24.1±1.5mg/L；而GY2并没有表现出的明显的细胞毒作用，其IC₅₀ 大于100mg/L. 5mg/L GY1作用48h可显著降低HT1080细胞对基底膜成分的粘附和侵袭能力，并对细胞的运动能力有一定影响；而相同浓度的GY2虽然对细胞的粘附性和侵袭性有一定影响，但对细胞的运动性却无明显的影响.     

Expression of reconstructive hFⅧ in the hrDNA by using hrDNA targeting vector

Our lab has constructed a new nonviral vector-hrDNA targeting vector（pHrneo）, pHrneo is a human derived vector that can target gene into human ribosomal DNA（hrDNA） locus. In this study, we inserted expression cassette of reconstructive hF Ⅷ （hFⅧ-BDDAK39） to pHrneo to construct targeting vector： pHrneo-BDDAK39. Through electroporation of pHrneo-BDDAK39 into HT1080 cells, we identified the homologous recombinants by PCR and Southen blotting, and tested the expression of hFⅧ- BDDAK39 in the hrDNA locus. The hFⅧ-BDDAK39 was successfully targeted into hrDNA locus of HT-1080 by pHrneo-BDDAK39, and the efficiency of site-specific integration was 2.0×10^-5. hFⅧ-BDDAK39 in hrDNA locus of HT-1080 is found to be able to express efficiently （32±5 ng·10^6 cells^-1 .24 h^-1）. Targeting vector pHrneo-BDDAK39 can find use in gene therapy for hemophilia.     

细胞粘附位点RGD三肽脂质体的制备及表征

对RGD（Arg-Gly-Asp）三肽脂质体载药剂型进行研究, 确定了薄膜超声法制备脂质 体的路线. 电子显微镜观察表明, 脂质体粒径均匀, 为100 nm右, 属于小单室脂质体. 脂质体中RGD量为2.4~2.5 mg/mL, 包封率达到70%. 脂质体稳定性较好, 而且具备pH 5.4~6.0的靶向性, 可能成为具有较好肿瘤细胞靶向性的脂质体制剂.     

抗人Connexin31单克隆抗体的获得与应用

间隙连接蛋白31(Connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(Connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少。本实验利用多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250-266AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫Balb/c小鼠、采血检测产生阳性抗体、脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合、筛选阳性克隆建株、分泌的抗体经Westernblotting、细胞免疫荧光染色证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31的特异抗体。     

准弹性光散射测量机理及其应用

准弹性光散射技术是生物学中一种新颖的技术，具有测量速度快，精度高等 优点。准弹性光散射测量原理是基于经典的多普勒效应，利用 Ｒａｙｌｅｉｇｈ－Ｇａｎｓ－Ｄｅｂｙｅ （ＲＧＤ）近似方法推导出微粒运动速度和频率变化之间关系。对生物微粒（精子与四膜 虫）进行测量表明 ＲＧＤ近似方法完全适用。     

Functionalization of PCL fibrous membrane with RGD peptide by a naturally occurring condensation reaction

Poly(e-caprolactone)(PCL)is widely adopted as an ingredient for tissue engineering scaffolds.To improve its cell affinity,in this study,we developed a new method to introduce bioactive RGD peptides onto the surface of PCL via condensation reaction between 2-cyanobenzothiazole(CBT)and D-cysteine.The PCL fibrous membranes were prepared by electrospinning,and RGD functionalization was characterized by fluorescence microscopy,scanning electron microscopy(SEM),X-ray photoelectron spectroscopy(XPS)and water contact angle(WCA).As expected,our results demonstrated the successful RGD immobilization on the surface of PCL.RGD modification improved the hydrophilicity of PCL,changing their WCA from 112.20°to38.35°.Cell adhesion,spreading and proliferation of 3T3fibroblasts were also enhanced.We therefore believe that the methods reported in this study was facile and effective for functional modification of the hydrophobic PCL scaffolds.The moderate reaction conditions are also suitable for covalent immobilization of bioactive molecules onto PCL.