肝细胞生长因子对血管外膜成纤维细胞表型转化及迁移的作用

目的 检测肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor/scatter factor,HGF)对血管外膜成纤维细胞（adventitial fibroblasts,AF)表型转化及迁移的影响，探索其在血管外膜重构中的可能作用。方法 体外培养AF，以不同剂量（0,20,40,80ng/ml)HGF刺激AF及40ng/ml HGF刺激AF不同时间（0,4,16,24小时），蛋白免疫印迹方法（Western blotting)分析不同条件刺激后AF中α－平滑肌肌动蛋白（α－SM actin)的表达变化，用transwell检测不同浓度HGF对AF迁移的影响。结果 HGF可上调AF中α－SM actin表达，于一定剂量依赖性和时间依赖性；40ng/ml HGF可明显促进AF迁移，迁移细胞数目在一定范围内随着HGF浓度增加而增加。结论 HGF能诱导AF表型转化为肌成纤维细胞（myofibroblasts,MF)，促进AF迁移，在血管外膜重构中可能具有一定作用。     

RhoA/ROKα反义寡核苷酸抑制TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-actin表达

目的 α-平滑肌-肌动蛋白(α-SM-actin)的表达是血管外膜成纤维细胞/肌成纤维细胞表型转化的分子标记.本研究观察阻断RhoA-ROKα信号转导通路对于转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-肌动蛋白(actin)表达的影响,以揭示RhoA-ROKα信号通路在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的作用.方法使用贴壁法体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;用Western blot技术测定RhoA和ROKα在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的表达.结果 RhoA-ROKα在血管外膜成纤维细胞表达,TGF-β1可以诱导RhoA表达上调.用反义寡核苷酸技术抑制RhoA或ROKα的表达后能够抑制α-SM-actin的表达.结论 RhoA-ROKα信号转导通路参与了TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞的过程.     

肝细胞生长因子及其受体在血管外膜成纤维细胞中的表达

目的 检测肝细胞生长因子（HGF）及其受体c-met在血管外膜2种表型成纤维细胞中的表达，探索其在血管外膜重塑中的作用。方法 用转化生长因子-β1建立大鼠主动脉外膜成纤维细胞和肌成纤维细胞2种细胞表型。以实时定量逆转录聚合酶链反应技术和蛋白免疫印迹方法分析HGF及c-met在2种不同表型细胞中的表达。酶联免疫吸附试验检测2种细胞无血清培养上清液中HGF的含量。结果 HGFmRNA及HGF蛋白，c-metmRNA及c-met蛋白在主动脉外膜成纤维细胞。肌成纤维细胞中均有表达。在主动脉外膜成纤维细胞转变为肌成纤维细胞后表达明显上调，随转化生长因子-β1刺激浓度和时间的增加，在主动脉外膜成纤维细胞逐渐表达-α-平滑肌肌动蛋白转变为肌成纤维细胞的过程中HGF表达逐渐上调。结论 血管外膜成纤维细胞存在局部HGF系统。HGF可能在血管外膜细胞瑶型转化中有一定作用。     

RhoA/ROCK通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化

目的 血管外膜成纤维细胞(AF)的表型转化在血管重塑过程中起了重要作用.通过观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管AF中RhoA/ROCK通路活性的影响,探讨该通路在AF/肌成纤维细胞(MF)表型转化中的作用.方法 AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠血管AF,测定刺激后10、30 min RhoA的活性变化,并分别测定2、6、12、24 h ROCK底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)的磷酸化水平,Western blot检测AF/MF表型转化标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,并观察腺病毒dominant negative N19RhoA(dnN19RhoA,MOI=200)和ROCK抑制剂Y27632(10μmol/L)对α-SM-actin表达的影响.结果 AngⅡ刺激使AF RhoA活性的明显增强及ROCK底物MYPT1的磷酸化水平明显增加.刺激30 min RhoA活性约为未刺激的3倍,刺激12 h MYPT1的磷酸化约为未刺激的3.5倍.dnN19RhoA和Y27632均可明显抑制AngⅡ诱导的血管Afα-SM-actin表达,抑制α-SM-actin表达程度均约为75％.结论 AngⅡ可激活血管AF中的RhoA/ROCK通路,该通路参与了AngⅡ诱导的血管AF/MF表型转化.     

RhoA/ROCK通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化

目的血管外膜成纤维细胞(AF)的表型转化在血管重塑过程中起了重要作用。通过观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管AF中RhoA/ROCK通路活性的影响,探讨该通路在AF/肌成纤维细胞(MF)表型转化中的作用。方法AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠血管AF,测定刺激后10、30min RhoA的活性变化,并分别测定2、6、12、24hROCK底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)的磷酸化水平,Western blot检测AF/MF表型转化标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,并观察腺病毒dominant negative N19RhoA(dnN19RhoA,MOI=200)和ROCK抑制剂Y27632(10μmol/L)对α-SM-actin表达的影响。结果AngⅡ刺激使AFRhoA活性的明显增强及ROCK底物MYPT1的磷酸化水平明显增加。刺激30min RhoA活性约为未刺激的3倍,刺激12hMYPT1的磷酸化约为未刺激的3.5倍。dnN19RhoA和Y27632均可明显抑制AngⅡ诱导的血管AFα-SM-actin表达,抑制α-SM-actin表达程度均约为75%。结论AngⅡ可激活血管AF中的RhoA/ROCK通路,该通路参与了AngⅡ诱导的血管AF/MF表型转化。     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1介导外膜成纤维细胞表型转化

目的探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)是否参与血管外膜成纤维细胞(AF)表型转化。方法选取雄性SD大鼠,组织切块法培养胸主动脉AF,将未用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的AF分别作为空白组、对照1和2组,用2.5、5.0、10.0和15.0ng/ml TGF-β1诱导AF依次为A、B、C和D组;分别用50μmol/L的EMD638683和SB203580预处理细胞为抑制剂1和2组;用5ng/ml TGF-β1刺激细胞分别为刺激1和2组。Western blot检测SGK1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白相对表达量。结果与空白组比较,A、B和C组SGK1表达显著增加(P0.05),B组SGK1表达量最高;B、C和D组α-SMA表达显著增加(P0.05),C组α-SMA表达量最高(P0.05)。与对照1组比较,刺激1组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达明显升高(P0.05),与刺激1组比较,抑制剂1组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达显著降低(P0.05);与对照2组比较,刺激2组细胞SGK1表达明显升高(P0.05),与刺激2组比较,抑制剂2组细胞SGK1表达显著降低(P0.05)。结论 SGK1通过p38促分裂素原活化蛋白激酶参与TGF-β1诱导的血管AF表型转化,参与血管的病理性重构。     

E1A激活基因阻遏子基因表达与血管外膜成纤维细胞表型转化的关系

目的探讨E1A激活基因阻遏子（CREG）基因表达与血管外膜成纤维细胞（AFs）表型转化间的关系。方法制作小鼠颈动脉损伤模型,免疫荧光染色观察血管外膜中CREG与平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达变化;培养小鼠原代AFs,外源性应用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导其表型转化,RT-PCR和Western-blot检测不同作用时间及不同浓度AngⅡ刺激AFs后CREG和α-SMA mRNA和蛋白质表达。结果血管损伤后1 d、3 d血管外膜增生显著,外膜中α-SMA表达显著上调,而CREG表达显著下调;血管损伤后7 d、14 d外膜增生有所缓解,α-SMA表达水平逐渐下降,而CREG表达也有所恢复。应用AngⅡ诱导AFs发生表型转化,AFs中α-SMA mRNA和蛋白水平显著上调,而CREG mRNA和蛋白水平显著下调,并且呈时间和剂量依赖性。结论在体和离体模型均表明AFs表型转化过程中伴随CREG基因表达下调,提示CREG基因可能参与AFs的表型转化。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂干预大鼠血管外膜成纤维细胞迁移

目的 检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ激动剂及吡格列酮对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导血管外膜成纤维细胞(AF)迁移的调节作用及机制.方法 采用贴壁法培养SD大鼠胸主动脉AF.Transwell观察Ang Ⅱ诱导AF迁移作用,RT-PCR检测Ang Ⅱ 1型受体(AT1R)mRNA水平.结果 (1)Ang Ⅱ刺激AF迁移呈浓度依赖性,当Ang Ⅱ的浓度为10-7mol/L时,AF迁移数目最大(P＜0.01);(2)PPARγ激动剂15D-PJG2和吡格列酮可抑制Ang Ⅱ诱导AF迁移,并且呈剂量依赖性,浓度为10×10-6mol/L时作用最明显(P＜0.01);(3)AT1R阻滞剂(氯沙坦)可完全抑制Ang Ⅱ诱导的AF迁移(P＜0.01),而AT2R阻滞剂(PD123319)对AF迁移无明显抑制作用(P＞0.05);(4)与对照组相比,15D-PJG2和吡格列酮干预组AT1R mRNA表达水平呈剂量依赖性下降,浓度为10×10-6mol/L时抑制作用最明显(P＜0.01).结论 PPARγ激动剂可抑制Ang Ⅱ诱导的AF迁移,这可能是通过下调AF AT1R mRNA表达发挥作用.     

活性氧在血管外膜成纤维细胞表型转化、增殖、迁移及胶原分泌过程中的作用

<正>近期研究证明血管外膜中的主要细胞成分血管外膜成纤维细胞(VAF)对多种刺激具有应答能力,被激活后获得α-平滑肌肌动蛋白(SM-actin)的表达特征,转化为肌成纤维细胞(MF)表型,然后可向中膜和新生内膜迁移、增殖,同时大量合成胶原纤维,参与血管重塑过程。VAF的表型转化、增殖、迁移及胶原纤维的合成在动脉粥样硬化、高血压和血管介入治疗后再狭窄等多种心血管疾病的发生中发挥重要作用〔1〕。活性氧(ROS)     

结缔组织生长因子及其抗体对人胃成纤维细胞生物学功能的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)及其抗体对人胃成纤维细胞增殖、移行、合成细胞外基质(ECM)的影响.方法 (1)应用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的CTGF(5、20、50、100 ng/ml)及其抗体(0.1、0.5、1 μg/ml)对人胃成纤维细胞增殖的影响.(2)应用羟脯氨酸法检测不同浓度的CTGF及其抗体对人胃成纤维细胞分泌胶原蛋白的影响.(3)应用Transwell小室法检测不同浓度的CTGF及其抗体对人胃成纤维细胞迁移能力的影响.结果 5 ～ 10 ng/ml CTGF可剂量依赖性地促进入胃成纤维细胞增殖;20～ 100 ng/ml CTGF可剂量依赖性地促进人胃成纤维细胞分泌胶原蛋白;20～ 100 ng/ml CTGF可剂量依赖性地促进人胃成纤维细胞迁移.另一方面,0.1～1μg/ml CTGF抗体可剂量依赖性地抑制人胃成纤维细胞增殖;0.5、1 μg/ml CTGF抗体可剂量依赖性地抑制人胃成纤维细胞分泌胶原蛋白;0.5、1 μg/ml ETGF抗体可剂量依赖性地抑制人胃成纤维细胞迁移.以上各实验组与相应对照组比较均有显著性差异(P＜0.05).结论 一定浓度范围内的CTGF能剂量依赖性地促进人胃成纤维细胞增殖、分泌胶原蛋白及迁移,这表明CTGF参与了胃硬癌间质纤维化进程,在间质纤维化进程的各环节发挥重要作用.而一定浓度范围内的CTGF抗体可剂量依赖性地抑制这些效应,这为胃硬癌的临床治疗提供了新的思路.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

Inhibition of intimal thickening of the carotid artery of rabbits and of outgrowth of explants of aorta by probucol.

The effect of administration of probucol in preventing intimal thickening of rabbit carotid artery after balloon catheter injury and the mechanism of action of the drug were studied. Groups of 6 male New Zealand-White rabbits were given normal diet (Group I), high cholesterol diet (Group II) or high cholesterol diet plus probucol (Group III) for 4 weeks. Balloon catheter injury was made in week 2 and animals were killed in week 4. No significant differences in the total cholesterol levels in Groups II and III were found in week 4. The medians of areas of the intimal layer in cross-sections of the carotid arteries of Groups I, II and III were 0.237, 0.475 and 0.309 mm2, respectively. Thus high-cholesterol diet increased the thickness of the intimal layer and probucol reduced its effect. There were no significant differences in the areas of the medial layers in these 3 groups. For the examination of the mechanism of the effect of probucol, rabbits were given chow containing 0.5% cholesterol with and without 0.5% probucol (7 rabbits each) and then the numbers of explants from their aortas showing outgrowth were compared. The plasma total cholesterol levels of these two groups were the same. The probucol concentrations in the plasma and aorta of the former group were 18.6 +/- 13.2 micrograms/ml and 7.3 +/- 5.4 micrograms/g wet tissue, respectively. The number of explants showing outgrowth on day 14 was suppressed by 34% in the probucol-treated group.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)