吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的: 探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法: 雄性Wistar大鼠,随机分为2组:正常对照(NC)组和高脂饮食(HFD)组。喂养8周后高脂饮食组大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ, 27 mg/kg),以随机血糖≥16.7 mmol/L为2型糖尿病大鼠造模成功。将成模大鼠随机分为2组:糖尿病模型(DM)组和PDTC (50 mg·kg^-1·d^-1, ip)治疗组。治疗1周后断头处死大鼠,留取各组血浆、尿液及肾脏标本。测定各组血糖、尿微量白蛋白/肌酐比值、肾皮质组织中丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;经HE及Masson染色观察大鼠肾小球形态学变化;透射电镜观察肾脏微血管超微结构改变;免疫组化观察肾脏组织中诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和硝基酪氨酸(NT)的表达。结果: PDTC治疗组血糖和尿微量白蛋白/肌酐比值较DM组明显降低(P<0.01)。DM组肾皮质组织中MDA含量明显高于NC组, GSH-Px和SOD的活性明显低于NC组(P<0. 05) 。HE及Masson染色显示,DM组肾小球体积增大,肾小管扩张,系膜区扩张,Masson染色阳性物质增多,提示肾小球毛细血管基底膜增厚;PDTC治疗组病理改变较DM组明显改善。电镜超微结构显示,DM组基底膜高度增厚,厚度不均,有断裂层,足突融合;PDTC治疗组基底膜轻度增厚,足突轻度融合。免疫组化显示,DM组iNOS和NT表达量较NC组明显增多(P<0.05);PDTC治疗组iNOS和NT表达量较DM组明显减少(P<0.05)。结论: PDTC不仅具有降低血糖作用,而且可通过减少iNOS和NT表达改善糖尿病肾脏损害。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对2型糖尿病大鼠肝糖原合成的影响

目的:探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对糖尿病大鼠肝糖原合成的影响及其机制。方法:雄性Wistar大鼠,随机分为2组:正常饮食组和高脂饮食组。喂养8周后,高脂饮食组大鼠腹腔注射单剂量链脲佐菌素(STZ)27 mg/kg复制2型糖尿病大鼠模型,2型糖尿病大鼠造模成功后随机分为3组:糖尿病模型组、PDTC治疗组和胰岛素治疗组。PDTC治疗组大鼠每天腹腔注射PDTC(50 mg/kg)1次;其它各组每天同一时间注射相同体积的生理盐水,胰岛素治疗组大鼠在处死前1 h腹腔注射胰岛素(1 U/kg)1次。治疗1周后尾静脉采血测定各组大鼠血糖水平,然后断头处死大鼠,测定肝组织中肝糖原的含量,采用Western blotting分析大鼠肝脏中蛋白激酶B(PKB/Akt)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化水平的变化。结果:糖尿病模型组与正常饮食组大鼠相比血糖显著升高(P0.01);肝糖原含量明显减少(P0.01);肝脏中Akt及GSK-3β磷酸化水平明显降低(P0.01)。与糖尿病模型组大鼠相比,PDTC治疗组与胰岛素治疗组大鼠肝糖原合成均显著增加(P0.01);血糖均明显降低(P0.01);肝脏中Akt和GSK-3β磷酸化水平均明显增加(P0.01)。结论:PDTC可通过调控Akt/GSK-3β活性,增加肝糖原合成,降低血糖。     

姜黄素对糖尿病大鼠心肌的保护作用*

 目的： 研究姜黄素对糖尿病大鼠心肌的保护作用及可能机制。方法: 雄性Wistar大鼠75只,随机抽取10只大鼠作为正常对照组,其余65只大鼠给予高糖高脂饮食喂养8周后腹腔注射链脲佐菌素40 mg/kg,给药72 h和7 d空腹血糖≥11.6 mmol/L为糖尿病模型成功大鼠。糖尿病大鼠随机分为糖尿病心肌病组、姜黄素小剂量治疗组和大剂量治疗组。测定心肌谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量,酶联免疫吸附试验检测血清心肌钙蛋白I（cTnI）的变化,Western blotting检测蛋白激酶C（PKC）蛋白表达。结果: 姜黄素治疗后可明显改善糖尿病所致的动物体重下降和空腹血糖升高,抑制心肌中MDA的产生并升高GSH-Px活性,减少血清中cTnI的释放,下调心肌组织PKC蛋白表达。结论: 姜黄素对大鼠糖尿病心肌病具有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激有关。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯减轻2型糖尿病大鼠胰岛β细胞氧化损伤

 目的 探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞氧化损伤的影响及其机制。方法 用长期高脂饮食加小剂量链脲佐菌素（STZ,27mg/kg体重）建立2型糖尿病大鼠模型。PDTC治疗组大鼠每天腹腔注射PDTC（50mg/kg）1次,1周后取血浆检测血糖。取胰腺组织匀浆测定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的含量;应用免疫组化和Western blot等检测胰腺组织中诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的表达及硝基化酪氨酸（NT）的水平;流式细胞术检测胰岛β细胞凋亡百分率。结果 糖尿病大鼠血糖、MDA水平均显著高于对照组（P﹤0.01）;SOD和GSH-PX水平明显低于对照组（P﹤0.01）;胰岛组织中iNOS表达水平（0.37±0.06）和NT生成量（0.24±0.01）均较对照组（0.11±0.01）和（0.12±0.01）明显增多（P<0.01）。PDTC治疗后血糖明显降低,MDA明显减少（P＜0.01）;而SOD、GSH-PX水平明显升高（P＜0.05,P＜0.01）;胰岛组织中iNOS表达及NT生成均明显减少（P＜0.01）;胰岛β细胞凋亡率明显降低（P＜0.05）。结论 PDTC可以降低血糖,减轻大鼠体内氧化应激反应,减少糖尿病大鼠胰岛β细胞的凋亡。     

葛根素对糖尿病大鼠睾丸的保护作用

目的： 探讨葛根素对糖尿病大鼠睾丸的保护作用及其机制。方法：雄性SD大鼠随机分成6组：正常对照组,糖尿病模型组,葛根素高(160 mg·kg-1)、中(120 mg·kg-1)、低(80 mg·kg-1)剂量治疗组,氨基胍(100 mg·kg-1)治疗组;各组大鼠每天腹腔注射相应药物1次,正常对照组及糖尿病模型组腹腔注射等体积丙二醇。治疗12周后,透射电镜下观察睾丸的形态学改变,用生化、免疫学方法测定睾丸组织中一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）、降钙素基因相关肽（CGRP）、丙二醛（MDA)的含量及一氧化氮合酶（NOS）、诱导型NOS(iNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、Ca2+-ATPase、Na+-K+-ATPase的活性,采用RT-PCR检测睾丸组织内皮型NOS(eNOS)、iNOS、CGRP、ET-1、醛糖还原酶（AR）的基因表达水平。结果：糖尿病组大鼠睾丸组织电镜下主要见到支持细胞与曲细精管基底膜接触面减小、出现空泡,胞浆内内含物形成;NO、CGRP含量及SOD、Ca2+-ATPase、Na+-K+-ATPase活性和eNOS、CGRP mRNA表达明显低于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,而ET-1、MDA含量及NOS、iNOS活性和iNOS、AR、ET-1 mRNA表达明显高于正常对照组（均P<0.01）。经葛根素治疗后,上述改变逆转,与糖尿病模型组比较差异显著（P<0.05或P<0.01）,电镜下睾丸组织的形态结构接近于正常组;而葛根素高、中、低剂量治疗组、氨基胍治疗组间差异无显著。结论：葛根素对糖尿病大鼠睾丸具有一定的保护作用,其机制可能与改善睾丸血供及减轻氧化应激损伤有关。     

糖尿病大鼠心肌血管紧张素Ⅱ和一氧化氮的动态变化

目的 :观察糖尿病大鼠心肌局部血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )和一氧化氮 (nitricoxide ,NO)的动态变化。方法 :实验动物分为三月对照组和糖尿病组各 8只 ;六月对照组和糖尿病组各 10只 ;分别于 3个月、6个月杀栓 ,测定AⅡ、血管紧张素转换酶 (ACE)、NO的含量和一氧化氮合酶 (iNOS)的表达。结果 :糖尿病大鼠心肌局部AngⅡ、ACE三个月时与对照组比较无显著性差异 ,六个月时明显增高 ,呈动态增加 ;血浆AngⅡ、ACE明显持续增高。心肌局部及血浆一氧化氮代谢产物硝酸盐 /亚硝酸盐含量从三个月起较对照组明显降低 ,到六个月时进一步减低 ,iNOS表达呈持续阳性。结论 :糖尿病心肌局部AngⅡ的不断增高和NO的持续减低可能共同参与了糖尿病心肌病的发生。     

参麦注射液对糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化的干预作用及相关机制探讨

 目的：探讨参麦注射液对糖尿病心肌病心肌纤维化的干预作用并初步探讨其机制。方法：将30只Wistar大鼠分为对照组、糖尿病组以及治疗组,每组各10只。采用链脲佐菌素单次腹腔注射的方法制作大鼠糖尿病模型,以枸橼酸缓冲液腹腔注射为对照,治疗组则采用腹腔注射的方式给予参麦注射液干预治疗。采用心室插管对大鼠心功能进行评估;Masson染色观察大鼠心脏组织中胶原水平;二氢乙啶染色观察大鼠心脏组织中活性氧（ROS）水平;Western blotting观察大鼠心肌组织中I 型胶原、基质金属蛋白酶2（MMP-2）以及金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP-2）的表达水平。结果：与对照组相比,糖尿病组心功能显著下降（P＜0.05）;而治疗组心功能则显著恢复（P＜0.05）。与对照组相比,糖尿病组心肌组织ROS及胶原生成水平显著升高（P＜0.05）,但经参麦注射液治疗后均显著降低（P＜0.05）。与对照组相比,糖尿病组I 型胶原及TIMP-2表达水平显著升高（P＜0.05）,而MMP-2水平显著降低（P＜0.05）;与糖尿病组相比,治疗组I 型胶原及TIMP-2水平显著降低（P＜0.05）,而MMP-2水平则显著升高（P＜0.05）。结论:参麦注射液可能通过抑制氧化应激损伤而减轻糖尿病心肌病心肌纤维化程度。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制NF-κB活化对HL-60细胞的化疗增敏作用

目的：探讨化疗诱导性核因子κB的活化机制及抗氧化抑制NF-κB活化对白血病细胞凋亡及化疗敏感性的影响。 方法： 采用间接免疫荧光方法和凝胶迁移率变动试验（EMSA）观察不同浓度的化疗药物单独或与抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）联合作用于HL-60细胞后NF-κB的活化反应；运用流式细胞术和MTT试验比较NF-κB活化及活化抑制对HL-60细胞凋亡及化疗敏感性的影响。 结果： EMSA试验表明，柔红霉素（DNR）和足叶乙甙（VP-16）均呈剂量依赖性诱导NF-κB活化；RelA亚基位于细胞核进一步证实了NF-κB活化。PDTC呈剂量依赖性抑制诱导性NF-κB活化，当其浓度达到100 μmol/L时，NF-κB活化被完全抑制。比较PDTC干预前后细胞的凋亡反应，发现2.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L VP-16诱导的细胞凋亡指数分别由(5.34±0.62)%、(10.16±0.42)%、(17.32±1.15)%增至(8.97±0.81)%、(16.01±1.06)%、(22.96±1.33%)，且PDTC显著增强DNR及VP-16对HL-60细胞的生长抑制率(P<0.01)。 结论： 反应性氧中间产物介导化疗诱导性NF-κB活化，抗氧化抑制NF-κB活化可以增进HL-60细胞凋亡及化疗敏感性。     

核因子-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸对百草枯中毒后早期肺损伤的影响

目的 观察核因子(NF)-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对百草枯(PQ)中毒后早期肺损伤的影响.方法 64只成年雄性SD大鼠建立PQ肺损伤模型,数字随机法分为PQ+PDTC和PQ+PBS组,每组32只.PQ+PDTC组给予PDTC 100 mg/kg腹腔内注射,PQ+PBS组给予PBS腹腔内注射.24、48和72 h后观察两组动物存活率,应用苏木精-伊红(HE)染色观察急性肺损伤(ALL)情况并评分;免疫组化检测肺组织炎性细胞浸润;ELISA法检测肺组织内TNF-α、IL-6含量和免疫印迹法检测肺内NF-κB激活情况.结果 与PQ+PBS组相比,PDTC提高大鼠PQ中毒后的72 h内存活率[24/32(75％)比13/32(40.6％),P=0.015].PDTC改善大鼠PQ中毒后24、48 h和72 h的肺损伤评分(7.5±1.0比9.8±1.5,9.7±0.8比12.0±0.9,11.5±1.0比14.5±1.0,均P＜0.05).PDTC降低大鼠PQ中毒后24、48 h和72 h的肺内髓过氧化物酶(MPO)阳性细胞数、肺组织内TNF-α、IL-6蛋白水平和胞核、胞质NF-κB P65蛋白浓度(均P＜0.05).结论 PDTC可减少大鼠PQ中毒后早期炎性细胞的浸润并抑制NF-κB的激活,使致炎因子TNF-α、IL-6表达下降,减轻肺损伤,降低早期病死率.     

肾缺血再灌注模型细胞凋亡与吡咯烷二硫代氨基甲酸的干预

背景：肾缺血/再灌注诱导产生大量活性氧,导致核因子κB的活化。激活的核因子κB通过调节诱导型一氧化氮合酶的生成,进而导致一氧化氮的大量产生和触发细胞凋亡。 目的：观察吡咯烷二硫代氨基甲酸对肾缺血再灌注后肾脏组织中核因子κB、诱导型一氧化氮合酶、一氧化氮、caspase-3和细胞凋亡指数的作用。 方法：将健康雄性Wistar大鼠随机分为3组：缺血再灌注组和吡咯烷二硫代氨基甲酸组通过右侧肾切除+左肾动脉夹闭 45 min建立肾缺血/再灌注模型,吡咯烷二硫代氨基甲酸组于实验前30 min尾静脉注射吡咯烷二硫代氨基甲酸 (100 mg/kg)。假手术组不给予缺血再灌注处理。 结果与结论：与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠再灌注后肾组织核因子κB表达水平、血肌酐水平、尿素氮水平、诱导型一氧化氮合酶活性、一氧化氮表达水平、caspase-3表达水平和细胞凋亡水平增加(P < 0.05);而与缺血再灌注组相比,吡咯烷二硫代氨基甲酸组大鼠再灌注后以上指标均好转。说明肾缺血/再灌注损伤可引起肾组织结构损伤和细胞凋亡,且与核因子κB引起的一氧化氮高表达有关;应用核因子κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸可对缺血再灌注肾损伤发挥明显的保护作用。     

葛根素对糖尿病肾病大鼠肾组织中一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶水平的影响

目的：探讨葛根素（Pur）对糖尿病（DM）大鼠肾组织中一氧化氮（NO）含量、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法:一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病大鼠模型。每日腹腔注射Pur注射液,共16周,收集24 h尿液测定尿蛋白（Upro）;腹主动脉取血分离血清测定血糖（Glu）和血尿素氮（BUN）。光镜下观察肾组织病理形态学改变;采用免疫组织化学技术观察肾组织中的iNOS定位与分布。制备组织匀浆,以检测肾组织中的NO活性。结果:与对照组相比,DM组出现肾功能下降、肾小球及肾小管肥大等异常表现,同时,iNOS表达及NO含量明显增加;应用Pur后肾功能及肾组织病理变化有明显改善,且iNOS表达及NO含量显著降低。结论:Pur可降低肾组织iNOS表达及NO含量从而减轻肾组织损伤,这可能是其减轻DM所致大鼠肾脏功能及结构异常的作用机制之一。     

糜蛋白酶抑制剂保护糖尿病仓鼠肾功能的机制研究

目的　观察糜蛋白酶抑制剂对糖尿病仓鼠肾脏的保护作用,进而探讨其保护肾脏损伤的机理。 方法　链脲佐菌素腹腔注射法制备仓鼠糖尿病模型。通过分子生物学技术、免疫组织化学技术、免疫印记技术检测各组动物糜蛋白酶,RAS成分：ACE、肾素、ANG-I、ANG-II;氧化应激水平：8-OhdG,NOX-4,p22phox,以及TGF-β1的表达情况。 结果　糜蛋白酶抑制剂抑制了糖尿病仓鼠肾内ANG-II升高,同时明显降低了8-OHdG 分泌水平。NOX-4和p22phox染色表明糖尿病组血管球和肾小管区域氧化产物显著增高,而糜蛋白酶抑制剂抑制氧化产物的升高(P<0.01)。Western blot 证实了糖尿病组血管球NOX-4和p22phox蛋白的水平较对照组高,糜蛋白酶抑制剂显著降低了其表达。血管球TGF-β1表达糖尿病组高于对照组,同样糜蛋白酶抑制剂治疗后大大降低了TGF-β1水平。 结论　糜蛋白酶抑制剂能保护糖尿病仓鼠的肾功能,其机制是通过降低肾内ANG-II水平和氧化应激水平来保护糖尿病肾脏损伤。     

超声微泡靶向递送aFGF对糖尿病心肌病的治疗作用及其机制研究

 目的：观察SonoVue超声微泡靶向递送酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对糖尿病心肌病（DCM）大鼠左室舒缩功能的保护作用并初步探讨其机制。方法：24只健康雄性SD大鼠通过腹腔注射链脲佐菌素建立DCM模型,再随机平均分成DCM组与aFGF治疗组。另选择正常对照组12只。aFGF治疗组经尾静脉注射SonoVue-aFGF溶液并同时给予心肌定点超声辐照。干预后4周对所有大鼠行心导管检查,测定左室收缩末压力(LVESP)、左室舒张末压力(LVEDP)和左室内压最大上升/下降速率(LV±dp/dtmax)。处死大鼠取心肌组织,免疫组织化学染色检测心肌微血管密度（MVD),改良Masson胶原染色法测定心肌胶原容积分数（CVF）,TUNEL法检测心肌组织凋亡指数（AI）。结果：干预后4周,aFGF治疗组大鼠LVESP和LV±dp/dtmax与DCM组比较明显增加（P<0.01）,LVEDP较DCM组明显减低（P<0.01）。aFGF治疗组MVD测值与DCM组比较明显增加（P<0.01）,而CVF及AI较DCM组明显减低（P<0.01）。结论: 超声微泡靶向递送aFGF可有效改善DCM大鼠的左心室功能,有望成为治疗DCM的新方法。     

莱菔硫烷对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护作用

目的:研究莱菔硫烷(SF)对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护效应,并初步探讨其作用机制。方法:通过一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病大鼠模型;通过测定活性氧簇(ROS)的生成、TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡和计数存活的视网膜神经节细胞(RGCs)等方法作为指标观察SF对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护效应;以免疫组织化学染色和Western blot法检测视网膜核因子E2相关因子2(Nrf2)的核转移和血红素加氧酶1(HO-1)的表达变化。结果:SF能抑制糖尿病大鼠视网膜ROS的生成,抑制视网膜神经细胞的凋亡并增加糖尿病大鼠视网膜RGCs的存活数量;同时SF还可促进Nrf2的激活及HO-1蛋白表达;使用HO-1抑制剂锌原卟啉可明显减弱SF对糖尿病大鼠视网膜RGCs凋亡的抑制作用。结论:SF可能通过激活Nrf2/HO-1抗氧化通路改善糖尿病大鼠视网膜氧化应激状态,减少视网膜神经细胞凋亡,减轻糖尿病大鼠的视网膜损伤。     

血府逐瘀汤对大鼠糖尿病性心肌病的影响

目的: 观察2型糖尿病心肌病大鼠心肌组织的病理改变以及血府逐瘀汤对于糖尿病性心肌病的治疗作用,探讨心肌病发生的病理机制。方法: 雄性Wistar大鼠42只,采用高脂高热量饮食诱导出胰岛素抵抗,加单次中等剂量(50 mg/kg)链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病动物模型。8周后采用心电图及超声心动图评价心肌受损情况;取血检测血糖、胆固醇、甘油三酯含量;心肌组织Masson染色定量左室心肌胶原纤维;TUNEL凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡,光镜和电镜观察心肌细胞结构破坏程度。结果: 与相同时点正常组比较,模型组血糖、甘油三酯、胆固醇含量升高(P<0.05),第11、14周左室收缩末期内径明显增厚(P<0.01),第14周左室舒张末期内径增厚(P<0.05),心肌组织结构破坏严重,胶原纤维含量增多(P<0.01),细胞凋亡增多;与相同时点模型组相比,血府逐瘀汤组大鼠血糖、胆固醇、甘油三酯明显降低(P<0.05),第11周左室收缩末期内径、第14周左室舒张末期内径增厚减低(P<0.05),第14周左室重量明显变轻(P<0.01),心肌组织破坏程度较轻,胶原纤维含量显著减少(P<0.01),心肌细胞亚细胞结构破坏程度较轻,细胞凋亡减少。结论: 糖尿病性心肌病时,血糖、胆固醇和甘油三酯含量升高,心肌增厚,心肌组织内胶原纤维含量增多,结构破坏严重,细胞凋亡增多;血府逐瘀汤能够降低糖尿病心肌病时血糖、胆固醇和甘油三酯水平,减轻心肌纤维化的病理改变程度,延缓糖尿病导致的心肌病进程。